Ст 36 зк: ЗК РФ Статья 36. Утратила силу / КонсультантПлюс

Статья 36 ЗК РФ. Утратила силу с 1 марта 2015 года.

Статья 36 ЗК РФ. Утратила силу с 1 марта 2015 года. — Федеральный закон от 23.06.2014 N 171-ФЗ.

Актуально на:

09 сентября 2021 г.

Земельный кодекс, N 136-ФЗ | ст. 36 ЗК РФ

Постоянная ссылка на документ

• URL
• HTML
• BB-код
• Текст

URL документа [скопировать]

<a href=»»></a>

HTML-код ссылки для вставки на страницу сайта [скопировать]

[url=][/url]

BB-код ссылки для форумов и блогов [скопировать]

—

в виде обычного текста для соцсетей и пр. [скопировать]

Скачать документ в формате

Судебная практика по статье 36 ЗК РФ:

• Решение Верховного суда: Определение N 305-ЭС16-19865, Судебная коллегия по экономическим спорам, кассация
  Предпринимателем не был представлен кадастровый паспорт земельного участка, в связи с чем государственная услуга Кирикову Ю.А. не могла быть оказана, а договор купли-продажи земельного участка не мог быть заключен в силу статей 29 и 36 ЗК РФ и положений приказа № 475. Учитывая изложенное, суд апелляционной инстанции изменил решение исключив возложение на Департамент обязанности по подготовке проекта договора купли-продажи спорного земельного участка по цене 20 % кадастровой стоимости…

• Решение Верховного суда: Определение N 305-ЭС16-19865, Судебная коллегия по экономическим спорам, кассация

  Предпринимателем не был представлен кадастровый паспорт земельного участка, в связи с чем государственная услуга Киркову Ю.А. не могла быть оказана, а договор купли-продажи земельного участка не мог быть заключен в силу статей 29 и 36 ЗК РФ и положений приказа № 475. Учитывая изложенное, суд апелляционной инстанции изменил решение исключив возложение на Департамент обязанности по подготовке проекта договора купли-продажи спорного земельного участка по цене 20 % от кадастровой стоимости…

• Решение Верховного суда: Определение N 308-ЭС17-1483, Судебная коллегия по экономическим спорам, кассация

  Удовлетворяя заявленные требования, суды правомерно исходили из следующего. Исключительное право на приватизацию земельных участков или приобретение права аренды земельных участков, в силу статьи 36 Земельного кодекса Российской Федерации (в применимой к спорным отношениям редакции; далее — Земельный кодекс), имеют граждане и юридические лица собственники зданий, строений, сооружений…

+Еще…

Изменения документа

Постоянная ссылка на документ

• URL
• HTML
• BB-код
• Текст

URL документа [скопировать]

<a href=»»></a>

HTML-код ссылки для вставки на страницу сайта [скопировать]

[url=][/url]

BB-код ссылки для форумов и блогов [скопировать]

—

в виде обычного текста для соцсетей и пр. [скопировать]

Скачать документ в формате

Составить подборку

Анализ текста

Идет загрузка…

Ст. 36 ЗК РФ. Утратила силу с 1 марта 2015 года.

Документы Пленума и Президиума Верховного суда по ст. 36 ЗК РФ

• Обзор судебной практики Верховного Суда Российской Федерации N 2 (2020)

  (утв. Президиумом Верховного Суда РФ 22.07.2020)

• Обзор судебной практики Верховного Суда Российской Федерации N 1 (2019)

  (утв. Президиумом Верховного Суда РФ 24.04.2019)

• Обзор судебной практики Верховного Суда Российской Федерации N 3 (2018)

  (утв. Президиумом Верховного Суда РФ 14.11.2018) (ред. от 26.12.2018)

Все документы >>>

Документы Пленума и Президиума Верховного суда по ЗК РФ

• Обзор судебной практики Верховного Суда Российской Федерации N 2 (2021)

  (утв. Президиумом Верховного Суда РФ 30.06.2021)

• Обзор судебной практики по спорам, связанным с возведением зданий и сооружений в охранных зонах трубопроводов и в границах минимальных расстояний до магистральных или промышленных трубопроводов

  (утв. Президиумом Верховного Суда РФ 23.06.2021)

• Обзор судебной практики Верховного Суда Российской Федерации N 1 (2021)

  (утв. Президиумом Верховного Суда РФ 07.04.2021)

Все документы >>>

Законы Российской Федерации по ст. 36 ЗК РФ

• Федеральный закон от 23.06.2014 N 171-ФЗ (ред. от 27.12.2019)

  «О внесении изменений в Земельный кодекс Российской Федерации и отдельные законодательные акты Российской Федерации»

• Федеральный закон от 24.11.2014 N 356-ФЗ (ред. от 31.12.2017)

  «О внесении изменений в Федеральный закон «О содействии развитию жилищного строительства» и отдельные законодательные акты Российской Федерации»

• Федеральный закон от 27.12.2009 N 343-ФЗ (ред. от 26.07.2017)

  «О внесении изменений в Федеральный закон «О содействии развитию жилищного строительства» и отдельные законодательные акты Российской Федерации»

Все документы >>>

Законы Российской Федерации по ЗК РФ

• Федеральный закон от 13.07.2015 N 224-ФЗ (ред. от 02.07.2021)

  «О государственно-частном партнерстве, муниципально-частном партнерстве в Российской Федерации и внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации»

• Федеральный закон от 29.06.2012 N 96-ФЗ (ред. от 02.07.2021)

  «О внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации»

• Федеральный закон от 29.07.2017 N 216-ФЗ (ред. от 02.07.2021)

  «Об инновационных научно-технологических центрах и о внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации»

Все документы >>>

Указы и распоряжения Президента Российской Федерации по ЗК РФ

• Приказ Управления делами Президента РФ от 13.11.2019 N 442

  «Об утверждении Положения о национальном парке «Крымский» (Зарегистрировано в Минюсте России 18.12.2019 N 56871)

• Указ Президента РФ от 25.02.2003 N 250 (ред. от 31.12.2017)

  «Об изменении и признании утратившими силу некоторых актов Президента РСФСР и Президента Российской Федерации»

• Указ Президента РФ от 09.01.2011 N 26 (ред. от 11.04.2016)

  «Об утверждении перечня приграничных территорий, на которых иностранные граждане, лица без гражданства и иностранные юридические лица не могут обладать на праве собственности земельными участками»

Все документы >>>

Постановления и распоряжения Правительства Российской Федерации по ЗК РФ

• Распоряжение Правительства РФ от 31.12.2020 N 3683-р (ред. от 27.08.2021)

  «Об утверждении плана законопроектной деятельности Правительства РФ на 2021 год» (вместе с «Планом законопроектной деятельности Правительства Российской Федерации на 2021 год»)

• Распоряжение Правительства РФ от 24.08.2021 N 2338-р

  «О реализации инвестиционного проекта «Создание театрально-образовательного и музейного комплекса в г. Владивостоке»»

• Распоряжение Правительства РФ от 30.04.2021 N 1152-р (ред. от 21.07.2021)

  «Об утверждении плана мероприятий («дорожной карты») по внедрению социально ориентированной и экономически эффективной системы газификации и газоснабжения субъектов Российской Федерации»

Все документы >>>

Нормативные акты министерств и ведомств Российской Федерации по ст. 36 ЗК РФ

• Обзор судебной практики Верховного Суда Российской Федерации N 3 (2018) (ред. от 26.12.2018)

• Доклад о результатах мониторинга правоприменения в Российской Федерации за 2017 год

• СГА 101. Стандарт внешнего государственного аудита

  (контроля). Общие правила проведения контрольного (утв. постановлением Коллегии Счетной палаты РФ от 07.09.2017 N 9ПК)

Все документы >>>

Нормативные акты министерств и ведомств Российской Федерации по ЗК РФ

• Приказ ФНС России от 05.06.2018 N ММВ-7-8/373@ (ред. от 25.08.2021)

  «Об осуществлении бюджетных полномочий главного администратора доходов федерального бюджета Федеральной налоговой службой, администраторов доходов федерального бюджета территориальными органами Федеральной налоговой службы»

• Приказ Казначейства России от 01.11.2019 N 335 (ред. от 20.08.2021)

  «Об осуществлении бюджетных полномочий главного администратора (администратора) доходов федерального бюджета Федеральным казначейством и бюджетных полномочий администратора доходов федерального бюджета территориальными органами Федерального казначейства и федеральным казенным учреждением «Центр по обеспечению деятельности Казначейства России» по главе 100 «Федеральное казначейство»

• Доклад Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору с обзором практики осуществления видов государственного контроля (надзора) с указанием проблем их осуществления, наиболее часто встречающихся нарушений обязательных требований за 1 полугодие 2021 года

Все документы >>>

последние изменения и поправки, судебная практика

СТ 36 ЗК РФ — Утратила силу с 1 марта 2015 года

1. Граждане и юридические лица, имеющие в собственности, безвозмездном пользовании, хозяйственном ведении или оперативном управлении здания, строения, сооружения, расположенные на земельных участках, находящихся в государственной или муниципальной собственности, приобретают права на эти земельные участки в соответствии с настоящим Кодексом.

Если иное не установлено федеральными законами, исключительное право на приватизацию земельных участков или приобретение права аренды земельных участков имеют граждане и юридические лица — собственники зданий, строений, сооружений. Указанное право осуществляется гражданами и юридическими лицами в порядке и на условиях, которые установлены настоящим Кодексом, федеральными законами.

Религиозным организациям, имеющим в собственности здания, строения, сооружения религиозного и благотворительного назначения, расположенные на земельных участках, находящихся в государственной или муниципальной собственности, эти земельные участки предоставляются в собственность бесплатно.

Религиозным организациям, имеющим в соответствии с федеральными законами на праве безвозмездного пользования здания, строения, сооружения религиозного и благотворительного назначения, расположенные на земельных участках, находящихся в государственной или муниципальной собственности, эти земельные участки предоставляются на праве безвозмездного срочного пользования на срок безвозмездного пользования этими зданиями, строениями, сооружениями.

1.1. Продажа земельных участков, находящихся в государственной или муниципальной собственности, собственникам зданий, строений, сооружений, расположенных на этих земельных участках, осуществляется по цене, установленной соответственно органами исполнительной власти и органами местного самоуправления. Порядок определения цены этих земельных участков, их оплаты устанавливается в отношении:

1) земельных участков, находящихся в федеральной собственности, — уполномоченным Правительством Российской Федерации федеральным органом исполнительной власти;

2) земельных участков, которые находятся в собственности субъектов Российской Федерации или государственная собственность на которые не разграничена, — органами государственной власти субъектов Российской Федерации;

3) земельных участков, находящихся в муниципальной собственности, — органами местного самоуправления.

Бесплатная юридическая консультация по телефонам:

1.2. Цена земельных участков, указанных в пункте 1.1 настоящей статьи, не может превышать их кадастровую стоимость. До установления уполномоченным Правительством Российской Федерации федеральным органом исполнительной власти, органом государственной власти субъекта Российской Федерации или органом местного самоуправления порядка определения цены земельного участка эта цена устанавливается в размере его кадастровой стоимости.

2. В существующей застройке земельные участки, на которых находятся сооружения, входящие в состав общего имущества многоквартирного дома, жилые здания и иные строения, предоставляются в качестве общего имущества в общую долевую собственность домовладельцев в порядке и на условиях, которые установлены жилищным законодательством.

3. В случае, если здание (помещения в нем), находящееся на неделимом земельном участке, принадлежит нескольким лицам на праве собственности, эти лица имеют право на приобретение данного земельного участка в общую долевую собственность или в аренду с множественностью лиц на стороне арендатора, если иное не предусмотрено настоящим Кодексом, федеральными законами, с учетом долей в праве собственности на здание.

В случае, если в здании, находящемся на неделимом земельном участке, помещения принадлежат одним лицам на праве собственности, другим лицам на праве хозяйственного ведения либо оперативного управления или всем лицам на праве хозяйственного ведения, эти лица имеют право на приобретение данного земельного участка в аренду с множественностью лиц на стороне арендатора, если иное не предусмотрено настоящим Кодексом, федеральными законами. При этом договор аренды земельного участка заключается с условием согласия сторон на вступление в этот договор иных правообладателей помещений в этом здании.

Казенные предприятия и государственные или муниципальные учреждения — правообладатели помещений в этом здании обладают правом ограниченного пользования земельным участком для осуществления своих прав на принадлежащие им помещения.

4. В случае, если помещения в здании, расположенном на неделимом земельном участке, закреплены за несколькими казенными предприятиями и государственными или муниципальными учреждениями, данный земельный участок предоставляется лицу, во владении которого находится большая площадь помещений в здании, в постоянное (бессрочное) пользование, а другие из этих лиц обладают правом ограниченного пользования земельным участком для осуществления своих прав на закрепленные за ними помещения.

5. Для приобретения прав на земельный участок граждане или юридические лица, указанные в настоящей статье, совместно обращаются в исполнительный орган государственной власти или орган местного самоуправления, предусмотренные статьей 29 настоящего Кодекса, с заявлением о приобретении прав на земельный участок.

Перечень документов, необходимых для приобретения прав на земельный участок, устанавливается федеральным органом исполнительной власти, осуществляющим функции по выработке государственной политики и нормативно-правовому регулированию в сфере земельных отношений.

Исполнительные органы государственной власти и органы местного самоуправления, предусмотренные статьей 29 настоящего Кодекса, не вправе требовать от заявителя представления дополнительных документов, за исключением документов, предусмотренных указанным перечнем.

Исполнительные органы государственной власти и органы местного самоуправления, предусмотренные статьей 29 настоящего Кодекса, не вправе требовать от заявителя представления документов, которые находятся в их распоряжении, распоряжении иных государственных органов, органов местного самоуправления либо подведомственных государственным органам или органам местного самоуправления организаций в соответствии с нормативными правовыми актами Российской Федерации, нормативными правовыми актами субъектов Российской Федерации, муниципальными правовыми актами, за исключением случаев, если такие документы включены в определенный Федеральным законом от 27 июля 2010 года N 210-ФЗ «Об организации предоставления государственных и муниципальных услуг» перечень документов.

6. В месячный срок со дня поступления указанного в пункте 5 настоящей статьи заявления исполнительный орган государственной власти или орган местного самоуправления, предусмотренные статьей 29 настоящего Кодекса, принимает решение о предоставлении земельного участка на праве собственности, в аренду или в случаях, указанных в пункте 1 статьи 20 настоящего Кодекса, на праве постоянного (бессрочного) пользования. В месячный срок с даты принятия решения о предоставлении земельного участка на праве собственности или в аренду исполнительный орган государственной власти или орган местного самоуправления, предусмотренные статьей 29 настоящего Кодекса, осуществляет подготовку проекта договора купли-продажи или аренды земельного участка и направляет его заявителю с предложением о заключении соответствующего договора.

7. В случае, если не осуществлен государственный кадастровый учет земельного участка или в государственном кадастре недвижимости отсутствуют сведения о земельном участке, необходимые для выдачи кадастрового паспорта земельного участка, орган местного самоуправления на основании заявления гражданина или юридического лица либо обращения предусмотренного статьей 29 настоящего Кодекса исполнительного органа государственной власти в месячный срок со дня поступления указанных заявления или обращения утверждает и выдает заявителю схему расположения земельного участка на кадастровом плане или кадастровой карте соответствующей территории. Лицо, которое обратилось с заявлением о предоставлении земельного участка, обеспечивает за свой счет выполнение в отношении этого земельного участка кадастровых работ и обращается с заявлением об осуществлении государственного кадастрового учета этого земельного участка в порядке, установленном Федеральным законом «О государственном кадастре недвижимости».

Местоположение границ земельного участка и его площадь определяются с учетом фактического землепользования в соответствии с требованиями земельного и градостроительного законодательства. Местоположение границ земельного участка определяется с учетом красных линий, местоположения границ смежных земельных участков (при их наличии), естественных границ земельного участка.

8. Исполнительный орган государственной власти или орган местного самоуправления, предусмотренные статьей 29 настоящего Кодекса, в двухнедельный срок со дня представления кадастрового паспорта земельного участка принимает решение о предоставлении этого земельного участка лицам, указанным в пункте 5 настоящей статьи, и направляет им копию такого решения с приложением кадастрового паспорта этого земельного участка.

9. Иностранные граждане, лица без гражданства и иностранные юридические лица — собственники зданий, строений, сооружений имеют право на приобретение земельных участков в собственность в порядке, установленном настоящей статьей, и в соответствии с пунктом 2 статьи 5, пунктом 3 статьи 15 и пунктами 4 и 5 статьи 28 настоящего Кодекса.

Комментарий к Статье 36 Земельного кодекса РФ

Комментарий к Статье 36 ЗК РФ временно недоступен.

Новая редакция Земельного кодекса с 1 марта 2015 года

Наличие в собственности земельного участка – большое подспорье для любого бизнеса, а иногда и необходимость для ведения конкретного вида деятельности.

Допустим, у Вас уже есть объект недвижимости в собственности, а земельный участок – в аренде или не оформлен никак. Как выкупить землю под Вашим объектом, кто и на каких условиях может это сделать?

На сегодняшний день собственники зданий или сооружений, расположенных на земельном участке, могут приобрести в собственность такой земельный участок без торгов. Более того, у собственника объекта недвижимости есть исключительное право на приобретение этого земельного участка (ст. 36 Земельного кодекса РФ — ЗК РФ). Это означает, что никто другой, кроме собственника объекта недвижимости, не имеет права выкупать или приобретать на ином праве земельный участок, занятый постройкой.

Но с 01 марта 2015 года в связи с обширными изменениями, внесенными в Земельный кодекс РФ законом N 171-ФЗ от 23.06.2014, статья 36 ЗК РФ утрачивает силу.

Стоит ли беспокоиться собственникам объектов недвижимости, не успевших реализовать свое исключительное право на приобретение земельного участка? Как нужно будет действовать после 01.03.2015 года и кто будет иметь право на приватизацию земли?

Рассмотрим изменения в Земельный кодекс подробнее.

 

Кто будет вправе приобрести участок в собственность в порядке приватизации?

Новая редакция Земельного Кодекса, как и ранее, устанавливает, что в порядке приватизации без проведения торгов вправе приобрести в собственность земельные участки собственники зданий и сооружений, расположенных на таких земельных участках, а также те юридические лица, которым земельный участок предоставлен на праве постоянного бессрочного пользования.

Вместо статьи 36 ЗК РФ законодатель вводит целый комплекс норм, регулирующих подобные ситуации. Так, статья 39.20 ЗК РФ воспроизводит уже известную нам формулу: исключительное право на приобретение земельных участков в собственность или аренду имеют граждане и юридические лица, являющиеся собственниками зданий и сооружений, расположенных на таких земельных участках.

В порядке приватизации вправе приобрести в собственность земельные участки собственники зданий и сооружений, расположенных на таких земельных участках.

Однако если на одном земельном участке находится несколько объектов недвижимости, принадлежащих на праве собственности разным лицам, а раздел земельного участка невозможен – приобрести в собственность участок можно только по согласию всех сособственников. Причем заявление подается такими лицами совместно.

Если на земельном участке расположено несколько объектов, принадлежащих разным лицам на разных правах (одному на праве бессрочного пользования, другому на праве собственности и т.д.), или же здание, в котором помещения принадлежат разным лицам на разных правах, – приобрести участок в собственность невозможно. Единственный вариант – заключить договор аренды со множественностью лиц на стороне арендатора.

 

По какой цене собственник объекта недвижимости может выкупить земельный участок?

Выкупная цена регламентируется правовыми актами правительства РФ, органами власти субъекта РФ или органами местного самоуправления. Однако в любом случае выкупная цена земельного участка не может превышать его кадастровую стоимость.

 На территории Кемеровской области действует областной закон №10-ОЗ от 07.02.2013 г., в соответствии с которым физические и юридические лица – собственники зданий и сооружений могут выкупить земельные участки, находящиеся в государственной собственности субъекта РФ, а также земельные участки, государственная собственность на которые не разграничена, по цене 100 % от кадастровой стоимости участка.

Но также существуют возможности приобретения земли по более низкой ставке. Этим правом могут воспользоваться, например, граждане – в отношении индивидуальных жилых домов, дачных и садовых домов, гаражей, а кроме того, и юридические лица, если ранее участок предоставлялся им на праве бессрочного пользования, а до 1 июля 2012 года они переоформили его на право аренды.

 

В какие органы необходимо обращаться с заявлением о предоставлении земельного участка?

Подразделения Росимущества сдают в аренду и предоставляют в собственность земельные участки, находящиеся в собственности Российской Федерации. Органы власти субъекта РФ распоряжаются земельными участками, находящимися в собственности субъекта Российской Федерации (в Кемеровской области – комитет по управлению госимуществом). Органы местного самоуправления – земельными участками, находящимися в собственности муниципальных образований. Полномочия указанных органов не меняются после 01.03.2015 года.

Существуют земельные участки, государственная собственность на которые не разграничена.

Но существуют «земельные участки, государственная собственность на которые не разграничена», — их большинство. Это значит, что земельный участок не отвечает критериям отнесения его к собственности РФ, субъекта РФ или муниципального образования, а специального акта о разграничении собственности не издавалось.

После 1 марта 2015 года меняются полномочия органов по распоряжению земельными участками, государственная собственность на которые не разграничена. По общему правилу, предоставлять такие участки в собственность или аренду будут органы местного самоуправления городского округа или поселения. А если земельный участок расположен на территории населенного пункта, в котором правила землепользования и застройки не утверждены, – органы муниципального района. Указанные изменения не касаются положения дел в городе Кемерово: полномочия по распоряжению данной категорией земельных участков будет у областного комитета по управлению госимуществом, как и в настоящий момент.

 

Какие проблемы с выкупом земли могут возникнуть?

• Ситуация №1. Распространенная ошибка, возникающая в процессе приватизации земли, — направление документов на приобретение земельного участка в орган, который не вправе распоряжаться таким земельным участком.

  Так, организация — собственник объекта недвижимости, расположенного на земельном участке, обратилось в Комитет по управлению государственным имуществом Кемеровской области (КУГИ) за предоставлением данного земельного участка в порядке приватизации. И уже только после подачи заявления в КУГИ выяснилось, что в Едином госреестре прав было зарегистрировано право собственности Российской Федерации на спорный участок. Как следствие – в выкупе было отказано с разъяснением права на обращение в Росимущество.

  В настоящее время организация защищает свои права на льготный выкуп (действовал до 01 июля 2012 года) в суде.
   

• Ситуация №2. В другом случае собственник объекта недвижимости (ООО) подал заявление на выкуп земельного участка в надлежащий орган, однако КУГИ необоснованно отказал в предоставлении участка в связи с тем, что его границы подлежали уточнению. Необходимо отметить, что эти замечания не являлись неустранимыми препятствиями для рассмотрения заявления Общества. К тому же общество параллельно вело работы по межеванию участка.

  Адвокаты КА «Юрпроект» сопровождали данный спор в арбитражных судах (дело № А27-4786/2014). В итоге Арбитражный суд Кемеровской области обязал КУГИ устранить нарушения закона и рассмотреть по существу заявление о предоставлении земельного участка Обществу в собственность.

Также на практике существуют ситуации, когда уполномоченные органы не учитывают имеющиеся у заинтересованного лица льготы на приобретение земельного участка (ситуация №3), требуют уменьшить площадь требуемого заявителю участка (ситуация №4), отказывают по иным основаниям – зачастую, необоснованно.

В таких случаях квалифицированная правовая помощь по взаимодействию с органами власти и сопровождению процедуры выкупа земельного участка (а при необходимости — по обжалованию незаконных действий чиновников в прокуратуру или суд) – действительнопозволяет решить проблему с оформлением прав на землю в разумные сроки и с минимальными трудностями.

 

Алгоритм действий по выкупу земельного участка

 

Решение ВС снизит потенциал местных администраций для земельных «схем»

Сначала компании дали в аренду огромный земельный участок, на десятой части которого она возвела торговый центр. Потом как его собственник она выкупила всю землю без торгов и собиралась с одобрения администрации построить там супермаркет. Антимонопольный орган это возмутило, а вот суды двух инстанций нет, однако, их поправила экономколлегия. Юристы рассказывают, что теперь ждет публичных собственников и почему решение ВС справедливо.

Коллегия Верховного суда по экономическим спорам (КЭС) опубликовала определение по антимонопольному делу, где главным фигурантом выступила Администрация города Дубны (№ А40-125042/2015). «Определение посвящено тонкому и болезненному вопросу предоставления земли в свете соблюдения законодательства о защите конкуренции в системной взаимосвязи с Земельным кодексом», – говорит Анна Заброцкая, советник и руководитель практики «Разрешение споров» Санкт-Петербургского офиса «Борениус». На ее взгляд, решение КЭС является позитивным примером борьбы с разного рода схемами обхода закона. 

Анна Заброцкая, «Борениус». Фактически КЭС устранила расширительное толкование исключительных случаев, когда земельные участки предоставляются без публичных процедур. Практически это означает, что публичный субъект обязан каждый раз обосновывать площадь отчуждаемого земельного участка. 

«Схема» началась в 2007 году, когда ООО «Столичные инвестиции. Дубна» арендовало у Администрации города земельный участок для строительства торгово-офисного центра. После завершения стройки общество как собственник здания на земле обратилось с заявлением о ее выкупе без торгов – в порядке тогда еще действовавшей ч. 1 ст. 36 Земельного кодекса. Неоднозначность ситуации была в том, что площадь центра была всего 796 кв. м, а площадь выкупленной земли – целых 10 000 кв. м.

Антимонопольный орган попросили проверить законность таких действий. В результате Управление Федеральной антимонопольной службы по Московской области (УФАС) признало Администрацию и застройщика нарушившими закон о защите конкуренции. Впрочем, суды признали решение УФАС незаконным. Общество как собственник здания имело преимущественное право покупки земельного участка, коротко объясняется в актах. При этом ссылка УФАС на значительную разницу в площади суды не смутила. Это, по их мнению, значения не имеет: ст. 36 ЗК не устанавливает предельных размеров.

Такая логика ошибочна, констатировала КЭС. Для понимания этого достаточно обратиться к п. 3 ст. 33 ЗК (в редакции, действовавшей до января 2015-го), согласно которой предельные размеры земельных участков устанавливаются в соответствии с правилами землепользования и застройки, землеустроительной, градостроительной и проектной документацией. Как разъяснила КЭС:

<…> при предоставлении в собственность хозяйствующего субъекта арендуемого им земельного участка без публичных торгов орган государственной власти обязан учитывать потребность в данном земельном участке исходя из назначения объекта недвижимости, градостроительных и иных требований, а также проектов планировки и развития территории населенного пункта.

Нужно учесть и «согласованность» действий виновников спора, которую также не оставили без внимания антимонопольщики (в отличе от судов). До передачи земли в собственность застройщика город планировал построить там многоэтажный жилой дом. Однако после общество разделило участок на два, а сразу после этого администрация издала постановление, разрешив тем самым возвести на свободной от офисного центра земле супермаркет. С учетом этого, а также того факта, что Администрация никакого обоснования своим действием не дала, тройка ВС (Татьяна Завьялова, Наталья Павлова, Марина Пронина) акты нижестоящих инстанций отменила, признав решение УФАС законным.

Мнение юристов

 

«Действительно, ни Земельный кодекс, ни другие законодательные акты не содержат предельных размеров участков, которые можно приватизировать без торгов в порядке ст. 36 ЗК (в ранее действовавшей редакции)», – рассказывает Виталий Можаровский, партнер Goltsblat BLP. Но это и оправданно, поскольку невозможно заранее определить эти размеры. На них влияет большое количество разных параметров.

