П 4 ст 753 гк: ГК РФ Статья 753. Сдача и приемка работ / КонсультантПлюс

Содержание

ГК РФ Статья 753. Сдача и приемка работ / КонсультантПлюс

Позиции высших судов по ст. 753 ГК РФ >>>

 

1. Заказчик, получивший сообщение подрядчика о готовности к сдаче результата выполненных по договору строительного подряда работ либо, если это предусмотрено договором, выполненного этапа работ, обязан немедленно приступить к его приемке.

2. Заказчик организует и осуществляет приемку результата работ за свой счет, если иное не предусмотрено договором строительного подряда.

В предусмотренных законом или иными правовыми актами случаях в приемке результата работ должны участвовать представители государственных органов и органов местного самоуправления.

3. Заказчик, предварительно принявший результат отдельного этапа работ, несет риск последствий гибели или повреждения результата работ, которые произошли не по вине подрядчика.

4. Сдача результата работ подрядчиком и приемка его заказчиком оформляются актом, подписанным обеими сторонами. При отказе одной из сторон от подписания акта в нем делается отметка об этом и акт подписывается другой стороной.

Односторонний акт сдачи или приемки результата работ может быть признан судом недействительным лишь в случае, если мотивы отказа от подписания акта признаны им обоснованными.

5. В случаях, когда это предусмотрено законом или договором строительного подряда либо вытекает из характера работ, выполняемых по договору, приемке результата работ должны предшествовать предварительные испытания. В этих случаях приемка может осуществляться только при положительном результате предварительных испытаний.

6. Заказчик вправе отказаться от приемки результата работ в случае обнаружения недостатков, которые исключают возможность его использования для указанной в договоре строительного подряда цели и не могут быть устранены подрядчиком или заказчиком.

Открыть полный текст документа

Статья 753 ГК РФ. Сдача и приемка работ. Актуально в 2020 и 2021. Последняя редакция

Оглавление

Позиции высших судов по ст. 753 ГК РФ >>>

Ч.1 статьи 753 ГК РФ

1. Заказчик, получивший сообщение подрядчика о готовности к сдаче результата выполненных по договору строительного подряда работ либо, если это предусмотрено договором, выполненного этапа работ, обязан немедленно приступить к его приемке.

Ч.2 статьи 753 ГК РФ

2. Заказчик организует и осуществляет приемку результата работ за свой счет, если иное не предусмотрено договором строительного подряда.

В предусмотренных законом или иными правовыми актами случаях в приемке результата работ должны участвовать представители государственных органов и органов местного самоуправления.

Ч.3 статьи 753 ГК РФ

3. Заказчик, предварительно принявший результат отдельного этапа работ, несет риск последствий гибели или повреждения результата работ, которые произошли не по вине подрядчика.

Ч.4 статьи 753 ГК РФ

4. Сдача результата работ подрядчиком и приемка его заказчиком оформляются актом, подписанным обеими сторонами. При отказе одной из сторон от подписания акта в нем делается отметка об этом и акт подписывается другой стороной.

Односторонний акт сдачи или приемки результата работ может быть признан судом недействительным лишь в случае, если мотивы отказа от подписания акта признаны им обоснованными.

Ч.5 статьи 753 ГК РФ

5. В случаях, когда это предусмотрено законом или договором строительного подряда либо вытекает из характера работ, выполняемых по договору, приемке результата работ должны предшествовать предварительные испытания. В этих случаях приемка может осуществляться только при положительном результате предварительных испытаний.

Ч.6 статьи 753 ГК РФ

6. Заказчик вправе отказаться от приемки результата работ в случае обнаружения недостатков, которые исключают возможность его использования для указанной в договоре строительного подряда цели и не могут быть устранены подрядчиком или заказчиком.

Существует ли возможность сдачи объекта без подписания акта приема и передачи одной из сторон?

Ст. 753 ГК РФ регулирует процесс сдачи и приема исполненных по договору подряда работ. Согласно правилам, прием и сдача объекта (результата исполненных по договору работ) сопровождается подписанием соответствующего акта. В его подписании участвуют обе стороны, а, при необходимости, еще и представители уполномоченных государственных органов. Однако отказ заказчика или подрядчика подписывать этот документ (обычно отказывается заказчик неудовлетворенный результатом) не означает, что объект не будет сдан. Просто в этом случае составляется односторонний акт сдачи или приемки результатов работы. Односторонний акт — действующий документ, имеющий юридическую силу. Он остается таковым до тех пор, пока одна из сторон не оспорит его действительность в суде (если это вообще произойдет). Чтобы признать недействительность акта, потребуется доказать в суде обоснованность мотивов отказа от подписания документа.

Может ли подрядчик, подписав односторонний акт передачи работ, требовать от заказчика оплаты?

Статья 753 ГК РФ указывает на то, что заказчик должен получить сообщение от подрядчика о том, что тот готов сдать оконченную работу. Соответственно, за подрядчиком закреплена обязанность известить заказчика о своей готовности. Если подрядчик пренебрег своей обязанностью и не вызвал заказчика для прямого участия в приеме готовой работы, то права требовать оплаты он не имеет. Ведь тогда он не докажет отказ заказчика принимать его работу и подписывать документ. При этом, составление одностороннего акта не будет основанием для требования оплаты. В случае же, когда подрядчик оповестил заказчика о том, что работа окончена, и вызвал его для подписания акта, а тот не явился либо отказался этот акт подписывать, требования подрядчика оплатить работу правомерны.

Имеет ли право заказчик предъявлять претензии к качеству или объему работы в суде, если он подписал без замечаний акт приема и передачи работы?

В процессе сдачи и приемки результатов работ должны участвовать обе стороны отношений по договору подряда. Согласно ст 753 ГК РФ, заказчик приступает к приемке выполненной второй стороной работы сразу же после извещения его подрядчиком о готовности. В процессе этого действия обе стороны (в некоторых случаях одна) подписывают акт приема-передачи работы. Исходя из судебной практики, наличие подписанного заказчиком акта приема и передачи оконченной работы, не препятствует последующему заявлению претензий к качеству или объему выполненных подрядчиком работ. Неприятные последствия некачественного выполнения работы вполне могли быть замечены уже после сдачи объекта. Обычно договором определен гарантийный срок. До тех пор, пока он не истечет, найденные заказчиком недостатки, подрядчик обязуется устранить. Если срок гарантии в договоре не указан, то требования предъявляются, если недостатки обнаружены в разумный срок (но только в пределах 5 лет со дня сдачи работы). Существует вероятность, что подрядчик докажет иную природу возникновения недостатков. Например, что они явились результатом обыкновенного износа или неправильной эксплуатации объекта самим заказчиком. И тогда он от ответственности освобождается. Исходя из п 3 ст 753 ГК РФ, если объект работы погиб или повредился без вины подрядчика, то заказчик, принявший до этого результат отдельного этапа работ, самостоятельно несет этот риск. Для того, чтобы избегать споров, касающихся качества работы, уже после её приемки и передачи, целесообразно включать в сам договор условия приемки объекта и порядок устранения недостатков.

Может ли договор подряда включать условие, по которому приёмка работ осуществляется в устной форме в присутствии свидетелей?

Ответ из файла и подпись По договору подряда одна сторона для другой в установленный срок выполняет работы, а вторая эти работы принимает и оплачивает, создавая предварительно необходимые условия для их выполнения. По п 4 ст. 753 ГК РФ заказчик осматривает результат работ прежде чем их оплатить, и, принимая работу, подписывает вместе со второй стороной акт приёма передачи. Ст. 753 ГК РФ уточняет также, что такой акт можно составить и односторонне, сделав об этом пометку, если какая-либо сторон отказывается его подписывать. Отсюда следует, что сдача строительных работ по договору подряда в устной форме законом не предусмотрена. И хотя стороны договора свободны в выборе его условий, согласно ст. 422 ГК РФ, соглашение тем не менее должно обязательно соответствовать правилам, указанным в законе и правовых актах на момент его заключения. То есть содержащееся в договоре условие о возможности проведения приемки работы устно при свидетелях является неправомерным. Совершенная на таких условиях сделка может быть признана не соответствующей требованиям закона, а вследствие этого недействительной.

Статья 753 ГК РФ с комментариями — Сдача и приемка работ

1. Заказчик, получивший сообщение подрядчика о готовности к сдаче результата выполненных по договору строительного подряда работ либо, если это предусмотрено договором, выполненного этапа работ, обязан немедленно приступить к его приемке.

2. Заказчик организует и осуществляет приемку результата работ за свой счет, если иное не предусмотрено договором строительного подряда.

В предусмотренных законом или иными правовыми актами случаях в приемке результата работ должны участвовать представители государственных органов и органов местного самоуправления.

3. Заказчик, предварительно принявший результат отдельного этапа работ, несет риск последствий гибели или повреждения результата работ, которые произошли не по вине подрядчика.

4. Сдача результата работ подрядчиком и приемка его заказчиком оформляются актом, подписанным обеими сторонами. При отказе одной из сторон от подписания акта в нем делается отметка об этом и акт подписывается другой стороной.

Односторонний акт сдачи или приемки результата работ может быть признан судом недействительным лишь в случае, если мотивы отказа от подписания акта признаны им обоснованными.

5. В случаях, когда это предусмотрено законом или договором строительного подряда либо вытекает из характера работ, выполняемых по договору, приемке результата работ должны предшествовать предварительные испытания. В этих случаях приемка может осуществляться только при положительном результате предварительных испытаний.

6. Заказчик вправе отказаться от приемки результата работ в случае обнаружения недостатков, которые исключают возможность его использования для указанной в договоре строительного подряда цели и не могут быть устранены подрядчиком или заказчиком.

Комментарий к статье 753 Гражданского Кодекса РФ

1. Коммент. ст. закрепляет ряд принципиальных правил, относящихся к сдаче-приемке результата строительных работ. Их основная цель — в распределении между сторонами обязанностей, связанных с организацией и проведением приемки работ, и рисков, обусловленных ее последствиями. Большинство указанных правил носит императивный характер, т.е. не может быть изменено соглашением сторон. Применительно к некоторым из них это вряд ли оправданно.

2. Прежде всего, на заказчика возлагается обязанность немедленно приступить к приемке работ по получении от подрядчика сообщения о готовности работ к сдаче. Слово «немедленно» едва ли в данном случае имеет иной смысл, чем смысл словосочетаний «в предельно короткий срок», «незамедлительно», «в кратчайший срок» и т.п. Ведь для подготовки к приемке работ заказчик должен располагать необходимым временем. Во избежание споров по этому поводу целесообразно указывать в договоре конкретный срок, в течение которого заказчик должен приступить к приемке работ. Явная просрочка заказчика с приемкой объекта, во-первых, переносит на него риск случайной гибели результата работ (п. 2 ст. 705 ГК) и, во-вторых, дает подрядчику право требовать возмещения вызванных задержкой приемки убытков.

3. Далее, п. 2 возлагает на заказчика обязанность по организации и проведению приемки. В частности, по общему правилу именно заказчик должен обеспечить участие в приемочной комиссии представителей соответствующих органов и заинтересованных организаций, выделить персонал, обеспечить объект энергией, сырьем, топливом и т.п. Все это заказчик делает за свой счет, если иное не предусмотрено договором.

Участие в приемке работ представителей государственных органов и органов местного самоуправления предусматривается в целом ряде случаев, в частности при сдаче в эксплуатацию многоквартирных жилых домов, объектов, финансирование которых осуществлялось за счет бюджетных средств, и т.д. Конкретные требования к порядку приемки определены СНиП 3.01.04-87 «Приемка в эксплуатацию законченных строительством объектов. Основные положения».

4. Приемка строительных работ может осуществляться как в целом, так и отдельными частями (этапами, очередями). Если объект сдается заказчику по частям, стороны должны оговорить, кто из них будет осуществлять пользование переданной частью объекта, обеспечивать ее охрану, нести эксплуатационные расходы и т.п.

Пункт 3 коммент. ст. в императивной форме устанавливает правило о том, что на заказчика, принявшего результат отдельного этапа работ, переходит риск случайной гибели этого результата. Вряд ли столь категоричное решение является оправданным, так как для него нет никаких видимых причин. Более разумным было бы придание этой норме значения лишь общего правила.

5. Сдача-приемка объекта оформляется специальным актом, который подписывается обеими сторонами, а также представителями уполномоченных государственных органов и органов местного самоуправления. Отказ стороны (обычно заказчика) от подписания акта сдачи-приемки не исключает оформления сдачи объекта. Об этом в акте делается особая пометка, и акт подписывается другой стороной.

Такой односторонний акт сдачи-приемки результата работ имеет юридическую силу до тех пор и постольку, пока и поскольку по иску другой стороны он не признан судом недействительным. Решение суда зависит от того, признает ли суд мотивы отказа от подписания акта обоснованными или нет.

6. В соответствии с п. 6 ст. 753 отказ заказчика от приемки объекта считается обоснованным лишь тогда, когда выявленные при приемке недостатки исключают использование объекта по назначению и не могут быть устранены подрядчиком и заказчиком. Таким образом, наличие в построенном объекте иных недостатков, не носящих существенного характера, не препятствует его приемке. Все обнаруженные в ходе приемки недостатки и недоделки фиксируются в акте, подрядчику предоставляется разумный срок для их устранения, взыскиваются санкции, если они предусмотрены договором, но сам результат работ должен быть принят заказчиком.

