Гк ст 15 п 2: ГК РФ Статья 15. Возмещение убытков / КонсультантПлюс

Содержание

Ст. 15 ГК РФ с Комментариями 2020-2021 года (новая редакция с последними изменениями)

1. Лицо, право которого нарушено, может требовать полного возмещения причиненных ему убытков, если законом или договором не предусмотрено возмещение убытков в меньшем размере.

2. Под убытками понимаются расходы, которые лицо, чье право нарушено, произвело или должно будет произвести для восстановления нарушенного права, утрата или повреждение его имущества (реальный ущерб), а также неполученные доходы, которые это лицо получило бы при обычных условиях гражданского оборота, если бы его право не было нарушено (упущенная выгода).

Если лицо, нарушившее право, получило вследствие этого доходы, лицо, право которого нарушено, вправе требовать возмещения наряду с другими убытками упущенной выгоды в размере не меньшем, чем такие доходы.

Комментарий к Ст. 15 ГК РФ

1. В комментируемой статье понятие убытков связывается с правонарушением и характеризуется как категория юридической ответственности. Следует, однако, иметь в виду, что чрезвычайно широко распространено (в том числе и в законодательстве) и иное понимание убытков. Нередко под убытками разумеются неблагоприятные последствия (чего-либо) в имущественной сфере субъекта, выражающиеся в умалении этой сферы (например, утрата имущества), необходимости нести расходы и (или) сохранении этой имущественной сферы в неизменном виде, хотя она должна была пополниться (расшириться). Причем возложение обязанности возместить убытки в таких случаях нельзя квалифицировать как привлечение к гражданско-правовой ответственности. По-видимому, это мера защиты. Так, в случае принятия Российской Федерацией закона, прекращающего право собственности, убытки, причиненные собственнику в результате принятия этого акта, в том числе стоимость имущества, возмещаются государством (ст. 306 ГК). При изъятии у собственника жилого помещения в связи с изъятием земельного участка для государственных или муниципальных нужд ему выплачивается рыночная стоимость жилого помещения, а также возмещаются все убытки (в том числе те, которые он несет в связи с изменением места проживания, переездом, оформлением права собственности на другое жилое помещение и т.п., и, кроме того, упущенная выгода) (ст. 239 ГК, ст. 32 ЖК).

Независимо от того, взыскиваются ли убытки как гражданско-правовая санкция за правонарушение (как говорится в рассматриваемой статье) или взыскание убытков производится в качестве применения меры защиты (при отсутствии правонарушения), в соответствующих случаях действуют правила комментируемой статьи 15 ГК РФ о понятии убытков и о принципе полного возмещения убытков (об этом далее).

2. Взыскание убытков как санкция за правонарушение или как мера защиты является универсальным правовым средством. Оно может производиться в целях защиты любого субъективного гражданского права (вещного, обязательственного, исключительного) независимо от того, есть ли на этот счет указания в специальных нормах (о собственности, обязательствах и пр.).

Кроме того, универсальность рассматриваемого средства проявляется и в том, что убытки могут взыскиваться одновременно с взысканием неустойки (по общему правилу — в части, не покрытой неустойкой), процентов за пользование чужими денежными средствами (в части, не покрытой процентами) (см. ст. ст. 394, 395 ГК и комментарий к ним) и т.д. Вообще убытки в ряде случаев взыскиваются наряду с применением иных гражданско-правовых санкций. И это, кстати, опровергает широко распространившееся мнение о существовании принципа недопустимости применения двух (и более) санкций за одно правонарушение. В гражданском праве никогда такого принципа не было и нет.

3. В законе говорится о взыскании убытков, возмещении вреда или ущерба, компенсации расходов или издержек и т.п. Вопрос о соотношении соответствующих терминов (и понятий) остается предметом дискуссий уже несколько десятилетий . Анализ гражданско-правовых норм свидетельствует о том, что в некоторых случаях эти термины используются как синонимы. Так, в ст. 796 ГК РФ речь идет о возмещении ущерба, причиненного в случае утраты, недостачи или повреждения (порчи) груза либо багажа. Понятно, что речь идет об убытках (реальном ущербе). В других случаях указанными терминами обозначаются разные понятия. Например, на лицо, ответственное за причинение вреда, может быть возложена обязанность «возместить вред в натуре (предоставить вещь того же рода и качества, исправить поврежденную вещь и т.п.) или возместить причиненные убытки (пункт 2 статьи 15)» (ст. 1082 ГК).

———————————
Об этом см., например: Садиков О.Н. Убытки в гражданском праве Российской Федерации. М.: Статут, 2009. С. 9, 50 — 57.

Таким образом, всякий раз необходимо выяснять истинный смысл употребления того или иного термина, если, конечно, это имеет какое-либо правовое значение .

———————————

КонсультантПлюс: примечание.

Монография М.И. Брагинского, В.В. Витрянского «Договорное право. Общие положения» (книга 1) включена в информационный банк согласно публикации — Статут, 2001 (3-е издание, стереотипное).

Брагинский М.И., Витрянский В.В. Договорное право: общие положения. М.: Статут, 1997. С. 515.

4. Гражданское законодательство исходит из того, что убытки должны быть возмещены в полном объеме. Таково общее правило, сформулированное в комментируемой статье 15 ГК в развитие одного из основных начал гражданского законодательства: гражданское законодательство основывается в том числе на необходимости обеспечения восстановления нарушенных прав (см. ст. 1 ГК и комментарий к ней). Взыскание убытков в большем объеме, нежели пострадала имущественная сфера потерпевшего, приводило бы к неосновательному обогащению . Напротив, взыскание убытков в меньшем размере приводит к тому, что нарушенные права восстанавливаются лишь частично.

Бесплатная юридическая консультация по телефонам:

———————————
См., например, Определение Верховного Суда РФ от 7 мая 2009 г. N КАС 09-184.

Сказанное отнюдь не означает, что гражданско-правовые санкции обладают компенсационной природой (ныне это чрезвычайно популярная точка зрения). Действительно, существует общее правило, в соответствии с которым нарушенное право должно быть восстановлено (потери компенсированы и т.д.). Применительно к убыткам справедливо отмечается существование принципа полного их возмещения. Однако из этого правила есть множество исключений, причем как в ту, так и в другую сторону. Например, возможно взыскание неустойки сверх убытков (субъект получает больше того, что потерял, см. ст. 394 ГК и комментарий к ней). В рассматриваемой статье 15 Гражданского кодекса РФ предусмотрена возможность установления законом или договором правила, в соответствии с которым убытки взыскиваются не в полном объеме, но в меньшем размере.

Установление в законе ограничений при взыскании убытков достаточно широко распространено (как в случаях, когда взыскание производится в виде санкции, так и в ситуациях, когда оно происходит в качестве применения меры защиты). Только в ГК РФ соответствующих указаний несколько десятков . Например, заказчик по договору возмездного оказания услуг может отказаться от исполнения договора при условии оплаты исполнителю фактически понесенных им расходов (п. 1 ст. 782 ГК). В случае утраты или недостачи груза либо багажа перевозчик возмещает ущерб в размере стоимости утраченного или недостающего груза либо багажа (п. 2 ст. 796 ГК РФ).

———————————
Садиков О.Н. Указ. соч. С. 135.