Виталий Можаровский, Goltsblat BLP. Одно дело, например, жилой дом эконом-класса в мегаполисе и другое, – логистический парк, которому требуются большие свободные пространства для маневрирования и стоянок тяжёлых грузовиков. И таких примеров можно приводить десятки. 

По мнению Можаровского, вполне разумно, что в законе есть просто ссылка на проектную документацию: «Именно она должна определять «разумные размеры», принимая во внимание специфику бизнеса и производственных процессов, конфигурацию участка, транспортно-логистические решения, вопросы безопасности и т. д.». Как указывает Можаровский, КЭС своим определением последовательно призывает оценивать сделки исходя из существа отношений, а не формально: внешне каждая из последовательных сделок между администрацией и застройщиком сама по себе выглядит полностью соответствующей закону.

При этом, по словам Ирины Афанасьевой, юриста практики «Недвижимость. Земля. Строительство» юридической фирмы VEGAS LEX, достаточно распространены случаи, когда органы местного самоуправления отказывают в предоставлении земельного участка в связи с тем, что его площадь несоразмерно больше площади расположенного на нем объекта недвижимости. Такие отказы суды признают правомерными (см., в частности, определение ВС от 15 сентября.2016 года № 305-КГ16-11133).

«С практической точки зрения, определение КЭС должно помочь пресечению выстраивания недобросовестных схем с целью обхода закона, коих уже придумано немало. Логика определения ВС должна снизить желание их разрабатывать и применять», – резюмирует Наталья Афиногенова, юрист Dentons.

Читайте также

Ст. 36 Кодекс РБ о Земле Размеры земельных участков 425-З от 23.07.2008 г. Кодекс Республики Беларусь о Земле Статья 36 (Земельный Кодекс РБ) Комментарий

Размер земельного участка, предоставляемого в частную собственность, пожизненное наследуемое владение, пользование или аренду для строительства и (или) обслуживания жилого дома, обслуживания зарегистрированной организацией по государственной регистрации квартиры в блокированном жилом доме, устанавливается:

в городах – от 0,05 до 0,15 гектара включительно;

в сельских населенных пунктах, поселках городского типа – от 0,15 до 0,25 гектара включительно.

Размеры земельных участков, предоставляемых для строительства и обслуживания жилых домов в населенных пунктах, расположенных в пригородных зонах г. Минска, областных центров и городов областного подчинения, устанавливаются от 0,1 до 0,15 гектара включительно. Размеры земельных участков, находившихся в пользовании граждан, индивидуальных предпринимателей или юридических лиц до 1 января 2008 года и предоставляемых для обслуживания жилых домов, квартир в блокированных жилых домах (при соблюдении условий, установленных законодательством), в указанных населенных пунктах устанавливаются от 0,15 до 0,25 гектара включительно.

Размер земельных участков, предоставляемых гражданину Республики Беларусь в сельском населенном пункте, поселке городского типа, в котором он зарегистрирован, или предоставляемых в ином населенном пункте, расположенном на территории соответствующего сельсовета, для ведения личного подсобного хозяйства в частную собственность или пожизненное наследуемое владение, не может превышать 1 гектара, а предоставляемых в аренду – 4 гектаров с учетом размера земельного участка, предоставленного на территории соответствующего сельсовета для строительства и (или) обслуживания жилого дома, обслуживания зарегистрированной организацией по государственной регистрации квартиры в блокированном жилом доме. Дополнительно к земельным участкам, предоставленным для ведения личного подсобного хозяйства в частную собственность или пожизненное наследуемое владение, в таких населенных пунктах в аренду могут предоставляться земельные участки, размер которых не может превышать 3 гектаров.

Размер земельного участка, предоставляемого в сельском населенном пункте, поселке городского типа иностранному гражданину, лицу без гражданства, зарегистрированному по месту жительства в этом населенном пункте или ином населенном пункте, расположенном на территории соответствующего сельсовета, для ведения личного подсобного хозяйства в аренду, не может превышать 4 гектаров с учетом размера земельного участка, предоставленного в населенном пункте для строительства и (или) обслуживания жилого дома, обслуживания зарегистрированной организацией по государственной регистрации квартиры в блокированном жилом доме.

Размер земельного участка, предоставляемого в частную собственность, пожизненное наследуемое владение или аренду для коллективного садоводства, дачного строительства, не может превышать 0,15 гектара на одного члена садоводческого товарищества, дачного кооператива.

Размер земельного участка, предоставляемого гражданину Республики Беларусь для ведения крестьянского (фермерского) хозяйства на праве пожизненного наследуемого владения, не может превышать 100 гектаров сельскохозяйственных земель.

Размер земельного участка, предоставляемого крестьянскому (фермерскому) хозяйству для ведения крестьянского (фермерского) хозяйства на праве постоянного пользования или аренды, определяется проектом отвода земельного участка.

Конкретный размер земельного участка, предоставляемого для целей, указанных в частях первой – четвертой настоящей статьи, устанавливается государственным органом, предоставляющим земельный участок, в соответствии с его компетенцией, предусмотренной настоящим Кодексом и иными актами законодательства, в зависимости от местных условий и особенностей, волеизъявления лица, которому он предоставляется, а также с соблюдением градостроительных регламентов, природоохранных требований, противопожарных, санитарных, строительных и иных норм и правил. Предоставление земельного участка меньше минимального размера, установленного настоящей статьей, может осуществляться только с согласия лица, которому он предоставляется.

Размер земельного участка, предоставляемого для огородничества, сенокошения и выпаса сельскохозяйственных животных, традиционных народных промыслов (ремесел), устанавливается государственным органом, предоставляющим земельный участок в соответствии с его компетенцией, в зависимости от местных условий и особенностей, волеизъявления лица, которому он предоставляется.

 30.04.1998. Земельный кодекс Республики Узбекистан

В случаях, предусмотренных статьей 24¹настоящего Кодекса, срок договора субаренды земельных участков сельскохозяйственного назначения, введенных в пользование, определяется по соглашению сторон и не может превышать срок договора аренды земельного участка сельскохозяйственного назначения. Прекращение права владения или права постоянного либо временного пользования земельным участком в случаях, указанных в пунктах 1, 2, 3 и 5 части первой настоящей статьи, производится соответственно решениями хокимов районов, городов, областей или решением Кабинета Министров Республики Узбекистан по представлению органов, осуществляющих государственный контроль за использованием и охраной земель, на основании подтверждающих документов, обосновывающих прекращение прав. Прекращение права владения или права постоянного либо временного пользования земельным участком в случаях, указанных в пунктах 6 — 11 части первой настоящей статьи, производится судом в порядке, установленном в статье 38 настоящего Кодекса. Прекращение права владения или права постоянного либо временного пользования земельным участком в случае, указанном в пункте 12 части первой настоящей статьи, производится решениями хокимов районов по предложению советов фермерских, дехканских хозяйств и владельцев приусадебных земель соответствующего района на основании подтверждающих документов, обосновывающих прекращение прав. При несогласии с решениями Кабинета Министров Республики Узбекистан и указанных должностных лиц о прекращении права владения, права постоянного или временного пользования земельными участками юридические и физические лица могут обжаловать их в суд.В случаях, предусмотренных пунктами 6 — 11 части первой статьи 36 настоящего Кодекса, а также в других случаях нарушения земельного законодательства орган, осуществляющий государственный контроль за использованием и охраной земель, после предупреждения землевладельца или землепользователя вносит в орган, предоставивший земельный участок, представление об изъятии земельного участка. Орган, предоставивший земельный участок, на основании представления в месячный срок вносит в суд исковое заявление о его изъятии. В необходимых случаях орган, предоставивший земельный участок, вправе назначить дополнительную проверку состояния земельного участка и качества проводимых землевладельцем или землепользователем мер по рациональному использованию и охране земель.

Влияние илопроста (ZK 36374) на статус глутатиона во время ишемии и реперфузии изолированных сердец кроликов.

Br J Pharmacol. 1989 Oct; 98 (2): 678–684.

Cattedra di Cardiologia, Университет Брешии, Италия.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

1. Реперфузия изолированных сердец кроликов через 60 минут ишемии привела к плохому восстановлению механической функции, высвобождению креатинфосфокиназы (CPK) и восстановленного (GSH) и окисленного (GSSG) глутатиона, снижению митохондриальной супероксиддисмутазы ( Mn SOD) и соотношение GSH / GSSG в тканях со сдвигом окислительно-восстановительного состояния клеточных тиолов в сторону окисления, что свидетельствует о возникновении окислительного стресса.2. Предварительная обработка изолированного сердца стабильным аналогом простациклина (илопрост) при 27 или 270 нМ, но не при 2,7 нМ, улучшила функциональное восстановление миокарда, уменьшила высвобождение CPK, GSH и GSSG, поддержала активность Mn SOD и ослабила возникновение окислительного стресса. 3. Этот эффект илопроста нельзя объяснить пониженной потребностью или усиленной доставкой кислорода во время ишемии или прямым влиянием на активность глутатионпероксидазы и редуктазы.

Полный текст

Полный текст доступен в виде отсканированной копии оригинальной печатной версии.Получите копию для печати (файл PDF) полной статьи (1.0M) или щелкните изображение страницы ниже, чтобы просмотреть страницу за страницей. Ссылки на PubMed также доступны для Избранные ссылки .

Избранные ссылки

Эти ссылки находятся в PubMed. Это может быть не полный список ссылок из этой статьи.

• Адамс Дж. Д., младший, Лаутербург, Б. Х., Митчелл-младший. Глутатион в плазме и дисульфид глутатиона у крыс: регуляция и реакция на окислительный стресс.J Pharmacol Exp Ther. 1983 декабрь; 227 (3): 749–754. [PubMed] [Google Scholar]
• Брэдфорд MM. Быстрый и чувствительный метод количественного определения количества белка в микрограммах, использующий принцип связывания белок-краситель. Анальная биохимия. 7 мая 1976 г., 72: 248–254. [PubMed] [Google Scholar]
• Ceconi C, Curello S, Cargnoni A, Ferrari R, Albertini A, Visioli O. Роль статуса глутатиона в защите от ишемического и реперфузионного повреждения: эффекты N-ацетилцистеина. J Mol Cell Cardiol.1988 Январь; 20 (1): 5–13. [PubMed] [Google Scholar]
• Curello S, Ceconi C, Cargnoni A, Cornacchiari A, Ferrari R, Albertini A. Улучшенная процедура определения глутатиона в плазме как показателя окислительного стресса миокарда. Clin Chem. 1987 Авг; 33 (8): 1448–1449. [PubMed] [Google Scholar]
• Дариус Х., Осборн Дж. А., Райбель Д. К., Лефер А. М.. Защитные действия стабильного аналога простациклина при повреждении мембраны, вызванном ишемией, в миокарде крысы. J Mol Cell Cardiol. Март 1987 г., 19 (3): 243–250.[PubMed] [Google Scholar]
• de Langen CD, van Gilst WH, Wesseling H. Устойчивая защита сердца свиньи с помощью илопроста в острой и хронической фазах инфаркта миокарда. J Cardiovasc Pharmacol. 1985 сентябрь-октябрь; 7 (5): 924–928. [PubMed] [Google Scholar]
• Fantone JC, Kinnes DA. Модуляция простагландином E1 и простагландином I2 производства супероксида нейтрофилами человека. Biochem Biophys Res Commun. 15 июня 1983 г., 113 (2): 506–512. [PubMed] [Google Scholar]
• Фарбер Н. Э., Пипер Г. М., Томас Дж. П., Гросс Дж. Дж.Благотворное влияние илопроста на оглушенный миокард собак. Circ Res. 1988 Февраль; 62 (2): 204–215. [PubMed] [Google Scholar]
• Ferrari R, Ceconi C, Curello S, Guarnieri C, Caldarera CM, Albertini A, Visioli O. Опосредованное кислородом повреждение миокарда во время ишемии и реперфузии: роль клеточной защиты от кислородного отравления. J Mol Cell Cardiol. 1985 Октябрь; 17 (10): 937–945. [PubMed] [Google Scholar]
• Ferrari R, Ceconi C, Curello S, Cargnoni A, Agnoletti G, Boffa GM, Visioli O.Внутриклеточные эффекты ишемии и реперфузии миокарда: роль кальция и кислорода. Eur Heart J. 1986 May; 7 (Suppl A): 3–12. [PubMed] [Google Scholar]
• Ferrari R, Cargnoni A, Ceconi C, Curello S, Belloli S, Albertini A, Visioli O. Защитный эффект миметика простациклина на реперфузированный ишемией миокард кролика. J Mol Cell Cardiol. 1988 декабрь; 20 (12): 1095–1106. [PubMed] [Google Scholar]
• van der Giessen WJ, Schoutsen B, Tijssen JG, Verdouw PD. Илопрост (ZK 36374) усиливает восстановление регионарной функции миокарда во время реперфузии после окклюзии коронарной артерии у свиньи.Br J Pharmacol. 1986, январь, 87 (1): 23–27. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Харрис Э. Дж., Бут Р., Купер МБ. Влияние образования супероксида на способность митохондрий поглощать и удерживать Ca2 +. FEBS Lett. 1982 20 сентября; 146 (2): 267–272. [PubMed] [Google Scholar]
• Hess ML, Okabe E, Kontos HA. Взаимодействие протонов и свободных кислородных радикалов с кальциевой транспортной системой саркоплазматического ретикулума сердца. J Mol Cell Cardiol. 1981, август; 13 (8): 767–772. [PubMed] [Google Scholar]
• Griffiths GL, Sigel SP, Payne SM, Neilands JB.Вибриобактин, сидерофор от холерного вибриона. J Biol Chem. 1984 10 января; 259 (1): 383–385. [PubMed] [Google Scholar]
• Лефер А.М., Оглетри М.Л., Смит Дж.Б., Сильвер М.Дж., Николау К.С., Барнетт В.Е., Гасич Г.П. Простациклин: потенциально ценное средство для сохранения ткани миокарда при острой ишемии миокарда. Наука. 1978, 7 апреля; 200 (4337): 52–54. [PubMed] [Google Scholar]
• Меерсон Ф.З., Каган В.Е., Козлов Ю.П., Белкина Л.М., Архипенко Ю.В. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе ишемического поражения и антиоксидантной защите сердца.Basic Res Cardiol. Сентябрь-октябрь 1982 г.; 77 (5): 465–485. [PubMed] [Google Scholar]
• ОЛИВЕР ИТ. Спектрофотометрический метод определения креатинфосфокиназы и миокиназы. Biochem J. Сентябрь 1955; 61 (1): 116–122. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Paglia DE, Valentine WN. Исследования по количественной и качественной характеристике глутатионпероксидазы эритроцитов. J Lab Clin Med. Июль 1967; 70 (1): 158–169. [PubMed] [Google Scholar]
• Шрёр К., Олендорф Р., Дариус Х.Благоприятные эффекты нового производного карбациклина, ZK 36 374, при острой ишемии миокарда. J Pharmacol Exp Ther. 1981 Октябрь; 219 (1): 243–249. [PubMed] [Google Scholar]
• Schrör K, Darius H, Matzky R, Ohlendorf R. Антиагрегантное и сердечно-сосудистое действие нового производного карбациклина (ZK 36 374) — эквивалентно PGI2 in vitro. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 1981 июнь; 316 (3): 252–255. [PubMed] [Google Scholar]
• Schrör K, Addicks K, Darius H, Ohlendorf R, Rösen P. PGI2 ингибирует активацию тромбоцитов, вызванную ишемией, и предотвращает повреждение миокарда путем ингибирования высвобождения катехоламина из адренергических нервных окончаний.Доказательства того, что цАМФ является общим знаменателем. Thromb Res. 1981, 1 января; 21 (1-2): 175–180. [PubMed] [Google Scholar]
• Седлак Дж., Линдси Р. Х. Оценка общих, связанных с белками и небелковых сульфгидрильных групп в ткани с помощью реактива Эллмана. Анальная биохимия. 1968, 24 октября; 25 (1): 192–205. [PubMed] [Google Scholar]
• Симпсон П.Дж., Микельсон Дж., Фантон Дж. К., Галлахер К.П., Луччеси Б.Р. Илопрост подавляет функцию нейтрофилов in vitro и in vivo и ограничивает экспериментальный размер инфаркта в сердце собаки.Circ Res. 1987 Май; 60 (5): 666–673. [PubMed] [Google Scholar]
• Tappel AL. Повреждение компонентов клеток перекисным окислением липидов. Fed Proc. 1973, август; 32 (8): 1870–1874. [PubMed] [Google Scholar]
• Thiemermann C, Steinhagen-Thiessen E, Schrör K. Ингибирование кислородно-центрированного образования свободных радикалов с помощью стабильного простациклин-миметического илопроста (ZK 36 374) при острой ишемии миокарда. J Cardiovasc Pharmacol. Март-апрель 1984 г.; 6 (2): 365–366. [PubMed] [Google Scholar]
• Титце Ф. Ферментативный метод количественного определения количества общего и окисленного глутатиона в нанограммах: приложения к крови и другим тканям млекопитающих.Анальная биохимия. Март 1969 г., 27 (3): 502–522. [PubMed] [Google Scholar]

---

Статьи из Британского журнала фармакологии любезно предоставлены Британское фармакологическое общество

---

ZK International Group Co., Ltd. объявляет о рекордной выручке в 86,85 миллионов долларов, увеличившись на 36 % на 2020 финансовый год

 ZK International Group Co., Ltd. объявляет о рекордной выручке в размере 86,85 миллиона долларов,
                 Увеличение на 36% в 2020 финансовом году

PR Newswire

ВЭНЬЧЖОУ, Китай, фев.9, 2020

ВЭНЬЧЖОУ, Китай, 9 февраля 2020 г. / PRNewswire / - ZK International Group Co.,
Ltd. (ZKIN) («ZK International» или «Компания»), проектировщик, инженер,
производитель и поставщик запатентованной высококачественной нержавеющей стали и
трубы из углеродистой стали, в основном используемые для водоснабжения и газоснабжения, сегодня
объявила аудированные финансовые результаты за финансовый год, закончившийся в сентябре
30, 2020.

Основные финансовые показатели на 2020 финансовый год

                                           За финансовый год, закончившийся в сентябре
                                           30,
(в миллионах долларов, кроме данных на акцию) 2020 2019% Изменение
Выручка 86 долларов.85 $ 63,88 35,9%
Валовая прибыль $ 3,94 $ 15,64 -74,8%
Валовая прибыль 4,5% 24,5% -19,9 процента
                                                              точки
Прибыль (убыток) от операционной деятельности (1,88 $) 8,65 $ -121,7%
Маржа операционной прибыли (убытка) -2,2% 13,5% -15,7 процента
                                                              точки
Чистая прибыль (убыток), приходящаяся на ZK (0.83) 8,11 $ -110,2%
Международный
Разводненная прибыль (убыток) на акцию (0,05 доллара США) 0,49 доллара США -110,2%
Чистая балансовая стоимость на акцию 2,72 доллара США 2,63 доллара 3,4%



  o Выручка увеличилась на 35,9% до рекордных 86,85 млн долларов США, главным образом за счет
    увеличение продаж рулонов и полос из нержавеющей стали и частично компенсировано за счет
    сниженные средневзвешенные цены продажи («ASP»), предлагаемые покупателям в качестве
    временная стратегия продаж во время пандемии путем предоставления одноразовых
    скидка на определенные товары некоторым ключевым клиентам.o Валовая прибыль снизилась на 74,8% до 3,94 млн долларов США. Валовая прибыль составила 4,5%,
    по сравнению с 24,5% за предыдущий финансовый год. Снижение валовой прибыли
    и валовая прибыль в основном связаны с увеличением процента продаж на низком уровне
    валовая маржа продукции, такой как рулоны и полосы из нержавеющей стали, и уменьшилась
    процент продаж продукции с высокой валовой прибылью, такой как нержавеющая сталь
    трубопроводная и фитинговая продукция.
  o Убыток от операционной деятельности составил 1,88 миллиона долларов США по сравнению с доходом от операционной деятельности.
    8 долларов.65 миллионов за предыдущий финансовый год. Маржа операционных убытков составила
    2,2%, по сравнению с маржой операционной прибыли в 13,5% за предыдущий финансовый период.
    год.
  o Чистый убыток, относящийся к ZK International, составил 0,83 млн долларов США, или чистый убыток
    0,05 доллара за акцию. По сравнению с чистой прибылью, относящейся к ZK
    International в размере 8,11 млн долларов США, или 0,49 доллара США за акцию, за предыдущий финансовый период.
    год.
  o Чистая балансовая стоимость на акцию на 30 сентября 2020 г. составляла 2,72 доллара США по сравнению с
    2,63 доллара США по состоянию на 30 сентября 2019 г.

"Хотя пандемия COVID-19 вызвала исторические неудачи в мировой экономике
и беспрецедентные трудности по стоимости труб из нержавеющей и углеродистой стали
сети, нам удалось увеличить нашу выручку на 35.9% и достигла рекордной выручки в размере
86,85 миллиона долларов за двенадцать месяцев, закончившихся 30 сентября 2020 г., что свидетельствует о
высокое качество нашей продукции и признание среди наших конечных потребителей.
Однако в 2020 финансовом году рентабельность и рентабельность ухудшились.
результат значительного снижения ASP для наших продуктов и увеличения продаж
рулонная и полосовая продукция из нержавеющей стали с более низкой маржой в процентах от общего количества
продажи. Мы воодушевлены и с нетерпением ждем следующего года, в котором мы
надеемся, что и дальше будем видеть не только рост выручки в нашей компании, но и рост
по рентабельности и рентабельности."прокомментировал г-н Цзяньцун Хуан, председатель и
Генеральный директор ZK International.

Финансовые результаты за 2020 финансовый год

Доход

За финансовый год, закончившийся 30 сентября 2020 г., выручка увеличилась на
22,96 млн долларов, или 35,9%, до рекордных 86,85 млн долларов с 63,88 млн долларов за
предыдущий финансовый год. Рост выручки был в основном обусловлен нашим
увеличение продаж рулонов и полос из нержавеющей стали, что частично компенсируется
снижение средневзвешенных цен реализации, предлагаемых покупателям.Увеличенный
продажа рулонов и лент из нержавеющей стали, которые также являются сырьем для
производство наших трубопроводов и фитингов из нержавеющей стали в первую очередь было обусловлено
решение руководства снизить уровень запасов во время пандемии Covid-19
и для увеличения денежного потока Компании. Прирост выручки от продаж составил
частично компенсировано снижением средневзвешенных цен реализации, предлагаемых
клиентов в качестве временной стратегии продаж во время пандемии путем предоставления
разовая скидка на определенные продукты некоторым ключевым клиентам в результате
другие клиенты не могли выполнять свои заказы, поскольку они пострадали от
негативное влияние пандемии COVID-19 в начале этого года.Валовая прибыль

Валовая прибыль снизилась на 11,70 млн долларов США, или 74,8%, до 3,94 млн долларов США.
2020 финансовый год с 15,64 миллиона долларов за предыдущий финансовый год. Как результат,
валовая прибыль снизилась до 4,5% в 2020 финансовом году с 24,5% для
предыдущий финансовый год. Снижение валовой прибыли в основном связано с уменьшением
средневзвешенные цены продажи, которые мы предлагали покупателям как временные продажи
стратегия во время пандемии, предоставляя разовую скидку на определенные продукты
некоторым ключевым клиентам в результате того, что другие клиенты не могут выполнить
их заказы, поскольку они пострадали от негативного воздействия COVID-19
пандемия в начале этого года.Снижение валовой прибыли также связано с
к увеличению процента продаж продуктов с низкой валовой прибылью, таких как
рулон и полоса из нержавеющей стали и снижение процента продаж высоких валовых
маржинальные продукты, такие как трубы и фитинги из нержавеющей стали. Брутто
прибыль от катушек из нержавеющей стали составляет примерно 0,15% за счет
снижение средней цены реализации рулонной продукции из нержавеющей стали, в то время как наша
продукция трубопроводов для воды и газа обычно имеет валовую прибыль 7,58% в течение
год закончился 30 сентября 2020 года.Операционные расходы

Расходы на продажи и маркетинг снизились на 0,43 млн долларов США, или 16,3%, до 2,22 долларов США.
млн на 2020 финансовый год с 2,65 млн долларов за предыдущий финансовый год.
В процентном отношении к продажам, коммерческим и маркетинговым расходам пришлось 2,6% для
2020 финансовый год по сравнению с 4,1% за предыдущий финансовый год. Уменьшение было
в первую очередь за счет снижения транспортных расходов, расходов на рекламу и
вознаграждение торгового персонала в течение года.

Общие и административные расходы снизились на $ 0.42 млн, или 14,3%, до
2,48 миллиона долларов на 2020 финансовый год с 2,90 миллиона долларов на предыдущий финансовый год.
год. В процентном отношении к продажам общие и административные расходы составили 2,9%.
в 2020 финансовом году по сравнению с 4,5% в предыдущем финансовом году. В
снижение в основном связано с сокращением командировочных расходов и
расходы на развлечения.

Затраты на исследования и разработки снизились на 0,33 млн долл. США, или на 22,6%, до
1,12 миллиона долларов на 2020 финансовый год с 1,45 миллиона долларов на предыдущий финансовый год.
год.В процентах от продаж расходы на исследования и разработки составили 1,3% для
в 2020 финансовом году по сравнению с 2,3% в предыдущем финансовом году. Уменьшение
в первую очередь из-за сокращения научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ как
результат разрушения, вызванного пандемией.

Общие операционные расходы снизились на 1,18 млн долларов США, или 16,8%, до 5,82 долларов США.
млн на 2020 финансовый год с 7,00 млн долларов за предыдущий финансовый год.
В процентном отношении к продажам общие операционные расходы составили 6,7% для фискального бюджета.
2020 год, по сравнению с 11.0% за предыдущий финансовый год.

Доход (убыток) от операционной деятельности

Убыток от операционной деятельности в 2020 финансовом году составил 1,88 млн долларов США по сравнению с
операционная прибыль за предыдущий финансовый год составила 8,65 млн долларов. Как
в результате маржа операционных убытков составила 2,2% в 2020 финансовом году по сравнению с
операционная маржа в размере 13,5% за предыдущий финансовый год. Уменьшение
операционная прибыль и операционная маржа в основном связаны с уменьшением
валовая прибыль (маржа), описанная выше и частично компенсированная уменьшением
операционные расходы.Прочие доходы (расходы)

Процентные расходы в 2020 финансовом году составили 1,00 млн долларов США по сравнению с
1,15 миллиона долларов за предыдущий финансовый год. Прочие доходы составили 0,33 миллиона долларов за
в 2020 финансовом году по сравнению с 0,92 миллиона долларов в предыдущем финансовом году. В качестве
В результате общие чистые прочие расходы за финансовый год составили 0,39 миллиона долларов.
2020 г., по сравнению с 0,20 млн долларов США за предыдущий финансовый год.

Чистая прибыль (убыток) и прибыль (убыток) на акцию

В результате действия факторов, описанных выше, чистый убыток компании составил 0,84 млн долларов США.
2020 финансовый год по сравнению с чистой прибылью в 8 долларов.19 миллионов за предыдущий финансовый год
год. Маржа чистых убытков в 2020 финансовом году составила 1,0% по сравнению с чистыми убытками.
рентабельность за предыдущий финансовый год составила 12,8%.

После вычета неконтролирующих долей участия чистый убыток, относящийся к ZK
International составила 0,83 миллиона долларов, или чистый убыток 0,05 доллара на акцию, для
2020 финансовый год. В сравнении с чистой прибылью, относящейся к ZK International.
8,11 млн долларов, или 0,49 доллара на акцию, за предыдущий финансовый год.