7. Иногда приемке результатов работ должны предшествовать предварительные испытания эксплуатационных качеств построенного объекта (проверка работы механизмов, узлов, агрегатов и т.д.). В этих случаях приемка осуществляется только при положительном результате испытаний, который удостоверяется специальным актом. В зависимости от условий договора испытания могут проводиться либо самим подрядчиком, либо обеими сторонами. Поскольку испытания предшествуют приемке, они организуются и проводятся за счет подрядчика, если иное не предусмотрено договором.

Ст. 753 ГК РФ с Комментариями 2020-2021 года (новая редакция с последними изменениями)

1. Заказчик, получивший сообщение подрядчика о готовности к сдаче результата выполненных по договору строительного подряда работ либо, если это предусмотрено договором, выполненного этапа работ, обязан немедленно приступить к его приемке.

2. Заказчик организует и осуществляет приемку результата работ за свой счет, если иное не предусмотрено договором строительного подряда.

В предусмотренных законом или иными правовыми актами случаях в приемке результата работ должны участвовать представители государственных органов и органов местного самоуправления.

3. Заказчик, предварительно принявший результат отдельного этапа работ, несет риск последствий гибели или повреждения результата работ, которые произошли не по вине подрядчика.

4. Сдача результата работ подрядчиком и приемка его заказчиком оформляются актом, подписанным обеими сторонами. При отказе одной из сторон от подписания акта в нем делается отметка об этом и акт подписывается другой стороной.

Односторонний акт сдачи или приемки результата работ может быть признан судом недействительным лишь в случае, если мотивы отказа от подписания акта признаны им обоснованными.

5. В случаях, когда это предусмотрено законом или договором строительного подряда либо вытекает из характера работ, выполняемых по договору, приемке результата работ должны предшествовать предварительные испытания. В этих случаях приемка может осуществляться только при положительном результате предварительных испытаний.

Бесплатная юридическая консультация по телефонам:

6. Заказчик вправе отказаться от приемки результата работ в случае обнаружения недостатков, которые исключают возможность его использования для указанной в договоре строительного подряда цели и не могут быть устранены подрядчиком или заказчиком.

Комментарий к Ст. 753 ГК РФ

При приемке результатов работ ключевое значение имеют различного рода акты, подписываемые сторонами. Исследование законодательства и практики его применения показывает, что акт приемки имеет многогранное значение. Он является и расчетным документом, и основанием для перехода риска случайной гибели, и собственно актом приемки. Однако на практике вопрос о правовой природе указанного акта ставится и в следующей плоскости: является ли акт приемки сделкой или же лишь документом, отражающим фактические действия по приемке и подтверждающим выполнение соответствующих работ? Следует сказать, что поводом для поставленного вопроса явилось указание п. 4 комментируемой статьи на то, что односторонний акт сдачи или приемки результата работ может быть признан судом недействительным лишь в случае, если мотивы отказа от подписания акта признаны им обоснованными. Данное законоположение может быть воспринято как определяющее возможность признания акта приемки недействительным по общим основаниям недействительности сделки и, следовательно, как определяющее сделочную природу самого акта.

Президиум Высшего Арбитражного Суда РФ в п. 14 Обзора практики рассмотрения споров по договорам строительного подряда указал, что требование о признании недействительным одностороннего акта приемки результата работ рассматривается одновременно с иском о взыскании стоимости работ. Описательная часть указанного пункта (отрицающая возможность предъявления самостоятельного иска о признании недействительным акта приемки) косвенно может свидетельствовать об отрицании сделочной природы этого акта.

В пользу данного вывода свидетельствует и правовая позиция, изложенная в п. 10 Обзора, в силу которой подрядчик, не сообщивший заказчику о необходимости выполнения дополнительных работ, не учтенных в технической документации, не вправе требовать оплаты этих работ и в случае, когда такие работы были включены в акт приемки, подписанный представителем заказчика. При этом важно, что основанием для данного подхода явился вывод о том, что «акт подтверждает лишь факт выполнения подрядчиком работ» и, по всей видимости, не может содержать изъявления воли на одобрение выполнения подрядчиком дополнительных работ.

Однако следует признать, что четкого ответа на вопрос о сделочной природе акта приемки Президиум Высшего Арбитражного Суда РФ не дал, что может объясняться отсутствием на момент утверждения Обзора в отечественной цивилистике широкой теоретической проработки вопроса о природе исполнения обязательства .

———————————
Исследования, посвященные исполнению обязательства, появились в отечественной цивилистике новейшего времени позже. О природе исполнения см.: Сарбаш С.В. Исполнение договорного обязательства. М., 2005. С. 7 — 75.

Данное обстоятельство не замедлило сказаться на практике и явилось основанием для противоречивого разрешения указанного вопроса судами . Приведение рассматриваемой практики к единообразию, возможно, станет предметом будущих разъяснений.

———————————
См., например: Постановления ФАС Поволжского округа от 17 мая 2005 г. по делу N А65-9332/2004-СГ2-4, ФАС Уральского округа от 26 сентября 2007 г. по делу N Ф09-7907/07-С4, ФАС Северо-Кавказского округа от 17 января 2008 г. по делу N А53-1242/2007-С5-14.

Судебная практика ВС РФ: сдача выполненных работ в договоре подряда по ст. 753 ГК РФ

Заказчик, получивший сообщение подрядчика о готовности к сдаче результата выполненных по договору строительного подряда работ либо, если это предусмотрено договором, выполненного этапа работ, обязан немедленно приступить к его приемке.

Позиции о рисках заказчика при приемке результата работ (п. 2 ст. 753 ГК РФ)

1. Каковы последствия нарушения п. 2 ст. 753 ГК РФ

1.1 Риски неисполнения обязанности по организации и осуществлению приемки результата выполненных работ несет заказчик, если исполнитель принимал меры по сдаче результата работ (позиция ВАС РФ)

2. Позиции о рисках заказчика при предварительной приемке результата отдельного этапа работ (п. 3 ст. 753 ГК РФ)

2.1. К каким ситуациям не применяется п. 3 ст. 753 ГК РФ

2.1.1. Подписание промежуточных актов приемки работ не означает перехода к заказчику риска гибели объекта, если в договоре строительного подряда этапы работ не выделены (позиция ВАС РФ)

3. Позиции об оформлении акта сдачи и приемки результата работ (п. 4 ст. 753 ГК РФ)

3.1. Какие действия признаются неправомерными в соответствии с п. 4 ст. 753 ГК РФ

3.1.1. Если заказчик не извещен о завершении работ по договору строительного подряда и не вызван для их приемки, подрядчик не может ссылаться на отказ заказчика от приемки и требовать оплаты на основании одностороннего акта сдачи (позиция ВАС РФ)

3.2. Каковы последствия совершения действий в соответствии с п. 4 ст. 753 ГК РФ

3.2.1. Наличие подписанного без замечаний акта приемки работ по договору строительного подряда не препятствует заказчику заявить в суде возражения по качеству, объему и стоимости работ (позиция ВАС РФ)

3.2.2. При отказе заказчика по договору строительного подряда от оплаты работ, выполнение которых подтверждено односторонним актом, суд должен рассмотреть доводы заказчика, отказавшегося от подписания акта (позиция ВС РФ, ВАС РФ)

3.3. Какие доказательства можно использовать при возникновении спора в рамках п. 4 ст. 753 ГК РФ

3.3.1. Факт выполнения работ подрядчиком может доказываться не только актами выполненных работ (позиция ВС РФ)

4. Позиции о предварительных испытаниях при приемке результата работ (п. 5 ст. 753 ГК РФ)

4.1. Какие действия признаются правомерными в соответствии с п. 5 ст. 753 ГК РФ

4.1.1. Если подрядчик по договору строительного подряда после получения отрицательных результатов предварительных испытаний не провел такие испытания повторно, заказчик вправе отказаться от подписания акта приемки работ (позиция ВАС РФ)

Посмотрите еще темы

Статья 753 ГК РФ ➔ текст и комментарии. Сдача и приемка работ.

1. Заказчик, получивший сообщение подрядчика о готовности к сдаче результата выполненных по договору строительного подряда работ либо, если это предусмотрено договором, выполненного этапа работ, обязан немедленно приступить к его приемке.

2. Заказчик организует и осуществляет приемку результата работ за свой счет, если иное не предусмотрено договором строительного подряда.В предусмотренных законом или иными правовыми актами случаях в приемке результата работ должны участвовать представители государственных органов и органов местного самоуправления.

3. Заказчик, предварительно принявший результат отдельного этапа работ, несет риск последствий гибели или повреждения результата работ, которые произошли не по вине подрядчика.

4. Сдача результата работ подрядчиком и приемка его заказчиком оформляются актом, подписанным обеими сторонами. При отказе одной из сторон от подписания акта в нем делается отметка об этом и акт подписывается другой стороной.Односторонний акт сдачи или приемки результата работ может быть признан судом недействительным лишь в случае, если мотивы отказа от подписания акта признаны им обоснованными.

5. В случаях, когда это предусмотрено законом или договором строительного подряда либо вытекает из характера работ, выполняемых по договору, приемке результата работ должны предшествовать предварительные испытания. В этих случаях приемка может осуществляться только при положительном результате предварительных испытаний.

6. Заказчик вправе отказаться от приемки результата работ в случае обнаружения недостатков, которые исключают возможность его использования для указанной в договоре строительного подряда цели и не могут быть устранены подрядчиком или заказчиком.

Комментарий к статье 753 Гражданского Кодекса РФ

1. Настоящая статья устанавливает требования по приемке работ по договору строительного подряда независимо от того, осуществляется приемка отдельного этапа работы или результата работ в целом. Заказчик обязан немедленно приступить к приемке объекта, как только получит от подрядчика сообщение о его готовности. Выполнение этого требования минимизирует возможные затраты подрядчика, связанные с вынужденным простоем в ожидании приемки объекта.

2. Организация приемки и сама приемка объекта строительства осуществляются за счет средств заказчика. Это общее правило, установленное пунктом 2. Хотя в договоре строительного подряда может быть предусмотрено распределение затрат между сторонами или возложение затрат на подрядчика.

3. В приемке-сдаче объекта должны участвовать обе стороны, а в некоторых случаях обязательно участие представителей государственных органов или органов местной власти. Участие последних может быть предусмотрено только законом или иными нормативными актами. Результат приемки объекта оформляется актом, который должны подписать все стороны, участвовавшие в этом процессе. Если одна из сторон отказывается подписывать акт, об этом делается отметка в данном документе, что не делает его автоматически недействительным. Для признания его таковым заинтересованная сторона должна обратиться в суд и доказать в ходе разбирательства, что ее причины отказа от подписи были обоснованными. Одним из оснований отказа является обнаружение заказчиком недостатков, которые исключают возможность использования объекта для указанной в договоре строительного подряда цели и не могут быть устранены подрядчиком или заказчиком.

4. Законом или договором может быть предусмотрено условие обязательного проведения этапа испытаний объекта строительства. В этом случае приемка производится только после успешного окончания испытаний. Если объект принимался по частям, поэтапно, то риск случайной гибели принятых промежуточных результатов работы возлагается на заказчика. Он обязан принимать все меры, направленные на сохранность промежуточных результатов работ.

Другой комментарий к статье 753 ГК РФ

1. Коммент. ст. закрепляет ряд принципиальных правил, относящихся к сдаче-приемке результата строительных работ. Их основная цель — в распределении между сторонами обязанностей, связанных с организацией и проведением приемки работ, и рисков, обусловленных ее последствиями. Большинство указанных правил носит императивный характер, т.е. не может быть изменено соглашением сторон. Применительно к некоторым из них это вряд ли оправданно.

2. Прежде всего, на заказчика возлагается обязанность немедленно приступить к приемке работ по получении от подрядчика сообщения о готовности работ к сдаче. Слово «немедленно» едва ли в данном случае имеет иной смысл, чем смысл словосочетаний «в предельно короткий срок», «незамедлительно», «в кратчайший срок» и т.п. Ведь для подготовки к приемке работ заказчик должен располагать необходимым временем. Во избежание споров по этому поводу целесообразно указывать в договоре конкретный срок, в течение которого заказчик должен приступить к приемке работ. Явная просрочка заказчика с приемкой объекта, во-первых, переносит на него риск случайной гибели результата работ (п. 2 ст. 705 ГК) и, во-вторых, дает подрядчику право требовать возмещения вызванных задержкой приемки убытков.

3. Далее, п. 2 возлагает на заказчика обязанность по организации и проведению приемки. В частности, по общему правилу именно заказчик должен обеспечить участие в приемочной комиссии представителей соответствующих органов и заинтересованных организаций, выделить персонал, обеспечить объект энергией, сырьем, топливом и т.п. Все это заказчик делает за свой счет, если иное не предусмотрено договором.

Участие в приемке работ представителей государственных органов и органов местного самоуправления предусматривается в целом ряде случаев, в частности при сдаче в эксплуатацию многоквартирных жилых домов, объектов, финансирование которых осуществлялось за счет бюджетных средств, и т.д. Конкретные требования к порядку приемки определены СНиП 3.01.04-87 «Приемка в эксплуатацию законченных строительством объектов. Основные положения».

4. Приемка строительных работ может осуществляться как в целом, так и отдельными частями (этапами, очередями). Если объект сдается заказчику по частям, стороны должны оговорить, кто из них будет осуществлять пользование переданной частью объекта, обеспечивать ее охрану, нести эксплуатационные расходы и т.п.

Пункт 3 коммент. ст. в императивной форме устанавливает правило о том, что на заказчика, принявшего результат отдельного этапа работ, переходит риск случайной гибели этого результата. Вряд ли столь категоричное решение является оправданным, так как для него нет никаких видимых причин. Более разумным было бы придание этой норме значения лишь общего правила.