Встречаются и ограничения иного рода. Так, ст. 717 ГК РФ устанавливает максимальный предел возмещения убытков в случае одностороннего отказа заказчика от исполнения договора подряда. Так, подрядчик обратился в арбитражный суд с иском о взыскании с заказчика убытков, возникших в результате отказа последнего от исполнения договора строительного подряда, в размере разницы между договорной ценой и суммой, выплаченной за выполненную работу. Суд первой инстанции удовлетворил иск в полной сумме со ссылкой на ст. 717 ГК РФ, согласно которой в случае отказа заказчика от договора он обязан возместить подрядчику убытки в указанном в этой статье размере. Суд кассационной инстанции решение отменил и передал дело на новое рассмотрение по следующим основаниям. Заказчик до истечения срока действия договора и сдачи ему результата работы в порядке, установленном ст. 717 ГК РФ, отказался от исполнения договора, известив об этом подрядчика. В соответствии с п. 1 ст. 15 ГК РФ причиненный ущерб возмещается полностью, если законом или договором не предусмотрено возмещение убытков в меньшем размере. Статьей 717 ГК РФ определено, что помимо уплаты подрядчику части установленной договором цены пропорционально объему работы, выполненной до получения извещения об отказе заказчика от исполнения договора, заказчик обязан возместить убытки, причиненные прекращением договора подряда, в пределах разницы между ценой, определенной за всю работу, и частью цены, выплаченной за выполненную работу. Данная норма не содержит исключения из общего правила возмещения убытков и не освобождает истца от обязанности доказывания возникших у него убытков, а лишь ограничивает размер возмещения в случае, если фактический ущерб превышает установленный законом максимальный предел .

———————————
Информационное письмо Президиума ВАС РФ от 24 января 2000 г. N 51 «Обзор практики разрешения споров по договору строительного подряда» (п. 19).

Допустимость установления ограниченной ответственности договором есть одно из проявлений принципа свободы договора (см. ст. ст. 1, 421 ГК и комментарий к ним). Вместе с тем для усмотрения сторон существуют некие пределы, устанавливаемые законом. Наиболее общее правило включено в п. 4 ст. 401 ГК РФ: заключенное заранее соглашение об устранении или ограничении ответственности за умышленное нарушение обязательства ничтожно. Недействительно также заранее заключенное соглашение. После нарушения, в том числе умышленного, ограничить размер ответственности, по-видимому, все же можно (в частности, посредством достижения мирового соглашения).

С целью защитить слабую сторону в п. 2 ст. 400 ГК РФ указывается на ничтожность соглашения об ограничении ответственности должника по договору присоединения или по иному договору, в котором кредитором является гражданин, выступающий в качестве потребителя.

Существуют и иные нормы, ограничивающие усмотрение сторон, предусмотренные ГК РФ (п. 3 ст. 75, п. 2 ст. 461, п. 4 ст. 723, п. 2 ст. 793, ст. 1046), а также иными актами (в частности, транспортного законодательства) .

———————————
См. об этом: Садиков О.Н. Указ. соч. С. 144 — 147.

Ограничение ответственности может происходить также в результате установления исключительной неустойки (см. статью 394 ГК РФ и комментарий к ней).

Соглашение об ограничении размера или состава взыскиваемых убытков может быть достигнуто как до их появления, так и после того, как понесены убытки.

Законом или договором можно предусмотреть возмещение убытков в меньшем размере, но нельзя установить, что возможно взыскание большей суммы, нежели понесенные убытки, или указать на недопустимость взыскания убытков.

5. Как следует из п. 2 комментируемой статьи 15, согласно традиции убытки подразделяются на реальный ущерб и упущенную выгоду.

6. Реальный ущерб может выразиться в следующем.

Во-первых, в расходах, которые лицо произвело или должно будет произвести для восстановления права. Имеются в виду как те ситуации, когда право прекратилось, но может быть восстановлено, так и случаи, когда право продолжает существовать в деформированном виде. Например, передана вещь ненадлежащего качества и понесены (должны быть понесены) расходы на исправление недостатков.

При взыскании расходов, которые лицо должно будет понести для восстановления нарушенного права (будущих расходов), суды исходят из того, что необходимость таких расходов и их предполагаемый размер должны быть подтверждены обоснованным расчетом, доказательствами, в качестве которых могут быть представлены смета (калькуляция) затрат на устранение недостатков товаров, работ, услуг, договор, определяющий размер ответственности за нарушение обязательств, и т.п. .

———————————
Постановление Пленума Верховного Суда РФ N 6, Пленума ВАС РФ N 8 от 1 июля 1996 г. «О некоторых вопросах, связанных с применением части первой Гражданского кодекса Российской Федерации» (п. 10).

В состав реального ущерба входят также расходы на представительство в суде и юридические услуги, понесенные в связи с обращением к суду за защитой нарушенного права (другое дело, что законодательством установлен специальный порядок взыскания такого ущерба) .

———————————
Определения Конституционного Суда РФ от 20 февраля 2002 г. N 22-О «По жалобе открытого акционерного общества «Большевик» на нарушение конституционных прав и свобод положениями статей 15, 16 и 1069 Гражданского кодекса Российской Федерации», от 19 января 2010 г. N 88-О-О «Об отказе в принятии к рассмотрению жалобы гражданки Трофименко Зинаиды Ивановны на нарушение ее конституционных прав статьей 15 Гражданского кодекса Российской Федерации, частью первой статьи 98 и частью первой статьи 100 Гражданского процессуального кодекса Российской Федерации«; информационное письмо Президиума ВАС РФ от 5 декабря 2007 г. N 121 «Обзор судебной практики по вопросам, связанным с распределением между сторонами судебных расходов на оплату услуг адвокатов и иных лиц, выступающих в качестве представителей в арбитражных судах» (п. 1).

Во-вторых, реальный ущерб может быть выражен в утрате имущества (о «многоликости» понятия имущества см. ст. 128 ГК и комментарий к ней).

Под имуществом в этом случае понимаются прежде всего вещи. Убытки выражаются в гибели вещи (ее исчезновении), что приводит к умалению имущественной сферы. Утратой имущества следует считать также прекращение права, если оно не может быть восстановлено. Взысканные убытки в этих случаях представляют собой денежную сумму, компенсирующую данные потери. Так, товарищество обратилось в арбитражный суд с иском об обязании предприятия передать в натуре две трехкомнатные квартиры, как это предусмотрено договором на участие в строительстве. При разрешении спора в суде первой инстанции ответчик признал иск, но сослался на невозможность исполнения обязательства, так как весь дом заселен. В связи с этим истец изменил предмет иска и просил взыскать убытки в виде стоимости квартир. Суд первой инстанции удовлетворил иск, взыскав с ответчика денежную сумму, внесенную истцом в размере сметной стоимости квартир на момент заключения договора. Обжалуя решение, истец указал на то, что присужденная сумма в связи с инфляцией не позволяет ему приобрести две трехкомнатные квартиры и, следовательно, восстановить свои имущественные права, нарушенные ответчиком вследствие неисполнения им договорного обязательства. Постановлением апелляционной инстанции решение изменено: в пользу истца взыскана денежная сумма, необходимая для покупки двух трехкомнатных квартир, адекватных по качеству тем, которые подлежали передаче истцу в построенном сторонами доме, по ценам, действовавшим в день предъявления иска. При этом арбитражный суд исходил из следующего. Поскольку ответчик не выполнил свои обязательства по передаче квартир, истец вправе требовать в соответствии со ст. 15 ГК РФ возмещения убытков. При определении размера убытков следует руководствоваться п. 3 ст. 393 ГК РФ .

———————————
Информационное письмо Президиума ВАС РФ от 25 июля 2000 г. N 56 «Обзор практики разрешения арбитражными судами споров, связанных с договорами на участие в строительстве» (п. 10).

В-третьих, реальный ущерб может состоять в повреждении имущества. Речь идет только о вещах. Повреждение означает, что вещь утрачивает какие-либо свойства, понижаются ее качественные характеристики и т.д. Очевидно, что в этом случае говорится как о собственно повреждении вещи как следствии механического воздействия, так и о порче как результате развития органических процессов.