Финансовое состояние

По состоянию на 30 сентября 2020 г. денежные средства и их эквиваленты и краткосрочные вложения
составила 4 доллара.05 млн по сравнению с 3,73 млн долларов на 30 сентября 2019 г.
Краткосрочные банковские заимствования составили 17,37 млн ​​долларов США по состоянию на 30 сентября 2020 г.
по сравнению с 16,28 млн долларов США на 30 сентября 2019 г.

Дебиторская задолженность на 30 сентября 2020 г. составила 31,39 млн долларов США по сравнению с
25,12 млн долларов США на 30 сентября 2019 г. Товарно-материальные запасы составили 21,68 млн долларов США на 30 сентября 2019 г.
30 сентября 2020 г. по сравнению с 20,80 млн долларов США на 30 сентября 2019 г.
Кредиторская задолженность на 30 сентября 2020 г. составила 10,35 млн долларов США по сравнению с
4,18 миллиона долларов США по состоянию на 30 сентября 2019 года.Общие текущие активы и краткосрочные обязательства составили 64,78 млн долларов США и
$ 40,88 млн, соответственно, что приводит к коэффициенту текущей ликвидности 1,58 на
30 сентября 2020 г. В сравнении с общими оборотными активами и текущими активами.
обязательства составляли 58,85 млн долларов и 34,58 млн долларов соответственно, а текущие
коэффициент 1,70 по состоянию на 30 сентября 2019 г.

Чистые денежные средства от операционной деятельности составили 0,46 млн долларов для фискальной
в 2020 году по сравнению с 8,46 млн долларов за предыдущий финансовый год. Использованные чистые денежные средства
в инвестиционной деятельности составил 1 доллар.16 миллионов на 2020 финансовый год, по сравнению
до 0,89 миллиона долларов за предыдущий финансовый год. Чистые денежные средства, полученные от финансирования
на 2020 финансовый год составила 0,76 млн долларов США по сравнению с чистыми денежными средствами.
использовано на финансовую деятельность в размере 11,73 млн долларов США за предыдущий финансовый год.

Недавние улучшения

19 января 2021 года Компания объявила о создании децентрализованного фонда, подобного ETF, и
платформа, которая была вторым проектом DeFi в экосистеме xSigma.

12 января 2021 года Компания объявила, что xSigma Corporation,
дочерняя компания компании, опубликовала технический документ для своего протокола DeFi
который раскрыл ключевые технические детали своего будущего продукта.4 января 2021 года Компания объявила, что xSigma Corporation,
блокчейн лаборатория исследований и разработок и дочерняя компания Компании, находились в процессе
обеспечение начальной ликвидности с помощью институционального и индивидуального блокчейна
инвесторов для своего проекта DeFi.

28 декабря 2020 года Компания объявила, что xSigma Corporation,
дочерняя компания Компании, завершила разработку смарт-контракта
Платформа DeFi от xSigma.

23 декабря 2020 года Компания объявила о приеме делегации во главе с
Мистер.Джеймс Хеллер, генеральный консул Генерального консульства США в Шанхае
14 декабря 2020 года во время визита в Вэньчжоу и Компании.

21 декабря 2020 года Компания объявила, что xSigma Corporation,
дочерняя компания компании, назначила Джесси Браунера старшим инженером.

10 декабря 2020 года Компания объявила о подписании письма о намерениях.
с Tuopeng Industrial, известной компанией по строительству и недвижимости, чтобы
создать совместное предприятие, которое будет участвовать в торгах на строительство судоходной и
гидроэнергетический проект общей стоимостью 4.9 миллиардов юаней
(примерно 0,7 миллиарда долларов США).

30 ноября 2020 года Компания объявила об официальном запуске
проект децентрализованного финансирования (DeFi).

30 ноября 2020 года Компания объявила, что ее дочерняя компания xSigma
Корпорация выбрала Dentoro Alliance LP в качестве партнера по разработке программного обеспечения.
для разработки и внедрения протокола децентрализованного финансирования
заявление.

25 ноября 2020 года Компания объявила, что ее дочерняя компания xSigma
Corporation, запускала протокол децентрализованного финансирования («DeFi»), который
направлены на обеспечение нового уровня прозрачности и легитимности децентрализованных
смарт-контракты на основе финансовых блокчейнов.23 ноября 2020 года Компания объявила, что планирует профинансировать
дочерняя компания, xSigma Corporation, для разработки и развертывания разрушительной цепочки блоков.
решения.

19 ноября 2020 года Компания объявила об официальном утверждении нового
национальный стандарт водосбережения в Китае.

9 ноября 2020 года Компания объявила, что ее дочерняя компания xSigma
Corporation, подписала письмо о намерениях с Dentoro Alliance LP.

22 октября 2020 года Компания объявила, что она была утверждена в качестве Квалифицированного
Поставщик для Suning Real Estate Co., Ltd, которая в 2019 году Suning Real
Estate вошла в ТОП-5 из 100 лучших коммерческих объектов коммерческой недвижимости Китая
Предприятия, ТОП-20 самых дорогих брендов недвижимости Китая и
ТОП-50 из 100 крупнейших китайских компаний в сфере недвижимости.

24 сентября 2020 года Компания объявила, что установила условия
финансирование в виде конвертируемых облигаций с совокупной валовой выручкой до 1,4 миллиона долларов.

О компании ZK International Group Co., Ltd.

ZK International Group Co., Ltd. - китайский дизайнер, инженер,
производитель и поставщик запатентованной высококачественной нержавеющей стали и
трубная продукция из углеродистой стали, требующая сложного водопровода или газопровода
системы.Компании принадлежит 33 патента, 21 товарный знак, 2 технических достижения.
Награды, а также 10 национальных и отраслевых наград. ZK International - это
Сертифицирована система менеджмента качества (ISO9001), система экологического менеджмента
Сертифицирован (ISO1401) и Национальное производство промышленной нержавеющей стали
Лицензиат, специализирующийся на поставках стальных труб для многомиллиардного
долларовые отрасли газового и водного секторов. ZK поставил нержавеющую сталь
трубопроводов для более чем 2000 проектов, включая Пекинский национальный аэропорт,
«Водный куб» и «Птичье гнездо», которые были местом проведения Пекинской конференции 2008 года.
Олимпиада.Подчеркивая превосходные свойства и долговечность стальных трубопроводов,
ZK International предлагает решение для доставки высокого качества,
очень устойчивая, экологически чистая питьевая вода не только для
рынок Китая, но также и международные рынки, такие как Европа, Восточная Азия,
и Юго-Восточная Азия.

Для получения дополнительной информации посетите сайт www.ZKInternationalGroup.com. Кроме того,
пожалуйста, следите за Компанией в Twitter, Facebook, YouTube и Weibo. Для
дополнительную информацию о документах компании в SEC можно найти на сайте www.sec.gov.

Заявление о безопасной гавани

Этот пресс-релиз содержит прогнозные заявления по смыслу
Раздел 27A Закона о ценных бумагах 1933 г. с поправками и раздел 21E Закона о ценных бумагах
Закон о фондовых биржах 1934 года с поправками и определением, принятым в США.
Закон о реформе судебных разбирательств по частным ценным бумагам 1995 года. Не ограничивая
Вообще говоря, такие слова, как «может», «будет», «ожидать», «поверить»,
«предполагать», «намереваться», «мог», «оценивать» или «продолжать», или отрицательное, или
другие их варианты или сопоставимая терминология предназначены для идентификации
прогнозные заявления.Кроме того, любые утверждения, относящиеся к
ожидания, прогнозы или другие характеристики будущих событий или
обстоятельства являются прогнозными заявлениями. Эти прогнозные заявления
не являются гарантией будущих результатов и подвержены определенным рискам,
неопределенности и предположения, которые трудно предсказать, и многие из которых
находятся вне контроля ZK International. Фактические результаты могут отличаться от
те, которые прогнозируются в прогнозных заявлениях из-за рисков и
неопределенности, а также другие факторы риска, которые включены в
Документы компании в U.S. Комиссия по ценным бумагам и биржам. Несмотря на то что
ZK International считает, что допущения, лежащие в основе перспективных
утверждения разумны, любое из предположений может оказаться неточным и,
следовательно, не может быть никакой гарантии, что результаты, предусмотренные в
прогнозные заявления будут реализованы. В свете значительного
неопределенности, присущие прогнозной информации, включенной в настоящий документ,
включение такой информации не должно рассматриваться как заявление ZK
Международное или любое другое лицо, что их цели или планы будут
достигнуто.ZK International не берет на себя никаких обязательств по пересмотру
прогнозные заявления, содержащиеся в данном документе, чтобы отразить события или обстоятельства
после указанной даты или для отражения наступления непредвиденных событий.

Контактное лицо для инвесторов:

Шерри Чжэн
ООО «Вайтиан Групп»
Почта: [email protected]
Телефон: + 1718-213-7386





ZK INTERNATIONAL GROUP CO., LTD
КОНСОЛИДИРОВАННЫЙ ОТЧЕТ ОБ ОПЕРАЦИЯХ И СОВОКУПНОМ ДОХОДЕ (УБЫТКЕ)
В ДОЛЛАРАХ США, БЕЗ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ ДАННЫХ)
                             За год, закончившийся 30 сентября,
                             2020 2019 2018
Выручка $ 86 846 791 $ 63 883 520 $ 54 884 381
Себестоимость (82 903 989) (48 239 478) (36 593 792)
Валовая прибыль 3,942,802 15,644042 18,290,589
Операционные расходы:
Продажа и маркетинг 2215651 2647429 2949204
затраты
Общие и административные 2 482 972 2 897 995 4 071 116
затраты
Исследования и разработки 1,123,555 1,452,061 1,652,633
расходы
Итого операционные расходы 5,822,178 6,997,485 8,672,953
Операционная прибыль (убыток) (1,879,376) 8,646,557 9,617,636
Прочие доходы (расходы):
Процентные расходы (1,000,554) (1,151,045) (1,239,170)
Процентные доходы 7,192 24,437 10,702
Прибыль от выбытия 536 612 - -
дочерняя компания, нетто
Убыток от инвестиций (256 937) - -
Прочие доходы, нетто 327,845 921,973 112,099
Итого прочие расходы, нетто (385,842) (204,635) (1,116,369)
Прибыль (убыток) до прибыли (2,265,218) 8,441,922 8,501,267
налоги
Возмещение налога на прибыль 1,428,202 (248,228) (1,398,210)
(расход)
Чистая (убыточная) прибыль (837 016) долл. США 8 193 694 долл. США 7 103 057 долл. США
Чистая (убыточная) прибыль
приходятся на 11,402 (86,828) (84,943)
неконтролируемые интересы
Чистая (убыточная) прибыль
относящиеся к ZK (825 614) 8 106 866 $ 7 018 114
Международная группа
Co., ООО
Чистая (убыточная) прибыль (837 016) 8 193 694 долл. 7 103 057 долл. США
Прочий совокупный доход
(потеря):
Иностранная валюта 2 319 048 (1 694 278) (818 468)
корректировка перевода
Итого совокупный доход $ 1,482,032 $ 6,499,416 $ 6,284,589
Совокупный убыток (доход)
относящиеся к (6,136) (73,919) (75,719)
неконтролируемые интересы
Совокупный доход
относящиеся к ZK $ 1 475 896 $ 6 425 497 $ 6 208 870
Международная группа
Co., ООО
Базовая и разводненная прибыль
(убыток) на акцию
Базовый $ (0,05) $ 0,49 $ 0,52
Разбавленный (0,05) 0,49 0,51
Средневзвешенное количество
Акции выдающиеся
Базовый 16,558,037 16,551,708 13,610,046
Разводненный 16,558,037 16,551,708 13,629,517







ZK INTERNATIONAL GROUP CO., LTD
ОБЪЕДИНЕННЫЙ БАЛАНС
(В ДОЛЛАРАХ США)
                                                 По состоянию на 30 сентября
                                                 2020 2019
Ресурсы
Текущие активы
Денежные средства и их эквиваленты 3 759 535 долл. США 3 451 138 долл. США
Краткосрочные инвестиции 294,568 279,810
Дебиторская задолженность за вычетом резерва на
сомнительные счета на сумму 2 020 373 долл. США и 1 919 152 долл. США, 31 393 289 долл. США 25 115 040 долл. США
соответственно
Векселя к получению 192 819 385 519
Прочая дебиторская задолженность 3,337,634 1,866,321
Задолженность перед связанными сторонами 47,135 110,990
Запасы 21,679,258 20,796,075
Аванс поставщикам 4 078 256 6 848 143
Итого оборотные активы 64,782,494 58,853,036
Основные средства, нетто 7,870,680 6,595,704
Нематериальные активы, нетто 929 021 918 717
Отложенные налоговые активы 724 612 289 756
Долгосрочный депозит 11,836,860 11,453,690
Долгосрочные инвестиции 306 837 291 464
ИТОГО АКТИВЫ 86 450 504 долл. 78 402 367 долл. США
ОБЯЗАТЕЛЬСТВА И АКЦИОНЕРНЫЙ КАПИТАЛ
Текущие обязательства:
Кредиторская задолженность $ 10 351 880 $ 4 182 530
Начисленные расходы и прочие краткосрочные обязательства 4,172,781 4,438,570
Начисленная заработная плата и социальное обеспечение 1,555,705 1,340,060
Авансы от клиентов 2,345,891 2,422,776
Средства связанных сторон 1,315,803 1,446,461
Краткосрочные банковские займы 17 372 894 16 281 461
Прочие заимствования - краткосрочная часть 420 741 -
Векселя к оплате 153,175 296,267
Налог на прибыль к уплате 3,188,615 4,176,537
Итого краткосрочные обязательства 40,877,485 34,584,662
Прочие займы - долгосрочная часть 269 290 -
ИТОГО ОБЯЗАТЕЛЬСТВА $ 41 146 775 $ 34 584 662
Беспристрастность
Обыкновенные акции без номинальной стоимости, 50 000 000 штук
объявленные, 16,558,037 и 16,558,037 акций
выпущены и находятся в обращении соответственно
Добавочный капитал 18 049 630 18 049 630
Обязательный резервный резерв 2,904,699 2,904,699
Нераспределенная прибыль 23 546 921 24 372 535
Накопленный прочий совокупный доход (убыток) 492,685 (1,808,825)
Итого капитал, относящийся к ZK International 44,993,935 43,518,039
Group Co., ООО
Капитал, относящийся к неконтролирующим 309,794 299,666
интересы
Итого собственный капитал 45,303,729 43,817,705
ИТОГО ОБЯЗАТЕЛЬСТВА И КАПИТАЛ $ 86 450 504 $ 78 402 367





ZK INTERNATIONAL GROUP CO., LTD
КОНСОЛИДИРОВАННЫЙ ОТЧЕТ О ДВИЖЕНИИ ДЕНЕЖНЫХ СРЕДСТВ
(В ДОЛЛАРАХ США)
                             За год, закончившийся 30 сентября,
                             2020 2019 2018
Денежные потоки от операционной
Мероприятия:
Чистая прибыль (837 016) $ 8 193 694 $ 7 103 057
Корректировки для согласования
чистая прибыль к чистым использованным денежным средствам
в операционной деятельности:
Расходы на амортизацию 438,467 375,286 395,604
Расходы на амортизацию 11,366 13,638 12,137
Убыток от выбытия фиксированный 7 608 2244 -
ресурсы
Расходы по безнадежным долгам - - 286 606
Резерв по запасам 103 942 - -
Списание аванса на 100 684 102 523
поставщики
Отложенные налоговые льготы (406 637) (1 958) (37 311)
Расходы на безналичное обслуживание - 50 679 -
Прибыль от выбытия (536 612) - -
дочернее предприятие
Убыток от инвестиций 214 114 - -
Изменение непризнанного налога (1 021 565) - -
преимущества
Изменения в операционных активах
и обязательства:
Дебиторская задолженность (4,800,889) 995,327 (7,151,260)
Прочая дебиторская задолженность (793,936) 680,970 (1,215,167)
Векселя к получению 206,465 13,119 (216,478)
Запасы 103,123 (3,846,722) (9,065,712)
Аванс поставщикам 2,933,852 596,380 1,580,700
Кредиторская задолженность 5,582,787 2,593,103 861,192
Векселя к оплате (153 824) 308 005 (380 000)
Начисленные расходы и прочие (484,477) (1,314,005) 1,698,015
текущие обязательства
Начисленная заработная плата и социальное обеспечение 140 497 506 894 600 619
Авансы от покупателей (198,358) (887,934) 1,563,693
Задолженность по налогу на прибыль (149,386) 83,250 1,349,310
Чистые предоставленные (использованные) денежные средства 460,205 8,464,493 (2,614,995)
основная деятельность
Денежные потоки от инвестиций
Мероприятия:
Приобретение недвижимости, (1,168,322) (880,289) (467,138)
завод и оборудование
Приступить к выбытию
недвижимость, завод и 6 281 5 963 -
оборудование
Выбытие нематериальных активов - - 257 863
актив
Приобретение нематериальных активов - (11 149) (501 000)
ресурсы
Чистые денежные средства, использованные при инвестировании (1,162,041) (885,475) (710,275)
виды деятельности
Денежные потоки от финансирования
виды деятельности:
Чистая выручка, высвобожденная от
(размещены) краткосрочные - 559 030 (893 945)
вложение
Чистая выручка, полученная от
(размещены в) долгосрочные (7 682 151) (4 444 170)
депозит
Чистая выручка, высвобожденная от - - 539 381
денежные средства с ограничением
Поступления от краткосрочных 18,061,979 25,875,962 24,056,279
банковские займы
Выплаты краткосрочных (17,836,445) (28,199,497) (25,529,488)
банковские займы
Чистая выручка, полученная от (133,007) (2,279,911) 5,665,914
(погашены) связанным сторонам
Исходя из прочих 775 951 - -
заимствование
Погашение прочего (107 195) - -
заимствование
Чистые денежные средства, предоставленные (использованные 761 283 (11 726 567) (606 029)
в) финансовая деятельность
Влияние обменного курса 248 950 (83 902) 335 413
изменения в наличных деньгах
Чистое изменение денежных средств и денежных средств 308,397 (4,231,451) (3,595,886)
эквиваленты
Денежные средства и их эквиваленты 3,451,138 7,682,589 11,278,475
в начале года
Денежные средства и их эквиваленты 3 759 535 долларов 3 451 138 долларов 7 682 589 долларов
в конце года
Дополнительное раскрытие
информация о денежных потоках:
Безналичное финансирование $ - $ 9 842 676
виды деятельности
Денежные средства, уплаченные по налогу на прибыль $ 149 291 $ 170 331 $ 38 218 $
Денежные средства, уплаченные под проценты $ 991 319 $ 1,197,504 $ 1,218,757
затраты





Cision Посмотреть оригинал
содержание: http: // www.prnewswire.com/news-releases/zk-international-group-co-ltd-announces-record-revenue-of-86-85-million-an-increase-of-36-for-the-fiscal-year-2020- -301225180.html

ИСТОЧНИК ZK International Group Co., Ltd.

Сайт: www.ZKInternationalGroup.com
 

Прежде чем оказаться здесь, он находится на терминале Bloomberg.

УЧИТЬ БОЛЬШЕ

Влияние антагониста AMPA ZK 200775 на функцию зрения: рандомизированное контролируемое исследование

Аннотация

Фон

ZK 200775 является антагонистом рецептора α-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолепропионата (AMPA) и заслужил внимание как возможное нейрозащитное средство при церебральной ишемии.Пробанды, получавшие агент в ходе испытаний I фазы, сообщили об изменении зрительного восприятия. В этом испытании было подробно проанализировано влияние ZK 200775 на зрительную систему.

Методология

В рандомизированном контролируемом исследовании мы изучали глаза и зрение до и после внутривенного введения двух разных доз ZK 200775 и плацебо. Всего было 3 группы по 6 пробандов в каждой: группа 1 получала 0,03 мг / кг / ч, группа 2 0,75 мг / кг / ч ZK 200775, контрольная группа получала 0.9% раствор натрия хлорида. Пробандами были здоровые мужчины в возрасте от 57 до 69 лет. Применялись следующие методы: клиническое обследование, острота зрения, офтальмоскопия, цветовое зрение, абсолютный порог стержня, центральное поле зрения, зрительные вызванные потенциалы с изменением паттерна (pVEP), ON-OFF и электроретинограмма во всем поле (ERG).

Основные результаты

Не было замечено влияния ZK 200775 на положение или моторику глаз, стереопсис, функцию зрачков или тестирование центрального поля зрения.Острота зрения и темное зрение значительно ухудшились в обеих группах лечения. Цветовое зрение было наиболее заметно нарушено. ЭРГ, адаптированная к темноте, выявила снижение осцилляторных потенциалов (OP) и частично a- и b-волн, кроме того, изменение морфологии b-волн и незначительно повышенное соотношение b / a. Модальности Cone-ERG показали снижение амплитуды и задержку неявного времени. В ЭРГ ВКЛ-ВЫКЛ амплитуды ответа ВКЛ увеличились, тогда как время пика ответа ВЫКЛ было уменьшено.Образец VEP показал более низкие амплитуды и более длительное время пика.

Выводы

Блокада рецептора AMPA привела к сильному нарушению типичных функций выключенного пути, таких как цветовое зрение и колбочка ERG. С другой стороны, ON-путь, измеренный с помощью темного зрения, и скотопическая ERG также были затронуты. Это дополнительно проясняет взаимозависимость обоих путей.

Образец цитирования: Bergholz R, Staks T, Rüther K (2010) Влияние антагониста AMPA ZK 200775 на зрительную функцию: рандомизированное контролируемое испытание.PLoS ONE 5 (8): e12111. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012111

Редактор: Катрина Гвинн, Национальные институты здравоохранения, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 26 октября 2009 г .; Одобрена: 10 июня 2010 г .; Опубликован: 12 августа 2010 г.

Авторские права: © 2010 Bergholz et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Это исследование финансировалось Bayer Schering AG (http://www.bayerhealthcare.com/scripts/pages/en/index.php). Спонсор участвовал в разработке исследования, но не принимал участия в сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи. Стоимость судебного разбирательства составила около 200 000 евро. Томас Стакс заявляет следующее: Нет никаких финансовых соглашений с Bayer HealthCare AG и ее аффилированными компаниями, по которым на размер компенсации мог бы повлиять результат исследования.В тестируемом продукте, являющемся предметом исследования, нет никаких имущественных интересов (то есть каких-либо имущественных или иных финансовых интересов, включая, помимо прочего, патенты, товарные знаки, авторские права или лицензионные соглашения). У Bayer HealthCare AG и ее дочерних компаний нет доли в капитале. Это может включать любую долю владения, опционы на акции или другие финансовые интересы, стоимость которых не может быть легко определена путем ссылки на публичные цены. В публичной компании нет доли в капитале, стоимость которой превышает 50 000 долларов США во время клинического исследования или в течение одного (1) года после завершения исследования.Никаких значительных платежей другого рода, которые представляют собой платежи с совокупной денежной стоимостью 25000 долларов США или более, произведенные Bayer HealthCare AG и ее дочерними компаниями во время клинического исследования или в течение одного (1) года после завершения исследования, за исключением затраты на проведение исследования или других клинических исследований. Это может включать гранты для финансирования текущих исследований, компенсацию в виде оборудования или гонораров за текущие консультации или гонорары.

Конкурирующие интересы: Томас Стакс работает в компании Bayer Schering AG, которая финансировала это испытание.Томас Стакс принимал участие только в дизайне исследования. Ни у кого из авторов нет финансовых, личных или профессиональных интересов, которые можно было бы истолковать как повлиявшие на их статью. Компания Bayer Schering AG прекратила дальнейшие исследования ZK200775, и в разработке нет других продуктов, связанных с ZK200775. Насколько известно авторам, Bayer Schering AG больше не имеет патента на ZK200775, и на рынке нет продуктов, связанных с ZK200775. Исследование финансировалось Bayer Schering AG и завершилось в 1997 году.В то время разработка ZK200775 и других антагонистов AMPA для лечения церебральной ишемии была очень многообещающей. Наконец, исследования ZK200775 в качестве терапевтического агента были прекращены, поскольку имелись опасные для жизни побочные эффекты, которые нельзя было устранить. В настоящее время Bayer Schering AG не заинтересована в дальнейшей разработке AMPA-антагониста ZK200775. Томас Стакс, как сотрудник Bayer Schering AG, принимал участие только в разработке исследования. Представленные здесь данные были собраны, проанализированы и подготовлены исключительно Клаусом Рютером и Рихардом Берггольцем.Оба являются независимыми исследователями и не связаны с Bayer Schering AG. Любая предвзятость из-за противоречивых интересов невозможна. Авторы заверяют, что роль Bayer Schering AG не ставит под угрозу их приверженность всем политикам PLoS ONE в отношении обмена данными и материалами. Причина представления этой рукописи — уникальность блокады рецепторов AMPA in vivo у людей.

Введение

Глутамат является важным возбуждающим нейромедиатором сетчатки [1], [2], [3].Помимо возбуждения нейронов, он также участвует в развитии нейронов, синаптической пластичности и нейротоксичности (экситоксичности) [4], [5], [6], [7]. Его активность опосредуется метаботропными и ионотропными рецепторами глутамата (mGluRs и iGluRs). Последние подразделяются на N-метил-D-аспартат (NMDA) и не-NMDA рецепторы. Последние снова классифицируются как α-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолепропионат (AMPA, состоящий из субъединиц iGluR1-4) и каинатный (состоящий из субъединиц iGluR6-7) рецепторы (см. Рисунок S1).

Не-NMDA рецепторы преобладают в пути выключения сетчатки в сетчатке млекопитающих. В экспериментах на животных субъединицы рецептора AMPA были локализованы во внутреннем и внешнем плексиформном слое, в амакриновых, биполярных и горизонтальных клетках, а также в ганглиозных клетках и глиальных клетках Мюллера [8], [9], [10], [11] . Webvision дает обзор опубликованных данных по различным видам (см. Таблицу S1) [12].

ZK 200775 был разработан Schering AG (Берлин, Германия) как антагонист рецептора AMPA.Это вызвало ожидания в качестве возможного нейропротекторного средства при церебральной ишемии. Представленные здесь данные были получены на этапе I исследования для оценки безопасности, переносимости и фармакокинетики препарата [13], [14], [15]. В более раннем испытании пробанды, получавшие ZK 200775, утверждали, что у них нечеткое зрение и сильно нарушенное цветовое восприятие, поэтому целью этого исследования было количественное определение офтальмологических эффектов ZK200775 с помощью соответствующих обследований.

Между тем дальнейшая разработка препарата была прекращена из-за невыносимых, но не связанных со зрением побочных реакций [16], [17], [18].

На микроскопическом уровне подробно изучены распределение и физиология рецепторов АМРА в сетчатке. Появление фазы I испытания ZK200775 открыло уникальную возможность исследовать эффекты блокады рецепторов in vivo, то есть выяснить функцию рецепторов AMPA на зрительное восприятие у людей.

Результаты

Введение ZK 200775 не повлияло на положение глаз (Таблица S2) и моторику (Таблица S3), стереопсис, как проверено с помощью теста Титмуса, зрачковую афферентность и эмоциональность (Таблица S4), тестирование центрального поля зрения с помощью Амслера. сетка (Таблица S5) и морфология переднего и заднего сегментов.

Острота зрения

Острота зрения значительно ухудшилась в обеих группах после лечения (p = 0,038 в группе 1 и p = 0,004 в группе 2). Через 22 часа исходный уровень практически восстановился. Правый глаз не тестировался, так как зрачок был расширен. См. Рисунок 1 и таблицу 1.

Рисунок 1. Острота зрения.