5. Сдача-приемка объекта оформляется специальным актом, который подписывается обеими сторонами, а также представителями уполномоченных государственных органов и органов местного самоуправления. Отказ стороны (обычно заказчика) от подписания акта сдачи-приемки не исключает оформления сдачи объекта. Об этом в акте делается особая пометка, и акт подписывается другой стороной.

Такой односторонний акт сдачи-приемки результата работ имеет юридическую силу до тех пор и постольку, пока и поскольку по иску другой стороны он не признан судом недействительным. Решение суда зависит от того, признает ли суд мотивы отказа от подписания акта обоснованными или нет.

6. В соответствии с п. 6 ст. 753 отказ заказчика от приемки объекта считается обоснованным лишь тогда, когда выявленные при приемке недостатки исключают использование объекта по назначению и не могут быть устранены подрядчиком и заказчиком. Таким образом, наличие в построенном объекте иных недостатков, не носящих существенного характера, не препятствует его приемке. Все обнаруженные в ходе приемки недостатки и недоделки фиксируются в акте, подрядчику предоставляется разумный срок для их устранения, взыскиваются санкции, если они предусмотрены договором, но сам результат работ должен быть принят заказчиком.

7. Иногда приемке результатов работ должны предшествовать предварительные испытания эксплуатационных качеств построенного объекта (проверка работы механизмов, узлов, агрегатов и т.д.). В этих случаях приемка осуществляется только при положительном результате испытаний, который удостоверяется специальным актом. В зависимости от условий договора испытания могут проводиться либо самим подрядчиком, либо обеими сторонами. Поскольку испытания предшествуют приемке, они организуются и проводятся за счет подрядчика, если иное не предусмотрено договором.

Дороги России XXI века 06 (2019)

Дороги России | № 6 (114) | 2019

97

П А НОРАМА Р Е ГИОНОВ

в Определении Судебной коллегии по экономи-

ческим спорам Верховного Суда Российской Фе-

дерации от 24.08.2015 № 302-ЭС15-8288. Кроме

того, в Определении также указано, что для под-

тверждения исполнения принятых на себя обяза-

тельств подрядчику надлежит представить и акт

приема-передачи выполненных работ по капи-

тальному ремонту объекта.

ПОДРЯДЧИКАМ НЕОБХОДИМО СОБЛЮДАТЬ

УСЛОВИЯ КОНТРАКТА В ЧАСТИ НАПРАВЛЕНИЯ

ЮРИДИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫХ ДОКУМЕНТОВ В АДРЕС

ЗАКАЗЧИКА, В ОБЯЗАТЕЛЬНОМ ПОРЯДКЕ

НАПРАВЛЯТЬ ИЗВЕЩЕНИЯ, СОПУТСТВУЮЩУЮ

ДОКУМЕНТАЦИЮ ПОЧТОЙ НА ЮРИДИЧЕСКИЙ

АДРЕС ЗАКАЗЧИКА, А ТАКЖЕ СОХРАНЯТЬ

ДОКУМЕНТЫ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ ТАКИЕ

ОТПРАВКИ.

Статья 753 Гражданского кодекса Российской

Федерации предусматривает, что заказчик, по-

лучивший сообщение подрядчика о готовности

к сдаче результата выполненных по договору

строительного подряда работ, обязан немедлен-

но приступить к приемке. Сдача результата работ

подрядчиком и приемка его заказчиком оформ-

ляются актом, подписанным обеими сторонами.

При отказе одной из сторон от подписания акта

в нем делается отметка об этом, и акт подписыва-

ется другой стороной. Односторонний акт сдачи

или приемки результата работ может быть при-

знан судом недействительным лишь в случае,

если мотивы отказа от подписания акта призна-

ны им обоснованными.

Как разъяснено в п. 14 информационного пись-

ма Президиума Высшего Арбитражного Суда Рос-

сийской Федерации от 24.01.2000 № 51 «Обзор

практики разрешения споров по договору строи-

тельного подряда», изложенная в п. 4 ст. 753 Гра-

жданского кодекса Российской Федерации нор-

ма означает, что оформленный в одностороннем

порядке акт — ​доказательство исполнения под-

рядчиком обязательства по договору и при отка-

зе заказчика от оплаты на суд возлагается обязан-

ность рассмотреть доводы заказчика, обосновы-

вающие его отказ от подписания акта приемки

результата работ.

При этом в силу ч. 2 ст. 65 Арбитражного про-

цессуального кодекса Российской Федерации

именно заказчик должен представить доказатель-

ства обоснованного отказа от подписания актов

выполненных работ.

Между тем, как отмечено в Постановлении Пре-

зидиума Высшего Арбитражного Суда Российской

Федерации от 27.03.2012 № 12888/11, само наличие

MTD Оригинальная деталь 753-06356 CARB 27CC OEM-деталь для Troy-Bilt Cub-Cadet Craftsm … Дом и сад Двор, сад и жизнь на открытом воздухе gkdevelopers.com

Оригинальная деталь MTD 753-06356 CARB 27CC OEM-деталь для Troy-Bilt Cub-Cadet Craftsm … Дом и сад Двор, сад и жизнь на открытом воздухе gkdevelopers.com

, если товар не изготовлен вручную или не был упакован производителем в нерызничную упаковку, неповрежденный товар в оригинальной упаковке (если упаковка применима). Упаковка должна быть такой же, как в розничном магазине.неоткрытые, например, в коробке без надписи или в полиэтиленовом пакете. См. Список продавца для получения полной информации. См. Все определения условий : Бренд: : MTD , MPN: : MTD-753-06356 : UPC: : Не применяется ,, Оригинальная деталь MTD 753-06356 CARB 27CC OEM-деталь для Troy-Bilt Cub-Cadet Craftsm …. MTD Оригинальная деталь 753-06356 CARB 27CC OEM-деталь для Troy-Bilt Cub-Cadet Craftsman Bolens Remington Ryobi Yardman Yard-Machine White Huskee Lawn-Chief Power-Pro Town & Country. Состояние: Новое: Абсолютно новое. неиспользованный.








Информация[email protected]

+91 7888093332

Оригинальная деталь MTD 753-06356 CARB 27CC OEM-деталь для Troy-Bilt Cub-Cadet Craftsm…

MTD Оригинальная деталь 753-06356 CARB 27CC OEM-деталь для Troy-Bilt Cub-Cadet Craftsm …

CARB 27CC OEM-деталь для Troy-Bilt Cub-Cadet Craftsm … MTD Genuine Part 753-06356, MTD Original Part 753-06356 CARB 27CC OEM-деталь для Troy-Bilt Cub-Cadet Craftsman Bolens Remington Ryobi Yardman Yard-Machine White Huskee Lawn-Chief Power-Pro Town & Country, Недорогие онлайн-продажи от экспертов, Быстрая БЕСПЛАТНАЯ доставка, Доставка в тот же день, Хорошие товары в магазине, Вы можете получить лучшее соотношение цены и качества и 100% удовлетворение! 753-06356 CARB 27CC OEM Деталь для Troy-Bilt Cub-Cadet Craftsm… Оригинальная деталь MTD, оригинальная деталь MTD 753-06356 CARB 27CC OEM-деталь для Troy-Bilt Cub-Cadet Craftsm ….

30-дюймовая светодиодная фара рабочего света Bobcat 553 751 753 763 и т. Д. Для Ford New Holland

Запчасти и аксессуары для тяжелого оборудования Запчасти и навесное оборудование для тяжелого оборудования gkdevelopers.com 30-дюймовая светодиодная фара рабочего света Bobcat 553 751 753 763 и т. Д. ДЛЯ Ford New Holland

, например, коробка без надписи или полиэтиленовый пакет. См. Список продавца для получения полной информации. См. Все определения условий : MPN: : 1800lm-5d696661353 , Совместимая марка оборудования: : Bobcat, если только товар не был упакован производителем в нерозничную упаковку.неиспользованный, Trencor, неоткрытый, Tesmec, Ford, Matsuura, JRB, 30-дюймовая светодиодная фара рабочего света Bobcat 553 751 753 763 и т. д. ДЛЯ Ford New Holland 615517173293. Форма луча: комбинированный луч. область, Rockwell, Lull, ясно видеть ночью неповрежденный предмет в оригинальной упаковке (если применима упаковка). Упаковка должна быть такой же, как в розничном магазине. Waldon : Торговая марка: : MAC-AUTO , Тип детали: : Фары : Совместимое оборудование: Погрузчик с бортовым поворотом , UPC: : 615517173293 ,。, New Holland, Samsung, Ridgid, Economy, Galion, FlexArm, Fiat-Allis, IHI, Hyster, отличный визуальный эффект, Rex, подходит для рыбная ловля.1 х комплект жгута проводов кулисного переключателя. Монтажный кронштейн: Кронштейн фирмы Alu .. Состояние: Новое: Совершенно новое. Дресста, Фэрбенкс, Морс, Гилсон, Дельта.







[email protected]

+91 7888093332

30-дюймовая светодиодная фара рабочего света Bobcat 553 751 753 763 и т. Д. Для Ford New Holland

30-дюймовая светодиодная фара рабочего света Bobcat 553 751 753 763 и т. Д. Для Ford New Holland

30-дюймовая светодиодная фара рабочего света Bobcat 553 751 753 763 и т. Д. Для Ford New Holland, рисунок луча: комбинированный луч прожектора, комбинированный луч прожектора и прожектора, сверхяркая зона обзора, четкое видение ночью, отличный визуальный эффект, он подходит для рыбалки, 1 комплект жгута проводов кулисного переключателя, монтажный кронштейн: прочный кронштейн из алюминия, доступные цены, новая мода, дешевая сделка, покупка часов в Интернете, подкрепленная нашей гарантией низкой цены.Фара Bobcat 553 751 753 763 и т. Д. Для Ford New Holland 30 «LED Work, 30» LED Work Light Bar Headlight Bobcat 553 751 753 763 и т. Д. ДЛЯ Ford New Holland.

Обзор, использование, побочные эффекты, меры предосторожности, взаимодействия, дозировка и обзоры

Belcaro G, Laurora G, Cesarone MR и др. Эффективность центеллазы (R) при лечении венозной гипертензии оценивалась с помощью комбинированной модели микроциркуляции. Curr Ther Res 1989; 46 (6): 1015-1026.

Белкаро Г.В., Гримальди Р., Гуиди Г. и др.Лечение диабетической микорангиопатии с помощью TTFCA. Исследование микроциркуляции с использованием лазерно-доплеровской флоуметрии, P02 / PC02 и измерения проницаемости капилляров. Curr Ther Res 1990; 47 (3): 421-428.

Белкаро, Г. В., Гримальди, Р., и Гуиди, Г. Улучшение проницаемости капилляров у пациентов с венозной гипертензией после лечения TTFCA. Ангиология 1990; 41 (7): 533-540. Просмотреть аннотацию.

Бильбао, И., Агирре, А., Забала, Р., Гонсалес, Р., Ратон, Дж., И Диас Перес, Дж. Л. Аллергический контактный дерматит, вызванный бутоксиэтилникотиновой кислотой и экстрактом центеллы азиатской.Контактный дерматит 1995; 33 (6): 435-436. Просмотреть аннотацию.

Bonte, F., Dumas, M., Chaudagne, C. и Meybeck, A. Влияние азиатской кислоты, мадекассовой кислоты и азиатикозида на синтез человеческого коллагена I. Planta Med 1994; 60 (2): 133-135. Просмотреть аннотацию.

Брадвейн Дж., Кошицки Д., Шлик Дж. И др. Центелла азиатская снижает акустическую реакцию вздрагивания. 152-е ежегодное собрание Американской психиатрической ассоциации, Вашингтон, округ Колумбия, США (15-20 мая) 1999 г .;

Bradwejn J, Zhou Y, Koszycki и др.Влияние острого введения Gotu-kola (Centella asiatica) на акустическую реакцию вздрагивания у здоровых добровольцев. XXIst Collegium Internationale Neuro-psychopharmacologicum, Гласкоу, Шотландия (12–16 июля) 1998 г .; (Ссылка на реферат: NRW001)

Карлсон, Дж. Дж., Фаркуар, Дж. У., Динуччи, Э., Аусерер, Л., Зендер, Дж., Миллер , Д., Берра, К., Хагерти, Л., и Хаскелл, В. Л. Безопасность и эффективность пищевой добавки, содержащей гинкго билоба, на когнитивные функции, качество жизни и функцию тромбоцитов у здоровых, когнитивно неповрежденных пожилых людей.J Am Diet. Assoc 2007; 107 (3): 422-432. Просмотреть аннотацию.

Cesarone MR, Belcaro G, De Sanctis MT и др. Эффекты общей тритерпеновой фракции Centella asiatica при венозной гипертонической микроангиопатии: проспективное плацебо-контролируемое рандомизированное исследование. Ангиология 2001; 52 (10 приложение 2): S15-S18.

Cesarone MR, Belcaro G, Rulo A и др. Микроциркуляторные эффекты общей тритерпеновой фракции центеллы азиатской при хронической венозной гипертензии: измерение с помощью лазерного допплера, TcPo2-co2 и волюметрия ног.Ангиология 2001; 52 (10 приложение 2): S45-S48.

Cesarone MR, Incandela L, De Sanctis MT и др. Оценка лечения диабетической микроангиопатии общей тритерпенической фракцией Centella asiatica: клиническое проспективное рандомизированное исследование с использованием модели микроциркуляции. Ангиология 2001; 52 (10 приложение 2): S49-S54.

Сезароне, М. Р., Лаурора, Г., Де Санктис, М. Т., Инкандела, Л., Гримальди, Р., Марелли, К., и Белкаро, Г. [Микроциркуляторная активность центеллы азиатской при венозной недостаточности.Двойное слепое исследование. Минерва Кардиоангиол. 1994; 42 (6): 299-304. Просмотреть аннотацию.