Умаление имущественной сферы потерпевшего состоит в сумме разницы между стоимостью вещи до ее повреждения и ее стоимостью после повреждения.

В судебной практике иногда понятие «ущерб» конкретизируется при применении норм процессуального законодательства. Так, Президиум ВАС РФ указал, что понятие «ущерб», использованное в ч. 2 ст. 90 АПК РФ, охватывает как ущерб, определяемый по правилам комментируемой статьи ГК РФ, так и неблагоприятные последствия, связанные с ущемлением чести, достоинства и деловой репутации .

———————————
Информационное письмо Президиума ВАС РФ от 13 августа 2004 г. N 83 «О некоторых вопросах, связанных с применением части 3 статьи 199 Арбитражного процессуального кодекса Российской Федерации» (п. 2).

7. Упущенная выгода (неполученные доходы) представляет собой то мыслимое (предполагаемое) пополнение имущественной сферы потерпевшего, которое произошло бы при нормальном развитии событий (при обычных условиях гражданского оборота), если бы право не было нарушено .

———————————
См., например: информационное письмо Президиума ВАС РФ от 21 января 2002 г. N 67 «Обзор практики разрешения споров, связанных с применением норм о договоре о залоге и иных обеспечительных сделках с ценными бумагами» (п. 10).

8. Правило, включенное в абз. 2 п. 2 комментируемой статьи 15 Гражданского кодекса, само по себе заслуживающее поддержки, «работоспособно» лишь в очень малом числе случаев. Хотя бы по той простой причине, что потерпевшему весьма непросто, а чаще всего невозможно доказать получение дохода правонарушителем, а тем более обосновать его размер.

9. При рассмотрении случаев, когда спор вытекает из налоговых или других финансовых и административных правоотношений, следует учитывать, что гражданское законодательство может быть применено к указанным правоотношениям только при условии, что это предусмотрено законодательством.

Судебная практика исходит из того, что граждане и юридические лица на основании правил комментируемой статьи и ст. 16 ГК РФ могут предъявлять требования о возмещении убытков, вызванных необоснованным взиманием экономических (финансовых) санкций налоговыми, таможенными органами, органами ценообразования и другими государственными органами .

10. Взыскание убытков с практической точки зрения — дело весьма трудоемкое. И дело не столько в сложности рассматриваемых материально-правовых норм, сколько в том, что они оперируют оценочными категориями. Следовательно, необходимо доказать факт наличия убытков, а также материального права на их возмещение, отсутствие процессуальных препятствий для взыскания убытков, их размер и т.д. .

———————————
См. об этом: Дегтярев С.Л. Возмещение убытков в гражданском и арбитражном процессе. 2-е изд. М., 2003 (1-е изд. — 2001).

Смотрите также ст. 393 ГК РФ и комментарий к ней.

Взыскание и возмещение упущенной выгоды: расчет, стоимость и практика

Упущенная выгода — это один убытков в гражданском праве. Рассматриваются особенности взыскания, доказывания и методики расчета в арбитражной практике

Читать статью

Комментарий к проекту постановления пленума ВАС РФ о последствиях расторжения договора

Читать статью

Комментарий к постановлению пленума ВАС РФ о возмещении убытков лицами, входящими в состав органов юридического лица.

Читать статью

О способах защиты бизнеса и активов, прав и интересов собственников (бенефициаров) и менеджмента. Возможные варианты структуры бизнеса и компаний, участвующих в бизнесе

Читать статью

Дробление бизнеса – одна из частных проблем и постоянная тема в судебной практике. Уход от налогов привлекал и привлекает внимание налоговых органов. Какие ошибки совершаются налогоплательщиками и могут ли они быть устранены? Читайте материал на сайте

Читать статью

Привлечение к ответственности бывших директоров, учредителей, участников обществ с ограниченной ответственностью (ООО). Условия, арбитражная практика по привлечению к ответственности, взыскания убытков

Читать статью

АСК НДС-2 – объект пристального внимания. Есть желание узнать, как она работает, есть ли способы ее обхода, либо варианты минимизации последствий ее применения. Поэтому мы разобрали некоторые моменты с ней связанные

Читать статью

Срывание корпоративной вуали – вариант привлечения контролирующих лиц к ответственности. Без процедуры банкротства. Подходит для думающих и хорошо считающих кредиторов в ситуации взыскания задолженности

Читать статью

Общество с ограниченной ответственностью с двумя участниками: сложности принятия решений и ведения хозяйственной деятельности общества при корпоративном конфликте, исключение участника, ликвидация общества. Равное и неравное распределение долей.

Читать статью

Структурирование бизнеса является одним из необходимых инструментов для бизнеса и его бенефициаров с целью создания условий налоговой безопасности при ведении предпринимательской деятельности. Подробнее на сайте юрфирмы «Ветров и партнеры».

Читать статью

ГРАЖДАНСКИЙ КОДЕКС РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Глава 59. Обязательства вследствие причинения вреда

ГРАЖДАНСКИЙ КОДЕКС РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ЧАСТЬ ВТОРАЯ

Раздел IV. Отдельные виды обязательств

Глава 59. Обязательства вследствие причинения вреда

§ 1. Общие положения о возмещении вреда

Статья 1064. Общие основания ответственности за причинение вреда

1. Вред, причиненный личности или имуществу гражданина, а также вред, причиненный имуществу юридического лица, подлежит возмещению в полном объеме лицом, причинившим вред.

Законом обязанность возмещения вреда может быть возложена на лицо, не являющееся причинителем вреда.

Законом или договором может быть установлена обязанность причинителя вреда выплатить потерпевшим компенсацию сверх возмещения вреда.

2. Лицо, причинившее вред, освобождается от возмещения вреда, если докажет, что вред причинен не по его вине. Законом может быть предусмотрено возмещение вреда и при отсутствии вины причинителя вреда.

3. Вред, причиненный правомерными действиями, подлежит возмещению в случаях, предусмотренных законом.

В возмещении вреда может быть отказано, если вред причинен по просьбе или с согласия потерпевшего, а действия причинителя вреда не нарушают нравственные принципы общества.

Статья 1065. Предупреждение причинения вреда

1. Опасность причинения вреда в будущем может явиться основанием к иску о запрещении деятельности, создающей такую опасность.

2. Если причиненный вред является последствием эксплуатации предприятия, сооружения либо иной производственной деятельности, которая продолжает причинять вред или угрожает новым вредом, суд вправе обязать ответчика, помимо возмещения вреда, приостановить или прекратить соответствующую деятельность.

Суд может отказать в иске о приостановлении либо прекращении соответствующей деятельности лишь в случае, если ее приостановление либо прекращение противоречит общественным интересам. Отказ в приостановлении либо прекращении такой деятельности не лишает потерпевших права на возмещение причиненного этой деятельностью вреда.

Статья 1066. Причинение вреда в состоянии необходимой обороны

Не подлежит возмещению вред, причиненный в состоянии необходимой обороны, если при этом не были превышены ее пределы.

Статья 1067. Причинение вреда в состоянии крайней необходимости

Вред, причиненный в состоянии крайней необходимости, то есть для устранения опасности, угрожающей самому причинителю вреда или другим лицам, если эта опасность при данных обстоятельствах не могла быть устранена иными средствами, должен быть возмещен лицом, причинившим вред.

Учитывая обстоятельства, при которых был причинен такой вред, суд может возложить обязанность его возмещения на третье лицо, в интересах которого действовал причинивший вред, либо освободить от возмещения вреда полностью или частично как это третье лицо, так и причинившего вред.

Статья 1068. Ответственность юридического лица или гражданина за вред, причиненный его работником

1. Юридическое лицо либо гражданин возмещает вред, причиненный его работником при исполнении трудовых (служебных, должностных) обязанностей.