Динамика средних значений +/- 2 * стандартное отклонение для 6 человек в каждой группе. Значительное ухудшение по сравнению с исходным уровнем наблюдалось в обеих группах через 4 часа после лечения (столбцы, отмеченные звездочкой).Поскольку зрачок правого глаза был расширен, проверка остроты зрения проводилась только на левом глазу.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012111.g001

Цветное зрение

Наиболее выраженное влияние ZK 200775 было замечено на цветовое зрение, как было оценено с помощью теста ненасыщенной Lanthony Panel D-15. Различия между исходным уровнем и оценкой ошибок после лечения были значительными для обеих обработанных групп и составили 22,16 и 39,15 в группах 1 и 2, соответственно, но только 0.17 человек в контрольной группе. Через 22 часа количество ошибок в обработанных группах вернулось к исходному уровню (рисунок 2 и таблица 2).

Рис. 2. Тест цветового зрения Lanthony Panel D-15.

Динамика оценки ошибки +/- 2 * стандартное отклонение. Средние значения для 6 человек в каждой группе. Значительное ухудшение по сравнению с исходным уровнем наблюдалось в обеих обработанных группах сразу после лечения (столбцы, отмеченные звездочкой).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012111.g002

Темное зрение

Точно так же после приема лекарства ухудшалось темное зрение. Значительное повышение абсолютного порога стержня можно было наблюдать в обеих обработанных группах через 4 часа (p = 0,002 для обеих групп) и в группе 2 даже через 22 часа (p = 0,026). Рисунок 3 и Таблица 3 показывают, что ухудшение темного зрения было дозозависимым, и что никаких нарушений не наблюдалось в контрольной группе.

Рисунок 3. Порог штанги.

Временной ход среднего порога стержня +/- 2 * стандартное отклонение для обоих глаз всех пробандов.Значительные изменения (отмечены звездочкой) по сравнению с исходным уровнем произошли в обеих обработанных группах через 4 часа, а также через 22 часа в группе 2.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012111.g003

ZK 200775 Администрация оказала различное влияние на электрофизиологические записи. В статистический расчет мы включили амплитуды и время пика, измеренные в отдельных записях. Средние значения, которые можно прочитать на диаграммах (рис. 4, 5, 6 и 7), могут отличаться от средних значений, рассчитанных по отдельным записям.Мы считаем, что в случае неоднозначных результатов суммарные ответы, представленные на упомянутых диаграммах, наиболее четко демонстрируют влияние препарата на электрофизиологию.

Рисунок 4. Средняя адаптированная к темноте ЭРГ полного поля.

Записи для каждой группы и сила вспышки на исходном уровне (черная линия) и через 4 часа после обработки (серая линия). Эффект ZK200775 был незаметным, но узнаваемым. Статистически значимое уменьшение амплитуды a- и b-волн произошло в группе с низкой дозой через 4 часа.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012111.g004

Рисунок 5. Средний конус-ЭРГ.

Записи каждой группы для исходного уровня (тонкая линия) и через 4 часа после лечения (толстая линия). Практически зависимое от дозы уменьшение амплитуды можно увидеть во всех модальностях конус-ЭРГ. Значительные приращения (+) и уменьшения (-) отклонений по сравнению с базовой линией отмечены на соответствующих графиках (PT = время пика, amp = амплитуда).

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0012111.g005

Рисунок 6. Среднее значение ON-OFF-ERG.

Записи каждой группы для исходного уровня (тонкая линия) и через 4 часа после лечения (толстая линия). В группе 1 учитывались записи только 4 из 6 пробандов из-за неузнаваемости OFF-ответов у 2 пробандов. Увеличение амплитуды ответов в обеих группах лечения кажется очевидным, но статистически не значимым. Однако через 4 часа после лечения наблюдалось значительное сокращение времени пика ответа (ПВ) в обеих обработанных группах.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012111.g006

Рис. 7. Зрительный вызванный потенциал среднего образца.

Записи для каждой группы и размер проверки. Стимуляция левого глаза естественным зрачком. Тонкие линии: исходные записи, толстые линии: записи через 4 часа после лечения. На этом рисунке показано практически дозозависимое уменьшение амплитуды и увеличение времени пика. Значительные приращения (+) и уменьшения (-) отклонений по сравнению с базовой линией отмечены на соответствующих графиках (PT = время пика, amp = амплитуда).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012111.g007

Скотопическая электроретинограмма (ЭРГ)

Наблюдалась небольшая, но очевидная разница в морфологии зубца b до и после введения лекарства (рисунок 4, таблица 4). В адаптированной к темноте ЭРГ, вызванной более высокой интенсивностью стимула, b- и a-волны были уменьшены по амплитуде, достигнув значительного значения только в группе 1. Отношение b / a было незначительно и незначительно повышено в обеих обработанных группах через четыре часа.По сравнению с этим умеренным влиянием на a- и b-волну ERG, адаптированные к темноте осцилляторные потенциалы (OP) были значительно уменьшены по амплитуде и показали значительно измененное время пика в группе 1 через 4 часа и в группе 2 через 22 часа (Рисунок 5, Таблица 5).

Photopic ERG

Все фотопические ответы ERG показали дозозависимое снижение амплитуды в обработанных группах (рис. 5, таблица 6). Значительное снижение произошло в обеих обработанных группах через 4 часа, а в группе 2 даже через 22 часа.Пиковое время также было сокращено, и разница достигла значимого уровня только в отношении ответа на мерцание колбочки в группе 1 через 4 часа.

Включение-выключение ERG

В 1-й группе учтены записи только 4 из 6 пробандов из-за неузнаваемости OFF-ответов у 2 пробандов.

Амплитуда ON-ответа фактически показала дозозависимое увеличение в обеих обработанных группах, не достигнув значимого уровня (рисунок 6, таблица 7). Время пика OFF-ответа было значительно сокращено в обеих обработанных группах через 4 часа (p = 0.026 в группе 1 и p = 0,021 в группе 2), ответ ON был отложен через 22 часа в группе 2 (p = 0,021). Амплитуды выключения изменились незначительно.

Образец визуального вызванного потенциала (pVEP)

Также на pVEP повлияло введение ZK 200775 (Рисунок 7, Таблица 8). ПВЭП после лечения можно было легко идентифицировать по характерным морфологическим изменениям. Мы наблюдали дозозависимое увеличение времени пика и уменьшение амплитуды комплекса P100. Значительные изменения наблюдались во 2-й группе через четыре часа в отношении амплитуды для 1 ° 18 ‘и 17.7 ‘(p = 0,028 и 0,08) и время пика модели 35,4’ (p = 0,038). Удивительно, но в контрольной группе наблюдалось сокращение времени пика для размера чека 17,7 ‘через 4 и 22 часа (p = 0,032 и 0,044).

Обсуждение

ZK 200775 является антагонистом глутамата рецептора AMPA и прошел клинические испытания на предмет его нейропротекторного действия при ишемии головного мозга. Пробанды, получающие ZK 200775, постоянно сообщали об изменении своего визуального восприятия. Это клиническое испытание дало возможность объективизировать влияние блокады рецептора AMPA на зрительную систему психофизическими и электрофизиологическими средствами in vivo.

Антагонизация рецепторов AMPA с помощью ZK200775 приводила к изменениям цвета и темного зрения, остроты зрения, модальностей конусной ERG и pVEP и в меньшей степени на scotopic ERG. ZK 200775 не изменил морфологию глаза, функционирование экстраокулярных мышц, бинокулярное зрение, поля зрения или зрачок.

Все субъективные и объективные симптомы, обнаруженные в этом исследовании, которые могут быть коррелированы с введением антагониста AMPA ZK 200775, скорее всего, обратимы.Все параметры, которые были изменены сразу после введения, вернулись к нормальному диапазону или показали сильную тенденцию к этому через 22 часа.

Большинство наших психофизических и электрофизиологических результатов согласуется с локализацией рецепторов AMPA в слоях сетчатки, как было сообщено в предыдущих экспериментальных исследованиях. Есть много указаний на то, что антагонисты AMPA нарушают действие глутамата средней и внутренней сетчатки в большей степени, чем функцию внешних слоев сетчатки.Изменения ЭРГ вспышки были незначительными, а компоненты, представляющие функцию фоторецепторов (а-волна ЭРГ вспышки), были незначительно уменьшены. С другой стороны, ERG OFF-ответ и OP, которые представляют большую внутреннюю функцию сетчатки, были снижены более заметно в обработанных группах.

Наши результаты особенно намекают на нарушение горизонтальной функции и функции амакриновых клеток. Известно, что оба типа клеток играют роль в цветовом зрении, а также в интеграции определения яркости.Следовательно, функциональный дефект этих клеток может привести к ухудшению цветового зрения, а также к снижению темного зрения. Измененные ОП можно рассматривать как электрофизиологический коррелят нарушения функции амакринных клеток.

Разделив пути включения и выключения, наши результаты в значительной степени согласуются с более ранними выводами. Палочки подключаются в основном к включенным биполярным ячейкам, тогда как конусы подключаются к включенным или выключенным биполярным ячейкам. Рецепторы AMPA в основном участвуют в пути OFF, но также говорят, что они экспрессируются некоторыми биполярными клетками ON [19], [20], [21], [22].В то время как дисфункция палочкообразных биполярных клеток и синаптическая недостаточность между палочковыми и палочковыми биполярными клетками, а также между биполярными клетками колбочки и ON-колбочки хорошо известны из нескольких заболеваний сетчатки (например, врожденная стационарная куриная слепота), нарушение пути OFF-конуса встречается редко. ZK200775 слегка изменил путь ON (скотопическая ERG и темное зрение), основной эффект можно было наблюдать в пути OFF и пострецепторально (цветовое зрение, острота зрения, модальности ERG конуса).

Наиболее заметным результатом этого исследования является ухудшение цветового зрения, измеренное с помощью теста Panel D-15.После инфузии ZK200775 показатель ошибок значительно увеличился в обеих обработанных группах, что является почти предсказуемым результатом блокады пути выключения.

Преобладание не-NMDA рецепторов в пути OFF также делает очень вероятным ухудшение остроты центрального зрения после частичной фармакологической блокады. В этом исследовании у пролеченных пробандов наблюдалось снижение остроты зрения между одной и двумя строками.

С другой стороны, мы наблюдали ухудшение темного зрения примерно на 1 логарифмическую единицу, чего нельзя было бы в первую очередь ожидать от чистой блокады вне пути.Помимо потенциального воздействия горизонтального поражения клеток на скотопическое зрение, можно предположить дополнительный эффект. Однако недавние результаты экспериментов на животных, ставящие под сомнение концепцию двух строго независимых палочек и колбочек, позволяют предположить, что блокада AMPA влияет на скотопическое зрение, как показано в нашем исследовании:

1. Несколько авторов сообщили об экспрессии рецепторов AMPA даже в биполярных клетках ON [19], [20], [21], [22].
2. Что касается сетчатки грызунов, Hack et al.и Tsukamoto et al. доказали существование небольших популяций биполярных клеток OFF, которые соединяются с обоими палочками колбочки и [23], [24], [25].
3. Путь стержня напрямую связан с каналом колбочки через щелевые соединения между фоторецепторами колбочки и стержня. Следовательно, биполярные клетки с выключенным конусом также получают вход от стержней [23], [24], [26], [27], [25], [28].

Что касается адаптированной к темноте полнопольной ERG, ZK 200775 уменьшил как a-, так и b-волну. При высоких интенсивностях стимула амплитуды уменьшались в большей степени, чем при малых.Отношение b / a было немного повышено в обеих обработанных группах через четыре часа после введения, не достигнув значительного уровня.

Зубец b адаптированной к темноте ЭРГ генерируется в основном палочковыми биполярными клетками, волна a появляется при более высоких интенсивностях стимула и отражает активность стержней. Опять же, что касается темного зрения, небольшое влияние на адаптированную к темноте ERG можно объяснить незначительной ролью рецепторов AMPA, которые, как предполагается, играют в пути ON и, следовательно, в скотопическом зрении.Зависимость между интенсивностью стимула и изменением ЭРГ можно объяснить возрастающим влиянием колбочек на морфологию ЭРГ при более ярких вспышках [29].

В режиме ON-OFF-ERG более продолжительные вспышки используются для разделения активности обоих путей. ON-ответ состоит из волн a и b. Отличие от скотопической ЭРГ состоит в том, что фотопическая b-волна ЭРГ возникает из-за потенциалов противоположного поля, генерируемых не только деполяризацией (ВКЛ), но также гиперполяризацией (ВЫКЛ) биполярных и горизонтальных клеток, а также нейронами третьего порядка [30], [ 31].Сивинг и др. установили «двухтактную модель» этих типов клеток [32].

Мы наблюдали дозозависимое увеличение амплитуды ВКЛ-ответа, которое соответствует результатам Sieving et al. и, вероятно, отражает затухающее влияние противоположных OFF-нейронов третьего порядка, блокируемых ZK 200775.

OFF-ответ (или d-волна) появляется после прекращения стимула и может быть отделен от b-волны только в том случае, если стимул достаточно длинный. Говорят, что он генерируется в биполярных клетках OFF.Измеренные нами амплитуды выключения практически не зависели от препарата, но неожиданно время пиковых значений было значительно сокращено. Это парадоксальные открытия, которые не поддаются объяснению с помощью имеющихся до сих пор данных. Более ранние исследования с использованием DNQX для избирательной блокировки AMPA и KA GluR даже показали обратную полярность ответа OFF [31].

Реакция палочки на мигающие стимулы слишком медленная, чтобы можно было стимулировать палочки мерцающим светом с частотой 30 Гц. Следовательно, мерцание-ЭРГ является параметром функции конуса.В обработанных группах ответы, опосредованные конусом, показали снижение амплитуды (реакция на мерцание, красный свет и ответ с одной вспышкой) и отложенное время пика (реакция на мерцание). Тем не менее, все ответы конуса все еще были узнаваемы. Это еще раз доказывает влияние ZK200775 на путь OFF, но выступает против его полной блокады.

VEP — это параметр целостности всего зрительного пути [29]. Снижение амплитуд pVEP можно объяснить влиянием препарата на функцию ганглиозных клеток или даже на средний и внешний слои сетчатки.Более того, мы зафиксировали значительно увеличенное неявное время действия комплекса P100, который обычно считается маркером нарушения нервной проводимости, например, при воспалении зрительного нерва. Мы предполагаем, что изменения сетчатки, расположенные выше по течению, привели к увеличению продолжительности вторичного пика. Сокращение времени пика в контрольной группе после лечения предположительно связано с принципиальной вариабельностью этого электрофизиологического метода.

Наши результаты подтверждают, что рецепторы AMPA преобладают в пути OFF и играют второстепенную роль в пути ON.Тем не менее взаимозависимость обоих путей становится очевидной. Неожиданными открытиями были частичное сохранение остроты зрения, ухудшение темного зрения, стойкий выключенный ответ с сокращенным временем пика и задержка пика pVEP.

Хотя результаты этого исследования не позволяют точно определить роль рецепторов AMPA в сетчатке человека, они предоставляют некоторую информацию о значении глутамата для зрения и для компонентов электроретинограммы.Принимая во внимание, что последние также можно было изучить на животных, это исследование дало уникальный шанс выяснить влияние AMPA на психофизически изученное зрение у людей.

Материалы и методы

Протокол этого испытания и вспомогательный контрольный список CONSORT доступны в качестве вспомогательной информации; см. Контрольный список S1 и Протокол S1.

Это клиническое исследование было одобрено Ethikkommission der Berliner Aerztekammer (Комитет по этике Берлинской медицинской ассоциации) и проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией.Все пробанды дали письменное информированное согласие на участие в исследовании.

18 здоровых пробандов были набраны для этого исследования. Набор проводился путем случайного отбора пробандов из центральной базы данных Schering на основе критериев включения и исключения (таблица S6). Период набора длился с февраля по июль 1997 г. Все пробанды были мужского пола, средний возраст составлял 61 год (от 57 до 69 лет). Ни один из пробандов не участвовал в других испытаниях фазы I, касающихся ZK200775.

При наборе пробандов физическое и офтальмологическое обследование выявляло любые соответствующие заболевания или нарушения зрения.Если пробанд был включен в исследование, это обследование также служило базовым обследованием и включало:

• Медицинский и офтальмологический анамнез
• Острота зрения
• Стереопсис (тест Титмуса)
• Положение глаз, моторика, зрачковая реакция
• Цветовое зрение (ненасыщенная панель Lanthony D-15)
  • Чтобы вычислить оценку ошибок теста панели, были рассчитаны и суммированы различия значений каждых двух подключенных панелей (сумма до 15 для полностью правильного теста).Затем из суммы вычитали 15 (поскольку оценка ошибки для правильного теста должна быть 0).
• Центральное поле зрения (сетка Амслера)
• Аппланационная тонометрия (по Гольдману)
• Обследование переднего сегмента с помощью щелевой лампы
• Фундускопия.

Рандомизация была проведена путем стратификации. Была запланирована последовательная («эскалация дозы») стратегия, начиная со слоя с низкими дозами и заканчивая слоем с высокими дозами. Было два слоя, по одному для каждой группы дозирования (0.03 и 0,75 мг / кг / ч). В каждом слое было два возможных лечения: ZK200775 или плацебо. Verum-группа включала 6 участников, группа плацебо — 3 участника на группу дозирования. В общей сложности 18 участников были распределены на лечение в соотношении 2: 1 (12 ZK200775 [6 с дозировкой 0,03 мг / кг / ч и 6 с дозировкой 0,75 мг / кг / ч], 6 плацебо [0,9 % раствора хлорида натрия], см. рисунок 8).

Все участники, а также все лица, участвовавшие в аппликации лекарств и обследовании, были лишены возможности назначать лекарства или плацебо внутри группы.Ослепления между слоями не было. Независимая команда, имеющая доступ к рандомизированному списку, подготовила исследуемый продукт и инфузионную систему утром в день лечения. Другой список рандомизации был помещен в мастер-файл исследования. Конверты для неотложной помощи хранились в Институте клинической фармакологии Шеринга и были также доступны исследователю.

Не было явных критериев оценки результатов. Целью исследования было количественное определение офтальмологических эффектов ZK200775 с помощью соответствующих обследований.

В день приема препарата дополнительное офтальмологическое обследование проводилось до, сразу после (через 4 часа после начала лечения) и через 22 часа после начала приема препарата. Эти обследования включали указанные выше пункты, за исключением анамнеза и тонометрии. Кроме того, абсолютный порог стержня был протестирован в правом глазу с расширенным зрачком с помощью адаптометра Hartinger (Carl Zeiss, Jena) после 30 минут адаптации к темноте.

Электрофизиологические исследования также проводились до, сразу после и через 22 часа после введения лекарства.Для полнопольной ЭРГ зрачок правого глаза был расширен тропикамидом. Для остальных исследований зрачок левого глаза оставался нейтральным. Для электрофизиологических записей использовалась установка Nicolet Bravo® (Nicolet, Германия, Hoechberg). Для электроретинографии использовали резьбовые конъюнктивальные электроды. Все записи были сделаны в соответствии со стандартом Международного общества клинической электрофизиологии зрения (ISCEV).

Электроретинограмма полного поля (ERG)

Четыре скотопических ответа с увеличением интенсивности стимула после адаптации к темноте.

Колебательные потенциалы

Первоначальная адаптация к темноте. Фильтр высоких частот: 100 Гц.

Конус-ERG

Первоначально десять минут световой адаптации (30 кдм ⁻² ). Запись реакции конуса на одиночную вспышку, ответа на красный свет конуса и реакции на мерцание 30 Гц.

ВКЛ-ВЫКЛ ERG

Стимуляция с помощью красных вспышек продолжительностью 200 мс, доставляемая через светодиоды после световой адаптации.

Визуальный вызванный потенциал разворота модели (pVEP)

Чек размером 17.7 ‘, 35,4’ и 1,18 ° при 3 оборотах в секунду. Стимуляция левого глаза естественным зрачком.

Средняя амплитуда и время пика рассчитывались для всех испытуемых лиц при каждом измерении (до введения, сразу после лечения [4:00 часа] и 22:00 часа после начала лечения).

Значения после обработки через 4 и 22 часа (острота зрения, оценка ошибок панельного теста, порог стержня, время пика и амплитуда электрофизиологических записей) сравнивали с исходными измерениями с использованием t-критерия.Значения P <0,05 считались статистически значимыми.

Вклад авторов

Эксперимент задумал и спроектировал: TS KR. Проведены опыты: КР. Проанализированы данные: РБ. Внесенные реагенты / материалы / инструменты анализа: TS. Написал статью: РБ КР.

Ссылки

1. 1. Мацуи К., Хосой Н., Тачибана М. (1998) Возбуждающая синаптическая передача во внутренней сетчатке: парные записи биполярных клеток и нейронов слоя ганглиозных клеток.J Neurosci 18: 4500–4510.
2. 2. Thoreson WB, Witkovsky P (1999) Глутаматные рецепторы и цепи в сетчатке позвоночных. Prog Retin Eye Res 18: 765–810.
3. 3. Brandstatter JH (2002) Рецепторы глутамата в сетчатке: молекулярный субстрат для обработки визуальных сигналов. Curr Eye Res 25: 327–331.
4. 4. Grunder T, Kohler K, Guenther E (2000) Распределение и регуляция развития белков субъединиц рецептора AMPA в сетчатке крысы.Инвестируйте в офтальмол Vis Sci 41: 3600–3606.
5. 5. Zhang C, Hammassaki-Britto DE, Britto LR, Duvoisin RM (1996) Экспрессия генов субъединиц рецептора глутамата во время развития сетчатки мыши. Нейроотчет 8: 335–340.
6. 6. Атланте А., Калиссано П., Бобба А., Джаннаттазио С., Марра Е. и др. (2001) Нейротоксичность глутамата, окислительный стресс и митохондрии. FEBS Lett 497: 1–5.
7. 7. Чой DW (1992) Эксайтотоксическая гибель клеток. J Neurobiol 23: 1261–1276.
8. 8. Brandstatter JH, Koulen P, Wassle H (1998) Разнообразие рецепторов глутамата в сетчатке млекопитающих. Видение Res 38: 1385–1397.
9. 9. Qin P, Pourcho RG (1996) Распределение AMPA-селективных субъединиц рецептора глутамата в сетчатке кошки. Brain Res 710: 303–307.
10. 10. Peng YW, Blackstone CD, Huganir RL, Yau KW (1995) Распределение подтипов рецепторов глутамата в сетчатке позвоночных. Неврология 66: 483–497.
11. 11.Hughes TE (1997) Имеются ли ионотропные рецепторы глутамата на стержневой биполярной клетке сетчатки глаза мыши? Vis Neurosci 14: 103–109.
12. 12. Connaughton V (2003) Webvision: Подтипы глутаматных и глутаматных рецепторов в сетчатке позвоночных. http://webvision.med.utah.edu/.
13. 13. (1999) Неопубликованный отчет Schering Research AG99. Исследовательское исследование безопасности, переносимости, фармакодинамики и фармакокинетики после инфузий ZK 200775 с возрастающими дозами у пожилых людей.
14. 14. (1999) Неопубликованный отчет Schering Research AO12. Исследовательское исследование безопасности, переносимости и стабильной кинетики после 24-часовой инфузии ZK 200775 у мужчин-добровольцев в возрасте от 55 до 65 лет при введении в качестве нагрузочной и последующей поддерживающей дозы.
15. 15. (1999) Неопубликованный отчет Schering Research Report AR35. Влияние нарушения функции почек на фармакокинетику ZK 200775 после 4-часовой инфузии 10 мг / час ZK 200775 у мужчин-добровольцев в возрастных группах от 40 до 59 лет и от 60 до 80 лет в открытый дизайн исследования.
16. 16. Элтинг Дж. У., Султер Г. А., Касте М., Лис К. Р., Динер Х. С. и др. (2002) Антагонист AMPA ZK200775 у пациентов с острым ишемическим инсультом: возможная токсичность глиальных клеток, обнаруженная при мониторинге уровней S-100B в сыворотке. Ход 33: ​​2813–2818.
17. 17. Турски Л., Хут А., Ширдаун М., Макдональд Ф., Нойхаус Р. и др. (1998) ZK200775: антагонист фосфонат хиноксалиндиона AMPA для нейропротекции при инсульте и травмах. Proc Natl Acad Sci U S A 95: 10960–10965.
18. 18. Уолтерс М.Р., Касте М., Лис К.Р., Динер Х.С., Хоммель М. и др. (2005) Антагонист AMPA ZK 200775 у пациентов с острым ишемическим инсультом: двойное слепое, многоцентровое, плацебо-контролируемое исследование безопасности и переносимости. Цереброваск Дис 20: 304–309.
19. 19. Calkins DJ (2005) Локализация ионотропных рецепторов глутамата на инвагинирующих дендритах в синапсе колбочек в сетчатке приматов. Vis Neurosci 22: 469–477.
20. 20. Harvey DM, Calkins DJ (2002) Локализация каинатных рецепторов в пресинаптической активной зоне палочковидного фоторецептора в сетчатке приматов.Vis Neurosci 19: 681–692.
21. 21. Kamphuis W, Klooster J, Dijk F (2003) Экспрессия субъединицы рецептора глутамата AMPA-типа (GluR2) в ON-биполярных нейронах сетчатки крысы. J Comp Neurol 455: 172–186.
22. 22. Мориджива К., Варди Н. (1999) Дифференциальная экспрессия субъединиц ионотропных рецепторов глутамата во внешней сетчатке. J Comp Neurol 405: 173–184.
23. 23. Hack I, Peichl L, Brandstatter JH (1999) Альтернативный путь для сигналов палочек в сетчатке грызунов: фоторецепторы палочек, биполярные клетки колбочек и локализация рецепторов глутамата.Proc Natl Acad Sci U S A 96: 14130–14135.
24. 24. Hack I, Frech M, Dick O, Peichl L, Brandstatter JH (2001) Гетерогенное распределение субъединиц рецептора глутамата AMPA в синапсах фоторецепторов сетчатки грызунов. Eur J Neurosci 13: 15–24.
25. 25. Цукамото Ю., Мориджива К., Уэда М., Стерлинг П. (2001) Микросхемы для ночного видения в сетчатке мышей. J Neurosci 21: 8616–8623.
26. 26. Hornstein EP, Verweij J, Li PH, Schnapf JL (2005) Соединение щелевого соединения и абсолютная чувствительность фоторецепторов в сетчатке макака.J Neurosci 25: 11201–11209.
27. 27. Ли Э.Дж., Хан Дж.В., Ким Х.Дж., Ким И.Б., Ли М.Й. и др. (2003) Иммуноцитохимическая локализация коннексина 36 в щелевых соединениях палочек и колбочек в сетчатке морской свинки. Eur J Neurosci 18: 2925–2934.
28. 28. Zhang J, Wu SM (2004) Белки щелевых контактов Connexin35 / 36 экспрессируются в фоторецепторах сетчатки тигровой саламандры. J Comp Neurol 470: 1–12.
29. 29. Бах М., Келлнер У. (2000) [Электрофизиологическая диагностика в офтальмологии].Офтальмолог 97: 898–920.
30. 30. Dong CJ, Hare WA (2000) Вклад в кинетику и амплитуду b-волны электроретинограммы нейронами сетчатки третьего порядка в сетчатке кролика. Vision Res 40: 579–589.
31. 31. Awatramani G, Wang J, Slaughter MM (2001) Вклад амакриновых и ганглиозных клеток в электроретинограмму сетчатки земноводных. Vis Neurosci 18: 147–156.
32. 32. Sieving PA, Murayama K, Naarendorp F (1994) Двухтактная модель фотопической электроретинограммы приматов: роль гиперполяризующих нейронов в формировании b-волны.Vis Neurosci 11: 519–532.