Чаттерджи, Т.К., Чакраборти, А., Патак, М., и Сенгупта, Г.С. Влияние растительного экстракта центеллы азиатской (Linn.) На стрессовую язву при переохлаждении у крыс. Индийский J.Exp.Biol. 1992; 30 (10): 889-891. Просмотреть аннотацию.

Данезе П., Карневали К. и Бертаццони М. Г. Аллергический контактный дерматит, вызванный экстрактом центеллы азиатской. Контактный дерматит 1994; 31 (3): 201. Просмотреть аннотацию.

Дарнис, Ф., Орсель, Л., Сен-Мор, П., и Маму, П. [Использование титрованного экстракта центеллы азиатской при хронических заболеваниях печени (авторский перевод)]. Сем.Хоп. 11-8-1979; 55 (37-38): 1749-1750. Просмотреть аннотацию.

De Sanctis MT, Belcaro G, Incandela L и др. Лечение отека и повышенной капиллярной фильтрации при венозной гипертензии с помощью общей тритерпеновой фракции центеллы азиатской: клиническое, проспективное, плацебо-контролируемое, рандомизированное исследование с определением дозировки. Ангиология 2001; 52 (10 приложение 2): S55-S59.

De Sanctis MT, Incandela L, Cesarone MR и др. Острые эффекты TTFCA на капиллярную фильтрацию при тяжелой венозной гипертензии. Panminerva Medica 1994; 36 (2): 87-90.

DeLucia R, Sertie JAA, Camargo EA и др. Фармакологические и токсикологические исследования экстракта центеллы азиатской. Фитотерапия 1997; 68: 413-416.

Grimaldi, R., De Ponti, F., D’Angelo, L., Caravaggi, M., Guidi, G., Lecchini, S., Frigo, GM, and Crema, A. Фармакокинетика общей тритерпеновой фракции Центеллы азиатской после однократного и многократного введения здоровым добровольцам.Новый анализ азиатской кислоты. J Ethnopharmacol. 1990; 28 (2): 235-241. Просмотреть аннотацию.

Incandela L, Belacaro G, Cesarone MR и др. Лечение диабетической микроангиопатии и отеков общей тритерпеновой фракцией центеллы азиатской: проспективное плацебо-контролируемое рандомизированное исследование. Ангиология 2001; 52 (10 приложение 2): S27-S31.

Incandela L, Belcaro G, De Sanctis MT и др. Общая тритерпеновая фракция центеллы азиатской в ​​лечении венозной гипертензии: клиническое проспективное рандомизированное исследование с использованием комбинированной модели микроциркуляции.Ангиология 2001; 52 (10 приложение 2): S61-S67.

Идзу, Р., Агирре, А., Гил, Н. и Диас-Перес, Дж. Л. Аллергический контактный дерматит, вызванный кремом, содержащим экстракт центеллы азиатской. Контактный дерматит 1992; 26 (3): 192-193. Просмотреть аннотацию.

Казюлин А.Н., Петухов А.Б., Кучерявый Ю.А. [Эффективность включения биологически активных веществ в рацион больного печеночной энцефалопатией]. Вопр.Питан. 2006; 75 (2): 40-44. Просмотреть аннотацию.

Кловекорн В., Тепе А. и Данеш У.Рандомизированное, двойное слепое, контролируемое с использованием носителя полубороковое сравнение с травяной мазью, содержащей Mahonia aquifolium, Viola tricolor и Centella asiatica, для лечения атопического дерматита легкой и средней степени тяжести. Int.J.Clin.Pharmacol.Ther. 2007; 45 (11): 583-591. Просмотреть аннотацию.

Лаерум О. Д. и Иверсен О. Х. Ретикулозы и эпидермальные опухоли у бесшерстных мышей после местного нанесения на кожу кантаридина и азиатикозида. Cancer Res 1972; 32 (7): 1463-1469. Просмотреть аннотацию.

Марастони, Ф., Baldo, A., Redaelli, G., and Ghiringhelli, L. [Экстракт центеллы азиатской при венозной патологии нижних конечностей и его оценка по сравнению с трибенозидом]. Минерва Кардиоангиол. 1982; 30 (4): 201-207. Просмотреть аннотацию.

Мин, З. Дж., Лю, С. З. и Као, Л. [Влияние общих глюкозидов центеллы азиатской на противодействие фиброзу печени, индуцированному диметилнитрозамином у крыс]. Чжунго Чжун. Си.И.Цзе.Хэ.За Чжи. 2004; 24 (8): 731-734. Просмотреть аннотацию.

О’Брайен, Б. Синдром ночного переедания и Готу Кола.Ирландия, 2005; 98 (10): 250-251. Просмотреть аннотацию.

O’Keeffe, P. Испытание азиатикозида на донорских участках кожного трансплантата. Br J. Plast .urg 1974; 27 (2): 194-195. Просмотреть аннотацию.

Раманатан, М., Сивакумар, С., Анандвиджаякумар, П. Р., Сараванабабу, С. и Пандиан, П. Р. Нейропротекторная оценка стандартизированного экстракта центеллы асциатической у крыс, обработанных глутаматом натрия. Индийский журнал J Exp Biol 2007; 45 (5): 425-431. Просмотреть аннотацию.

Раш, У. Р., Мюррей, Г. Р., и Грэм, Д.J. Сравнительная стационарная биодоступность активных ингредиентов Мадекассола. Eur J Drug Metab Pharmacokinet. 1993; 18 (4): 323-326. Просмотреть аннотацию.

Сайрам К., Рао С. В. и Гоэль Р. К. Влияние центеллы азиатской Linn на физические и химические факторы, вызывающие язвы желудка и секрецию у крыс. Индийский J.Exp.Biol. 2001; 39 (2): 137-142. Просмотреть аннотацию.

Сантуччи Б., Пикардо М. и Кристаудо А. Контактный дерматит, вызванный центелазой. Контактный дерматит 1985; 13 (1): 39.Просмотреть аннотацию.

Sarma DNK, Khosa RL, Chansauria JPN и др. Антистрессовая активность экстрактов Tinospora cordifolia и Centella asiatica. Фитотерапевтические исследования 1996; 10 (2): 181-189.

Sasaki, S., Shinkai, H., Akashi, Y., and Kishihara, Y. Исследования механизма действия азиатикозида (Мадекассол) на экспериментальную грануляционную ткань и культивированные фибробласты и его клиническое применение при системной склеродермии. Acta Derm.Venereol. 1972; 52 (2): 141-150. Просмотреть аннотацию.

Шукла, А., Rasik, A.M., и Dhawan, B.N., индуцированное азиатикозидом повышение уровней антиоксидантов в заживающих ранах. Phytother.Res 1999; 13 (1): 50-54. Просмотреть аннотацию.

Сугуна Л., Сивакумар П. и Чандракасан Г. Влияние экстракта центеллы азиатской на заживление кожных ран у крыс. Индийский журнал J Exp Biol 1996; 34 (12): 1208-1211. Просмотреть аннотацию.

Sunilkumar, Parameshwaraiah, S. и Shivakumar, H.G. Оценка составов водного экстракта центеллы азиатской для местного применения на открытых ранах крыс.Индийский J Exp Biol. 1998; 36 (6): 569-572. Просмотреть аннотацию.

Тенни, Р., Занабони, Г., Де Агостини, М. П., Росси, А., Бендотти, К., и Четта, Г. Влияние тритерпеноидной фракции центеллы азиатской на макромолекулы соединительного матрикса фибробластов кожи человека культур. Ital.J Biochem 1988; 37 (2): 69-77. Просмотреть аннотацию.

Веласко, М. и Ромеро, Э. Лекарственное взаимодействие азиатикозида и некоторых противовоспалительных препаратов при заживлении ран у крыс. Curr Ther Res Clin Exp 1976; 19 (1): 121-125.Просмотреть аннотацию.

Вена, Г. А. и Анджелини, Г. Контактная аллергия на центелазу. Контактный дерматит 1986; 15 (2): 108-109. Просмотреть аннотацию.

Vogel HG, DeSouza N и D’Sa A. Влияние терпеноидов, выделенных из центеллы азиатской, на ткань гранулемы. Acta Therapeutica 1990; 16: 285-298.

Yoosook, C., Bunyapraphatsara, N., Boonyakiat, Y., and Kantasuk, C. Активность сырых водных экстрактов тайских лекарственных растений против вируса простого герпеса. Фитомедицина. 2000; 6 (6): 411-419.Просмотреть аннотацию.

Zheng, M. S. Экспериментальное исследование действия 500 лекарственных растений против HSV-II. J Tradit. Chin Med 1989; 9 (2): 113-116. Просмотреть аннотацию.

Бабу Т.Д., Куттан Дж., Падиккала Дж. Цитотоксические и противоопухолевые свойства некоторых таксонов зонтичных с особым упором на Centella asiatica (L.) Urban. J. Ethnopharmacol 1995; 48: 53-7. Просмотреть аннотацию.

Белкаро Г., Дугалл М., Ипполито Э. и др. Пикногенол и центелла азиатская для предотвращения бессимптомного прогрессирования атеросклероза при клинических проявлениях.Минерва Кардиоангиол. 2017 Февраль; 65 (1): 24-31. Просмотреть аннотацию.

Белкаро Г.В., Руло А., Гримальди Р. Капиллярная фильтрация и отек голеностопного сустава у пациентов с венозной гипертензией, получавших TTFCA. Ангиология 1990; 41: 12-8 .. Просмотреть аннотацию.

Bilbao I, Aguirre A, Zabala R, et al. Аллергический контактный дерматит от бутоксиэтилникотиновой кислоты и экстракта центеллы азиатской. Контактный дерматит 1995; 33: 435-6.

Bosse JP, Papillon J, Frenette G и др. Клиническое исследование нового антикелоидного средства.Ann Plast Surg 1979; 3: 13,21. Просмотреть аннотацию.

Bradwejn J, Zhou Y, Koszycki D, Shlik J. Двойное слепое плацебо-контролируемое исследование эффектов Gotu Kola (Centella asiatica) на реакцию акустического испуга у здоровых субъектов. J Clin Psychopharmacol 2000; 20: 680-4. Просмотреть аннотацию.

Brinkhaus B, Lindner M, Schuppan D, Hahn EG. Химический, фармакологический и клинический профиль восточноазиатского лекарственного растения Centella asiatica. Фитомедицина 2000; 7: 427-48. Просмотреть аннотацию.

Cesarone MR, Belcaro G, De Sanctis MT, et al.Эффекты общей тритерпеновой фракции Centella asiatica при венозной гипертонической микроангиопатии: проспективное плацебо-контролируемое рандомизированное исследование. Ангиология 2001; 52 Приложение 2: S15-18. Просмотреть аннотацию.

Cesarone MR, Belcaro G, Nicolaides AN, et al. Повышение эхогенности эхолуцентных каротидных бляшек после лечения общей тритерпеновой фракцией центеллы азиатской: проспективное плацебо-контролируемое рандомизированное исследование. Ангиология 2001; 52 Приложение 2: S19-25. Просмотреть аннотацию.

Cesarone MR, Belcaro G, Rulo A, et al.Микроциркуляторные эффекты общей тритерпеновой фракции центеллы азиатской при хронической венозной гипертензии: измерение с помощью лазерного допплера, TcPO2-CO2 и волюметрия ног. Ангиология 2001; 52 Приложение 2: S45-8. Просмотреть аннотацию.

Cesarone MR, Incandela L, De Sanctis MT, et al. Оценка лечения диабетической микроангиопатии общей тритерпенической фракцией Centella asiatica: клиническое проспективное рандомизированное исследование с использованием модели микроциркуляции. Ангиология 2001; 52 Приложение 2: S49-54. Просмотреть аннотацию.

De Sanctis MT, Belcaro G, Incandela L и др. Лечение отека и повышенной капиллярной фильтрации при венозной гипертензии с помощью общей тритерпеновой фракции центеллы азиатской: клиническое, проспективное, плацебо-контролируемое, рандомизированное исследование с определением дозировки. Ангиология 2001; 52 Приложение 2: S55-9. Просмотреть аннотацию.

Dutta T, Basu UP. Неочищенный экстракт центеллы азиатской и продукты, полученные из ее гликозидов, в качестве пероральных противозачаточных средств. Индийский журнал J Exp Biol 1968; 6: 181-2.

Ын Х.С., Ли Эй.Контактный дерматит, вызванный мадекассолом. Контактный дерматит 1985; 13: 310-3 .. Просмотреть аннотацию.

Fam A. Использование титрованного экстракта центеллы азиатской (TECA) при бильгарциальных поражениях мочевого пузыря. Int Surg 1973; 58: 451-2.

Гарсия Эрнандес Я., Мадера Гонсалес Д., Падилья Кастильо М., Фигерас Фалькон Т. Использование специального крема против растяжек для предотвращения или уменьшения степени тяжести стрий беременных. Рандомизированное двойное слепое контролируемое исследование. Int J Cosmet Sci. 2013; 35 (3): 233-7. Просмотреть аннотацию.

Guo JS, Cheng CL, Koo MW. Ингибирующее действие водного экстракта центеллы азиатской и азиатикозида на индуцибельную синтазу оксида азота во время заживления язвы желудка у крыс. Planta Med 2004; 70: 1150-4. Просмотреть аннотацию.

Hausen BM. Центелла азиатская (индийский полынь) — эффективное терапевтическое средство, но слабый сенсибилизатор. Контактный дерматит 1993; 29: 175-9 .. Просмотреть аннотацию.