Применительно к правилам, предусмотренным настоящей главой, работниками признаются граждане, выполняющие работу на основании трудового договора (контракта), а также граждане, выполняющие работу по гражданско-правовому договору, если при этом они действовали или должны были действовать по заданию соответствующего юридического лица или гражданина и под его контролем за безопасным ведением работ.

2. Хозяйственные товарищества и производственные кооперативы возмещают вред, причиненный их участниками (членами) при осуществлении последними предпринимательской, производственной или иной деятельности товарищества или кооператива.

Согласно части 4 статьи 1 Федерального закона от 30.04.2010 N 68-ФЗ возмещение вреда в соответствии с настоящей статьей не препятствует присуждению компенсации за нарушение права на судопроизводство в разумный срок или права на исполнение судебного акта в разумный срок.

Действие статьи 1069 распространяется также на случаи, когда причинение вреда потерпевшему имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

О применении статьи 1069 см. Определение Конституционного Суда РФ от 20.02.2002 N 22-О.

Статья 1069. Ответственность за вред, причиненный государственными органами, органами местного самоуправления, а также их должностными лицами

Вред, причиненный гражданину или юридическому лицу в результате незаконных действий (бездействия) государственных органов, органов местного самоуправления либо должностных лиц этих органов, в том числе в результате издания не соответствующего закону или иному правовому акту акта государственного органа или органа местного самоуправления, подлежит возмещению. Вред возмещается за счет соответственно казны Российской Федерации, казны субъекта Российской Федерации или казны муниципального образования.

Действие статьи 1070 распространяется также на случаи, когда причинение вреда потерпевшему имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1070. Ответственность за вред, причиненный незаконными действиями органов дознания, предварительного следствия, прокуратуры и суда

Постановлением Конституционного Суда РФ от 16.06.2009 N 9-П пункт 1 статьи 1070 во взаимосвязи с частью 3 статьи 27.5 КоАП РФ признан не противоречащим Конституции РФ, поскольку данное положение по своему конституционно-правовому смыслу в системе действующего правового регулирования не исключают возможность возмещения гражданам вреда, причиненного незаконным административным задержанием на срок не более 48 часов как мерой обеспечения производства по делу об административном правонарушении, влекущем в качестве одной из мер административного наказания административный арест, независимо от вины соответствующих органов публичной власти и их должностных лиц.

Пункт 1 статьи 1070 подлежит применению в соответствии с его конституционно-правовым смыслом, выявленным в Определении Конституционного Суда РФ от 04.12.2003 N 440-О.

1. Вред, причиненный гражданину в результате незаконного осуждения, незаконного привлечения к уголовной ответственности, незаконного применения в качестве меры пресечения заключения под стражу или подписки о невыезде, незаконного привлечения к административной ответственности в виде административного ареста, а также вред, причиненный юридическому лицу в результате незаконного привлечения к административной ответственности в виде административного приостановления деятельности, возмещается за счет казны Российской Федерации, а в случаях, предусмотренных законом, за счет казны субъекта Российской Федерации или казны муниципального образования в полном объеме независимо от вины должностных лиц органов дознания, предварительного следствия, прокуратуры и суда в порядке, установленном законом.

(в ред. Федерального закона от 09.05.2005 N 45-ФЗ)

Пункт 2 статьи 1070 подлежит применению в соответствии с его конституционно-правовым смыслом, выявленным в Постановлении Конституционного Суда РФ от 25.01.2001 N 1-П, определении Конституционного Суда РФ от 08.02.2001 N 42-О, определении Конституционного Суда РФ от 08.02.2001 N 43-О.

2. Вред, причиненный гражданину или юридическому лицу в результате незаконной деятельности органов дознания, предварительного следствия, прокуратуры, не повлекший последствий, предусмотренных пунктом 1 настоящей статьи, возмещается по основаниям и в порядке, которые предусмотрены статьей 1069 настоящего Кодекса. Вред, причиненный при осуществлении правосудия, возмещается в случае, если вина судьи установлена приговором суда, вступившим в законную силу.

Статья 1071. Органы и лица, выступающие от имени казны при возмещении вреда за ее счет

В случаях, когда в соответствии с настоящим Кодексом или другими законами причиненный вред подлежит возмещению за счет казны Российской Федерации, казны субъекта Российской Федерации или казны муниципального образования, от имени казны выступают соответствующие финансовые органы, если в соответствии с пунктом 3 статьи 125 настоящего Кодекса эта обязанность не возложена на другой орган, юридическое лицо или гражданина.

Статья 1072. Возмещение вреда лицом, застраховавшим свою ответственность

Юридическое лицо или гражданин, застраховавшие свою ответственность в порядке добровольного или обязательного страхования в пользу потерпевшего (статья 931, пункт 1 статьи 935), в случае, когда страховое возмещение недостаточно для того, чтобы полностью возместить причиненный вред, возмещают разницу между страховым возмещением и фактическим размером ущерба.

Статья 1073. Ответственность за вред, причиненный несовершеннолетними в возрасте до четырнадцати лет

1. За вред, причиненный несовершеннолетним, не достигшим четырнадцати лет (малолетним), отвечают его родители (усыновители) или опекуны, если не докажут, что вред возник не по их вине.

2. Если малолетний гражданин, оставшийся без попечения родителей, был помещен под надзор в организацию для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей (статья 155.1 Семейного кодекса Российской Федерации), эта организация обязана возместить вред, причиненный малолетним гражданином, если не докажет, что вред возник не по ее вине.

(п. 2 в ред. Федерального закона от 24.04.2008 N 49-ФЗ)

3. Если малолетний гражданин причинил вред во время, когда он временно находился под надзором образовательной организации, медицинской организации или иной организации, обязанных осуществлять за ним надзор, либо лица, осуществлявшего надзор над ним на основании договора, эта организация либо это лицо отвечает за причиненный вред, если не докажет, что вред возник не по их вине при осуществлении надзора.

(п. 3 в ред. Федерального закона от 24.04.2008 N 49-ФЗ)

4. Обязанность родителей (усыновителей), опекунов, образовательных, медицинских организаций или иных организаций по возмещению вреда, причиненного малолетним, не прекращается с достижением малолетним совершеннолетия или получением им имущества, достаточного для возмещения вреда.

(в ред. Федерального закона от 24.04.2008 N 49-ФЗ)

Если родители (усыновители), опекуны либо другие граждане, указанные в пункте 3 настоящей статьи, умерли или не имеют достаточных средств для возмещения вреда, причиненного жизни или здоровью потерпевшего, а сам причинитель вреда, ставший полностью дееспособным, обладает такими средствами, суд с учетом имущественного положения потерпевшего и причинителя вреда, а также других обстоятельств вправе принять решение о возмещении вреда полностью или частично за счет самого причинителя вреда.

Статья 1074. Ответственность за вред, причиненный несовершеннолетними в возрасте от четырнадцати до восемнадцати лет

1. Несовершеннолетние в возрасте от четырнадцати до восемнадцати лет самостоятельно несут ответственность за причиненный вред на общих основаниях.

2. В случае, когда у несовершеннолетнего в возрасте от четырнадцати до восемнадцати лет нет доходов или иного имущества, достаточных для возмещения вреда, вред должен быть возмещен полностью или в недостающей части его родителями (усыновителями) или попечителем, если они не докажут, что вред возник не по их вине.

Если несовершеннолетний гражданин в возрасте от четырнадцати до восемнадцати лет, оставшийся без попечения родителей, был помещен под надзор в организацию для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей (статья 155.1 Семейного кодекса Российской Федерации), эта организация обязана возместить вред полностью или в недостающей части, если не докажет, что вред возник не по ее вине.