Генетика SCID | Итальянский педиатрический журнал

1.

Cossu F: Le basi Genetiche delle SCID. Проспеттив в педиатрии. 2009, 156: 228-238.

Google ученый

2.

Ochs HD, Smith CIE, Puck J: Первичные иммунодефицитные заболевания: молекулярный и генетический подход. 2007, Нью-Йорк: Oxford University Press

Google ученый

3.

Stiehm ER, Ochs HD, Winkelstein JA: Иммунологические расстройства у младенцев и детей. 2004, Филадельфия, Пенсильвания: Elsevier Saunders

Google ученый

4.

Baker MW, Laessig RH, Katcher ML, Routes JM, Grossman WJ, Verbsky J, Kurtycz DF, Brokopp CD: Внедрение рутинного тестирования на тяжелый комбинированный иммунодефицит в рамках программы скрининга новорожденных в Висконсине. Представитель общественного здравоохранения 2010, 125 (Дополнение 2): 88-95. [http: // www.publichealthreports.org/archives/issueopen.cfm?articleID=2428]

PubMed Central PubMed Google ученый

5.

Hale JE, Bonilla FA, Pai SY, Gerstel-Thompson JL, Notarangelo LD, Eaton RB, Comeau AM: идентификация младенца с тяжелым комбинированным иммунодефицитом путем скрининга новорожденных. J Allergy Clin Immunol. 2010, 126: 1073-1074. 10.1016 / j.jaci.2010.08.043.

PubMed Google ученый

6.

SCID добавлен в национальные стандарты скрининга новорожденных. Am J Med Genet A. 2010, 152A (8): ix-10.1002 / ajmg.a.33645.

7.

Розен Ф.С.: Тяжелый комбинированный иммунодефицит: неотложная педиатрическая помощь. J Pediatr. 1997, 130: 345-346.

CAS PubMed Google ученый

8.

Patel NC, Hertel PM, Estes MK, de la Morena M, Petru AM, Noroski LM, Revell PA, Hanson IC, Paul ME, Rosenblatt HM, Abramson SL: вакцинация ротавируса у младенцев с тяжелой сочетанной иммунодефицит.N Engl J Med. 2010, 362: 314-319. 10.1056 / NEJMoa0

5.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

9.

Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC): Добавление тяжелого комбинированного иммунодефицита в качестве противопоказания для введения ротавирусной вакцины. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2010, 59: 687-688.

Google ученый

10.

Mold JE, Michaëlsson J, Burt TD, Muench MO, Beckerman KP, Busch MP, Lee TH, Nixon DF, McCune JM: материнские аллоантигены способствуют развитию толерогенных регуляторных Т-клеток плода в утробе матери.Наука. 2008, 322: 1562-1565. 10.1126 / science.1164511.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

11.

Мюнх, МО: Внутриутробная трансплантация: ребенок делает шаг к эффективной терапии. Пересадка костного мозга. 2005, 35: 537-547. 10.1038 / sj.bmt.1704811.

CAS PubMed Google ученый

12.

Bluestone JA, Mackay CR, O’Shea JJ, Stockinger B: Функциональная пластичность подмножеств Т-клеток.Nat Rev Immunol. 2009, 9: 811-816. 10.1038 / nri2654.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

13.

Ван YY: Многозадачность вспомогательных Т-клеток. Иммунология. 2010, 130: 166-171. 10.1111 / j.1365-2567.2010.03289.x.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

14.

Адели М.М., Бакли Р.Х .: Почему необходим скрининг новорожденных на тяжелый комбинированный иммунодефицит: описание случая.Педиатрия. 2010, 126: e465-e469. 10.1542 / педс.2009-3659.

PubMed Google ученый

15.

Feske S, Picard C, Fischer A: Иммунодефицит из-за мутаций в ORAI1 и STIM1. Clin Immunol. 2010, 135: 169-182. 10.1016 / j.clim.2010.01.011.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

16.

Turul T, Tezcan I, Artac H, de Bruin-Versteeg S, Barendregt BH, Reisli I, Sanal O, van Dongen JJ, van der Burg M: Клиническая неоднородность может затруднить диагностику пациентов с дефицитом ZAP70 .Eur J Pediatr. 2009, 168: 87-93. 10.1007 / s00431-008-0718-х.

PubMed Google ученый

17.

Cossu F, Vulliamy TJ, Marrone A, Badiali M, Cao A, Dokal I: новая мутация DKC1, тяжелый комбинированный иммунодефицит (T ⁺ B ^— NK ^— SCID) и костный мозг трансплантация новорожденному с синдромом Хойераала-Хрейдарссона. Br J Haematol. 2002, 119: 765-768. 10.1046 / j.1365-2141.2002.03822.x.

CAS PubMed Google ученый

18.

Denianke KS, Frieden IJ, Cowan MJ, Williams ML, McCalmont TH: Кожные проявления приживления трансплантата у матери у пациентов с тяжелым комбинированным иммунодефицитом: клинико-патологическое исследование. Пересадка костного мозга. 2001, 28: 227-233. 10.1038 / sj.bmt.1703128.

CAS PubMed Google ученый

19.

Палмер К., Грин Т.Д., Робертс Дж. Л., Саджаров Е., Куни М., Парротт Р., Чен Д. Ф., Рейнсмоен Н. Л., Бакли Р. Х .: Необычные клинические и иммунологические проявления трансплацентарных материнских Т-клеток при тяжелом комбинированном иммунодефиците.J Allergy Clin Immunol. 2007, 120: 423-428. 10.1016 / j.jaci.2007.02.047.

CAS PubMed Google ученый

20.

Кобринский Л.Дж., Абрамовский С. Моноклональная гаммапатия IgA, вызванная материнскими В-клетками у ребенка с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (ТКИД) до трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. J Pediatr Hematol Oncol. 2006, 28: 53-56.

PubMed Google ученый

21.

Tezcan I, Ersoy F, Sanal O, Turul T, Uckan D, Balci S, Hicsonmez G, Prieur M, Caillat-Zucmann S, Le Deist F, De Saint Basile G: Долгосрочное выживание при тяжелом комбинированном иммунодефиците: роль стойкого материнского приживления. J Pediatr. 2005, 146: 137-140. 10.1016 / j.jpeds.2004.09.010.

PubMed Google ученый

22.

Вилла А, Сантагата С., Боззи Ф., Имберти Л., Нотаранджело Л.Д.: Синдром Оменна: нарушение генов Rag1 и Rag2.J Clin Immunol. 1999, 19: 87-97. 10.1023 / А: 1020550432126.

CAS PubMed Google ученый

23.

Вилла А, Нотаранджело Л.Д., Ройфман К.М.: Синдром Оменна: воспаление при тяжелом выраженном комбинированном иммунодефиците. J Allergy Clin Immunol. 2008, 122: 1082-1086. 10.1016 / j.jaci.2008.09.037.

CAS PubMed Google ученый

24.

Ройфман К.М., Чжан Дж., Аткинсон А., Грюнебаум Э., Мандель К. Дефицит аденозиндезаминазы может проявляться признаками синдрома Оменна.J Allergy Clin Immunol. 2008, 121: 1056-1058. 10.1016 / j.jaci.2007.12.1148.

CAS PubMed Google ученый

25.

Грубер Т.А., Шах А.Дж., Эрнандес М., Крукс Г.М., Абдель-Азим Х., Гупта С., Макнайт С., Уайт Д., Капур Н., Кон Д.Б .: Клиническая и генетическая гетерогенность синдрома Оменна и тяжелого комбинированного иммунодефицита. . Педиатр трансплантологии. 2009, 13: 244-250. 10.1111 / j.1399-3046.2008.00970.x.

PubMed Google ученый

26.

Giliani S, Bonfim C, de Saint Basile G, Lanzi G, Brousse N, Koliski A, Malvezzi M, Fischer A, Notarangelo LD, Le Deist F: синдром Оменна у младенца с мутацией гена IL7RA. J Pediatr. 2006, 148: 272-274. 10.1016 / j.jpeds.2005.10.004.

CAS PubMed Google ученый

27.

Эге М., Ма Y, Манфрас Б., Калвак К., Лу Х., Либер М. Р., Шварц К., Паннике У.: синдром Оменна, вызванный мутациями ARTEMIS. Кровь. 2005, 105: 4179-4186.10.1182 / кровь-2004-12-4861.

CAS PubMed Google ученый

28.

Грунебаум Э., Бейтс А., Ройфман К.М.: Синдром Оменна связан с мутациями в ДНК-лигазе IV. J Allergy Clin Immunol. 2008, 122: 1219-1220. 10.1016 / j.jaci.2008.08.031.

CAS PubMed Google ученый

29.

Pignata C, Fiore M, Guzzetta V, Castaldo A, Sebastio G, Porta F, Guarino A: Врожденная алопеция и дистрофия ногтей, связанные с тяжелым функциональным Т-клеточным иммунодефицитом у двух братьев и сестер.Am J Med Genet. 1996, 65: 167-170. 10.1002 / (SICI) 1096-8628 (19961016) 65: 2 <167 :: AID-AJMG17> 3.0.CO; 2-O.

CAS PubMed Google ученый

30.

Markert ML, Alexieff MJ, Li J, Sarzotti M, Ozaki DA, Devlin BH, Sempowski GD, Rhein ME, Szabolcs P, Hale LP, Buckley RH, Coyne KE, Rice HE, Mahaffey SM, Skinner MA : Полный синдром ДиДжорджи: развитие сыпи, лимфаденопатии и олигоклональных Т-лимфоцитов в 5 случаях. J Allergy Clin Immunol.2004, 113: 734-741. 10.1016 / j.jaci.2004.01.766.

CAS PubMed Google ученый

31.

Gennery AR, Slatter MA, Rice J, Hoefsloot LH, Barge D, McLean-Tooke A, Montgomery T, Goodship JA, Burt AD, Flood TJ, Abinun M, Cant AJ, Johnson D: Мутации в CHD7 у пациентов с синдромом ЗАРЯДА вызывают T ^— B ⁺ естественные киллерные клетки ⁺ тяжелый комбинированный иммунодефицит и могут вызывать синдром Оменна.Clin Exp Immunol. 2008, 153: 75-80. 10.1111 / j.1365-2249.2008.03681.x.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

32.

Ройфман CM, Gu Y, Cohen A: Мутации в РНК-компоненте процессинга митохондриальной РНК РНКазой могут вызвать синдром Оменна. J Allergy Clin Immunol. 2006, 117: 897-903. 10.1016 / j.jaci.2006.01.003.

CAS PubMed Google ученый

33.

Листон А., Эндерс А., Сиггс О.М.: Раскрытие связи частичного иммунодефицита Т-клеток и иммунной дисрегуляции. Nat Rev Immunol. 2008, 8: 545-558. 10.1038 / nri2336.

CAS PubMed Google ученый

34.

Poliani PL, Facchetti F, Ravanini M, Gennery AR, Villa A, Roifman CM, Notarangelo LD: Ранние дефекты развития Т-клеток человека серьезно влияют на распределение и созревание стромальных клеток тимуса: возможные последствия для патофизиологии синдрома Оменна.Кровь. 2009, 114: 105-108. 10.1182 / кровь-2009-03-211029.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

35.

Cassani B, Poliani PL, Moratto D, Sobacchi C, Marrella V, Imperatori L, Vairo D, Plebani A, Giliani S, Vezzoni P, Facchetti F, Porta F, Notarangelo LD, Villa A, Badolato R : Дефект регуляторных Т-клеток у пациентов с синдромом Оменна. J Allergy Clin Immunol. 2010, 125: 209-216. 10.1016 / j.jaci.2009.10.023.

CAS PubMed Google ученый

36.

Niehues T, Perez-Becker R, Schuetz C: Больше, чем просто SCID — фенотипический диапазон комбинированных иммунодефицитов, связанных с мутациями в генах, активирующих рекомбиназу (RAG) 1 и 2. Clin Immunol. 2010, 135: 183-192. 10.1016 / j.clim.2010.01.013.

CAS PubMed Google ученый

37.

Notarangelo LD, Roifman CM, Giliani S: Гипоплазия хряща и волос: молекулярная основа и гетерогенность иммунологического фенотипа.Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2008, 8: 534-539. 10.1097 / ACI.0b013e328310fe7d.

CAS PubMed Google ученый

38.

Бакли Р.Х .: Вариабельная фенотипическая экспрессия мутаций в генах иммунной системы. J Clin Invest. 2005, 115: 2974-2976. 10.1172 / JCI26956.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

39.

Умецу Д.Т., Шлоссман К.М., Охс HD, Хершфилд М.С.: Гетерогенность фенотипа у двух братьев и сестер с дефицитом аденозиндезаминазы.J Allergy Clin Immunol. 1994, 93: 543-550. 10.1016 / 0091-6749 (94)

-4.

CAS PubMed Google ученый

40.

Pasic S, Djuricic S, Ristic G, Slavkovic B: иммунодефицит гена 1, активирующего рекомбиназу: разные иммунологические фенотипы у трех братьев и сестер. Acta Paediatr. 2009, 98: 1062-1064. 10.1111 / j.1651-2227.2009.01250.x.

CAS PubMed Google ученый

41.

Вада Т., Кандотти Ф: Соматический мозаицизм при первичном иммунодефиците. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2008, 8: 510-514. 10.1097 / ACI.0b013e328314b651.

PubMed Google ученый

42.

Williamson AP, Montgomery JR, South MA, Wilson R, (Eds): специальный отчет: четырехлетнее исследование мальчика с комбинированным иммунодефицитом, поддерживаемого в строгой обратной изоляции с рождения. Pediatr Res. 1977, 11: 63-89. 10.1203 / 00006450-197701000-00001.

43.

Paschall VL, Brown LA, Lawrence EC, Karol RA, Lotzova E, Brown BS, Shearer WT: Иммунорегуляция у изолированного 12-летнего мальчика с врожденным тяжелым комбинированным иммунодефицитом. Pediatr Res. 1984, 18: 723-728. 10.1203 / 00006450-198408000-00009.

CAS PubMed Google ученый

44.

Shearer WT, Ritz J, Finegold MJ, Guerra IC, Rosenblatt HM, Lewis DE, Pollack MS, Taber LH, Sumaya CV, Grumet FC, Cleary ML, Warnke R, Sklar J: вирус Эпштейна-Барра- ассоциированные пролиферации B-клеток различного клонального происхождения после трансплантации костного мозга у 12-летнего пациента с тяжелым комбинированным иммунодефицитом.N Engl J Med. 1985, 312: 1151-1159. 10.1056 / NEJM198505023121804.

CAS PubMed Google ученый

45.

Noguchi M, Yi H, Rosenblatt HM, Filipovich AH, Adelstein S, Modi WS, McBride OW, Leonard WJ: Мутация гамма-цепи рецептора интерлейкина-2 приводит к Х-сцепленному тяжелому комбинированному иммунодефициту у людей. Клетка. 1993, 73: 147-157. 10.1016 / 0092-8674 (93)-О.

CAS PubMed Google ученый

46.

Берг LJ: Парадокс «мыльного пузыря»: ответ, который привел к вопросу. J Immunol. 2008, 181: 5815-5816.

CAS PubMed Google ученый

47.

Rochman Y, Spolski R, Leonard WJ: Новые сведения о регуляции Т-клеток цитокинами семейства γ _c . Nat Rev Immunol. 2009, 9: 480-490. 10.1038 / nri2580.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

48.

Laffort C, Le Deist F, Favre M, Caillat-Zucman S, Radford-Weiss I, Debré M, Fraitag S, Blanche S, Cavazzana-Calvo M, de Saint Basile G, de Villartay JP, Giliani S, Orth G, Казанова Дж. Л., Бодемер С., Фишер А. Тяжелая кожная папилломавирусная болезнь после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у пациентов с тяжелым комбинированным иммунодефицитом, вызванным общей субъединицей рецептора цитокина γc или дефицитом JAK-3. Ланцет. 2004, 363: 2051-2054. 10.1016 / S0140-6736 (04) 16457-Х.

CAS PubMed Google ученый

49.

De Ravin SS, Malech HL: Частично скорректированный X-сцепленный тяжелый комбинированный иммунодефицит: долгосрочные проблемы и варианты лечения. Immunol Res. 2009, 43: 223-242. 10.1007 / s12026-008-8073-6.

PubMed Google ученый

50.

Hacein-Bey-Abina S, Hauer J, Lim A, Picard C, Wang GP, Berry CC, Martinache C, Rieux-Laucat F, Latour S, Belohradsky BH, Leiva L, Sorensen R, Debré M , Casanova JL, Blanche S, Durandy A, Bushman FD, Fischer A, Cavazzana-Calvo M: Эффективность генной терапии Х-сцепленного тяжелого комбинированного иммунодефицита.N Engl J Med. 2010, 363: 355-364. 10.1056 / NEJMoa1000164.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

51.

Песу М., Кандотти Ф., Хуса М., Хофманн С.Р., Нотаранджело Л.Д., О’Ши Дж.Дж .: Jak3, тяжелый комбинированный иммунодефицит и новый класс иммунодепрессантов. Immunol Rev.2005, 203: 127-142. 10.1111 / j.0105-2896.2005.00220.x.

CAS PubMed Google ученый

52.

Ghoreschi K, Laurence A, O’Shea JJ: киназы Януса в передаче сигналов иммунных клеток. Immunol Rev.2009, 228: 273-287. 10.1111 / j.1600-065X.2008.00754.x.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

53.

Пуэл А., Леонард В.Дж .: Мутации в гене рецептора IL-7 приводят к T ^— B ⁺ NK ⁺ тяжелой комбинированной иммунодефицитной болезни. Curr Opin Immunol. 2000, 12: 468-473. 10.1016 / S0952-7915 (00) 00122-9.

CAS PubMed Google ученый

54.

Giliani S, Mori L, de Saint Basile G, Le Deist F, Rodriguez-Perez C, Forino C, Mazzolari E, Dupuis S, Elhasid R, Kessel A, Galambrun C, Gil J, Fischer A, Etzioni A, Notarangelo LD: Дефицит рецептора интерлейкина-7 α (IL-7Rα): клеточные и молекулярные основы. Анализ клинических, иммунологических и молекулярных особенностей у 16 ​​новых пациентов. Immunol Rev.2005, 203: 110-126. 10.1111 / j.0105-2896.2005.00234.x.

CAS PubMed Google ученый

55.

Такада К., Джеймсон С.К .: Наивный гомеостаз Т-клеток: от осознания пространства к ощущению места. Nat Rev Immunol. 2010, 9 (12): 823-832. 10.1038 / nri2657.

Google ученый

56.

McGhee SA, Stiehm ER, Cowan M, Krogstad P, McCabe ER: Двухуровневая универсальная стратегия скрининга новорожденных на тяжелый комбинированный иммунодефицит.Mol Genet Metab. 2005, 86: 427-430. 10.1016 / j.ymgme.2005.09.005.

CAS PubMed Google ученый

57.

Немази Д: Редактирование рецепторов в развитии лимфоцитов и центральной толерантности. Nat Rev Immunol. 2006, 6: 728-740. 10.1038 / nri1939.

CAS PubMed Google ученый

58.

Smith-Garvin JE, Koretzky GA, Jordan MS: Активация Т-клеток. Анну Рев Иммунол.2009, 27: 591-619. 10.1146 / annurev.immunol.021908.132706.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

59.

Конли М.Е., Доббс А.К., Фармер Д.М., Килич С., Пэрис К., Григориаду С., Кустан-Смит Е., Ховард В., Кампана Д. Первичные иммунодефициты В-клеток: сравнения и противопоставления. Анну Рев Иммунол. 2009, 27: 199-227. 10.1146 / annurev.immunol.021908.132649.

CAS PubMed Google ученый

60.

de Villartay JP: дефекты рекомбинации V (D) J. Adv Exp Med Biol. 2009, 650: 46-58. полный текст.

CAS PubMed Google ученый

61.

Очи Т., Сибанда Б.Л., Ву К., Чиргадзе Д.Ю., Боланос-Гарсиа В.М., Бланделл Т.Л.: Структурная биология репарации ДНК: пространственная организация многокомпонентных комплексов негомологичного соединения концов. J нуклеиновые кислоты. 2010, 2010: pii: 621695-10.4061 / 2010/621695.

Google ученый

62.

Dvorak CC, Cowan MJ: Радиочувствительный тяжелый комбинированный иммунодефицит. Immunol Allergy Clin North Am. 2010, 30: 125-142. 10.1016 / j.iac.2009.10.004.

PubMed Central PubMed Google ученый

63.

Sobacchi C, Marrella V, Rucci F, Vezzoni P, Villa A: RAG-зависимые первичные иммунодефициты. Hum Mutat. 2006, 27: 1174-1184. 10.1002 / humu.20408.

CAS PubMed Google ученый

64.

Li L, Moshous D, Zhou Y, Wang J, Xie G, Salido E, Hu D, de Villartay JP, Cowan MJ: мутация-основатель в Artemis, SNM1-подобном белке, вызывает ТКИН у коренных американцев, говорящих на языке атабасков. J Immunol. 2002, 168: 6323-6329.

CAS PubMed Google ученый

65.

Чистяков Д.А., Воронова Н.В., Чистяков А.П. Синдром лигазы IV. Eur J Med Genet. 2009, 52: 373-378. 10.1016 / j.ejmg.2009.05.009.

PubMed Google ученый

66.

Buck D, Malivert L, de Chasseval R, Barraud A, Fondanèche MC, Sanal O, Plebani A, Stéphan JL, Hufnagel M, le Deist F, Fischer A, Durandy A, de Villartay JP, Revy P: Cernunnos, роман негомологичный фактор присоединения концов мутировал при иммунодефиците человека с микроцефалией. Клетка. 2006, 124: 287-299. 10.1016 / j.cell.2005.12.030.

CAS PubMed Google ученый

67.

van der Burg M, van Dongen JJ, van Gent DC: Дефицит ДНК-PKcs у человека: давно предсказан, наконец найден.Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2009, 9: 503-509. 10.1097 / ACI.0b013e3283327e41.

CAS PubMed Google ученый

68.

Recio MJ, Moreno-Pelayo MA, Kiliç SS, Guardo AC, Sanal O, Allende LM, Pérez-Flores V, Mencía A, Modamio-Høybjør S, Seoane E, Regueiro JR: Дифференциальная биологическая роль CD3 цепи, выявленные иммунодефицитами человека. J Immunol. 2007, 178: 2556-2564.

CAS PubMed Google ученый

69.

Робертс Дж. Л., Лауритсен Дж. П., Куни М., Пэрротт Р. Э., Саджарофф Е. О., Вин СМ, Келлер М. Д., Карпентер Дж. Х., Карабана Дж., Крангель М. С., Сарзотти М., Чжун XP, Уист DL, Бакли РХ: T ^— B ⁺ NK ⁺ тяжелый комбинированный иммунодефицит, вызванный полным дефицитом субъединицы CD3ζ рецепторного комплекса Т-клеточного антигена. Кровь. 2007, 109: 3198-3206. 10.1182 / кровь-2006-08-043166.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

70.

Tchilian EZ, Wallace DL, Wells RS, Flower DR, Morgan G, Beverley PC: делеция в гене, кодирующем антиген CD45, у пациента с SCID. J Immunol. 2001, 166: 1308-1313.

CAS PubMed Google ученый

71.

Tchilian EZ, Beverley PC: Измененная экспрессия CD45 и заболевание. Trends Immunol. 2006, 27: 146-153. 10.1016 / j.it.2006.01.001.

CAS PubMed Google ученый

72.

Au-Yeung BB, Deindl S, Hsu LY, Palacios EH, Levin SE, Kuriyan J, Weiss A: Структура, регуляция и функция ZAP-70. Immunol Rev.2009, 228: 41-57. 10.1111 / j.1600-065X.2008.00753.x.

CAS PubMed Google ученый

73.

Goldman FD, Ballas ZK, Schutte BC, Kemp J, Hollenback C, Noraz N, Taylor N: Нарушение экспрессии p56lck у младенца с тяжелым комбинированным иммунодефицитом. J Clin Invest. 1998, 102: 421-429.10.1172 / JCI3205.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

74.

Hubert P, Bergeron F, Ferreira V, Seligmann M, Oksenhendler E, Debre P, Autran B: Дефектная активность p56Lck в Т-клетках у взрослого пациента с идиопатической CD4 + лимфоцитопенией. Int Immunol. 2000, 12: 449-457. 10.1093 / intimm / 12.4.449.

CAS PubMed Google ученый

75.

Lagresle-Peyrou C, Six EM, Picard C, Rieux-Laucat F, Michel V, Ditadi A, Demerens-de Chappedelaine C, Morillon E, Valensi F, Simon-Stoos KL, Mullikin JC, Noroski LM, Besse C, Wulffraat Н.М., Ферстер А., Абекасис М.М., Кальво Ф., Пети С., Кандотти Ф., Абель Л., Фишер А., Каваззана-Кальво М.: Дефицит аденилаткиназы 2 человека вызывает глубокий гематопоэтический дефект, связанный с нейросенсорной дефектом. Нат Жене. 2009, 41: 106-111. 10.1038 / ng.278.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

76.

Pannicke U, Hönig M, Hess I, Friesen C, Holzmann K, Rump EM, Barth TF, Rojewski MT, Schulz A, Boehm T., Friedrich W, Schwarz K: ретикулярный дисгенез (алейкоцитоз) вызван мутациями в кодирующем гене митохондриальная аденилаткиназа 2. Nat Genet. 2009, 41: 101-105. 10.1038 / ng.265.

CAS PubMed Google ученый

77.

Дзея П., Терзич А: Аденилаткиназа и сигнальные сети AMP: метаболический мониторинг, передача сигналов и определение энергии тела.Int J Mol Sci. 2009, 10: 1729-1772. 10.3390 / ijms10041729.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

78.

Klein C, Grudzien M, Appaswamy G, Germeshausen M, Sandrock I, Schäffer AA, Rathinam C, Boztug K, Schwinzer B, Rezaei N, Bohn G, Melin M, Carlsson G, Fadeel B, Dahl N. , Palmblad J, Henter JI, Zeidler C, Grimbacher B, Welte K: дефицит HAX1 вызывает аутосомно-рецессивную тяжелую врожденную нейтропению (болезнь Костмана).Нат Жене. 2007, 39: 86-92. 10.1038 / ng1940.

CAS PubMed Google ученый

79.

Cassani B, Mirolo M, Cattaneo F, Benninghoff U, Hershfield M, Carlucci F, Tabucchi A, Bordignon C, Roncarolo MG, Aiuti A: изменение внутриклеточной и внеклеточной передачи сигналов приводит к нарушению функций Т-клеток в ADA -SCID пациенты. Кровь. 2008, 111: 4209-4219. 10.1182 / кровь-2007-05-092429.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

80.

Зауэр А.В., Айути А: Новые взгляды на патогенез тяжелого комбинированного иммунодефицита с аденозиндезаминазой и прогресс в генной терапии. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2009, 9: 496-502. 10.1097 / ACI.0b013e3283327da5.

CAS PubMed Google ученый

81.

Sauer AV, Mrak E, Hernandez RJ, Zacchi E, Cavani F, Casiraghi M, Grunebaum E, Roifman CM, Cervi MC, Ambrosi A, Carlucci F, Roncarolo MG, Villa A, Rubinacci A, Aiuti A : ADA-дефицитный SCID связан со специфическим микроокружением и костным фенотипом, характеризующимся дисбалансом RANKL / OPG и недостаточностью остеобластов.Кровь. 2009, 114: 3216-3226. 10.1182 / кровь-2009-03-209221.

CAS PubMed Google ученый

82.