Hu S, Belcaro G, Hosoi M, Feragalli B, Luzzi R, Dugall M. Послеродовые растяжки: восстановление активности пероральной добавки Centella asiatica (Centellicum®).Минерва Гинекол. 2018; 70 (5): 629-634. Просмотреть аннотацию.

Incandela L, Belcaro G, Cesarone MR, et al. Лечение диабетической микроангиопатии и отеков общей тритерпеновой фракцией центеллы азиатской: проспективное плацебо-контролируемое рандомизированное исследование. Ангиология 2001; 52 Приложение 2: S27-31. Просмотреть аннотацию.

Incandela L, Belcaro G, De Sanctis MT и др. Общая тритерпеновая фракция центеллы азиатской в ​​лечении венозной гипертензии: клиническое проспективное рандомизированное исследование с использованием комбинированной модели микроциркуляции.Ангиология 2001; 52 Приложение 2: S61-7. Просмотреть аннотацию.

Incandela L, Belcaro G, Nicolaides AN и др. Модификация эхогенности бедренных бляшек после лечения общей тритерпенической фракцией Centella asiatica: проспективное рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. Ангиология 2001; 52 Приложение 2: S69-73. Просмотреть аннотацию.

Incandela L, Cesarone MR, Cacchio M и др. Общая тритерпеновая фракция центеллы азиатской при хронической венозной недостаточности и микроангиопатии с высокой перфузией.Ангиология 2001; 52 Приложение 2: S9-13. Просмотреть аннотацию.

Хорхе О.А., Хорхе А.Д. Гепатотоксичность, связанная с приемом центеллы азиатской внутрь. Ред. Esp Enferm Dig 2005; 97: 115-24. Просмотреть аннотацию.

Kenady DE, Chretien PB, Potvin C, Simon RM. Восстановление тимозина дефицита Т-клеток in vitro у онкологических больных. Рак 1977; 39: 575-80. Просмотреть аннотацию.

Луцци Р., Белкаро Дж., Ипполито Э. Стабилизация каротидных бляшек, вызванная ассоциацией добавок пикногенола и центеллы азиатской (Centellicum).Минерва Кардиоангиол. 2016 декабрь; 64 (6): 603-9. Просмотреть аннотацию.

Маллол Дж., Белда М.А., Коста Д. и др. Профилактика стрий беременных с помощью препарата для местного применения. Двойное слепое испытание. Int J Cosmet Sci 1991; 3: 51-7.

Maquart FX, Chastang F, Simeon A, et al. Тритерпены центеллы азиатской стимулируют накопление внеклеточного матрикса в экспериментальных ранах крыс. Eur J Dermatol 1999; 9: 289-96. Просмотреть аннотацию.

Мук-Юнг И., Шин Дж. Э., Юн Ш. и др. Защитные эффекты производных азиатикозида от нейротоксичности бета-амилоида.J. Neurosci Res 1999; 58: 417-25. Просмотреть аннотацию.

Муангман П., Прадицуктаворн Б., Чинарунчай К., Чунтрасакул С. Тест клинической эффективности полиэфирных повязок с экстрактом трав при заживлении ожоговых ран. Int J Раны нижних конечностей. 2016 сентябрь; 15 (3): 203-12. Просмотреть аннотацию.

Pointel JP, Boccalon H, Cloarec M и др. Титрованный экстракт центеллы азиатской (TECA) при лечении венозной недостаточности нижних конечностей. Ангиол 1987; 38: 46-50. Просмотреть аннотацию.

Саейдиния А., Кейханян Ф., Лашкари А.П. и др.Заживление частичных ожоговых ран местным лечением: рандомизированное контролируемое сравнение сульфадиазина серебра и сантидерма. Медицина (Балтимор). 2017 Март; 96 (9): e6168. Просмотреть аннотацию.

Sastravaha G, Yotnuengnit P, Booncong P, Sangtherapitikul P. Дополнительное лечение пародонта экстрактами центеллы азиатской и Punica granatum. Предварительное исследование. J Int Acad Periodontol 2003; 5: 106-15. Просмотреть аннотацию.

Шукла А., Расик А.М., Джайн Г.К. и др. In vitro и in vivo ранозаживляющая активность азиатикозида, выделенного из центеллы азиатской.Дж. Этнофармакол 1999; 65: 1-11. Просмотреть аннотацию.

Songvut P, ​​Chariyavilaskul P, Tantisira MH, Khemawoot P. Безопасность и фармакокинетика стандартизированного экстракта капсул центеллы азиатской (ECa 233) у здоровых тайских добровольцев: клиническое исследование фазы 1. Planta Med. 2019; 85 (6): 483-490. Просмотреть аннотацию.

Surakunprapha P, Winaikosol K, Chowchuen B, Punyavong P, Jenwitheesuk K, Jenwitheesuk K. Проспективное рандомизированное двойное слепое исследование силиконового геля с экстрактами трав в сравнении с плацебо в профилактике и улучшении предгрудинного гипертрофического рубца.Гелион. 2020; 6 (5): e03883. Просмотреть аннотацию.

Thanthong S, Nanthong R, Kongwattanakul S, et al. Профилактика радиационно-индуцированного дерматита у пациентов с раком груди с использованием травяных кремов: проспективное рандомизированное контролируемое исследование. Integr Cancer Ther. 2020; 19: 1534735420920714. Просмотреть аннотацию.

Widgerow AD, Chait LA, Stals R, Stals PJ. Новые инновации в лечении рубцов. Aesthetic Plast Surg 2000; 24: 227-34. Просмотреть аннотацию.

Young GL, Jewell D. Кремы для предотвращения растяжек при беременности.Кокрановская база данных Syst Rev 2000; (2): CD000066. Просмотреть аннотацию.