(в ред. Федерального закона от 24.04.2008 N 49-ФЗ)

3. Обязанность родителей (усыновителей), попечителя и соответствующей организации по возмещению вреда, причиненного несовершеннолетним в возрасте от четырнадцати до восемнадцати лет, прекращается по достижении причинившим вред совершеннолетия либо в случаях, когда у него до достижения совершеннолетия появились доходы или иное имущество, достаточные для возмещения вреда, либо когда он до достижения совершеннолетия приобрел дееспособность.

(в ред. Федерального закона от 24.04.2008 N 49-ФЗ)

Статья 1075. Ответственность родителей, лишенных родительских прав, за вред, причиненный несовершеннолетними

На родителя, лишенного родительских прав, суд может возложить ответственность за вред, причиненный его несовершеннолетним ребенком в течение трех лет после лишения родителя родительских прав, если поведение ребенка, повлекшее причинение вреда, явилось следствием ненадлежащего осуществления родительских обязанностей.

Статья 1076. Ответственность за вред, причиненный гражданином, признанным недееспособным

1. Вред, причиненный гражданином, признанным недееспособным, возмещают его опекун или организация, обязанная осуществлять за ним надзор, если они не докажут, что вред возник не по их вине.

2. Обязанность опекуна или организации, обязанной осуществлять надзор по возмещению вреда, причиненного гражданином, признанным недееспособным, не прекращается в случае последующего признания его дееспособным.

3. Если опекун умер либо не имеет достаточных средств для возмещения вреда, причиненного жизни или здоровью потерпевшего, а сам причинитель вреда обладает такими средствами, суд с учетом имущественного положения потерпевшего и причинителя вреда, а также других обстоятельств вправе принять решение о возмещении вреда полностью или частично за счет самого причинителя вреда.

Статья 1077. Ответственность за вред, причиненный гражданином, признанным ограниченно дееспособным

Вред, причиненный гражданином, ограниченным в дееспособности вследствие злоупотребления спиртными напитками или наркотическими средствами, возмещается самим причинителем вреда.

Статья 1078. Ответственность за вред, причиненный гражданином, не способным понимать значения своих действий

1. Дееспособный гражданин или несовершеннолетний в возрасте от четырнадцати до восемнадцати лет, причинивший вред в таком состоянии, когда он не мог понимать значения своих действий или руководить ими, не отвечает за причиненный им вред.

Если вред причинен жизни или здоровью потерпевшего, суд может с учетом имущественного положения потерпевшего и причинителя вреда, а также других обстоятельств возложить обязанность по возмещению вреда полностью или частично на причинителя вреда.

2. Причинитель вреда не освобождается от ответственности, если сам привел себя в состояние, в котором не мог понимать значения своих действий или руководить ими, употреблением спиртных напитков, наркотических средств или иным способом.

3. Если вред причинен лицом, которое не могло понимать значения своих действий или руководить ими вследствие психического расстройства, обязанность возместить вред может быть возложена судом на проживающих совместно с этим лицом его трудоспособных супруга, родителей, совершеннолетних детей, которые знали о психическом расстройстве причинителя вреда, но не ставили вопрос о признании его недееспособным.

Статья 1079. Ответственность за вред, причиненный деятельностью, создающей повышенную опасность для окружающих

1. Юридические лица и граждане, деятельность которых связана с повышенной опасностью для окружающих (использование транспортных средств, механизмов, электрической энергии высокого напряжения, атомной энергии, взрывчатых веществ, сильнодействующих ядов и т.п.; осуществление строительной и иной, связанной с нею деятельности и др.), обязаны возместить вред, причиненный источником повышенной опасности, если не докажут, что вред возник вследствие непреодолимой силы или умысла потерпевшего. Владелец источника повышенной опасности может быть освобожден судом от ответственности полностью или частично также по основаниям, предусмотренным пунктами 2 и 3 статьи 1083 настоящего Кодекса.

Обязанность возмещения вреда возлагается на юридическое лицо или гражданина, которые владеют источником повышенной опасности на праве собственности, праве хозяйственного ведения или праве оперативного управления либо на ином законном основании (на праве аренды, по доверенности на право управления транспортным средством, в силу распоряжения соответствующего органа о передаче ему источника повышенной опасности и т.п.).

2. Владелец источника повышенной опасности не отвечает за вред, причиненный этим источником, если докажет, что источник выбыл из его обладания в результате противоправных действий других лиц. Ответственность за вред, причиненный источником повышенной опасности, в таких случаях несут лица, противоправно завладевшие источником. При наличии вины владельца источника повышенной опасности в противоправном изъятии этого источника из его обладания ответственность может быть возложена как на владельца, так и на лицо, противоправно завладевшее источником повышенной опасности.

3. Владельцы источников повышенной опасности солидарно несут ответственность за вред, причиненный в результате взаимодействия этих источников (столкновения транспортных средств и т.п.) третьим лицам по основаниям, предусмотренным пунктом 1 настоящей статьи.

Вред, причиненный в результате взаимодействия источников повышенной опасности их владельцам, возмещается на общих основаниях (статья 1064).

Статья 1080. Ответственность за совместно причиненный вред

Лица, совместно причинившие вред, отвечают перед потерпевшим солидарно.

По заявлению потерпевшего и в его интересах суд вправе возложить на лиц, совместно причинивших вред, ответственность в долях, определив их применительно к правилам, предусмотренным пунктом 2 статьи 1081 настоящего Кодекса.

Статья 1081. Право регресса к лицу, причинившему вред

1. Лицо, возместившее вред, причиненный другим лицом (работником при исполнении им служебных, должностных или иных трудовых обязанностей, лицом, управляющим транспортным средством, и т.п.), имеет право обратного требования (регресса) к этому лицу в размере выплаченного возмещения, если иной размер не установлен законом.

2. Причинитель вреда, возместивший совместно причиненный вред, вправе требовать с каждого из других причинителей вреда долю выплаченного потерпевшему возмещения в размере, соответствующем степени вины этого причинителя вреда. При невозможности определить степень вины доли признаются равными.

3. Российская Федерация, субъект Российской Федерации или муниципальное образование в случае возмещения ими вреда, причиненного должностным лицом органов дознания, предварительного следствия, прокуратуры или суда (пункт 1 статьи 1070), имеют право регресса к этому лицу, если его вина установлена приговором суда, вступившим в законную силу.

4. Лица, возместившие вред по основаниям, указанным в статьях 1073 — 1076 настоящего Кодекса, не имеют права регресса к лицу, причинившему вред.

Статья 1082. Способы возмещения вреда

Удовлетворяя требование о возмещении вреда, суд в соответствии с обстоятельствами дела обязывает лицо, ответственное за причинение вреда, возместить вред в натуре (предоставить вещь того же рода и качества, исправить поврежденную вещь и т.п.) или возместить причиненные убытки (пункт 2 статьи 15).

Статья 1083. Учет вины потерпевшего и имущественного положения лица, причинившего вред

1. Вред, возникший вследствие умысла потерпевшего, возмещению не подлежит.

2. Если грубая неосторожность самого потерпевшего содействовала возникновению или увеличению вреда, в зависимости от степени вины потерпевшего и причинителя вреда размер возмещения должен быть уменьшен.

При грубой неосторожности потерпевшего и отсутствии вины причинителя вреда в случаях, когда его ответственность наступает независимо от вины, размер возмещения должен быть уменьшен или в возмещении вреда может быть отказано, если законом не предусмотрено иное. При причинении вреда жизни или здоровью гражданина отказ в возмещении вреда не допускается.

Вина потерпевшего не учитывается при возмещении дополнительных расходов (пункт 1 статьи 1085), при возмещении вреда в связи со смертью кормильца (статья 1089), а также при возмещении расходов на погребение (статья 1094).