Hönig M, Albert MH, Schulz A, Sparber-Sauer M, Schütz C, Belohradsky B, Güngör T, Rojewski MT, Bode H, Pannicke U, Lippold D, Schwarz K, Debatin KM, Hershfield MS, Фридрих В. Пациенты с дефицитом аденозиндезаминазы, выжившие после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток, имеют высокий риск осложнений со стороны ЦНС. Кровь.2007, 109: 3595-3602. 10.1182 / кровь-2006-07-034678.

PubMed Google ученый

83.

Барич I: Унаследованные нарушения превращения метионина в гомоцистеин. J Inherit Metab Dis. 2009, 32: 459-471. 10.1007 / s10545-009-1146-4.

PubMed Google ученый

84.

Gaspar HB, Aiuti A, Porta F, Candotti F, Hershfield MS, Notarangelo LD: Как я лечу дефицит ADA.Кровь. 2009, 114: 3524-3532. 10.1182 / кровь-2009-06-189209.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

85.

Гаспар HB: Трансплантация костного мозга и альтернативы при дефиците аденозиндезаминазы. Immunol Allergy Clin North Am. 2010, 30: 221-236. 10.1016 / j.iac.2010.01.002.

PubMed Google ученый

86.

Aiuti A, Cattaneo F, Galimberti S, Benninghoff U, Cassani B, Callegaro L, Scaramuzza S, Andolfi G, Mirolo M, Brigida I, Tabucchi A, Carlucci F, Eibl M, Aker M, Slavin S , Аль-Муса Х, Аль Гонаиум А, Ферстер А, Дюппенталер А, Нотаранджело Л, Винтергерст У., Бакли Р., Брегни М., Марктел С., Вальсекки М.Г., Росси П., Чичери Ф., Миньеро Р., Бординьон С., Ронкароло М.Г .: Джин терапия иммунодефицита вследствие дефицита аденозиндезаминазы.N Engl J Med. 2009, 360: 447-458. 10.1056 / NEJMoa0805817.

CAS PubMed Google ученый

87.

Айтекин С., Догу Ф., Танир Дж., Гулоглу Д., Сантистебан И., Хершфилд М.С., Икинциогуллари А. Дефицит пуриннуклеозидфосфорилазы со смертельным исходом у двух сестер. Eur J Pediatr. 2010, 169: 311-314. 10.1007 / s00431-009-1029-6.

CAS PubMed Google ученый

88.

Rodewald HR: Органогенез тимуса. Анну Рев Иммунол. 2008, 26: 355-388. 10.1146 / annurev.immunol.26.021607.0

.

CAS PubMed Google ученый

89.

Poliani PL, Vermi W, Facchetti F: Микроокружение тимуса при первичных иммунодефицитных заболеваниях человека. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2009, 9: 489-95. 10.1097 / ACI.0b013e3283327e5c.

PubMed Google ученый

90.

Франк Дж., Пигната К., Пантелеев А.А., Проуз Д.М., Баден Х., Вайнер Л., Гаэтаниелло Л., Ахмад В., Поцци Н., Чсерхальми-Фридман П.Б., Айта В.М., Уиттендаэле Х., Гордон Д., Отт Дж., Бриссетт Д.Л., Кристиано А.М. : Выявление фенотипа обнаженного человека. Природа. 1999, 398: 473-474. 10.1038 / 18997.

CAS PubMed Google ученый

91.

Adriani M, Martinez-Mir A, Fusco F, Busiello R, Frank J, Telese S, Matrecano E, Ursini MV, Christiano AM, Pignata C: мутация предкового основателя гена nude (FOXN1) в врожденном тяжелый комбинированный иммунодефицит, связанный с алопецией, у населения южной Италии.Энн Хам Жене. 2004, 68: (Pt 3): 265-268. 10.1046 / j.1529-8817.2004.00091.x.

PubMed Google ученый

92.

Amorosi S, D’Armiento M, Calcagno G, Russo I, Adriani M, Christiano AM, Weiner L, Brissette JL, Pignata C: гомозиготная мутация FOXN1, связанная с анэнцефалией и тяжелым дефектом нервной трубки у людей с атимической голой / ТКИД плод. Clin Genet. 2008, 73: 380-384. 10.1111 / j.1399-0004.2008.00977.x.

CAS PubMed Google ученый

93.

Маркерт М.Л., Девлин Б.Х., Чинн И.К., Маккарти Е.А.: Трансплантация тимуса при полной аномалии ДиДжорджи. Immunol Res. 2009, 44: 61-70. 10.1007 / s12026-008-8082-5.

PubMed Google ученый

94.

Кобринский Л.Дж., Салливан К.Э .: Велокардиофациальный синдром, синдром ДиДжорджи: синдромы делеции хромосомы 22q11.2. Ланцет. 2007, 370: 1443-1452. 10.1016 / S0140-6736 (07) 61601-8.

CAS PubMed Google ученый

95.

Блейк К.Д., Прасад С: синдром ЗАРЯДА. Orphanet J Rare Dis. 2006, 1: 34-10.1186 / 1750-1172-1-34.

PubMed Central PubMed Google ученый

96.

Jyonouchi S, McDonald-McGinn DM, Bale S, Zackai EH, Sullivan KE: ЗАРЯД (колобома, порок сердца, хоана атрезия, задержка роста и развития, генитальная гипоплазия, аномалии уха / глухота) синдром и хромосома 22q11 .2 синдром делеции: сравнение иммунологических и неиммунологических фенотипических признаков.Педиатрия. 2009, 123: e871-877. 10.1542 / педс.2008-3400.

PubMed Central PubMed Google ученый

97.

Аллен В.М., Армсон Б.А., Уилсон Р.Д., Аллен В.М., Блайт С., Ганьон А., Джонсон Дж. А., Ланглуа С., Саммерс А., Вятт П., Фарин Д., Армсон Б.А., Крейн Дж., Делисл М.Ф., Кинан- Линдси Л., Морин В., Шнайдер К.Э., Ван Аэрд Дж., Общество акушеров и гинекологов Канады: тератогенность, связанная с ранее существовавшим и гестационным диабетом.J Obstet Gynaecol Can. 2007, 29: 927-944. 10.1097 / GRF.0b013e318159c4fc.

PubMed Google ученый

98.

Райс Х.Э., Скиннер М.А., Махаффи С.М., Олдхэм К.Т., Инг Р.Дж., Хейл Л.П., Маркерт М.Л.: Трансплантация тимуса при полном синдроме ДиДжорджи: медицинские и хирургические соображения. J Pediatr Surg. 2004, 39: 1607-1615. 10.1016 / j.jpedsurg.2004.07.020.

PubMed Google ученый

99.

Markert ML, Devlin BH, McCarthy EA: Трансплантация тимуса. Clin Immunol. 2010, 135: 236-246. 10.1016 / j.clim.2010.02.007.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

100.

McGhee SA, Lloret MG, Stiehm ER: Иммунологическое восстановление при синдроме делеции 22q (ДиДжорджи). Immunol Res. 2009, 45: 37-45. 10.1007 / s12026-009-8108-7.

PubMed Google ученый

101.

Feske S: Передача сигналов кальция при активации лимфоцитов и заболевании. Nat Rev Immunol. 2007, 7: 690-702. 10.1038 / nri2152.

CAS PubMed Google ученый

102.

Shiow LR, Roadcap DW, Paris K, Watson SR, Grigorova IL, Lebet T, An J, Xu Y, Jenne CN, Föger N, Sorensen RU, Goodnow CC, Bear JE, Puck JM, Cyster JG : Регулятор актина коронин 1A является мутантом в линии мышей с дефицитом тимуса и у пациента с тяжелым комбинированным иммунодефицитом.Nat Immunol. 2008, 9: 1307-1315. 10.1038 / ni.1662.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

103.

Shiow LR, Paris K, Akana MC, Cyster JG, Sorensen RU, Puck JM: Тяжелый комбинированный иммунодефицит (SCID) и синдром дефицита внимания с гиперактивностью (ADHD), связанный с мутацией Coronin-1A и хромосомой 16p11. 2 удаления. Clin Immunol. 2009, 131: 24-30. 10.1016 / j.clim.2008.11.002.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

104.

Burkhardt JK, Carrizosa E, Shaffer MH: актиновый цитоскелет в активации Т-клеток. Анну Рев Иммунол. 2008, 26: 233-259. 10.1146 / annurev.immunol.26.021607.0

.

CAS PubMed Google ученый

105.

Пикард С., Фишер А. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток и другие стратегии лечения дефицита MHC класса II. Immunol Allergy Clin North Am. 2010, 30: 173-178. 10.1016 / j.iac.2010.01.001.

PubMed Google ученый

106.

Walne AJ, Dokal I. Достижения в понимании врожденного дискератоза. Br J Haematol. 2009, 145: 164-172. 10.1111 / j.1365-2141.2009.07598.x.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

107.

Маррон А., Валне А., Тамари Х, Масунари Ю., Кирван М., Бесвик Р., Валлиами Т., Докал I. Гомозиготные мутации теломеразы по обратной транскриптазе при аутосомно-рецессивном врожденном дискератозе и синдроме Хойераала-Хрейдарссона.Кровь. 2007, 110: 4198-4205. 10.1182 / кровь-2006-12-062851.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

108.

О’Салливан Р.Дж., Карлседер Дж .: Теломеры: защита хромосом от нестабильности генома. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010, 11: 171-181. 10.1038 / nrg2761.

PubMed Central PubMed Google ученый

109.

Walne AJ, Vulliamy T, Beswick R, Kirwan M, Dokal I: Мутации TINF2 приводят к очень коротким теломерам: анализ большой группы пациентов с врожденным дискератозом и связанными с ним синдромами недостаточности костного мозга.Кровь. 2008, 112: 3594-3600. 10.1182 / кровь-2008-05-153445.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

110.

Touzot F, Callebaut I, Soulier J, Gaillard L, Azerrad C, Durandy A, Fischer A, de Villartay JP, Revy P: функция Аполлона (SNM1B) на теломере, выделенная вариантом сращивания, идентифицированным на пациент с синдромом Хойераала-Хрейдарссона. Proc Natl Acad Sci USA. 2010, 107: 10097-10102. 10.1073 / pnas.08107.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

111.

Revy P, Busslinger M, Tashiro K, Arenzana F, Pillet P, Fischer A, Durandy A: синдром, включающий задержку внутриутробного развития, микроцефалию, гипоплазию мозжечка, дефицит B-лимфоцитов и прогрессирующую панцитопению. Педиатрия. 2000, 105: E39-10.1542 / peds.105.3.e39.

CAS PubMed Google ученый

112.

Borzutzky A, Crompton B, Bergmann AK, Giliani S, Baxi S, Martin M, Neufeld EJ, Notarangelo LD: обратимый фенотип тяжелого комбинированного иммунодефицита, вторичный по отношению к мутации протон-связанного переносчика фолиевой кислоты. Clin Immunol. 2009, 133: 287-294. 10.1016 / j.clim.2009.08.006.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

113.

Mazzolari E, de Martiis D, Forino C, Lanfranchi A, Giliani S, Marzollo R, Airò P, Imberti L, Porta F, Notarangelo LD: Одноцентровый анализ отдаленных результатов трансплантации гемопоэтических клеток у детей с врожденным тяжелым Т-клеточным иммунодефицитом.Immunol Res. 2009, 44: 4-17. 10.1007 / s12026-008-8022-4.

CAS PubMed Google ученый

114.

Neven B, Leroy S, Decaluwe H, Le Deist F, Picard C, Moshous D, Mahlaoui N, Debré M, Casanova JL, Dal Cortivo L, Madec Y, Hacein-Bey-Abina S, de Saint Basile G, de Villartay JP, Blanche S, Cavazzana-Calvo M, Fischer A: Долгосрочный результат после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток одноцентровой когорты из 90 пациентов с тяжелым комбинированным иммунодефицитом.Кровь. 2009, 113: 4114-4124. 10.1182 / кровь-2008-09-177923.

CAS PubMed Google ученый

115.

Railey MD, Lokhnygina Y, Buckley RH: Отдаленный клинический исход пациентов с тяжелым комбинированным иммунодефицитом, которым была проведена трансплантация донорского костного мозга без предтрансплантационной химиотерапии или посттрансплантационной профилактики РТПХ. J Pediatr. 2009, 155: 834-840. 10.1016 / j.jpeds.2009.07.049.

PubMed Central PubMed Google ученый

116.

Gennery AR, Slatter MA, Grandin L, Taupin P, Cant AJ, Veys P, Amrolia PJ, Gaspar HB, Davies EG, Friedrich W., Hoenig M, Notarangelo LD, Mazzolari E, Porta F, Bredius RG, Lankester AC, Wulffraat Н.М., Сегер Р., Гюнгёр Т., Фаст А., Седлачек П., Невен Б., Бланш С., Фишер А., Каваззана-Кальво М., Ландаис П., Рабочая группа по врожденным ошибкам Европейской группы по трансплантации крови и костного мозга; Европейское общество иммунодефицитов: трансплантация гемопоэтических стволовых клеток и долгосрочное выживание при первичных иммунодефицитах в Европе: вступая в новый век, добиваемся ли мы большего ?.J Allergy Clin Immunol. 2010, 126: 602-610. 10.1016 / j.jaci.2010.06.015.

PubMed Google ученый

117.

Cuvelier GD, Schultz KR, Davis J, Hirschfeld AF, Junker AK, Tan R, Turvey SE: Оптимизация результатов трансплантации гемопоэтических стволовых клеток при тяжелом комбинированном иммунодефиците. Clin Immunol. 2009, 131: 179-188. 10.1016 / j.clim.2009.01.003.

CAS PubMed Google ученый

118.

Вейс П: Трансплантация пониженной интенсивности при первичных иммунодефицитных расстройствах. Immunol Allergy Clin North Am. 2010, 30: 103-124. 10.1016 / j.iac.2009.11.003.

PubMed Google ученый

119.

Qasim W, Gaspar HB, Thrasher AJ: Прогресс и перспективы: генная терапия наследственных иммунодефицитов. Gene Ther. 2009, 16: 1285-1291. 10.1038 / gt.2009.127.

CAS PubMed Google ученый

120.

Фишер А., Хасейн-Бей-Абина С., Каваззана-Кальво М.: 20 лет генной терапии ТКИН. Nat Immunol. 2010, 11: 457-460. 10.1038 / ni0610-457.

CAS PubMed Google ученый

121.

Кон Д.Б., Саделайн М., Глориозо Дж.С.: Возникновение лейкемии после генной терапии Х-сцепленного ТКИД. Нат Рев Рак. 2003, 3: 477-488. 10.1038 / nrc1122.

CAS PubMed Google ученый

122.

Howe SJ, Mansour MR, Schwarzwaelder K, Bartholomae C, Hubank M, Kempski H, Brugman MH, Pike-Overzet K, Chatters SJ, de Ridder D, Gilmour KC, Adams S, Thornhill SI, Parsley KL, Staal FJ, Гейл RE, Linch DC, Bayford J, Brown L, Quaye M, Kinnon C, Ancliff P, Webb DK, Schmidt M, von Kalle C, Gaspar HB, Thrasher AJ: вставочный мутагенез в сочетании с приобретенными соматическими мутациями вызывает лейкемогенез после генной терапии SCID -X1 пациентов. J Clin Invest. 2008, 118: 3143-3150. 10.1172 / JCI35798.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

123.

Zhou S, Mody D, DeRavin SS, Hauer J, Lu T, Ma Z, Hacein-Bey Abina S, Gray JT, Greene MR, Cavazzana-Calvo M, Malech HL, Соррентино Б. инактивирующий лентивирусный вектор для генной терапии SCID-X1, который не активирует экспрессию LMO2 в Т-клетках человека. Кровь. 2010, 116: 900-908. 10.1182 / кровь-2009-10-250209.

PubMed Central PubMed Google ученый

124.

Cavazzana-Calvo M, Payen E, Negre O, Wang G, Hehir K, Fusil F, Down J, Denaro M, Brady T, Westerman K, Cavallesco R, Gillet-Legrand B, Caccavelli L, Sgarra R, Maouche-Chrétien Л., Бернауден Ф, Жирот Р., Дорацио Р., Малдер Дж. Дж., Полак А, Банк А, Сулье Дж, Ларгеро Дж., Каббара Н., Далле Б., Гурмель Б., Сосье Г., Кретьен С., Картье Н., Обург П., Фишер А., Cornetta K, Galacteros F, Beuzard Y, Gluckman E, Bushman F, Hacein-Bey-Abina S, Leboulch P: Независимость от переливания и активация HMGA2 после генной терапии человеческой β-талассемии.Природа. 2010, 467: 318-322. 10.1038 / природа09328.

CAS PubMed Central PubMed Google ученый

Уравнение ЗК-Бюргерса для трехмерных уединенных волн Россби и его решения, а также эффект чирпа | Достижения в разностных уравнениях

Как хорошо известное солитонное уравнение, уравнение КдФ играет ключевую роль в развитии теории солитонов. Однако уравнение КдФ считается \ ((1 + 1) \) -мерной моделью (одно пространственное и одно временное измерения).Наиболее известными двумерными обобщениями уравнения КдФ являются уравнения КП и ЗК. Для уравнения ZK было много исследований, в которых обсуждались аналитические решения уравнения ZK в различных условиях с помощью различных методов [30–40], таких как метод анзаца, модифицированный метод F -разложения и т. Д., Некоторые важные результаты были получены. Уравнение (24), которое мы получаем в статье, отличается от обычного уравнения ZK из-за наличия эффекта диссипации. Из-за связи между уравнением KdV и ZK, разумно рассмотреть классические решения уединенной волны в форме «sech ² »; с другой стороны, мотивированные исследованиями профессора Ма о рациональных решениях солитонного уравнения, мы должны глубоко задуматься, существуют ли рациональные решения уравнения ZK.Таким образом, этот раздел разделен на два подраздела: один посвящен поиску классических уединенных волновых решений уравнения ZK с помощью метода синус-косинусов, а другой посвящен исследованию рациональных решений уравнения ZK.

Классические решения уединенной волны

Предполагая, что

$$ \ xi = X + Y- (C + \ alpha) T, $$

(34)

, где C обозначает скорость волны, мы имеем следующую форму преобразования:

$$ \ begin {align} & \ frac {\ partial} {\ partial T} = — (C + \ alpha) \ frac { d} {d \ xi}, \ qquad \ frac {\ partial} {\ partial X} = \ frac {d} {d \ xi}, \ qquad \ frac {\ partial} {\ partial Y} = \ frac { d} {d \ xi}, \\ & \ frac {\ partial ^ {2}} {\ partial X ^ {2}} = \ frac {d ^ {2}} {d \ xi ^ {2}}, \ qquad \ frac {\ partial ^ {2}} {\ partial Y ^ {2}} = \ frac {d ^ {2}} {d \ xi ^ {2}}.{2} \ biggl (\ frac {1} {2} \ sqrt {\ frac {C} {a_ {1} + a_ {2}}} \ bigl [X + Y- (C + \ alpha) T \ bigr] \ biggr), \ quad \ frac {C} {a_ {1} + a_ {2}}> 0, $$

(49)

Рациональные решения

Таким же образом, пренебрегая эффектом диссипации и предполагая, что \ (\ alpha = 0 \) и \ (\ mu = 0 \), уравнение. (24) можно переписать как

$$ A_ {T} + a_ {0} AA_ {X} + a_ {1} A_ {XXX} + a_ {2} A_ {XYY} = 0. $$

(50)

Для удобства мы нормализуем коэффициенты в формуле.{2}, \ end {align} $$

(65)

, когда \ (c_ {6,0} = 0.00007 \), \ (c_ {5,0} = 0.00006 \), \ (c_ {3,0} = 0.00004 \), \ (c_ {1,0} = 0,00002 \), \ (\ beta = 0,0001 \). Изображение решения (65) представлено на рисунке 2.

Рисунок 2

Замечания

Как мы знаем, интегро-дифференциальные уравнения (BO, ILW), которые владеют решениями рациональных функций, могут быть использованы для описания алгебраических уединенных волн; эти рациональные решения могут быть использованы для описания деления уединенных волн и объяснения возможного физического механизма линии шквала в реальной атмосфере.С другой стороны, дифференциальные уравнения (KdV, mKdV) могут описывать классические уединенные волны. Теперь, с помощью приведенного выше вывода, мы можем узнать, что уравнение ZK-Бюргерса как дифференциальное уравнение имеет решения в виде рациональных функций. Может ли он также описывать алгебраические уединенные волны? Это открытая проблема. Обсудим это в будущем.

CR05-000-ZK ASJ | Дистрибьютор Rutronik24

1. Дом
3. Стандартный чип-резистор
4. Стандартный чип-резистор ASJ

RC0201 0R I = 0,5A
Поставщик: Код соответствия ASJ
: RC02010R
Rutronik No.: WRC53490
Единичная упаковка: 10000
MOQ: 10000
упаковка: 0201
Упаковка: REEL

Лучший выбор

Сопротивление резистора

0 Ом

Пакет

0201

Макс.опер. вольт.

15 В

Мин. Рабочая температура.

-55 ° С

Макс. Рабочая температура.

125 ° С

Упаковка

Катушка

Leadfree Defin.

10

Автомобильная промышленность

AEC-Q (200)

Спец. Особенности

СТАНДАРТ

Диапазон значений

ДЖЕМПЕР

Технологии

ТОЛЩАЯ ПЛЕНКА

ECCN

EAR99

Таможенный тариф No.

85332100000

Страна

Сингапур

ABC-код

С

Поставщик Срок выполнения

36 недель

С товарами в вашей корзине вы можете отправить нам заказ или, если у вас есть дополнительные вопросы, запрос, не имеющий обязательной силы.

PTK787 / ZK 222584, новый и мощный ингибитор тирозинкиназ рецептора фактора роста эндотелия сосудов, ухудшает индуцированные фактором роста эндотелия сосудов ответы и рост опухоли после перорального приема

ВВЕДЕНИЕ

Ангиогенез, образование новых сосудов из существующих сосудистая сеть, является важным событием в различных физиологических и патологические процессы.В физиологических условиях ангиогенез ограничен такими процессами, как эмбриогенез, овуляция и заживление ран. Ангиогенез также происходит при патологических такие процессы, как воспаление (1, 2, 3, 4) , ревматоидный артрит (5, 6, 7, 8) , глазная неоваскуляризация (9, 10, 11, 12, 13) , псориаз (14, 15, 16) , рост опухоли, и образование метастазов (17 , 18) .

Из многочисленных факторов роста и цитокинов, которые, как было показано, обладают ангиогенным действием, VEGF 2 оказывается ключевым фактором в патологических ситуациях, которые включают неоваскуляризация, а также повышенная проницаемость сосудов (19 , 20) .Рецепторы VEGF, Flt-1 (VEGF-R1; Ref. 21 год ) и KDR (VEGF-R2; Ref. 22 ), почти исключительно расположены на эндотелиальных клетках (23) . Экспрессия этих рецепторов низкий в нормальных тканях и активируется только во время развития этих патологических состояний при возникновении неоваскуляризации (24 , 25) . Оба рецептора имеют семь иммуноглобулиноподобных доменов в их внеклеточная область, единственный трансмембранный домен, и внутриклеточный расщепленный домен тирозинкиназы и принадлежит к тому же семейство рецепторов как PDGFR, c-Kit (рецептор фактора стволовых клеток), c-Fms (рецептор колониестимулирующего фактора), Flt-3 и Flt-4.Flt-1 связывает VEGF-A и VEGF-B (26 , 27) и связанные фактор роста плаценты (28 , 29) , тогда как KDR связывает VEGF-C и VEGF-D (30 , 31) в дополнение к VEGF-A. VEGF-C и VEGF-D являются как лигандами, так и активаторами Flt-4 (VEGF-R3), который является экспрессируется на эндотелиальных клетках лимфатических сосудов (32, 33, 34) . Хотя было показано, что активация Flt-1 опосредуют биологические реакции, такие как эндотелиальные и моноцитарные клетки миграция и индукция тканевого фактора (27 , 28 , 35, 36, 37, 38) , в клетки, экспрессирующие только Flt-1, или трансфицированные клетки с дефицитом Flt-1 с кДНК Flt-1 стимуляция VEGF индуцирует только слабый рецептор фосфорилирование и отсутствие значимого митогенного ответа (37 , 38) .В отличие от Flt-1, KDR сильно аутофосфорилируется. при стимуляции VEGF и опосредует митогенный ответ (39 , 40) .

Эксперименты по нокауту генов для VEGF (41 , 42) а также его рецепторы (43, 44, 45, 46) подчеркнули ключевую роль рецепторной системы VEGF / VEGF в развитии эмбрионального сосудистая система. Были использованы различные подходы к мешают работе рецепторной системы VEGF / VEGF у взрослых животных и тем самым определяют роль рецепторов VEGF в различных патологические состояния.Эти подходы включают нейтрализацию VEGF антитела (47, 48, 49) , антитела против рецепторов VEGF (50 , 51) , рекомбинантные растворимые рецепторные белки VEGF (52 , 53) , регулируемая тетрациклином система экспрессии VEGF (54 , 55) , и доминантно-отрицательные мутанты VEGF рецепторы (56) . Результаты этих подходов предполагают Система рецепторов VEGF / VEGF — новая и привлекательная терапевтическая мишень для подавления патологической неоваскуляризации и, в частности, для подавления роста опухоли (57 , 58) .

Наша цель заключалась в разработке низкомолекулярной синтетической молекулы, которая эффективно и избирательно блокирует рецепторную систему VEGF / VEGF после пероральный прием, подходящий для хронической терапии VEGF-зависимых патологическая неоваскуляризация. В этом отчете мы описываем фармакологический профиль мощного ингибитора тирозина VEGF киназы, выполняющие эту задачу. Хотя другие синтетические молекулы сообщалось, что ингибируют киназы рецептора VEGF (59 , 60) , насколько нам известно, это один из первых низкомолекулярных ингибиторы веса рецепторной системы VEGF / VEGF, как сообщается, активен при ингибировании VEGF-опосредованных процессов после перорального приема (61) .

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Вещества.

PTK787 / ZK 222584 (62) и SU5416 (60) мы синтезированы в отделении онкологических исследований (Novartis Фармацевтика). PTK787 / ZK 222584 был обнаружен и профилирован в сотрудничество с Институтом молекулярной медицины (биология опухолей) Center), а также онкологические исследовательские лаборатории Schering AG. Исследования, описанные в этом отчете, проводились либо с дигидрохлорид или сукцинатная соль.Для анализов in vitro a основной раствор 10 мм PTK787 / ZK 222584 был приготовлен в ДМСО. Его дополнительно разводили в буфере или среде так, чтобы концентрация ДМСО в аналитических системах не превышала 0,01%. Для in vivo исследований, носитель дигидрохлоридной соли была дистиллированная вода. Сукцинатную соль суспендировали в носителе. содержащий 5% ДМСО и 1% Твин 80 в дистиллированной воде. Используемый VEGF во всех тестах in vitro и in vivo было человеческим VEGF ₁₆₅ произведено в Escherichia coli (63) .HUVEC были получены от PromoCell (Heidelberg, Германия). KDR-трансфицированные клетки CHO получали из Институт молекулярной медицины (Центр биологии опухолей). Опухолевая клетка линии были получены из Американской коллекции типовых культур (Rockville, MD), за исключением CWR-22, который был получен от доктора Претлоу (Дело Медицинский факультет Западного резервного университета, Кливленд, Огайо).

Анализы тирозинкиназы рецептора VEGF.