S.753 — 117-й Конгресс (2021-2022): Акт 2021 г. Congress.gov

Секция записи Конгресса Ежедневный дайджест Сенат дом Расширения замечаний

Замечания участников Автор: Any House Member Адамс, Альма С.[D-NC] Адерхольт, Роберт Б. [R-AL] Агилар, Пит [D-CA] Аллен, Рик В. [R-GA] Оллред, Колин З. [D-TX] Амодеи, Марк Э. [R -NV] Армстронг, Келли [R-ND] Аррингтон, Джоди К. [R-TX] Auchincloss, Jake [D-MA] Axne, Cynthia [D-IA] Бабин, Брайан [R-TX] Бэкон, Дон [R -NE] Бэрд, Джеймс Р. [R-IN] Балдерсон, Трой [R-OH] Бэнкс, Джим [R-IN] Барр, Энди [R-KY] Барраган, Нанетт Диас [D-CA] Басс, Карен [ D-CA] Битти, Джойс [D-OH] Бенц, Клифф [R-OR] Бера, Ami [D-CA] Бергман, Джек [R-MI] Бейер, Дональд С., младший [D-VA] Байс , Стефани И. [R-OK] Биггс, Энди [R-AZ] Билиракис, Гас М.[R-FL] Бишоп, Дэн [R-NC] Бишоп, Сэнфорд Д., младший [D-GA] Блуменауэр, Эрл [D-OR] Блант Рочестер, Лиза [D-DE] Боберт, Лорен [R-CO ] Бонамичи, Сюзанна [D-OR] Бост, Майк [R-IL] Bourdeaux, Carolyn [D-GA] Bowman, Jamaal [D-NY] Бойл, Брендан Ф. [D-PA] Брэди, Кевин [R-TX ] Брукс, Мо [R-AL] Браун, Энтони Г. [D-MD] Браунли, Джулия [D-CA] Бьюкенен, Верн [R-FL] Бак, Кен [R-CO] Бакшон, Ларри [R-IN ] Бадд, Тед [R-NC] Берчетт, Тим [R-TN] Берджесс, Майкл К. [R-TX] Буш, Кори [D-MO] Бустос, Cheri [D-IL] Баттерфилд, GK [D-NC ] Калверт, Кен [R-CA] Каммак, Кэт [R-FL] Карбаджал, Салуд О.[D-CA] Карденас, Тони [D-CA] Карл, Джерри Л. [R-AL] Карсон, Андре [D-IN] Картер, Эрл Л. «Бадди» [R-GA] Картер, Джон Р. [ R-TX] Картер, Трой [D-LA] Картрайт, Мэтт [D-PA] Кейс, Эд [D-HI] Кастен, Шон [D-IL] Кастор, Кэти [D-FL] Кастро, Хоакин [D- TX] Cawthorn, Мэдисон [R-NC] Chabot, Стив [R-OH] Чейни, Лиз [R-WY] Чу, Джуди [D-CA] Cicilline, Дэвид Н. [D-RI] Кларк, Кэтрин М. [ D-MA] Кларк, Иветт Д. [D-NY] Кливер, Эмануэль [D-MO] Клайн, Бен [R-VA] Клауд, Майкл [R-TX] Клайберн, Джеймс Э. [D-SC] Клайд, Эндрю С. [R-GA] Коэн, Стив [D-TN] Коул, Том [R-OK] Комер, Джеймс [R-KY] Коннолли, Джеральд Э.[D-VA] Купер, Джим [D-TN] Корреа, Дж. Луис [D-CA] Коста, Джим [D-CA] Кортни, Джо [D-CT] Крейг, Энджи [D-MN] Кроуфорд, Эрик А. «Рик» [R-AR] Креншоу, Дэн [R-TX] Крист, Чарли [D-FL] Кроу, Джейсон [D-CO] Куэльяр, Генри [D-TX] Кертис, Джон Р. [R- UT] Дэвидс, Шарис [D-KS] Дэвидсон, Уоррен [R-OH] Дэвис, Дэнни К. [D-IL] Дэвис, Родни [R-IL] Дин, Мадлен [D-PA] ДеФазио, Питер А. [ D-OR] DeGette, Diana [D-CO] DeLauro, Rosa L. [D-CT] DelBene, Suzan K. [D-WA] Delgado, Antonio [D-NY] Demings, Val Butler [D-FL] DeSaulnier , Марк [D-CA] ДеДжарле, Скотт [R-TN] Дойч, Теодор Э.[D-FL] Диас-Баларт, Марио [R-FL] Дингелл, Дебби [D-MI] Доггетт, Ллойд [D-TX] Дональдс, Байрон [R-FL] Дойл, Майкл Ф. [D-PA] Дункан , Джефф [R-SC] Данн, Нил П. [R-FL] Эллзи, Джейк [R-TX] Эммер, Том [R-MN] Эскобар, Вероника [D-TX] Эшу, Анна Г. [D-CA ] Эспайлат, Адриано [D-NY] Эстес, Рон [R-KS] Эванс, Дуайт [D-PA] Фэллон, Пэт [R-TX] Feenstra, Рэнди [R-IA] Фергюсон, А. Дрю, IV [R -GA] Фишбах, Мишель [R-MN] Фицджеральд, Скотт [R-WI] Фитцпатрик, Брайан К. [R-PA] Флейшманн, Чарльз Дж. «Чак» [R-TN] Флетчер, Лиззи [D-TX] Фортенберри, Джефф [R-NE] Фостер, Билл [D-IL] Фокс, Вирджиния [R-NC] Франкель, Лоис [D-FL] Франклин, К.Скотт [R-FL] Фадж, Марсия Л. [D-OH] Фулчер, Расс [R-ID] Gaetz, Мэтт [R-FL] Галлахер, Майк [R-WI] Галлего, Рубен [D-AZ] Гараменди, Джон [D-CA] Гарбарино, Эндрю Р. [R-NY] Гарсия, Хесус Дж. «Чуй» [D-IL] Гарсия, Майк [R-CA] Гарсия, Сильвия Р. [D-TX] Гиббс, Боб [R-OH] Хименес, Карлос А. [R-FL] Гомерт, Луи [R-TX] Голден, Джаред Ф. [D-ME] Гомес, Джимми [D-CA] Гонсалес, Тони [R-TX] Гонсалес , Энтони [R-OH] Гонсалес, Висенте [D-TX] González-Colón, Jenniffer [R-PR] Хорошо, Боб [R-VA] Гуден, Лэнс [R-TX] Gosar, Paul A. [R-AZ ] Gottheimer, Джош [D-NJ] Granger, Kay [R-TX] Graves, Garret [R-LA] Graves, Sam [R-MO] Green, Al [D-TX] Green, Mark E.[R-TN] Грин, Марджори Тейлор [R-GA] Гриффит, Х. Морган [R-VA] Гриджалва, Рауль М. [D-AZ] Гротман, Гленн [R-WI] Гость, Майкл [R-MS] Гатри, Бретт [R-KY] Хааланд, Дебра А. [D-NM] Хагедорн, Джим [R-MN] Хардер, Джош [D-CA] Харрис, Энди [R-MD] Харшбаргер, Диана [R-TN] Хартцлер, Вики [R-MO] Гастингс, Элси Л. [D-FL] Хейс, Джахана [D-CT] Херн, Кевин [R-OK] Херрелл, Иветт [R-NM] Эррера Бейтлер, Хайме [R-WA ] Хайс, Джоди Б. [R-GA] Хиггинс, Брайан [D-NY] Хиггинс, Клэй [R-LA] Хилл, Дж. Френч [R-AR] Хаймс, Джеймс А. [D-CT] Хинсон, Эшли [R-IA] Hollingsworth, Trey [R-IN] Horsford, Steven [D-NV] Houlahan, Chrissy [D-PA] Hoyer, Steny H.[D-MD] Хадсон, Ричард [R-NC] Хаффман, Джаред [D-CA] Huizenga, Билл [R-MI] Issa, Даррелл Э. [R-CA] Джексон Ли, Шейла [D-TX] Джексон, Ронни [R-TX] Джейкобс, Крис [R-NY] Джейкобс, Сара [D-CA] Jayapal, Pramila [D-WA] Джеффрис, Хаким С. [D-NY] Джонсон, Билл [R-OH] Джонсон, Дасти [R-SD] Джонсон, Эдди Бернис [D-TX] Джонсон, Генри К. «Хэнк» младший [D-GA] Джонсон, Майк [R-LA] Джонс, Mondaire [D-NY] Джордан, Джим [R-OH] Джойс, Дэвид П. [R-OH] Джойс, Джон [R-PA] Кахеле, Кайали [D-HI] Каптур, Марси [D-OH] Катко, Джон [R-NY] Китинг , Уильям Р.[D-MA] Келлер, Фред [R-PA] Келли, Майк [R-PA] Келли, Робин Л. [D-IL] Келли, Трент [R-MS] Кханна, Ро [D-CA] Килди, Дэниел Т. [D-MI] Килмер, Дерек [D-WA] Ким, Энди [D-NJ] Ким, Янг [R-CA] Кинд, Рон [D-WI] Кинзингер, Адам [R-IL] Киркпатрик, Энн [D-AZ] Кришнамурти, Раджа [D-IL] Кустер, Энн М. [D-NH] Кустофф, Дэвид [R-TN] ЛаХуд, Дарин [R-IL] Ламальфа, Дуг [R-CA] Лэмб, Конор [D-PA] Лэмборн, Дуг [R-CO] Ланжевен, Джеймс Р. [D-RI] Ларсен, Рик [D-WA] Ларсон, Джон Б. [D-CT] Латта, Роберт Э. [R-OH ] Латернер, Джейк [R-KS] Лоуренс, Бренда Л.[D-MI] Лоусон, Эл, младший [D-FL] Ли, Барбара [D-CA] Ли, Сьюзи [D-NV] Леже Фернандес, Тереза ​​[D-NM] Леско, Дебби [R-AZ] Летлоу , Джулия [R-LA] Левин, Энди [D-MI] Левин, Майк [D-CA] Льеу, Тед [D-CA] Лофгрен, Зои [D-CA] Лонг, Билли [R-MO] Лоудермилк, Барри [R-GA] Ловенталь, Алан С. [D-CA] Лукас, Фрэнк Д. [R-OK] Люткемейер, Блейн [R-MO] Лурия, Элейн Г. [D-VA] Линч, Стивен Ф. [D -MA] Мейс, Нэнси [R-SC] Малиновски, Том [D-NJ] Маллиотакис, Николь [R-NY] Мэлони, Кэролин Б. [D-NY] Мэлони, Шон Патрик [D-NY] Манн, Трейси [ R-KS] Мэннинг, Кэти Э.[D-NC] Мэсси, Томас [R-KY] Маст, Брайан Дж. [R-FL] Мацуи, Дорис О. [D-CA] МакБэт, Люси [D-GA] Маккарти, Кевин [R-CA] МакКол , Майкл Т. [R-TX] Макклейн, Лиза К. [R-MI] МакКлинток, Том [R-CA] МакКоллум, Бетти [D-MN] МакИчин, А. Дональд [D-VA] Макговерн, Джеймс П. [D-MA] МакГенри, Патрик Т. [R-NC] МакКинли, Дэвид Б. [R-WV] МакМоррис Роджерс, Кэти [R-WA] Макнерни, Джерри [D-CA] Микс, Грегори В. [D- NY] Мейер, Питер [R-MI] Мэн, Грейс [D-NY] Meuser, Daniel [R-PA] Mfume, Kweisi [D-MD] Миллер, Кэрол Д. [R-WV] Миллер, Мэри Э. [ R-IL] Миллер-Микс, Марианнетт [R-IA] Мооленаар, Джон Р.[R-MI] Муни, Александр X. [R-WV] Мур, Барри [R-AL] Мур, Блейк Д. [R-UT] Мур, Гвен [D-WI] Морелль, Джозеф Д. [D-NY ] Моултон, Сет [D-MA] Мрван, Фрэнк Дж. [D-IN] Маллин, Маркуэйн [R-OK] Мерфи, Грегори [R-NC] Мерфи, Стефани Н. [D-FL] Надлер, Джерролд [D -NY] Наполитано, Грейс Ф. [D-CA] Нил, Ричард Э. [D-MA] Негусе, Джо [D-CO] Нелс, Трой Э. [R-TX] Ньюхаус, Дэн [R-WA] Ньюман , Мари [D-IL] Норкросс, Дональд [D-NJ] Норман, Ральф [R-SC] Нортон, Элеонора Холмс [D-DC] Нуньес, Девин [R-CA] О’Халлеран, Том [D-AZ] Обернолти, Джей [R-CA] Окасио-Кортес, Александрия [D-NY] Омар, Ильхан [D-MN] Оуэнс, Берджесс [R-UT] Палаццо, Стивен М.[R-MS] Паллоне, Фрэнк, младший [D-NJ] Палмер, Гэри Дж. [R-AL] Панетта, Джимми [D-CA] Паппас, Крис [D-NH] Паскрелл, Билл, мл. [D -NJ] Пейн, Дональд М., младший [D-NJ] Пелоси, Нэнси [D-CA] Пенс, Грег [R-IN] Перлмуттер, Эд [D-CO] Перри, Скотт [R-PA] Питерс, Скотт Х. [D-CA] Пфлюгер, Август [R-TX] Филлипс, Дин [D-MN] Пингри, Челли [D-ME] Пласкетт, Стейси Э. [D-VI] Покан, Марк [D-WI] Портер, Кэти [D-CA] Поузи, Билл [R-FL] Прессли, Аянна [D-MA] Прайс, Дэвид Э. [D-NC] Куигли, Майк [D-IL] Радваген, Аумуа Амата Коулман [R- AS] Раскин, Джейми [D-MD] Рид, Том [R-NY] Решенталер, Гай [R-PA] Райс, Кэтлин М.[D-NY] Райс, Том [R-SC] Ричмонд, Седрик Л. [D-LA] Роджерс, Гарольд [R-KY] Роджерс, Майк Д. [R-AL] Роуз, Джон В. [R-TN ] Розендейл старший, Мэтью М. [R-MT] Росс, Дебора К. [D-NC] Роузер, Дэвид [R-NC] Рой, Чип [R-TX] Ройбал-Аллард, Люсиль [D-CA] Руис , Рауль [D-CA] Рупперсбергер, Калифорния Датч [D-MD] Раш, Бобби Л. [D-IL] Резерфорд, Джон Х. [R-FL] Райан, Тим [D-OH] Саблан, Грегорио Килили Камачо [ D-MP] Салазар, Мария Эльвира [R-FL] Сан Николас, Майкл FQ [D-GU] Санчес, Линда Т. [D-CA] Сарбейнс, Джон П. [D-MD] Скализ, Стив [R-LA ] Скэнлон, Мэри Гей [D-PA] Шаковски, Дженис Д.[D-IL] Шифф, Адам Б. [D-CA] Шнайдер, Брэдли Скотт [D-IL] Шрейдер, Курт [D-OR] Шриер, Ким [D-WA] Швейкерт, Дэвид [R-AZ] Скотт, Остин [R-GA] Скотт, Дэвид [D-GA] Скотт, Роберт К. «Бобби» [D-VA] Сешнс, Пит [R-TX] Сьюэлл, Терри А. [D-AL] Шерман, Брэд [D -CA] Шерилл, Мики [D-NJ] Симпсон, Майкл К. [R-ID] Sires, Альбио [D-NJ] Slotkin, Элисса [D-MI] Смит, Адам [D-WA] Смит, Адриан [R -NE] Смит, Кристофер Х. [R-NJ] Смит, Джейсон [R-MO] Смакер, Ллойд [R-PA] Сото, Даррен [D-FL] Спанбергер, Эбигейл Дэвис [D-VA] Спарц, Виктория [ R-IN] Спейер, Джеки [D-CA] Стэнсбери, Мелани Энн [D-NM] Стэнтон, Грег [D-AZ] Stauber, Пит [R-MN] Стил, Мишель [R-CA] Стефаник, Элиза М.[R-NY] Стейл, Брайан [R-WI] Steube, В. Грегори [R-FL] Стивенс, Хейли М. [D-MI] Стюарт, Крис [R-UT] Стиверс, Стив [R-OH] Стрикленд , Мэрилин [D-WA] Суоззи, Томас Р. [D-NY] Swalwell, Эрик [D-CA] Такано, Марк [D-CA] Тейлор, Ван [R-TX] Тенни, Клаудия [R-NY] Томпсон , Бенни Г. [D-MS] Томпсон, Гленн [R-PA] Томпсон, Майк [D-CA] Тиффани, Томас П. [R-WI] Тиммонс, Уильям Р. IV [R-SC] Титус, Дина [ D-NV] Тлайб, Рашида [D-MI] Тонко, Пол [D-NY] Торрес, Норма Дж. [D-CA] Торрес, Ричи [D-NY] Трахан, Лори [D-MA] Трон, Дэвид Дж. .[D-MD] Тернер, Майкл Р. [R-OH] Андервуд, Лорен [D-IL] Аптон, Фред [R-MI] Валадао, Дэвид Г. [R-CA] Ван Дрю, Джефферсон [R-NJ] Ван Дайн, Бет [R-Техас] Варгас, Хуан [D-CA] Визи, Марк А. [D-TX] Вела, Филемон [D-TX] Веласкес, Нидия М. [D-Нью-Йорк] Вагнер, Энн [R -MO] Уолберг, Тим [R-MI] Валорски, Джеки [R-IN] Вальс, Майкл [R-FL] Вассерман Шульц, Дебби [D-FL] Уотерс, Максин [D-CA] Уотсон Коулман, Бонни [D -NJ] Вебер, Рэнди К., старший [R-TX] Вебстер, Дэниел [R-FL] Велч, Питер [D-VT] Венструп, Брэд Р. [R-OH] Вестерман, Брюс [R-AR] Векстон, Дженнифер [D-VA] Уайлд, Сьюзан [D-PA] Уильямс, Nikema [D-GA] Уильямс, Роджер [R-TX] Уилсон, Фредерика С.[D-FL] Уилсон, Джо [R-SC] Виттман, Роберт Дж. [R-VA] Womack, Стив [R-AR] Райт, Рон [R-TX] Ярмут, Джон А. [D-KY] Янг , Дон [R-AK] Зельдин, Ли М. [R-NY] Любой член Сената Болдуин, Тэмми [D-WI] Баррассо, Джон [R-WY] Беннет, Майкл Ф. [D-CO] Блэкберн, Марша [ R-TN] Блюменталь, Ричард [D-CT] Блант, Рой [R-MO] Букер, Кори А. [D-NJ] Бузман, Джон [R-AR] Браун, Майк [R-IN] Браун, Шеррод [ D-OH] Берр, Ричард [R-NC] Кантуэлл, Мария [D-WA] Капито, Шелли Мур [R-WV] Кардин, Бенджамин Л. [D-MD] Карпер, Томас Р. [D-DE] Кейси , Роберт П., Младший [D-PA] Кэссиди, Билл [R-LA] Коллинз, Сьюзан М. [R-ME] Кунс, Кристофер А. [D-DE] Корнин, Джон [R-TX] Кортез Масто, Кэтрин [D -NV] Коттон, Том [R-AR] Крамер, Кевин [R-ND] Крапо, Майк [R-ID] Круз, Тед [R-TX] Дейнс, Стив [R-MT] Дакворт, Тэмми [D-IL ] Дурбин, Ричард Дж. [D-IL] Эрнст, Джони [R-IA] Файнштейн, Dianne [D-CA] Фишер, Деб [R-NE] Гиллибранд, Кирстен Э. [D-NY] Грэм, Линдси [R -SC] Грассли, Чак [R-IA] Хагерти, Билл [R-TN] Харрис, Камала Д. [D-CA] Хассан, Маргарет Вуд [D-NH] Хоули, Джош [R-MO] Генрих, Мартин [ D-NM] Гикенлупер, Джон В.[D-CO] Хироно, Мази К. [D-HI] Хувен, Джон [R-ND] Хайд-Смит, Синди [R-MS] Инхоф, Джеймс М. [R-OK] Джонсон, Рон [R-WI ] Кейн, Тим [D-VA] Келли, Марк [D-AZ] Кеннеди, Джон [R-LA] Кинг, Ангус С., младший [I-ME] Klobuchar, Amy [D-MN] Ланкфорд, Джеймс [ R-OK] Лихи, Патрик Дж. [D-VT] Ли, Майк [R-UT] Леффлер, Келли [R-GA] Лухан, Бен Рэй [D-NM] Ламмис, Синтия М. [R-WY] Манчин , Джо, III [D-WV] Марки, Эдвард Дж. [D-MA] Маршалл, Роджер В. [R-KS] МакКоннелл, Митч [R-KY] Менендес, Роберт [D-NJ] Меркли, Джефф [D -ИЛИ] Моран, Джерри [R-KS] Мурковски, Лиза [R-AK] Мерфи, Кристофер [D-CT] Мюррей, Пэтти [D-WA] Оссофф, Джон [D-GA] Падилья, Алекс [D-CA ] Пол, Рэнд [R-KY] Питерс, Гэри К.[D-MI] Портман, Роб [R-OH] Рид, Джек [D-RI] Риш, Джеймс Э. [R-ID] Ромни, Митт [R-UT] Розен, Джеки [D-NV] Раундс, Майк [R-SD] Рубио, Марко [R-FL] Сандерс, Бернард [I-VT] Sasse, Бен [R-NE] Schatz, Брайан [D-HI] Шумер, Чарльз Э. [D-NY] Скотт, Рик [R-FL] Скотт, Тим [R-SC] Шахин, Жанна [D-NH] Шелби, Ричард К. [R-AL] Синема, Кирстен [D-AZ] Смит, Тина [D-MN] Стабеноу, Дебби [D-MI] Салливан, Дэн [R-AK] Тестер, Джон [D-MT] Тьюн, Джон [R-SD] Тиллис, Том [R-NC] Туми, Пэт [R-PA] Тубервиль, Томми [R -AL] Ван Холлен, Крис [D-MD] Уорнер, Марк Р.[D-VA] Варнок, Рафаэль Г. [D-GA] Уоррен, Элизабет [D-MA] Уайтхаус, Шелдон [D-RI] Уикер, Роджер Ф. [R-MS] Уайден, Рон [D-OR] Янг , Тодд [R-IN]