3. Суд может уменьшить размер возмещения вреда, причиненного гражданином, с учетом его имущественного положения, за исключением случаев, когда вред причинен действиями, совершенными умышленно.

§ 2. Возмещение вреда, причиненного жизни или

здоровью гражданина

Постановлением Конституционного Суда РФ от 20.10.2010 N 18-П положения пункта 1 и абзацев первого и второго пункта 2 статьи 18 Федерального закона «О статусе военнослужащих» во взаимосвязи со статьей 1084 ГК Российской Федерации признаны не противоречащими Конституции РФ.

Статья 1084 подлежит применению в соответствии с конституционно-правовым смыслом, выявленным в Постановлении Конституционного Суда РФ от 15.07.2009 N 13-П.

Статья 1084. Возмещение вреда, причиненного жизни или здоровью гражданина при исполнении договорных либо иных обязательств

Вред, причиненный жизни или здоровью гражданина при исполнении договорных обязательств, а также при исполнении обязанностей военной службы, службы в полиции и других соответствующих обязанностей возмещается по правилам, предусмотренным настоящей главой, если законом или договором не предусмотрен более высокий размер ответственности.

(в ред. Федерального закона от 07.02.2011 N 4-ФЗ)

Действие статьи 1085 распространяется также на случаи, когда причинение вреда жизни и здоровью гражданина имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1085. Объем и характер возмещения вреда, причиненного повреждением здоровья

1. При причинении гражданину увечья или ином повреждении его здоровья возмещению подлежит утраченный потерпевшим заработок (доход), который он имел либо определенно мог иметь, а также дополнительно понесенные расходы, вызванные повреждением здоровья, в том числе расходы на лечение, дополнительное питание, приобретение лекарств, протезирование, посторонний уход, санаторно-курортное лечение, приобретение специальных транспортных средств, подготовку к другой профессии, если установлено, что потерпевший нуждается в этих видах помощи и ухода и не имеет права на их бесплатное получение.

2. При определении утраченного заработка (дохода) пенсия по инвалидности, назначенная потерпевшему в связи с увечьем или иным повреждением здоровья, а равно другие пенсии, пособия и иные подобные выплаты, назначенные как до, так и после причинения вреда здоровью, не принимаются во внимание и не влекут уменьшения размера возмещения вреда (не засчитываются в счет возмещения вреда). В счет возмещения вреда не засчитывается также заработок (доход), получаемый потерпевшим после повреждения здоровья.

3. Объем и размер возмещения вреда, причитающегося потерпевшему в соответствии с настоящей статьей, могут быть увеличены законом или договором.

Действие статьи 1086 распространяется также на случаи, когда причинение вреда жизни и здоровью гражданина имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1086. Определение заработка (дохода), утраченного в результате повреждения здоровья

1. Размер подлежащего возмещению утраченного потерпевшим заработка (дохода) определяется в процентах к его среднему месячному заработку (доходу) до увечья или иного повреждения здоровья либо до утраты им трудоспособности, соответствующих степени утраты потерпевшим профессиональной трудоспособности, а при отсутствии профессиональной трудоспособности — степени утраты общей трудоспособности.

2. В состав утраченного заработка (дохода) потерпевшего включаются все виды оплаты его труда по трудовым и гражданско-правовым договорам как по месту основной работы, так и по совместительству, облагаемые подоходным налогом. Не учитываются выплаты единовременного характера, в частности компенсация за неиспользованный отпуск и выходное пособие при увольнении. За период временной нетрудоспособности или отпуска по беременности и родам учитывается выплаченное пособие. Доходы от предпринимательской деятельности, а также авторский гонорар включаются в состав утраченного заработка, при этом доходы от предпринимательской деятельности включаются на основании данных налоговой инспекции.

Все виды заработка (дохода) учитываются в суммах, начисленных до удержания налогов.

3. Среднемесячный заработок (доход) потерпевшего подсчитывается путем деления общей суммы его заработка (дохода) за двенадцать месяцев работы, предшествовавших повреждению здоровья, на двенадцать. В случае, когда потерпевший ко времени причинения вреда работал менее двенадцати месяцев, среднемесячный заработок (доход) подсчитывается путем деления общей суммы заработка (дохода) за фактически проработанное число месяцев, предшествовавших повреждению здоровья, на число этих месяцев.

Не полностью проработанные потерпевшим месяцы по его желанию заменяются предшествующими полностью проработанными месяцами либо исключаются из подсчета при невозможности их замены.

4. В случае, когда потерпевший на момент причинения вреда не работал, учитывается по его желанию заработок до увольнения либо обычный размер вознаграждения работника его квалификации в данной местности, но не менее установленной в соответствии с законом величины прожиточного минимума трудоспособного населения в целом по Российской Федерации.

(в ред. Федерального закона от 26.11.2002 N 152-ФЗ)

5. Если в заработке (доходе) потерпевшего произошли до причинения ему увечья или иного повреждения здоровья устойчивые изменения, улучшающие его имущественное положение (повышена заработная плата по занимаемой должности, он переведен на более высокооплачиваемую работу, поступил на работу после окончания учебного учреждения по очной форме обучения и в других случаях, когда доказана устойчивость изменения или возможности изменения оплаты труда потерпевшего), при определении его среднемесячного заработка (дохода) учитывается только заработок (доход), который он получил или должен был получить после соответствующего изменения.

Действие статьи 1087 распространяется также на случаи, когда причинение вреда жизни и здоровью гражданина имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1087. Возмещение вреда при повреждении здоровья лица, не достигшего совершеннолетия

1. В случае увечья или иного повреждения здоровья несовершеннолетнего, не достигшего четырнадцати лет (малолетнего) и не имеющего заработка (дохода), лицо, ответственное за причиненный вред, обязано возместить расходы, вызванные повреждением здоровья.

2. По достижении малолетним потерпевшим четырнадцати лет, а также в случае причинения вреда несовершеннолетнему в возрасте от четырнадцати до восемнадцати лет, не имеющему заработка (дохода), лицо, ответственное за причиненный вред, обязано возместить потерпевшему помимо расходов, вызванных повреждением здоровья, также вред, связанный с утратой или уменьшением его трудоспособности, исходя из установленной в соответствии с законом величины прожиточного минимума трудоспособного населения в целом по Российской Федерации.

(в ред. Федерального закона от 26.11.2002 N 152-ФЗ)

3. Если ко времени повреждения его здоровья несовершеннолетний имел заработок, то вред возмещается исходя из размера этого заработка, но не ниже установленной в соответствии с законом величины прожиточного минимума трудоспособного населения в целом по Российской Федерации.

(в ред. Федерального закона от 26.11.2002 N 152-ФЗ)

4. После начала трудовой деятельности несовершеннолетний, здоровью которого был ранее причинен вред, вправе требовать увеличения размера возмещения вреда исходя из получаемого им заработка, но не ниже размера вознаграждения, установленного по занимаемой им должности, или заработка работника той же квалификации по месту его работы.

Действие статьи 1088 распространяется также на случаи, когда причинение вреда жизни и здоровью гражданина имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1088. Возмещение вреда лицам, понесшим ущерб в результате смерти кормильца

1. В случае смерти потерпевшего (кормильца) право на возмещение вреда имеют:

нетрудоспособные лица, состоявшие на иждивении умершего или имевшие ко дню его смерти право на получение от него содержания;

ребенок умершего, родившийся после его смерти;

один из родителей, супруг либо другой член семьи независимо от его трудоспособности, который не работает и занят уходом за находившимися на иждивении умершего его детьми, внуками, братьями и сестрами, не достигшими четырнадцати лет либо хотя и достигшими указанного возраста, но по заключению медицинских органов нуждающимися по состоянию здоровья в постороннем уходе;

лица, состоявшие на иждивении умершего и ставшие нетрудоспособными в течение пяти лет после его смерти.