Анализы киназы in vitro проводили в 96-луночных планшетах. в качестве анализа связывания с фильтром с использованием рекомбинантной слитой с GST киназы домены, экспрессированные в бакуловирусе и очищенные более глутатион-сефароза.γ- [ ³³ P] АТФ использовали в качестве донор фосфата и пептид поли- (Glu: Tyr 4: 1) использовали в качестве акцептор. Рекомбинантные слитые белки GST разводили в 20 мМ Трис · HCl (pH 7,5), содержащий 1–3 мм MnCl ₂ , 3–10 мм Mg Cl ₂ , 0,25 мг / мл полиэтиленгликоль 20000 и ДТТ 1 мм, в зависимости от их специфической активности. Каждая слитая с GST киназа была инкубировали в оптимизированных буферных условиях [20 мМ Трис-HCl буфер (pH 7,5), 1–3 мм MnCl ₂ , 3–10 мм MgCl ₂ , 3–8 мкг / мл поли- (Glu: Tyr 4: 1), 0.25 мг / мл полиэтиленгликоля 20000, 8 мкм м АТФ, 10 мкм натрия ванадат, 1 мм DTT и 0,2 мкКи [γ — ³³ P] АТФ в общем объеме 30 мкл в наличие или отсутствие исследуемого вещества в течение 10 мин при температуре окружающей среды. температура. Реакцию останавливали добавлением 10 мкл 250 мкл. мм ЭДТА. Используя 96-луночную систему фильтрации, половина объем (20 мкл) переносили на иммобилон-поливинилиден дифторидная мембрана (Millipore, Bedford, MA). Затем мембрана была обильно промыт 0,5% H ₃ PO ₄ и затем пропитанный спирт этиловый.После высыхания коктейль Microscint (Packard, Meriden, CT) был добавлен, и был проведен сцинтилляционный счет. IC ₅₀ s для PTK787 / ZK 222584 или SU5416 в этих как а также все анализы, описанные ниже, были рассчитаны с помощью линейной регрессии. анализ процентного ингибирования.

Анализ селективности киназы.

Для определения профиля селективности фермента PTK787 / ZK 222584 его влияние на киназную активность Flt-4, c-Kit, c-Fms, рост эпидермиса рецептор фактора, рецептор фактора роста фибробластов-1, PDGFR-β, c- Онкоген Met (рецептор роста гепатоцитов фактор), Tie-2, c- Abl, c- Src протоонкоген, PKC-α и Cdc2 измеряли с использованием киназных анализов в соответствии с процедура, описанная выше для киназ рецептора VEGF.

Анализ фосфорилирования клеточных рецепторов.

Поскольку ингибитор киназы должен проникать в клетки, чтобы ингибировать киназу домена рецептора, эффекты PTK787 / ZK 222584 были протестированы в анализы аутофосфорилирования рецепторов на основе клеток с использованием HUVEC, которые естественным образом экспрессируют клетки CHO, трансфицированные KDR или KDR. HUVEC или CHO клетки высевали в шестилуночные планшеты и выращивали до ~ 80% конфлюэнтности. PTK787 / ZK 222584 добавляли в серийных разведениях, и клетки инкубировали. в течение 2 ч при 37 ° C в среде без FCS.VEGF (20 нг / мл) затем добавлен. После 5 мин инкубации (37 ° C) клетки дважды промывали ледяной PBS, а затем лизированный. Ядра были удалены на полной скорости. центрифугирование в течение 10 мин при 4 ° C на центрифуге Eppendorf. Концентрации белка в лизатах определяли с использованием BSA в качестве стандарт. Для второй части анализа моноклональные антитела к KDR. (моноклональное антитело 1495.12.14; Novartis) наносили на микротитровальный планшеты в качестве улавливающих антител. Лизаты клеток (20 мкг белка / лунку) были добавлен в трех экземплярах вместе с PY-20 (AP), щелочным меченные фосфатазой антифосфотирозиновые антитела (трансдукция Лаборатории, Лексингтон, Кентукки).После инкубации в течение ночи при 4 ° C связанный PY-20 (AP) был обнаружен люминесцентной щелочной фосфатазой субстрата (TROPIX, Bedford MA), а затем хемилюминесценцию определенный.

Анализ пролиферации эндотелиальных клеток.

В качестве теста способности PTK787 / ZK 222584 подавлять функциональную ответ на VEGF, анализ пролиферации эндотелиальных клеток, основанный на Использовали включение BrdUrd (Biotrak Cell Proliferation System V.2, Амершам, Англия).Субконфлюэнтные HUVEC были засеяны с плотностью 5 × 10 ³ клеток / лунка в 96-луночную планшеты, покрытые 1,5% желатином, а затем инкубированные при 37 ° C и 5% CO ₂ в питательной среде. Через 24 ч рост среду заменяли базальной средой, содержащей 1,5% FCS и постоянную концентрация VEGF (50 нг / мл), bFGF (0,5 нг / мл) или FCS (5%) в наличие или отсутствие PTK787 / ZK 222584. В качестве контроля лунки без фактора роста также были включены. Через 24 часа инкубации, добавляли раствор для мечения BrdUrd и клетки инкубировали дополнительные 24 часа до фиксации, блокировки и добавления Меченное пероксидазой антитело против BrdUrd.Связанное антитело затем было детектируется с использованием 3,3’5,5′-тетраметилбензидинового субстрата, в результате чего в окрашенном продукте реакции, количественно определенном спектрофотометрически при 450 нм.

Анализ выживаемости эндотелиальных клеток.

Чтобы определить, может ли PTK787 / ZK 222584 блокировать эндотелиальные клетки выживаемость VEGF, влияние этого соединения на клетки выживаемость в присутствии и в отсутствие VEGF определялась в бессывороточные условия. HUVEC (11 × 10 ³ клеток / лунку) культивировали в покрытые фибриногеном лунки (предметные стекла с 8-луночной камерой) при отсутствии сыворотка с VEGF или без него (10–100 нг / мл) и в присутствии возрастающие концентрации PTK787 / ZK 222584.Через 48 часов слайды фиксировали в холодном 70% этаноле и расщепляли РНКазой А (200 мкг / мл) до того, как ДНК была помечена насыщающими концентрациями пропидия йодид (25 мкг / мл) в банках Коплина. Слайды были закрыты с глицерином-PBS, содержащим иодид пропидия в том же пропидиуме концентрация йодида. Анализ клеток проводился с помощью лазерного Сканирующий цитометр (Compucyte Corporation, Кембридж, Массачусетс). Аргон ионный лазер с возбуждением 488 нм (5 мВт) и длиннопроходный фильтр с длиной волны 570 нм с использованием объектив × 20 использовали для регистрации флуоресценции иодида пропидия.Это использовалось как параметр контуров и пороговых значений для сбор данных о клетках, оставшихся в лунках для культивирования в конце эксперимент. Область сканирования была настроена так, чтобы охватить доступную культуру. площадь для каждой из камер. Параметры сбора / анализа данных были установлены для включения только отдельных ячеек и исключения мусора и агрегаты.

Анализ миграции эндотелиальных клеток.

В качестве теста способности этого соединения ингибировать другой функциональный ответ на VEGF, который важен для ангиогенеза, эндотелиальный использовали анализ миграции клеток.Планшеты (24-луночные) были покрыты 1,5% желатин и снабжены круговыми ограждениями в качестве барьера для предотвращения образования клеток от роста в центре колодца. Субконфлюэнтные HUVEC были засеяны во внешнюю зону (1 × 10 ⁵ клеток / лунку), а затем инкубировали при 37 ° C и 5% CO ₂ в питательной среде. Через 24 часа заборы были удалены, и питательная среда была заменена базальной средой содержащий человеческий VEGF (10 нг / мл) в присутствии или в отсутствие PTK787 / ZK 222584. Для подавления пролиферации клеток, 50 мкг / мл. Добавляли 5-фторурацил (Roche, Базель, Швейцария).Через 72 ч инкубации клетки фиксировали и окрашивали Diff-Quik (Dade Behring AG, Дюдинген, Швейцария), а также количество мигрировавших количество клеток подсчитывали под бинокулярным микроскопом, используя программное обеспечение KS-400 (Carl Zeiss Jena, Йена, Германия). Количество ячеек в лунки с VEGF или только сывороткой и носителем принимали за 100%. (контроль), а изменения количества клеток в лунках с разными концентрации PTK787 / ZK 222584 рассчитывались как процент от контрольные значения.

Анализы антипролиферативной активности против клеток, не экспрессирующих рецепторы VEGF.

Потенциальные антипролиферативные эффекты PTK787 / ZK 222584, не связанные с Ингибирование VEGF тестировали с использованием клеток, которые не экспрессируют VEGF. рецепторы, линии опухолевых клеток человека A431 (эпителиальная карцинома) и DU145 (рак простаты). Клетки высевали в 96-луночный микротитр. планшеты (1,5 × 10 ⁶ клеток / лунку) и инкубировали в течение ночи. PTK787 / ZK 222584 добавляли в серийных разведениях на день 1. Затем планшеты инкубировали в течение 6 дней. После инкубации клетки были зафиксированы с помощью 3.3% глутарового альдегида, промытого водой, и окрашены 0,05% метиленовым синим. После промывки краситель был элюирован. с 3% HCl и оптическая плотность, измеренная с помощью SpectraMax 340 ридер для микротитрационных планшетов при 665 нм.

Анализ образования ростков сосудов.

Способность PTK787 / ZK 222584 ингибировать ангиогенез была протестирована в in vitro модель образования капиллярного отростка (64) . Фрагменты (1 мм ² ) аорты крысы помещали в гель фибрина (500 мкл) в 24-луночные планшеты и инкубируют со средой, содержащей 10% FCS, в присутствии или в отсутствие возрастающих концентраций PTK787 / ZK 222584.Через 6 дней Плотность капилляров определялась количественно по изображениям, просмотренным под обратным микроскоп с использованием компьютеризированной системы визуализации (KS-400, Carl Zeiss Йена, Йена, Германия).

Определение концентраций в плазме после перорального введения у мышей.

Поскольку нашей целью было разработать соединение, которое ингибирует VEGF-индуцированный ангиогенез после перорального приема, мы проверили, PTK787 / ZK 222584 всасывается после перорального введения самкам мышей. (МАГ).Концентрации свободного основания в плазме также измеряли после однократное пероральное введение 50 мг / кг (свободное основание) дигидрохлорид или сукцинатная соль. Обе соли были приготовлены в виде 5% ДМСО / 1% Твин 80. Для сравнения, концентрации SU5416 в плазме были измеряется после перорального приема в той же дозе и с тем же транспортное средство. Пероральное дозирование осуществлялось через желудочный зонд, и мыши имели свободный доступ. к пище и воде во время эксперимента. В отведенное время четыре мышей умерщвляли из каждой группы обработки, и кровь сердца собираются в гепаринизированные пробирки.Образцы плазмы были проанализированы сразу на свободное основание соединений обращенно-фазовым методом жидкостная хроматография высокого давления. Образцы плазмы были депротеинируется добавлением равного объема ацетонитрила, с последующим тщательным перемешиванием и центрифугированием. Супернатант был проанализированы напрямую. Стандартная кривая была построена для плазменных шипов. с известными концентрациями соединения и обработаны и проанализированы как описано выше. Концентрации до 0,1 мкм ( самая низкая концентрация на стандартной кривой).

In vivo Модель ангиогенеза, индуцированного фактором роста.

Чтобы определить, ингибирует ли PTK787 / ZK 222584 VEGF-опосредованный ангиогенез in vivo , мы протестировали эффекты PTK787 / ZK 222584 на ангиогенный ответ, индуцированный VEGF в факторе роста модель имплантата у мышей. Чтобы проверить специфичность ответа, также были протестированы эффекты на ангиогенез, индуцированный PDGF. Пористый тефлон камера (объем 0,5 мл) была заполнена 0.8% мас. / Об. Агара, содержащего гепарин (20 единиц / мл) с фактором роста или без него (3 мкг / мл для человека VEGF, 2 мкг / мл человеческого PDGF) имплантировали подкожно. на спинном фланге Мыши C57 / C6. Мышей лечили PTK787 / ZK 222584 (12,5, 25 или 50 мг / кг дигидрохлорида перорально. один раз в день) или автомобиль (вода) запуск 1 за день до имплантации камеры и в течение 5 дней после. По окончании лечения мышей умерщвляли, а камеры удаленный. Васкуляризованная ткань, растущая вокруг камеры, была тщательно извлекали и взвешивали, а содержание крови оценивали измерение содержания гемоглобина в тканях (метод Драбкинса; Sigma, Дайзенхофен, Германия).Ранее мы показали, что этот рост факторы вызывают дозозависимое увеличение веса и содержания в крови растущая ткань (гистологически охарактеризованная как содержащая фибробласты и мелкие кровеносные сосуды) вокруг камер, и эта реакция блокируется антителами, которые специфически нейтрализуют факторы роста (65) .

In vivo Модель ангиогенеза, индуцированного опухолевыми клетками.

Чтобы определить, подавляет ли PTK787 / ZK 222584 ангиогенный ответ опосредовано опухолевыми клетками in vivo , мы протестировали эффекты PTK787 / ZK 222584 на ангиогенный ответ, индуцированный эпителиальным карцинома A431 (2 × 10 ⁶ ) инкапсулированы в альгинатные шарики и имплантированы s.c. на спинном боку голых мышей, как подробно описано ранее (66) . В мышей лечили PTK787 / ZK 222584 (50 мг / кг дигидрохлорида перорально. один раз в день) или транспортное средство, начиная со дня имплантации бусинок и продолжаться в течение 12 дней после этого. На 12-й день мышей умерщвляли 20 мин после инъекции 0,1 мл меченного FITC высокомолекулярного вещества раствор декстрана ( M _r 150,000; 100 мг / кг). Содержание крови в альгинатных гранулах определяли по измерение поглощения флуоресцентного декстрана альгинатным имплантатом, как описано ранее (66) .

Модель ксенотрансплантата опухоли человека голой мыши.

Чтобы определить влияние PTK787 / ZK 222584 на рост опухоли, его эффекты были протестированы на различных опухолях человека, выращенных подкожно. в обнаженном виде мышей. Рост опухоли инициировали подкожно. инъекция человека линии клеток карциномы (10 ⁶ клеток; A431 эпителиальный карцинома, карцинома толстой кишки Ls174T и карцинома толстой кишки HT-29) или трансплантация фрагментов опухоли (карцинома простаты PC-3, DU145 карцинома простаты и карцинома простаты CWR-22; ∼25 мг) из мыши-носители.Медикаментозное лечение было начато, когда объем опухоли 25–100 мм ³ . PTK787 / ZK 222584 был вводится в дозах от 25 до 100 мг / кг перорально один или два раза в день. Опухоль рост контролировали еженедельно путем измерения перпендикулярных диаметров. Опухоль площади определялись как произведение наибольшего диаметра ( a ) и его перпендикуляр ( b ) согласно формуле [площадь опухоли = a × b ], и объем опухоли был рассчитан из определение наибольшего диаметра ( a ) и его перпендикулярно ( b ) по формуле [опухоль объем = a × ( b ² /2)].

Гистология опухолей.

Чтобы определить, было ли ингибирование роста опухоли с помощью PTK787 / ZK 222584 связанные с ингибированием образования сосудов опухоли, группы мышей несущий эпителиальную карциному A431, образованную из фрагментов опухоли были использованы для гистологического исследования. Мыши с опухолями были обработанные либо PTK787 / ZK 222584 (50 мг / кг дигидрохлорида перорально), либо транспортное средство. По два животных из каждой группы ( n = 6) убивали каждую неделю, 90 254 i.е., через 7, 14 и 22 дня после начало лечения (14, 21 и 29 дней после трансплантации опухоли), для гистологического исследования опухоли. Ткань опухоли быстро зажила. замороженные в изопентане при -130 ° C и хранящиеся при -70 ° C. Для визуализация эндотелиальных клеток кровеносных сосудов, криосрезы окрашены антителами к CD31 (крысиные антимышиные; PharMingen, San Diego, CA; разведение 1: 5000) с использованием диаминобензидина в качестве хромагена (Набор ABC-Vectastain; Vector Laboratories, Burlingame, CA).Разделы контрастировали гематоксилином.

Модель Syngeneic Mouse.

Чтобы определить, подавляет ли PTK787 / ZK 222584 рост опухоли и образование метастазов у ​​иммунокомпетентных мышей, его последствия также были протестировано на модели ортотопической мышиной почечной карциномы (RENCA). Опухоли были инициированы инъекцией 1 × 10 ⁶ клеток в субкапсулярное пространство почка. Медикаментозное лечение было начато через 1 день после опухолевой клетки. прививка. Мыши получали либо PTK787 / ZK 222584 (50 мг / кг дигидрохлорид р.о. один раз в день) или носитель (дистиллированная вода). Три через несколько недель после начала терапии мышей умерщвляли для определения образование метастазов в легких и регионарных лимфатических узлах в брюшная полость.

Модель заживления ран.

Получены линейные послеоперационные раны на всю толщину (3 см) по длине спинная средняя линия молодых самцов крыс Sprague Dawley (250 г; n = 10 группа) и копируется с матрасные швы. Крысам вводили PTK787 / ZK 222584 (5, 20 или 50 мг / кг дигидрохлорида i.п., 1 раз в сутки, дни -2-7) или 1 мл / кг физиологический раствор i.p. (1 раз в сутки, дни от -2 до 7). PTK787 / ZK 222584 был дозирован i.p. а не п.о. чтобы избежать нагрузки на рану. В 50 мг / кг внутрибрюшинно. доза была оценена как эквивалент 100 мг / кг перорально. доза по фармакокинетической оценке. Как средство борьбы с поврежденной раной исцеления, другая группа животных получала суточную дозу дексаметазон (5 мг / кг, внутримышечно) за 1 день до разреза сделал. Крыс умерщвляли, срезы кожи (30 × 8 мм полосы) в ранах иссекали, а предел прочности на разрыв зажившая рана (измеряется путем растяжения раны до предела прочности) с универсальным растягивающим устройством модели 144501; Цвик, Ульм, Германия).Срезы кожи зафиксированы (4% параформальдегид в PBS pH 7,2), залитый, разделенный и окрашенный H&E для качественной гистологической оценки.

Оценка воздействия на кровообращение и лейкоциты костного мозга.

Для определения влияния PTK787 / ZK 222584 на кроветворение, нормальное Мышей BALB / c ( n = 5 / группа) лечили 50 мг / кг PTK787 / ZK 222584 или носитель, перорально, один раз в день в течение 21 дня. Определить влияние PTK787 / ZK 222584 на гематопоэтическое восстановление. после цитотоксического инсульта мышей BALB / c ( n = 5 / группа) лечили циклофосфамидом 100 мг / кг или физиологическим раствором (т.е.п., дни 3, 5 и 7) для уменьшения общего количества клеток костного мозга и циркулирующие клетки крови. Мышам также вводили 50 мг / кг. PTK787 / ZK 222584 или автомобиль (p.o., один раз в день). Через 21 день лечения, мышей умерщвляли и брали образец крови пункция полой вены и применение антикоагулянта ЭДТА. Большеберцовая кость были обнажены путем рассечения и удалены путем разрезания кости как можно ближе к лодыжку и мыщелок по возможности. Малоберцовая кость была отрезана, а костный фрагмент взвешивали.Костный мозг был получен путем вставки Игла 23-го размера в мыщелковый конец кости, и клетки были промывают 1 мл PBS, содержащего 1 ед. / мл гепарина. В полученная «пробка» клеток могла быть однородно суспендирована осторожным встряхиванием. Лейкоциты, эритроциты и тромбоциты были подсчитано с помощью счетчика клеток крови Sysmex TOA E-5000 (Digitana AG, Хорен, Швейцария).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Ингибирование протеинкиназ с помощью PTK787 / ZK 222584.

PTK787 / ZK 222584 ингибирует все тирозинкиназы рецептора VEGF проверено. Он был немного более эффективен против KDR (VEGF-R2), чем против Flt-1 (VEGF-R1) и даже менее эффективен против мышиного гомолога человеческий KDR, Flk-1 (Таблица 1) ⇓ . Он также ингибировал Flt-4 (VEGF-R3) при еще более высоких концентрациях. (Таблица 1) ⇓ . PTK787 / ZK 222584 также был активен в отношении другого тирозина. киназы, принадлежащие к тому же семейству рецепторов тирозинкиназ, что и рецепторы VEGF, i.е., PDGFR-β, c-Kit и c-Fms (Таблица 1) ⇓ . SU5146 был менее селективным, чем PTK787 / ZK 222584 для KDR; SU5416 ингибировал c-Kit, и KDR находился в том же диапазоне концентраций, с Flt-1 в еще более низких концентрациях. Он ингибировал PDGFR-β с эффективность аналогична PTK787 / ZK 222584.

Таблица 1

Ингибирующая активность PTK787 / ZK 222584 против рецептора класса III тирозинкиназы

Анализы киназ проводили с использованием рекомбинантного GST-слитого киназные домены рецептора.[ ³³ P] АТФ использовали в качестве донор фосфата и поли- (Glu: Tyr 4: 1) пептид использовали в качестве акцептор.

PTK787 / ZK 222584 не ингибировал киназы из других семейств ферментов в концентрации до 10 мкм. Различные протестированные киназы включают FGF-R1, c-Met, Tie-2, рецептор эпидермального фактора роста, c-Src, v-Abl, PKC-α и Cdc2.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на VEGF-индуцированные клеточные ответы.

Чтобы определить, используется ли PTK787 / ZK 222584 ячейками для достижения своего внутриклеточная мишень, ее влияние на фосфорилирование рецепторов было протестировано в клеточных анализах.Измерение VEGF-индуцированного аутофосфорилирование KDR при хемилюминесценции двойных антител анализ, используя либо HUVEC, либо клетки CHO, трансфицированные KDR рецептора, показали, что PTK787 / ZK 222584 ингибирует VEGF-индуцированный фосфорилирование с IC ₅₀ 17 ± 2 нм ( n = 4) и 34 ± 2 нм ( n = 14) для HUVEC (рис.1) ⇓ и клетки СНО соответственно. SU5416 стимулировал аутофосфорилирование KDR в обоих типах клеток в этих условиях анализа.

Рис.1.

Зависимое от концентрации ингибирование VEGF-индуцированного KDR фосфорилирование в HUVEC с помощью PTK787 / ZK 222584. HUVEC предварительно инкубировали с PTK787 / ZK 222584 в течение 2 ч перед добавлением VEGF (20 нг / мл). Затем клетки лизировали детергентом и использовали растворимую фракцию. для количественного определения фосфорилированного рецептора с помощью двухсайтового иммуноанализа. Разница между сигналами, полученными от нестимулированных клеток (отрицательный контроль) и клетки, стимулированные VEGF (положительный контроль). рассматривается как 100% VEGF-индуцированное аутофосфорилирование KDR.Ценности средства; штанги, SE; n = 4.

Для проверки влияния PTK787 / ZK 222584 на функциональные реакции на VEGF, его влияние на пролиферацию, миграцию и выживаемость HUVEC были проверено. PTK787 / ZK 222584 ингибировал включение тимидина, вызванное VEGF в HUVEC с IC ₅₀ 7,1 ± 5,1 нм ( n = 4). SU5416 ингибировал VEGF-индуцированное включение тимидина в HUVEC с IC ₅₀ из 16 ± 4 нм ( n = 4).В концентрации до 1 мкм, ни PTK787 / ZK 222584 и SU5416 не ингибировали ответ на bFGF или сыворотку.

Анализ HUVEC, меченных иодидом пропидия, методом лазерного сканирования цитометрия показала, что VEGF предотвращает гибель и потерю клеток при сывороточная депривация (рис.2) ⇓ . PTK787 / ZK 222584 дозозависимо ингибировал VEGF-индуцированную выживаемость эндотелиальные клетки в том же диапазоне доз, что и эндотелиальные пролиферация клеток (рис.2) ⇓ . При просмотре под флуоресценцией микроскоп, конденсированные и фрагментированные ядра, типичные для клеток, подвергающихся апоптоз можно было ясно увидеть в лишенных сыворотки клетках в отсутствие VEGF.Их не было в образцах, обработанных VEGF. но были вызваны увеличением концентрации PTK787 / ZK 222584. Апоптоз также проявлялся сдвигом влево гистограмм ДНК в Рис. 2 ⇓ с 1–10 нм PTK787 / ZK 222584. С выше концентрации, большинство клеток погибли и были потеряны во время подготовка слайдов. В анализе миграции клеток PTK787 / ZK 222584 также ингибировал VEGF-индуцированную миграцию HUVEC в зависимости от дозы (IC ₅₀ , 58 ± 10 нм; n = 8).

Рис.2.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на VEGF-индуцированную выживаемость HUVECs в отсутствие сыворотки анализировали с помощью лазерной сканирующей цитометрии. Клетки (11 × 10 ³ на лунку) культивировали в покрытые фибриногеном предметные стекла (восемь лунок) при отсутствии сыворотки с или без VEGF, в присутствии возрастающих концентраций PTK787 / ZK 222584. Через 48 ч слайды фиксировали и РНКазу А переваривали, и ДНК метили йодидом пропидия. Область сканирования была установлен, чтобы охватить доступную область культуры для каждого из камеры.Параметры сбора / анализа данных были настроены так, чтобы включать только одиночные клетки и исключить мусор и агрегаты. В ДНК гистограммы, показанные на рисунке, ось X представляет Содержание ДНК, а по оси Y — количество клеток измеряется. Цифры в скобках — это ячейки, оставшиеся в камера в конце эксперимента. VEGF (10 нг / мл) увеличивается выживаемость клеток. Возрастающие дозы PTK787 / ZK 222584 блокируют клетку эффекты выживания VEGF. На апоптоз указывает слева сдвинуть гистограмм ДНК.

Селективный ингибитор VEGF не должен ингибировать пролиферацию клетки, которые не экспрессируют рецепторы VEGF в той же концентрации диапазон, поскольку он ингибирует процессы, опосредованные рецептором VEGF. Это было проверено с использованием клеточной линии эпителиальной карциномы человека A431 и человека карцинома простаты DU145. PTK787 / ZK 222584 не повлиял на распространение A431 и DU145 в концентрациях до 1 мкм м. При очень высоких концентрациях (в 1000 раз выше, чем необходим для ингибирования фосфорилирования KDR в клеточных анализах), PTK787 / ZK 222584 ингибировал пролиферацию опухолевых клеток (IC ₅₀ : 17 ± 1 мкм и 18 ± 2 мкм для A431 ( n = 4) и DU145 ( n = 5) соответственно).

Испытать влияние на образование капилляров, влияние PTK787 / ZK 222584 были испытаны на формирование ростков из кусочков аорта крысы залита фибриновым гелем. PTK787 / ZK 222584 подавленный росток пластовая доза зависит от IC ₅₀ из 675 ± 64 нм ( n = 8; рис. ⇓ ).

Рис.3.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на формирование капиллярные ростки из кусочков (1 мм ² ) аорты крысы в фибриновый гель, культивированный в среде MCDB 131, содержащей 10% FCS и 300 мкм г / мл аминокапроновой кислоты при 37 ° C и 5% CO ₂ в течение 6 дней.На изображениях, просматриваемых под инверсным микроскопом, видны ростки. образования в отсутствие ( a ) или в присутствии ( b ) из PTK787 / ZK 222584 (1 мкм).

Концентрации PTK787 / ZK 222584 в плазме после перорального введения мышам.

Чтобы определить, поглощается ли PTK787 / ZK 222584, плазма концентрации были измерены после перорального приема. Пик концентрации свободного основания достигали около 30 мкм 30 мин. после перорального приема любой из солевых форм.Через 8 часов после введения, концентрации все еще были> 1 мкм (Рис.4) ⇓ . После перорального приема SU5416 в той же дозе, что и PTK787 / ZK 222584, концентрации в плазме едва определялись (рис. 4) ⇓ и упал ниже уровня обнаружения через 2 ч.