Раков | Бесплатный полнотекстовый | Многофункциональная платформа из оксида графена для борьбы с раком

1. Введение

В последнее время наночастицы на основе углерода привлекли большое внимание благодаря своим интересным поверхностным свойствам и способности действовать как платформа для модификации различными веществами, включая неорганические наночастицы. препараты и лиганды.Углеродные нанотрубки, квантовые точки [1], нанопористый графен [2], но в основном графен и производный оксид графена [3], часто используются в качестве новых инструментов для борьбы с раком. Графен, с его многочисленными исключительными свойствами, имеет широкий спектр применений в различных областях, как было описано рядом исследовательских групп [4,5,6,7,8,9]. Графен, как одиночный атомный слой графита, был первым доступным двумерным кристаллом с большой площадью поверхности и делокализованными π-электронами, гидрофобным, липофильным [10] и хорошим проводником электричества и тепла [3,11,12 ].Окисленный графен, т.е. оксид графена (GO), может быть получен в больших количествах [13] путем окисления и расслоения объемного графита, например, с помощью модифицированного метода Хаммерса [14]. GO, который покрыт кислородными функциональными группами, является гидрофильным, а кислородные функциональные группы обеспечивают его реакционную способность и ковалентную модификацию поверхности. GO содержит оксигенированные алифатические области (–OH) и (–O–), расположенные выше и ниже каждого слоя, в то время как карбоксильные группы обычно расположены на краях листов GO.Гидрофильность ГО является полезным свойством в биологических приложениях, и сообщалось о множестве различных функционализаций с различными молекулами [15,16] для использования модифицированного ГО в биосенсорах, носителях лекарств или тканевой инженерии. Однако не следует забывать о возможной цитотоксичности ГО, которая упоминалась in vivo [17] и несколько больше в приложениях in vitro. Описаны факторы, влияющие на цитотоксические эффекты ГО, такие как латеральный размер, толщина нанослоев, функциональная группа и особенно концентрация [7,18,19,20].В частности, гидрофильный характер GO позволяет производить надежные, высокочувствительные и сверхбыстрые целевые платформы. Возможность изменения размера нанолистов GO от нескольких микрон до менее 100 нм также важна для получения нанолистов GO, которые достаточно малы, чтобы проникать через биологические барьеры, в том числе барьеры опухолевой ткани [18,21]. Этот тип наночастиц также позволяет сочетать диагностику с терапией (тераностикой) [22,23,24]. Фототермическая терапия с комбинацией лечебных процедур стала результатом функционализации ГО с помощью неорганических наночастиц, других наноструктур или полимеров для создания композитов [25,26].Самый распространенный и простой метод функционализации — амидирование. Shan et al. приготовили модифицированный GO с поли-L-лизином (PLL) через ковалентную амидную связь. Та же самая связь используется для функционализации золотого электрода ГО, функционализированного ФАПЧ [27]. Группы карбоновых кислот (–COOH) ГО могут взаимодействовать с аминогруппами наноструктур или наночастиц, которые присоединяются, чтобы создать амидные связи. Этот процесс происходит в две стадии в присутствии активаторов, а именно, либо 1-этил-3- (3-диметиламинопропил) карбодиимид (EDC), либо N-этил-N ‘- (3-диметиламинопропил) карбодиимид гидрохлорид (EDAC) и N –Гидроксисукцинимид (NHS) [27,28,29].Первый этап включает активацию карбоксильной группы ГО и образование стабильного активного сложного эфира. Вторая стадия — это реакция между активным сложным эфиром и аминогруппой на прикрепляющейся наноструктуре с образованием ковалентной связи между GO и наночастицей [30]. Другой важный метод модификации — этерификация. Реакция этерификации включает реакцию между группами –COOH, локализованными на краях GO, и функциональными группами с концевыми гидроксильными группами CH 2 . Например, прививку поли (3-гексилтиофена) (P3HT) на поверхность GO проводили путем этерификации [31].Ключевая роль модификатора, связанного с GO, заключается в его селективной транспортировке к клетке или ткани-мишени, где соединение может быть предпочтительно введено. Сферические наночастицы магнетита (MNps), полученные методом соосаждения с солями трехвалентного и двухвалентного железа в щелочной водной среде [32], имеют большой потенциал для использования в онкологической медицине благодаря своей биосовместимости и легкости синтеза. Их можно легко настроить и использовать для конкретных приложений [30,33,34,35]. MNps были покрыты аминокислотным полимером поли-L-лизином для улучшения их биосовместимости [36,37].Важность аминокислоты L-лизина заключается в том, что она помогает в производстве антител, используется многими гормонами и ферментами и необходима для восстановления тканей. Биоконъюгация наночастиц с белками критически важна для ряда применений. в медико-биологических исследованиях, диагностике и терапии [38]. Молекулы антител обладают рядом функциональных групп, подходящих для целей модификации или конъюгации. Моноклональные антитела (MAb), антитела, вырабатываемые идентичными иммунными клетками, которые все являются клонами уникальной родительской клетки, способны специфически реагировать с антигенами, ассоциированными с опухолью [39].Следовательно, присутствие MAb может увеличить целевые свойства платформ оксида графена. В частности, MAb M75 распознает линейный эпитопный участок фермента карбоангидразы IX (CA IX). Этот фермент часто экспрессируется в карциномах человека из-за его сильной индукции гипоксией опухоли и отсутствует в соответствующей нормальной ткани [40,41]. CA IX способствует выживанию раковых клеток во враждебном микроокружении опухоли и способствует их склонности к метастазам. Из-за своей эпитопной специфичности к CA IX, MAb M75 не проявляет перекрестной реактивности с другими известными членами семейства карбоангидразы, у которых отсутствуют подобные участки [42].Меченый антителами ГО использовался для обнаружения рака или, в более общем смысле, для обнаружения белков. Комплекс антитело-ГО использовали в качестве распознающего элемента, что позволило быстро провести скрининг афлатоксина B 1 (AFB 1 ) в системе с боковым потоком; моноклональное антитело против AFB 1 было получено Yu et al. [43]. Другое исследование продемонстрировало модификацию углеродных электродов с трафаретной печатью путем сборки оксида графена для получения электрохимических иммуносенсоров с иммобилизованными антителами, специфичными к муцину 1, который является хорошо известным опухолевым маркером для различных злокачественных опухолей [44].Усилия по обнаружению или нацеливанию на CA IX были в основном сосредоточены на разработке разнообразных наночастиц, декорированных ингибиторами карбоновых ангидраз с модификациями, придающими селективность по отношению к CA IX и / или другим изоформам клеточной поверхности [45,46,47,48]. Эти подходы требуют доступа к активному сайту фермента, тогда как антитела могут связывать CA IX даже в неактивном состоянии. На этом этапе исследования проводились тесты in vitro. Здесь мы демонстрируем, что наш подход, основанный на платформах GO, украшенных MNps и M75 MAb, может избирательно связывать клетки, экспрессирующие CA IX, и, таким образом, может представлять собой многообещающий инструмент для визуализации рака.

В этой работе сообщается о создании нового типа платформы на основе ГО, содержащей магнитные наночастицы и моноклональные антитела, с целью создания наноносителей, способных воздействовать на раковые клетки, вызывающие гипоксию. Комбинация MAb, специфичных для CA IX, и GO в качестве наноносителя в сочетании с магнитными наночастицами является новым и оригинальным подходом к нацеливанию на CA IX-положительные раковые клетки. Использовали магнитные наночастицы, иммобилизованные MAb M75, и связывали их с платформой GO.Эти антитела, специфичные к индуцированному гипоксией внеклеточному ферменту CA IX, являются одними из лучших внутренних маркеров. Топология изготовленной платформы GO была исследована с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) и атомно-силовой микроскопии (АСМ), а ее структура и свойства поверхности были подтверждены с помощью рентгеновской фотоэлектронной спектроскопии (XPS). АСМ — подходящий метод быстрого скрининга прикрепленных наночастиц. В результате функционализация ГО с помощью модифицированных поли-L-лизином магнитных наночастиц, функционализированных МАт, была подтверждена с помощью АСМ.Кроме того, на функционализированных платформах GO были выполнены тесты ТЕА, иммунофлуоресценции, жизнеспособности и проточной цитометрии.

3. Обсуждение

Последние технологические достижения и новые возможности применения сенсоров на основе графена в биомедицине открывают новые возможности для обнаружения рака. Намерение состояло в том, чтобы использовать оксид графена (GO) в качестве платформы для разработки нового типа многообещающего инструмента для визуализации рака. С целью такой функционализации мы подготовили платформы GO с использованием модифицированной реакции Хаммера и Оффермана.Например, для получения нанографена использовали модифицированный метод Хаммера, который после ПЭГилирования использовали для доставки нерастворимого аналога камптотецина (СРТ), SN38 [19,57]. Платформы оксида графена были модифицированы магнитными наночастицами и моноклональными антителами. Для этого исследования необходимо было приготовить платформы GO в виде монослоев с размером частиц менее 500 нм для дальнейшей функционализации. Seabra et al. рассмотрели поведение ГО с точки зрения цитотоксичности [19].Они описали взаимосвязь с его толщиной (количеством слоев), размером, концентрацией, временем воздействия, методом функционализации, а также это зависит от линии клеток, на которой исследуется токсичность ГО. Чаще упоминается сравнение графена, ГО и восстановленного ГО, когда ГО имеет наименьшую токсичность из-за его гидрофильного характера, обусловленного функциональными группами [17,19]. Точно так же GO с поверхностью, содержащей группы COOH и группы NH 2 [58,59], показали меньшую токсичность, чем нефункционализированные [19,57].Однако явление токсичности GO до сих пор недостаточно изучено, и поэтому утверждения не могут быть обобщены. По этой причине мы провели тесты на цитотоксичность на клеточной линии B16-F0 после функционализации без токсичности. Модификация ГО с помощью магнитных наночастиц и моноклональных антител, специфичных к маркеру CA IX, — это новый подход и комбинация наноматериалов и антител. Специфичность этих моноклональных антител к опухолевым клеткам играет важную роль в получении наночастиц, модифицированных магнитными наночастицами и моноклональными антителами.Различия между клетками B16 CA IX и неоклетками без фермента CA IX подтверждают специфическое связывание функционализированной платформы GO с клетками-маркерами рака. Нацеливание функционализированных наночастиц GO на опухолевые клетки на этом этапе исследования представляет собой видение возможностей визуализации раковых клеток in vitro на данный момент и in vivo на более поздних этапах исследований. Обоснование использования CA IX в качестве мишени для визуализации рака вытекает из растет число исследований, демонстрирующих, что паттерн его экспрессии тесно связан с раком.Мета-анализ исследований, охватывающих более 24000 пациентов, выявил сильную значимую связь между экспрессией CA IX, оцененной с помощью иммуногистохимии, и всеми конечными точками: общей выживаемостью, выживаемостью без болезни, локально-региональным контролем, выживаемостью при конкретном заболевании, выживаемостью без метастазов и прогрессированием. -свободное выживание [60]. Анализ подгрупп показал сходные ассоциации в большинстве участков и типов опухолей. Результаты показали, что пациенты с опухолями с высокой экспрессией CA IX имеют более высокий риск прогрессирования заболевания и развития метастазов, независимо от типа опухоли или локализации.Фактически, транскрипция CA IX сильно индуцируется гипоксией, и этот белок также функционально участвует в прогрессировании рака из-за регуляции pH, контроля клеточной адгезии и инвазии, облегчения гликолитического метаболизма и метастатического распространения, что подтверждается данными по подавлению CA IX. в различных моделях рака [61]. Поскольку гипоксия и ацидоз представляют собой стрессы микросреды, связанные с агрессивным раком, визуализация областей, в которых раковые клетки подвергаются воздействию и адаптированы к этим стрессам, дает возможность прогнозировать прогноз и результат лечения.В этом контексте имеет смысл использовать CA IX для нацеливания на рак посредством обнаружения гипоксических / кислых опухолей. Помимо классических способов визуализации опухолей с помощью CA IX с помощью радиоактивно меченных антител, в литературе описаны несколько подходов, основанных на наночастицах. За исключением одного исследования с использованием наночастиц диоксида кремния, покрытых анти-CA IX MAb M75 [62], во всех других исследованиях использовались ингибиторы карбоангидразы. Поскольку ингибиторы CA в основном действуют в отношении различных изоформ CA из-за сходства в их активных центрах, селективность к CA IX обеспечивалась различными носителями [45], наночастицами золота [46], pH-чувствительными наночастицами [47], фотодинамическими наноингибиторами на полимерной основе. частицы [48].Однако подходы с использованием ингибиторов принципиально отличаются от подхода с использованием моноклональных антител. Ожидается, что ингибиторы будут получать доступ и связываться с каталитическим сайтом ферментативно активной CA IX, тогда как MAb, направленное на N-концевую область CA IX, такую ​​как M75, может получать доступ и связывать CA IX вне каталитического сайта и, таким образом, связывание не зависит от активности фермента и является высокоспецифичным. Это может быть особенно важно в опухолевых тканях, где CA IX присутствует на поверхности остро гипоксических клеток (из-за индукции гипоксии), а также постгипоксических и / или кислых клеток (из-за высокой стабильности белка), которые уже подверглись адаптации. к гипоксии и ацидозу и обладают агрессивными свойствами, тем самым расширяя клинически значимую область нацеливания на опухоль.Представленные здесь данные говорят о том, что этот подход жизнеспособен и заслуживает дальнейшего развития.