Один из родителей, супруг либо другой член семьи, не работающий и занятый уходом за детьми, внуками, братьями и сестрами умершего и ставший нетрудоспособным в период осуществления ухода, сохраняет право на возмещение вреда после окончания ухода за этими лицами.

2. Вред возмещается:

несовершеннолетним — до достижения восемнадцати лет;

учащимся старше восемнадцати лет — до окончания учебы в учебных учреждениях по очной форме обучения, но не более чем до двадцати трех лет;

женщинам старше пятидесяти пяти лет и мужчинам старше шестидесяти лет — пожизненно;

инвалидам — на срок инвалидности;

одному из родителей, супругу либо другому члену семьи, занятому уходом за находившимися на иждивении умершего его детьми, внуками, братьями и сестрами, — до достижения ими четырнадцати лет либо изменения состояния здоровья.

Действие статьи 1089 распространяется также на случаи, когда причинение вреда жизни и здоровью гражданина имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1089. Размер возмещения вреда, понесенного в случае смерти кормильца

1. Лицам, имеющим право на возмещение вреда в связи со смертью кормильца, вред возмещается в размере той доли заработка (дохода) умершего, определенного по правилам статьи 1086 настоящего Кодекса, которую они получали или имели право получать на свое содержание при его жизни. При определении возмещения вреда этим лицам в состав доходов умершего наряду с заработком (доходом) включаются получаемые им при жизни пенсия, пожизненное содержание и другие подобные выплаты.

2. При определении размера возмещения вреда пенсии, назначенные лицам в связи со смертью кормильца, а равно другие виды пенсий, назначенные как до, так и после смерти кормильца, а также заработок (доход) и стипендия, получаемые этими лицами, в счет возмещения им вреда не засчитываются.

3. Установленный каждому из имеющих право на возмещение вреда в связи со смертью кормильца размер возмещения не подлежит дальнейшему перерасчету, кроме случаев:

рождения ребенка после смерти кормильца;

назначения или прекращения выплаты возмещения лицам, занятым уходом за детьми, внуками, братьями и сестрами умершего кормильца.

Законом или договором может быть увеличен размер возмещения.

Действие статьи 1090 распространяется также на случаи, когда причинение вреда жизни и здоровью гражданина имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1090. Последующее изменение размера возмещения вреда

1. Потерпевший, частично утративший трудоспособность, вправе в любое время потребовать от лица, на которое возложена обязанность возмещения вреда, соответствующего увеличения размера его возмещения, если трудоспособность потерпевшего в дальнейшем уменьшилась в связи с причиненным повреждением здоровья по сравнению с той, которая оставалась у него к моменту присуждения ему возмещения вреда.

2. Лицо, на которое возложена обязанность возмещения вреда, причиненного здоровью потерпевшего, вправе потребовать соответствующего уменьшения размера возмещения, если трудоспособность потерпевшего возросла по сравнению с той, которая была у него к моменту присуждения возмещения вреда.

3. Потерпевший вправе требовать увеличения размера возмещения вреда, если имущественное положение гражданина, на которого возложена обязанность возмещения вреда, улучшилось, а размер возмещения был уменьшен в соответствии с пунктом 3 статьи 1083 настоящего Кодекса.

4. Суд может по требованию гражданина, причинившего вред, уменьшить размер возмещения вреда, если его имущественное положение в связи с инвалидностью либо достижением пенсионного возраста ухудшилось по сравнению с положением на момент присуждения возмещения вреда, за исключением случаев, когда вред был причинен действиями, совершенными умышленно.

Действие статьи 1091 распространяется также на случаи, когда причинение вреда жизни и здоровью гражданина имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1091. Увеличение размера возмещения вреда в связи с повышением стоимости жизни

(в ред. Федерального закона от 26.11.2002 N 152-ФЗ)

Суммы выплачиваемого гражданам возмещения вреда, причиненного жизни или здоровью потерпевшего, при повышении стоимости жизни подлежат индексации в установленном законом порядке (статья 318).

Действие статьи 1092 распространяется также на случаи, когда причинение вреда жизни и здоровью гражданина имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1092. Платежи по возмещению вреда

1. Возмещение вреда, вызванного уменьшением трудоспособности или смертью потерпевшего, производится ежемесячными платежами.

При наличии уважительных причин суд с учетом возможностей причинителя вреда может по требованию гражданина, имеющего право на возмещение вреда, присудить ему причитающиеся платежи единовременно, но не более чем за три года.

2. Суммы в возмещение дополнительных расходов (пункт 1 статьи 1085) могут быть присуждены на будущее время в пределах сроков, определяемых на основе заключения медицинской экспертизы, а также при необходимости предварительной оплаты стоимости соответствующих услуг и имущества, в том числе приобретения путевки, оплаты проезда, оплаты специальных транспортных средств.

Действие статьи 1093 распространяется также на случаи, когда причинение вреда жизни и здоровью гражданина имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1093. Возмещение вреда в случае прекращения юридического лица

1. В случае реорганизации юридического лица, признанного в установленном порядке ответственным за вред, причиненный жизни или здоровью, обязанность по выплате соответствующих платежей несет его правопреемник. К нему же предъявляются требования о возмещении вреда.

2. В случае ликвидации юридического лица, признанного в установленном порядке ответственным за вред, причиненный жизни или здоровью, соответствующие платежи должны быть капитализированы для выплаты их потерпевшему по правилам, установленным законом или иными правовыми актами.

Законом или иными правовыми актами могут быть установлены и другие случаи, при которых может быть произведена капитализация платежей.

Действие статьи 1094 распространяется также на случаи, когда причинение вреда жизни и здоровью гражданина имело место до 1 марта 1996 года, но не ранее 1 марта 1993 года, и причиненный вред остался невозмещенным (Федеральный закон от 26.01.1996 N 15-ФЗ).

Статья 1094. Возмещение расходов на погребение

Лица, ответственные за вред, вызванный смертью потерпевшего, обязаны возместить необходимые расходы на погребение лицу, понесшему эти расходы.

Пособие на погребение, полученное гражданами, понесшими эти расходы, в счет возмещения вреда не засчитывается.

§ 3. Возмещение вреда, причиненного вследствие

недостатков товаров, работ или услуг

Статья 1095. Основания возмещения вреда, причиненного вследствие недостатков товара, работы или услуги

Вред, причиненный жизни, здоровью или имуществу гражданина либо имуществу юридического лица вследствие конструктивных, рецептурных или иных недостатков товара, работы или услуги, а также вследствие недостоверной или недостаточной информации о товаре (работе, услуге), подлежит возмещению продавцом или изготовителем товара, лицом, выполнившим работу или оказавшим услугу (исполнителем), независимо от их вины и от того, состоял потерпевший с ними в договорных отношениях или нет.

Правила, предусмотренные настоящей статьей, применяются лишь в случаях приобретения товара (выполнения работы, оказания услуги) в потребительских целях, а не для использования в предпринимательской деятельности.

Статья 1096. Лица, ответственные за вред, причиненный вследствие недостатков товара, работы или услуги

1. Вред, причиненный вследствие недостатков товара, подлежит возмещению по выбору потерпевшего продавцом или изготовителем товара.

2. Вред, причиненный вследствие недостатков работы или услуги, подлежит возмещению лицом, выполнившим работу или оказавшим услугу (исполнителем).

3. Вред, причиненный вследствие непредоставления полной или достоверной информации о товаре (работе, услуге), подлежит возмещению лицами, указанными в пунктах 1 и 2 настоящей статьи.