Рис.4.

Средние концентрации свободного основания PTK787 / ZK 222584 (▪ и ▵) или SU5416 (•) в плазме мышей после однократного перорального приема. введение дозы 50 мг / кг (в пересчете на свободное основание). PTK787 / ZK 222584 вводили в виде дигидрохлоридной соли (▪) или сукцинатной соли (▵).Все соединения были сформулированы в 5% ДМСО / 1% Твин 80 для перорального применения. Плазменные концентрации свободное основание определяли методом жидкостной хроматографии высокого давления. после депротеинирования ацетонитрилом. Ценности — это средства; штанги, SE; n = 4.

Эффекты PTK787 / ZK 222584 на VEGF-индуцированный ангиогенез в Модель имплантата фактора роста

in vivo .

Чтобы определить, может ли PTK787 / ZK 222584 ингибировать VEGF-опосредованный ответ in vivo после перорального приема его эффекты были протестирован на модели имплантата фактора роста на мышах.В этой модели VEGF и PDGF индуцируют дозозависимый рост васкуляризированной ткани вокруг s.c. имплант. Ангиогенный ответ количественно оценивается путем измерения вес и содержание крови в этой ткани. PTK787 / ZK 222584, данные в суточные пероральные дозы 12,5, 25 или 50 мг / кг в течение 6 дней индуцировали дозозависимое ингибирование ангиогенного ответа на VEGF, как в сроки увеличения веса фиброзных тканей, растущих вокруг имплантат и увеличение содержания крови в тканях (рис. 5 a ) ⇓ .PTK787 / ZK 222584 также индуцировал дозозависимое ингибирование ответа PDGF, но в более высоком диапазоне доз (рис. 5 b ) ⇓ .

Рис.5.

Эффекты PTK787 / ZK 222584 на ангиогенез, индуцированный in модель имплантата фактора роста. Мышей лечили PTK787 / ZK 222584. (дигидрохлорид) за 1 день до имплантации камер, содержащих VEGF (3 мкг / мл; a ) или PDGF (2 мкг / мл; b ) и через 5 дней после этого. Ангиогенный ответ был определяется путем измерения веса и содержания в крови васкуляризированная ткань вокруг имплантата.Ценности — это средства; штанги, SE. ∗, P <0,05, статистическая значимость ингибирования, тест Даннета.

Эффекты PTK787 / ZK 222584 на ангиогенез, индуцированный опухолевыми клетками

in Vivo .

Чтобы определить, ингибирует ли это соединение ангиогенный ответ опосредовано опухолевыми клетками in vivo , мы протестировали эффекты PTK787 / ZK 222584 на ангиогенный ответ, индуцированный человеком эпителиальная карцинома A431, инкапсулированная в имплантированные альгинатные шарики s.c. у мышей. PTK787 / ZK 222584 ингибировал ангиогенную активность, индуцированную опухолевыми клетками. ответ (рис. 6) ⇓ .

Рис.6.

Эффект PTK787 / ZK 222584 на ангиогенез, индуцированный карцинома человека A431, инкапсулированная в альгинатные шарики и имплантированная подкожно в голых мышей. PTK787 / ZK 222584 (дигидрохлоридная соль) вводится перорально один раз в день в течение 12 дней после инъекции альгинатные шарики. Содержание крови в альгинатных гранулах было определено количественно. путем измерения количества флуоресцентного декстрана, попавшего в имплант на 12 день.Ценности — это средства; штанги, SE; n = 8. *, статистически значимо разница по сравнению с контрольной машиной, тест Даннета, P <0,05.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на рост нескольких опухолей человека в «Обнаженных мышах».

Было исследовано влияние PTK787 / ZK 222584 на рост диапазона опухолей человека, трансплантированных п / к в обнаженной мыши. Все эти опухоли продуцировать VEGF при выращивании в виде клеток в культуре или в виде s.c. ксенотрансплантаты в голые мыши (данные не показаны). PTK787 / ZK 222584 индуцированный дозозависимый подавление роста некоторых из этих опухолей человека после ежедневного перорального введение в дозах от 25 до 100 мг / кг (Таблица 2 ⇓ ; Рис. 7 ⇓ и 8 ⇓ ). Наиболее восприимчивым типом опухоли из исследованных была простата. С помощью DU145 рост опухоли карциномы подавлялся до 70%. С CWR-22 (рис.8) ⇓ , макроскопически видимых опухолей не обнаружено когда мышей умерщвляли через 80 дней в трех из семи Мыши, получавшие PTK787 / ZK 222584.При всех остальных опухолях максимум эффект заключался в замедлении роста опухоли (таблица 2 ⇓ ; Рис. 7 ⇓ ). Максимальные эффекты были получены при ежедневном дозировании около 50–100 мг / кг.

Рис.7.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на рост ксенотрансплантата эпителиальной карциномы человека A431, имплантированной п / к в BALB / c обнаженная мышей. Опухоли были инициированы s.c. впрыск 10 ⁶ A431 опухолевые клетки. Лечение было начато, когда пальпируемые первичные опухоли достигли размером ∼25 мм ² (день 25).PTK787 / ZK 222584 был вводится перорально один раз в день в дозе 25, 50 или 75 мг / кг с 26 по 54 дни после инъекции клеток. Ценности — это средства; штанги, SE; n = 8. *, P <0,05 по сравнению с контролем, тест Даннета.

Рис. 8.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на объем первичного человека Ксенотрансплантаты карциномы простаты CWR-22. Был индуцирован рост первичной опухоли автор: s.c. имплантация фрагментов опухоли самцам голых мышей. Все мыши были заменены тестостероном на s.c. имплантированные гранулы, содержащие тестостерон за 2 дня до имплантации опухоли. Мышей лечили носитель или PTK787 / ZK 222584 (50 мг / кг дигидрохлорида, перорально) один раз в день с 7-го дня после имплантации опухоли до 84-го дня. Значения являются средними; штанги, SE; n = 10. ∗, статистически значимая разница по сравнению с контролем, Тест Даннета.

Таблица 2

Влияние PTK787 / ZK 222584 на рост s.c. имплантированный человек карциномы у голых мышей

Влияние PTK787 / ZK 222584 на васкуляризацию опухоли.

Гистологическое исследование эпителиальной карциномы человека A431, выращенной как s.c. ксенотрансплантаты у голой мыши показали, что микрососуды имеют начал формироваться внутри опухолевой массы через 14 дней после имплантация фрагментов опухоли (рис.9 A ) ⇓ . Со временем размер опухоли увеличивался с ростом более крупных сосуды на границе между опухолью и тканью хозяина, но нет изменение микрососудов внутри опухоли (рис.9, A, C, и E ) ⇓ PTK787 / ZK 222584 в пероральной дозе 50 мг / кг один раз в день с 7-го дня после имплантации опухоли замедлил рост опухоли (Инжир.7) ⇓ . Это было связано с уменьшением количества микрососудов. внутри опухолевой массы со временем и появлением некроз в опухолевом центре (рис.9, B, D, и F ). ⇓ PTK787 / ZK 222584 не повлиял на более крупную установленную сосуды, особенно на краю опухоли (рис. 9, B, D, и F ). ⇓

Рис.9.

Динамика воздействия PTK787 / ZK 222584 на васкуляризация эпителиальной карциномы человека, A431, рост s.c. в голые мыши. Мышей лечили либо PTK787 / ZK 222584 (50 мг / кг дигидрохлорид, перорально) или носитель через 7 дней после опухоли имплантация. Каждую неделю убивали двух животных из каждой группы. , то есть через 7, 14 и 22 дня после начала лечения (14, 21 и 29 сут после трансплантации опухоли), для гистологического осмотр опухоли. Ткань опухоли быстро заморозилась. изопентан при -130 ° C и хранится при -70 ° C. Для визуализации эндотелиальных клеток кровеносных сосудов криосрезы окрашивали антитело к CD31 с использованием диаминобензидина в качестве хромагена.Разделы были контрастировали гематоксилином. Цвет коричневый показывает CD31-положительные клетки. наконечники стрел, микрососуды (капилляры). Маленькие стрелы, большие сосуды на периферия опухоли; стрелки большего размера, опухолевых клеток с пикнотические ядра; жирных стрелки, участков некроза и некротические клетки. Фотографии поперечных срезов репрезентативных опухолей. от мышей, получавших носитель, 14 дней ( A ), 21 день ( C ) и 29 дней ( E ) после опухоли имплантации и от мышей, получавших PTK787 / ZK 222584, в соответствующие временные точки, 7 ( B ), 14 ( D ), и через 21 ( F ) день после начала лечения. a, изображений опухолей с малым увеличением А – Ф . Бар, 100 мкм. b, изображений опухолей с большим увеличением A , B , D и F от а . Bar, 10 мкм.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на рост опухоли и развитие Метастазы в модели сингенной ортотопической опухоли у мышей.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на рост первичной опухоли, а также развитие метастазов, исследовали на иммунокомпетентных мышах.Для этого была создана ортотопическая модель почечно-клеточного рака мыши. (RENCA ) . PTK787 / ZK 222584 подавлял рост первичная опухоль [T / C (среднее увеличение объемов опухоли обработанной животных, разделенных на среднее увеличение объемов опухолей в контроле животных, умноженных на 100), 34%], что также привело к значительному уменьшение количества метастазов в лимфатических узлах и легких (T / C, 29 и 65% соответственно; n = 12 для группа носителя и n = 9 для обработанных группа; П <0.05). Гистологическое исследование кровеносных сосудов, окрашенных CD 31 в первичной опухоли почки а в легких метастазах также выявлено угнетение микрососудов пласт (Т / С для плотности микрососудов 45 и 42% соответственно).

PTK787 / ZK 222584 хорошо переносился всеми in vivo экспериментов и не оказали значительного влияния на массу тела, в целом благополучие животных или макроскопическое воздействие на любые органы тела при время жертвоприношения.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на заживление ран.

Поскольку ангиогенез является важной частью заживления ран, мы протестировали возможное нарушение заживления ран, связанное с ингибированием Сигнализация VEGF. PTK787 / ZK 222584, вводимый в диапазоне доз 5, 20 или 50 мг / кг внутрибрюшинно. один раз в день не повлиял на заживление послеоперационная рана на всю толщину у крыс без изменения ее прочности на разрыв (Рис.10) ⇓ . Напротив, у крыс, получавших дексаметазон (5 мг / кг в / м однократно ежедневно), рана заживала медленнее, чем у крыс, получавших носитель, и прочность на разрыв была значительно снижена на ~ 40%.Более того, раны крыс, получавших дексаметазон, имели более низкую степень клеточность, о чем свидетельствует заметное снижение притока мононуклеарные фагоциты и фибробласты и последующее снижение вновь сформированный матрикс в биоптатах раны (данные не показаны). Этот не наблюдали в ранах крыс, обработанных PTK787 / ZK 222584.

Рис. F10-9586.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на предел прочности при растяжении послеоперационная рана у крыс. Полнослойные линейные послеоперационные раны были вдоль спинной средней линии молодых самцов крыс Sprague Dawley ( n = 10 групп) и копируется с матрасные швы.Животным вводили дексаметазон (5 мг / кг, внутрибрюшинно, один раз в день, начиная с дня -1), PTK787 / ZK 222584 (5, 20 или 50 мг / кг, внутрибрюшинно, один раз в день, в начале -2 дня) или физиологический раствор (1 мл / кг, внутрибрюшинно, один раз в день, начало −2 дня) и лечили в общей сложности 8 дни после ранения. Участки кожи в ранах были вырезаны, и определяли предел прочности зажившей раны. Ценности средства; штанги, SE. Только группа дексаметазона была значительно отличается от контроля, обработанного физиологическим раствором.∗, P <0,001.

Влияние PTK787 / ZK 222584 на кровообращение и костный мозг Лейкоциты.

Учитывая эффективность PTK787 / ZK 222584 в ингибировании c-Kit, оценивалась способность PTK787 / ZK 222584 нарушать кроветворение. Через 21 день лечения PTK787 / ZK 222584 (50 мг / кг перорально, однократно ежедневно), циркулирующие кровяные клетки мышей BALB / c (10,6 ± 1,5 × 10 ³ лейкоциты / мкл; 8,7 ± 0,23 × 10 ⁶ эритроцитов / мкл; 867 ± 64 × 10 ³ тромбоцитов / мкл) и кости лейкоциты костного мозга (log 8.39 ± 0,04 клеток / г кости) были статистически не отличается от контрольных, обработанных носителем (9,4 ± 0,6 × 10 ³ лейкоциты / мкл; 8,5 ± 0,5 × 10 ⁶ эритроцитов / мкл; 732 ± 31 × 10 ³ тромбоцитов / мкл и log 8,23 ± 0,03 лейкоцитов / г кости). Циклофосфамид лечение значительно снизило как циркулирующие лейкоциты, так и костную ткань лейкоциты костного мозга (рис.11) ⇓ , а также циркулирующие эритроциты и тромбоциты (не показаны), но мыши смогли выздороветь через 8–14 дней после последней дозы.Когда вводят в комбинации с циклофосфамидом, 50 мг / кг PTK787 / ZK 222584 (перорально, один раз в день) не усиливали истощение, ни ухудшают восстановление лейкоцитов крови или костного мозга (рис.11) ⇓ ни эритроциты, ни тромбоциты (не показаны). Более высокая доза 100 мг / кг п.о. PTK787 / ZK 222584 вводится только в фазе восстановления после провокация циклофосфамидом также не оказала значительного воздействия на восстановление любого из этих параметров.

Рис. F11-9586.

Эффект лечения PTK787 / ZK 222584 с и после циклофосфамид на клетках крови нормальных мышей BALB / c.PTK787 / ZK 222584 давали в дозе 50 мг / кг перорально. в Ключеле один раз в день. Обработанный транспортным средством контрольные мыши получали Klucel ^® р.о. при 10 мл / кг. Циклофосфамид вводили внутрибрюшинно. по 100 мг / кг на 3, 5 и 7 дни; Контрольные мыши получали 10 мл / кг физиологического раствора. Мышей приносили в жертву в указанные дни и кровотечение из нижней полой вены, удаление костей и костный мозг промывают PBS. Клетки были пронумерованы электронный счетчик. Представленные данные являются средними; стержня, SE или охватывается размером символа.

ОБСУЖДЕНИЕ

В этом отчете мы описываем фармакологический профиль мощный и п.о. биодоступный ингибитор VEGF-опосредованных ответов, основан на молекулярном механизме ингибирования рецептора VEGF тирозинкиназы. Это один из первых синтетических ингибиторов Тирозинкиназы рецепторов VEGF, которые так активны после перорального приема. В ферментативные анализы с использованием рекомбинантных протеинкиназ, PTK787 / ZK 222584 было показано, что он является мощным ингибитором тирозина рецептора VEGF. киназы.Он наиболее эффективен против KDR, человеческого VEGF-R2, и проявляет немного более слабое ингибирование Flt-1, человеческого VEGF-R1 и даже более слабое ингибирование Flk-1, мышиного гомолога KDR, и Flt-4, рецептор, обнаруженный в лимфатической системе. На аналогичных и выше концентрациях, PTK787 / ZK 222584 также ингибирует другие киназы, принадлежащие к тому же классу, что и рецепторы VEGF, , т.е. PDGFR-β, c-Kit и c-Fms. В тех же условиях анализа эталонный соединение SU5416 также ингибирует эти киназы класса III и показывает даже меньшая избирательность по КДР.Протестированные протеинкиназы, принадлежащие к другим семейства, такие как EGF-R, c-Abl, c-Src, PKC-α и Cdc2, не являются ингибируется PTK787 / ZK 222584. Он также неактивен в отношении FGF-R1, c-Met и Tie-2, другие рецепторы, играющие роль в ангиогенные процессы.

Мы показали, что PTK787 / ZK 222584 активен против KDR также в анализы клеточного VEGF-индуцированного фосфорилирования рецепторов с использованием эндотелиальные клетки, которые естественным образом экспрессируют KDR, или трансфицированные клетки линия. В этих клеточных анализах PTK787 / ZK 222584 активен в 20 нм, что указывает на то, что он проникает в клетки и достигает своей внутриклеточной цели.Мы также продемонстрировали, что PTK787 / ZK 222584 селективно подавляет клеточные ответы, опосредованные VEGF в том же диапазоне доз; PTK787 / ZK 222584 ингибирует VEGF-опосредованную клетку пролиферация, выживаемость клеток и миграция клеток. В то же самое диапазон концентраций, PTK787 / ZK 222584 не ингибирует пролиферацию клетки, не экспрессирующие рецепторы VEGF.

В качестве доказательства того, что PTK787 / ZK 222584 может привести к нарушению неоваскуляризация, мы показали, что она подавляет капиллярно-подобные образование ростков в анализе ангиогенеза in vitro .В Кроме того, мы показали, что PTK787 / ZK 222584 ингибирует VEGF-индуцированный васкуляризация в модели имплантата фактора роста и опухоли модель клеточно-управляемого ангиогенеза in vivo . Кроме того, гистологическое исследование опухолей, использованное в исследованиях, описанных в это исследование, а также дополнительные исследования на других моделях опухолей (67) , показали, что лечение опухолей на животных моделях может значительно снизить васкуляризацию опухоли. А также подавляя васкуляризация опухоли, PTK787 / ZK 222584 ингибирует индуцированную ишемией неоваскуляризация сетчатки у новорожденных мышей (68) .PTK787 / ZK 222584 не только ингибирует VEGF-опосредованную неоваскуляризацию, но также Увеличение проницаемости сосудов, вызванное VEGF и опухолью (67) .

В отличие от всех других ингибиторов VEGF (антисмысловой, антитела и ранее описанная рецепторная тирозинкиназа ингибитор, SU 5416) и многие другие ингибиторы ангиогенеза с другими механизмы действия, PTK787 / ZK 222584 хорошо всасывается после перорального введение, при этом концентрация в плазме остается значительно выше концентрации, необходимые для ингибирования фосфорилирования рецептора, индуцируемого VEGF для мышей> 8 ч.Этот фармакокинетический профиль указывает на то, что PTK787 / ZK 222584 может быть отдан на н.у. Действительно, мы смогли продемонстрировать что ответы, опосредованные VEGF, могут быть эффективно заблокированы после однократного ежедневное пероральное дозирование PTK787 / ZK 222584. В имплантате фактора роста модель ангиогенеза, в которой VEGF индуцирует зависимый от концентрации рост васкуляризированной ткани, PTK787 / ZK 222584 дозозависимо блокировал увеличение васкуляризированной ткани. Он также заблокировал аналогичный, но более слабый ответ на PDGF в более высоком диапазоне доз, совместимый с его более слабым активность против тирозинкиназы PDGFR-β в в vitro анализов.После перорального приема PTK787 / ZK 222584 также ингибировал ангиогенный ответ, индуцированный эпителиальной опухолевой клеткой человека (A431) в s.c. имплантат мышам. Рост s.c. опухоли, возникающие из этой линии опухолевых клеток также подавлялся после перорального приема в обнаженном виде мышей, и это было связано с уменьшением количества микрососуды внутри опухоли.

PTK787 / ZK 222584 подавлял рост опухоли в нескольких различных опухолях модели. Лучшие эффекты были замечены против опухолей простаты.Все эти опухоли очень медленно растут. Рост CWR-22, очень медленно растущая опухоль у некоторых мышей полностью подавлялась. Рост из всех других опухолей, исследованных у голой мыши, была только подавлялись или замедлялись, и регрессии опухоли не наблюдалось. В эффективный диапазон доз PTK787 / ZK 222584 в различных дюйма vivo составляла от 50 до 100 мг / кг в день. Должно быть считается, что PTK787 / ZK 222584 в ~ 7 раз менее эффективен против рецепторная тирозинкиназа мыши Flk, чем эквивалентная киназа человека, KDR.Следовательно, дозы, необходимые для пациентов, могут быть ниже, чем можно напрямую экстраполировано из моделей мыши.

Гистологические исследования опухоли A431, а также опухоли RENCA через 1–3 недели лечения отмечалось уменьшение микрососудов в опухоль. Дальнейшие исследования на других моделях опухолей также показали, что PTK787 / ZK 222584 значительно сокращает количество микрососудов в опухоль (67) . Исчезновение капилляров под лечение согласуется с нашим наблюдением, что PTK787 / ZK 222584 ингибирует VEGF-индуцированное выживание эндотелиальных клеток в vitro .Не все сосуды в опухолях были затронуты лечением. с PTK787 / ZK 222584, особенно более крупные сосуды на периферии опухоль. Это указывает на то, что только новообразованные капилляры заторможенные и более стабильные и зрелые сосуды, сформированные до лечения инициируется или индуцируется другими ангиогенными факторами, не чувствительны к ингибированию VEGF. Более зрелые, более крупные сосуды, состоящие из более чем один слой эндотелиальных клеток может быть устойчивым к лечению Ингибиторы VEGF. Остаточный рост опухоли наблюдается у многих s.c. опухоли у моделей голых мышей, по-видимому, вызваны оставшимися более крупные сосуды, особенно на периферии опухоли, которые не уменьшается обработкой PTK787 / ZK 222584.

Наши выводы, что PTK787 / ZK 222584 менее эффективен против некоторых опухолей, чем другие, согласуется с исследованиями, описанными с использованием ингибитор тирозинкиназы, SU 5416 (60) , и нейтрализуя антитела против VEGF (47, 48, 49) . Хотя мы и другие показали, что почти все линии опухолевых клеток in vitro и опухоли выросли in vivo продуцируют VEGF, цитокины или рост факторы, отличные от VEGF, также могут способствовать развитию эндотелиальных клеток. выживаемость и ангиогенез опухоли и даже может быть усилена, когда эффекты VEGF подавляются. In vitro мы наблюдали что PTK787 / ZK 222584 не вызывает апоптоз эндотелиальных клеток, если в среде присутствует любая сыворотка. Это говорит о том, что есть несколько различных факторов, поддерживающих выживание эндотелия и опухоль васкуляризация. Анти-VEGF-терапия может быть более эффективной против некоторых типы опухолей, чем другие, и будущая терапия может потребовать сочетание антиангиогенных средств с разными механизмами действия, а также традиционные методы лечения, направленные на опухолевую клетку.

Подавление роста опухоли ограничивалось не только ростом опухоли s.c .; PTK787 / ZK 222584 также подавлял рост первичной опухоли и рост метастазов на моделях ортотопической опухоли в иммунокомпетентных мышей. Эффект на метастаз был даже больше, чем на первичная опухоль. Подавление образования метастазов может быть объясняется как сниженной васкуляризацией первичной опухоли, так и что приводит к сокращению путей выхода метастатических клеток, а также уменьшенная васкуляризация метастазов, ограничивающая их рост.PTK787 / ZK 222584 также ингибирует VEGFR-3, рецептор, экспрессируемый в лимфатической системы, и эта деятельность может также способствовать ее антиметастатические эффекты.

Поскольку предполагается, что и VEGF, и PDGF играют роль в ране исцеления, неожиданным открытием было отсутствие повреждений раны заживление в любой из моделей опухолей, требующих хирургического вмешательства или нарушения в заживление или сила заживления послеоперационной раны у крысы модель. Либо имеется избыточность ангиогенных факторов, либо VEGF и PDGF не играет жизненно важной роли в процессе заживления ран.Эта учеба предполагает, что PTK787 / ZK 222584 не может нарушать нормальное заживление ран. процесс, и его можно безопасно давать пациентам после операции. Может быть предположили, что более крупные сосуды, образующиеся на периферии имплантированные опухоли голым мышам могут фактически означать заживление ран. ответ, а не ангиогенез, индуцированный опухолью. Это может объяснить, почему эти сосуды не ингибируются PTK787 / ZK 222584 у мышей nude. и требует дальнейшего расследования.

PTK787 / ZK 222584 в качестве единственного агента не оказал значительного воздействия на циркулирующие клетки крови или лейкоциты костного мозга и не Нарушение гемопоэтического восстановления после применения цитотоксического противоопухолевого средства вызов.Это тоже довольно удивительно, учитывая тормозящее эффекты PTK787 / ZK 222584 на KDR и c-Kit, киназы класса III, которые экспрессируются на кроветворных клетках. Это предполагает избыточность гематопоэтические факторы роста, а также указывает на то, что PTK787 / ZK 222584 не усиливает гематопоэтическую токсичность цитотоксических агентов.

Во всех экспериментах in vivo , описанных в этом отчете и в дальнейших исследованиях, которые были выполнены (67 , 68) а также в 4-недельных токсикологических исследованиях надлежащей лабораторной практики в крыс и собак, PTK787 / ZK 222584 очень хорошо переносился без каких-либо влияние на массу тела или поведение животных, отсутствие токсичности для органов-мишеней наблюдалось.Взятые вместе, все эти наблюдения показывают, что PTK787 / ZK 222584 хорошо переносится после как минимум 1 месяца хронического терапия и переносится намного лучше, чем обычные противоопухолевые терапии. Остается выяснить, является ли хроническая терапия монотерапия или циклическая терапия в сочетании с традиционными противоопухолевая терапия будет лучшим подходом к лечению рак.

PTK787 / ZK 222584, синтетический, низкомолекулярный, п.о. биодоступный, и хорошо переносимая молекула, имеет много преимуществ перед ангиогенезом ингибиторы, о которых сообщалось ранее.Несколько молекул с разными сообщалось о механизмах действия, некоторые из которых вошли клинические испытания. Мы показали, что PTK787 / ZK 222584 столь же активен и переносится намного лучше, чем TNP-470 (69 , 70) в нескольких из наши модели опухолей, а также преимущество перорального дозирования. Хотя ангиостатин (71) и эндостатин (72) первоначально сообщалось, что они являются более эффективными ингибиторами опухолей рост, чем мы сообщаем здесь для PTK787 / ZK 222584, не во всех лабораториях смогли воспроизвести ту же степень in vitro и in vivo эффективность, о которой сообщалось первоначально.Кроме того, обе молекулы трудно производить в больших количествах и не п.о. активный. Дополнительная привлекательная особенность компаундов, которые подавлять эффекты VEGF заключается в том, что VEGF является не только ангиогенным фактор, но также мощный фактор проницаемости сосудов. Это может дать Ингибиторы VEGF имеют дополнительное терапевтическое применение по сравнению с антиангиогенным действием. средства с другими механизмами действия. Растворимые рецепторы VEGF (52 , 53) и антитела против VEGF (47, 48, 49) или его рецепторы (50 , 51) также были предложены как агенты для блокирования VEGF, но по сравнению с PTK787 / ZK 222584, имеют недостатки больших белков (сложность в производстве, стоимость, иммуногенный потенциал и необходимость родительского контроля).Другой Ингибиторы тирозинкиназы рецептора VEGF, такие как SU5416, также были сообщил (59 , 60) , но мы показали, что это соединение имеет низкую биодоступность при приеме внутрь и еще менее специфичен для VEGF рецепторных тирозинкиназ, чем PTK787 / ZK 222584. Совсем недавно появился другой Сообщалось о ингибиторе тирозинкиназы рецептора VEGF, SU 6668. это п.о. активен, но еще менее специфичен, ингибируя bFGF как а также киназы класса III. Это может привести к более сильному противоопухолевому эффекту. эффективность, но и больше побочных эффектов.

Наши данные показывают, что PTK787 / ZK 222584 является сильнодействующим, п.о. активный, и хорошо переносимый ингибитор VEGF-опосредованных ответов. Отличный оральный активность и переносимость этого соединения способствуют его использованию в течение длительного времени. лечения, а не только рака, зависящего от VEGF для их васкуляризации, но также и при других заболеваниях, при которых опосредовано VEGF ангиогенез играет ключевую роль в патогенезе.

.