4. Экспериментальная часть

4.1. Материалы
Графит (размер частиц 5 мкм, SGL Carbon GmbH, Мейтинген, Германия), 1-этил-3- (3-диметиламинопропил) карбодиимид (EDC, 98 +%, ACROS Organics, часть Thermo Fisher Scientific, Geel, Бельгия), сульфо-NHS ​​(N-гидроксисульфосукцинимид, 98 +%, ACROS Organics, входящая в состав Thermo Fisher Scientific, Гил, Бельгия), таблетки с фосфатно-солевым буфером (PBS) (100 мл, биотехнологический класс, VWR ™, часть Avantor, Бриджпорт, Нью-Джерси, США) и TWEEN ® 20 (Sigma-Aldrich Co., Сент-Луис, Миссури, США). Все химические вещества, использованные для окисления графита, имели чистоту 97% аналитической чистоты и использовались в том виде, в котором они были получены. Магнитные наночастицы, покрытые поли-L-лизином (MNps), с гидродинамическим размером 27-33 нм, и магнитные наночастицы, покрытые поли-L-лизином и конъюгированные с моноклональным антителом M75 (MNps-MAb и MNps-EDC-MAb) были подготовлены и синтезированы, как описано в предыдущем отчете [37].
4.2. Приготовление оксида графена
Оксид графена (GO) получали из графита модифицированным методом Хаммерса и Оффемана [14].Отшелушивание выполняли путем многократных повторений смешивания, обработки ультразвуком и центрифугирования на центрифуге Sigma 3–30 K (Sigma Centrifuges, Newtown, UK) при 10 000 × g в течение 40 мин. Приготовленный раствор имел концентрацию GO приблизительно 10 мг / мл.
4.3. Модификация поверхности оксида графена магнитными наночастицами

Раствор PBS и TWEEN ® 20 (Sigma-Aldrich Co., Сент-Луис, Миссури, США) смешивали с раствором GO. К раствору GO добавляли раствор EDC и сульфо-NHS ​​в массовом соотношении 1: 1.В реакционную смесь по каплям добавляли суспензию магнитных наночастиц, покрытых поли-L-лизином. Весовое соотношение ГО к МНП составляло 3: 1. Реакционную смесь помещали в ультразвуковую баню на два часа. Платформы GO, модифицированные MNps, разделяли в реакционном сосуде с помощью магнита и несколько раз очищали деионизированной водой. Подготовленная платформа получила обозначение GO-MNps.

4.4. Синтез GO-MNps-MAb и GO-MNps-EDC-MAb
Для модификации GO использовали два вида MNps, конъюгированных с MAb.Первый был получен реакцией со связывающим агентом, EDC, и меченым MNps-EDC-MAb, второй, без связывающего агента EDC, был обозначен MNps-MAb. Подробная процедура приготовления была описана в предыдущем сообщении [37]. Вкратце, наночастицы магнетита осаждались из водного раствора ионов Fe2 + и Fe3 + при постепенном добавлении гидроксида аммония. Образовавшийся осадок промывали сверхчистой водой и перемешивали погруженным зондом ультразвукового устройства (Model 450, BRANSON, Danbury, CT, USA) в течение 5 мин при мощности 280 Вт на водяной бане.Затем суспензию наночастиц смешивали с раствором PLL (0,1%) при теоретическом массовом соотношении PLL: Fe 3 O 4 , равном 1, и снова обрабатывали ультразвуком на ледяной бане. Затем образцы ультрацентрифугировали при 44000 g в течение 2 ч при 4 ° C. Осадок осторожно повторно диспергировали в сверхчистой воде и собирали для образования образца PLL-MNps с концентрациями магнетита и PLL 18,5 и 3,6 мг / мл соответственно. Затем модифицированные наночастицы инкубировали с добавленным раствором MAb, с EDC и без него, в PBS.После инкубации в течение 24 ч наночастицы центрифугировали и промывали, чтобы убедиться, что несвязанные MAb были удалены. Позднее частицы GO были модифицированы обоими типами MNps, как описано в разделе 2.3, и образцы были помечены как GO-MNps-MAb и GO-MNps-EDC-MAb.
4,5. Методы характеризации
АСМ-изображения платформ GO были получены с помощью микроскопа MultiMode 8 (Bruker, Billerica, MA, USA). Измерения проводились в режиме ScanAsyst на воздухе. Наконечники АСМ, используемые для измерений, представляли собой зонды ScanAsyst-Air (Bruker, Billerica, MA, USA).Измерения XPS выполняли с использованием системы XPS Thermo Scientific K-Alpha (Thermo Fisher Scientific, Лафборо, Великобритания), снабженной микрофокусированным монохроматическим источником рентгеновского излучения Al Kα (1486,6 эВ). Дзета-потенциал (Малверн, Хьюстон, Техас, США) измеряли в Zetasizer Nano-ZS для очищенного G0 в диапазоне pH от 2 до 11. pH регулировали раствором КОН и контролировали с помощью BENCH METER pH / мВ / температуры (Hanna Instruments Czech sro, Прага, Чехия). ПЭМ-микрофотографии платформ были получены с помощью просвечивающего электронного микроскопа Tecnai G2 Spirit Twin 12 (FEI, Прага, Чехия).Небольшая капля (2 мкл) суспензии, содержащей магнитные наночастицы (концентрация около 5 мг / мл) или платформы с наночастицами и / или без них (концентрация около 1 мг / мл), была нанесена на промышленный углеродный слой с покрытием. медную сетку для ПЭМ и оставили для уравновешивания (8 мин). Затем избыток раствора удаляли, касаясь нижней частью сетки небольшого кусочка фильтровальной бумаги (метод быстрого высыхания, который сводит к минимуму возможные артефакты высыхания). Высушенные образцы наблюдали в просвечивающем электронном микроскопе с использованием изображения в светлом поле при 120 кВ.Кроме того, магнитные наночастицы были также проанализированы с помощью энергодисперсионного анализа рентгеновских лучей (EDX, чтобы подтвердить их элементный состав) и с помощью дифракции электронов на выбранной площади (SAED, чтобы подтвердить их ожидаемую кристаллическую структуру магнетита). Картина дифракции SAED сравнивалась с рассчитанной картиной дифракции рентгеновских лучей на порошке (PXRD) магнетита, как описано в предыдущем отчете [63].
4.6. Анализ жизнеспособности клеток

Оценку цитотоксичности или цитостатического эффекта модифицированных GO-MNps-MAb и GO-MNps-EDC-MAb проводили на клетках меланомы мыши B16, перманентно трансфицированных полноразмерной кДНК CA IX (B16 CA IX), и ложно-трансфицированные клетки B16 ‑ neo.Использовали анализ жизнеспособности CellTiter-Blue (CTB) (Promega, Мэдисон, Висконсин, США). Тестирование проводилось в соответствии с инструкциями производителя. Клетки инкубировали в 96-луночных планшетах в течение 24 ч при 37 ° C. Измерения проводили сразу после создания культуры клеток, и следующие значения были измерены через 24, 48, 72 и 120 часов. Значение флуоресценции CTB контрольных клеток, измеренное в начале эксперимента, было установлено равным 1. Значения CTB обработанных клеток нормализовали к их необработанному контролю.Каждое измерение выполняли после прямого добавления 20 мкл раствора CellTiter-Blue в лунки и инкубации в течение 4 ч при 37 ° C. Флуоресценцию регистрировали с помощью набора фильтров 530 нм / 590 нм (возбуждение / испускание) с использованием считывающего устройства для микропланшетов Synergy HT (Bio-Tek, Winooski, VT, USA). Образцы были проанализированы в трех экземплярах для каждой концентрации GO-MNps-MAb и GO-MNps-EDC-MAb.

4.7. Иммунофлуоресцентный анализ

Клеточную линию меланомы мыши B16 с (B16 CA IX) и без (B16 ‑ neo) CA IX высевали (300 000 клеток на чашку Петри) на стерильные покровные стекла за 24 часа до эксперимента.Живые клетки инкубировали при 4 ° C в течение 30 минут с GO-MNps-MAb и GO-MNps-EDC-MAb, разведенными в культуральной среде, чтобы охарактеризовать поглощение MAb внеклеточным ферментом CA IX. Затем клетки промывали для удаления несвязавшихся платформ и переносили для инкубации при 37 ° C в течение 3 часов, чтобы обеспечить эндоцитоз. Промывку повторяли снова для удаления несвязавшихся наночастиц ГО и антител. Присутствие конъюгированного M75 визуализировали в клетках, фиксированных в ледяном метаноле при -20 ° C в течение 5 минут, используя вторичное антитело, конъюгированное против мыши Alexa Fluor ® 488 (Thermo Fisher Scientific, Лафборо, Великобритания).Наконец, клетки помещали на предметные стекла и анализировали с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) на приборе Zeiss LSM 510 Meta (Гейдельберг, Германия).

4.8. Анализ проточной цитометрии

Клетки почек собак Madin-Darby с CAIX (MDCK CAIX) и без фермента (MDCK neo) использовали для цитометрического анализа функционализированной платформы GO с помощью магнитных наночастиц и конъюгированных антител M75. Ячейки были установлены на 35000 / см2. Образцы платформы GO предварительно инкубировали с антителом против мыши Alexa Fluor ® 488, разведенным 1: 1000, 1 час при 37 ° C на орбитальной мешалке.После того, как клетки прилипли к поверхности планшета, в культуральную среду добавляли предварительно инкубированные образцы платформ GO 1: 4. Затем клетки инкубировали в течение ночи при 37 ° C. Впоследствии питательные среды были удалены; клетки промывали трижды раствором PBS и высвобождали трипсином. Затем суспензии клеток промывали Verzene (центрифугирование клеток 5 мин при 400 g) и анализировали с помощью проточной цитометрии Guava EasyCyte plus (Millipore, Берлингтон, Массачусетс, США) с использованием фильтра 525/30 нм.Данные оценивали с помощью программного обеспечения Cytosoft 5.2 (Millipore, Берлингтон, Массачусетс, США) с Guava ExpressPro.

Майкл П. Марки | people.wright.edu

Рецензент:
Секция изучения провокационных вопросов NIH (2018)
Grantové agentura České republiky (Чешский научный фонд) (2011, 2021)

Journal Reviewer:
Cancers (2021)
International Journal of Biological Sciences (2021)
Cytogenetic and Genome Research (2020)
International Journal of Molecular Science (2020)
Materials (2020)
Gene (2020)
Gene (2019)
Клеточная физиология и биохимия (2018)
Текущие цели противораковых препаратов (2018)
Гены (2017)
Клеточная физиология и биохимия (2016)
Oncotarget (2016)
PLoS ONE (2016)
Африканский журнал биотехнологии (2015, 2016)
Онкологические биомаркеры (2014)
Онкогенные мишени и терапия (2013)
Канцерогенез (2013)
FEBS Journal (2013)
Journal of Cell Biology (2013)
Обзоры апоптоза (2011)
Cell Cycle (2011)
Physiological Genomics (2011)

Комитеты:
Приемная комиссия BMS (2020-2022)
Номинационный комитет BMS (2019-2020, председатель)
WSU Graduate Council, представитель факультета BSOM (2014-2018)
Приемная комиссия BMS (2014-2015, председатель 2016)
Dayton Руководящий комитет по биорепозиториям (2014-2016)
Подкомитет по членству в аспирантском совете Медицинской школы Буншофт (2014-2018)
Комитет по обзору программ естественнонаучного и математического колледжа (2014-2015)
BMB Graduate Education Committee (GEC) (2014)
BMB MS Программный комитет по оценке студентов, председатель (2013 г.)
Комитет по назначениям BMS (2013 г.)
Комитет по назначениям BMS, председатель (2014 г.)
Празднование исследований, стипендий и творческой деятельности, председатель, Сессия 4 (2012 г.)
Комитет по исследованиям BSOM (2010 г.) -2013)
Руководящий комитет Института неврологии Государственного университета Райта и Premier Health Partners (2010)
Руководящий комитет комплексной неврологии (2008-2010)

Информационно-пропагандистская работа:
Судья, Международная научно-техническая ярмарка Intel® (ISEF), Научно-техническая ярмарка округа Монтгомери (2011-2019)
Участник, День «Возьми наших сыновей и дочерей на работу» (2016–2018)
Экскурсия по лаборатории Американского онкологического общества Событие (2015)
«Час кода», Публичная библиотека Ливана (2015)
«Полное свидетельство эволюции, сокращенное», Церковь Гармонии UU, Мейсон, Огайо (2014)
Судья, Св.Ярмарка науки в католической школе Питера, Хубер-Хайтс, Огайо (2008, 2011)
Судья, 3-й ежегодный День науки и техники округа Грин (2008)

Предприниматель:
Соучредитель ООО «Молекулярная онкологическая диагностика» (2013-2017)

% PDF-1.

Оставить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.