Статья 1097. Сроки возмещения вреда, причиненного в результате недостатков товара, работы или услуги

1. Вред, причиненный вследствие недостатков товара, работы или услуги, подлежит возмещению, если он возник в течение установленного срока годности или срока службы товара (работы, услуги), а если срок годности или срок службы не установлен, в течение десяти лет со дня производства товара (работы, услуги).

(в ред. Федерального закона от 17.12.1999 N 213-ФЗ)

2. Независимо от времени причинения вред подлежит возмещению, если:

в нарушение требований закона срок годности или срок службы не установлен;

лицо, которому был продан товар, для которого была выполнена работа или которому была оказана услуга, не было предупреждено о необходимых действиях по истечении срока годности или срока службы и возможных последствиях при невыполнении указанных действий либо ему не была предоставлена полная и достоверная информация о товаре (работе, услуге).

(п. 2 в ред. Федерального закона от 17.12.1999 N 213-ФЗ)

Статья 1098. Основания освобождения от ответственности за вред, причиненный вследствие недостатков товара, работы или услуги

Продавец или изготовитель товара, исполнитель работы или услуги освобождается от ответственности в случае, если докажет, что вред возник вследствие непреодолимой силы или нарушения потребителем установленных правил пользования товаром, результатами работы, услуги или их хранения.

§ 4. Компенсация морального вреда

О некоторых вопросах применения законодательства о компенсации морального вреда см. Постановление Пленума Верховного Суда РФ от 20.12.1994 N 10.

Статья 1099. Общие положения

1. Основания и размер компенсации гражданину морального вреда определяются правилами, предусмотренными настоящей главой и статьей 151 настоящего Кодекса.

2. Моральный вред, причиненный действиями (бездействием), нарушающими имущественные права гражданина, подлежит компенсации в случаях, предусмотренных законом.

3. Компенсация морального вреда осуществляется независимо от подлежащего возмещению имущественного вреда.

Статья 1100. Основания компенсации морального вреда

Компенсация морального вреда осуществляется независимо от вины причинителя вреда в случаях, когда:

вред причинен жизни или здоровью гражданина источником повышенной опасности;

Постановлением Конституционного Суда РФ от 16.06.2009 N 9-П абзац третий статьи 1100 во взаимосвязи с частью 3 статьи 27.5 КоАП РФ признан не противоречащим Конституции РФ, поскольку данное положение по своему конституционно-правовому смыслу в системе действующего правового регулирования не исключают возможность возмещения гражданам вреда, причиненного незаконным административным задержанием на срок не более 48 часов как мерой обеспечения производства по делу об административном правонарушении, влекущем в качестве одной из мер административного наказания административный арест, независимо от вины соответствующих органов публичной власти и их должностных лиц.

вред причинен гражданину в результате его незаконного осуждения, незаконного привлечения к уголовной ответственности, незаконного применения в качестве меры пресечения заключения под стражу или подписки о невыезде, незаконного наложения административного взыскания в виде ареста или исправительных работ;

вред причинен распространением сведений, порочащих честь, достоинство и деловую репутацию;

в иных случаях, предусмотренных законом.

Статья 1101. Способ и размер компенсации морального вреда

1. Компенсация морального вреда осуществляется в денежной форме.

2. Размер компенсации морального вреда определяется судом в зависимости от характера причиненных потерпевшему физических и нравственных страданий, а также степени вины причинителя вреда в случаях, когда вина является основанием возмещения вреда. При определении размера компенсации вреда должны учитываться требования разумности и справедливости.

Характер физических и нравственных страданий оценивается судом с учетом фактических обстоятельств, при которых был причинен моральный вред, и индивидуальных особенностей потерпевшего.

ЖК Новоград Павлино — новостройки в Балашихе от застройщика ГК МИЦ

ЖК «Новоград Павлино» занимает зеленый уголок Железнодорожного района города Балашихи, на левом берегу реки Пехорки. Ольгинский и Павлинский лесопарки ограничивают жилой квартал с севера. С юга находятся массивы Салтыковского реликтового леса, подпитывающие микрорайон свежим сосновым воздухом.

Близость к столице (до МКАД 7 км) одно из преимуществ новостройки. Добраться до Москвы можно ж/д транспортом (20-30 мин), на автомобиле и на метро. Транспортная инфраструктура района стремительно развивается. На ближайшие годы намечена реконструкция основных транспортных коридоров, ведущих в столицу:

Полным ходом идет строительство железнодорожной эстакады для создания двухуровневого сообщения. Реконструкция Горьковского отделения ж/д позволит удвоить количество скоростных электричек, а пригородных увеличить в 1,5 раза;
Разгружается основная автомагистраль — Носовихинское шоссе. В текущем и 2020 годах на нем будут построены путепроводы в Балашихинский и Реутовский районы;
В ближайшие годы здесь появится скоростной трамвай, способный значительно повысить комфортность сообщений;
В 2019 году запущена станция метро «Некрасовка» расположенная всего в 10 минутах движения автомобиля от ЖК «Новоград Павлино».

Об инфраструктуре района расположения

Масштабно и ответственно осуществляя полномочия застройщика, ГК МИЦ ведет строительство собственных инфраструктурных объектов, многие из которых находятся в стадии завершения. На территории квартала будут построены: 2 школы, 5 детских садов, поликлиника, паркинги, физкультурно-оздоровительный комплекс. Первые этажи корпусов займут магазины, салоны красоты, кафе, отделения банков и многое другое.

Железнодорожный является самостоятельным Подмосковным городом, с развитой инфраструктурой. В ближайшем районе есть большие торгово-развлекательные центры, гипермаркеты, кафе и рестораны, филиалы столичных вузов, гимназии, лицеи, спортивные комплексы и бассейны. Рядом с жилым кварталом находятся:

Троицкий храм;
Отделения банков;
Две действующие школы;
Несколько муниципальных детских садиков;
Большой торговый комплекс;
Конно-спортивный клуб.

Варианты предлагаемых квартир и их отделки

Более 800 тысяч кв. м. жилья квартала «Новоград Павлино» представлены квартирами площадью 24-82 кв.м. Проектом предусмотрены классические варианты с изолированными комнатами и европланировки. Среди них:

Студии — квартиры небольшого метража. Перегородка между кухней и жилой комнатой в них отсутствует, поэтому помещение выглядит просторным и светлым. Стоят они недорого, что сделало студии популярными у студентов и молодежи;
1-комнатные квартиры рассчитаны на комфортное проживание одного или семейной пары без детей. Площадь однушек 22-41 м;
2-комнатные квартиры — выбор семей, из 3-4 человек. Метраж двушек 40-68;
3-комнатные подходят большим семьям из 5-6 человек. Трешки имеют площадь 63-89 метра.

В жилом квартале «Новоград Павлино» вашему выбору предлагаются различные варианты жилья: от удобных студий до просторных трехкомнатных квартир, с отделкой и без отделки, с продуманными планировками, учитывающими ваши пожелания.

Лучший способ сэкономить время, силы и деньги это приобретение готовой отделки от застройщика. Больше не нужно организовывать сложный и дорогостоящий ремонт после получения ключей — заселяйтесь сразу!

О застройщике жилого комплекса

ГК «МИЦ» — крупная девелоперская компания, обеспечивающая весь цикл работ, начиная с разработки концепции жилой застройки, строительства, сдачи объектов, их последующей эксплуатации, заканчивая оказанием комплексных услуг по продаже и покупке недвижимости во всех сегментах столичного рынка.

ГК «МИЦ» занимается строительством с 1999 года, активно развивается, расширяя сферы деятельности. Ориентируясь на внедрение передовых технологий, используя новые инвестиционные инструменты и модернизируя систему управления, компания проработала на российском рынке 19 лет, реализовав за это время 20 масштабных жилищных проектов с вводом в эксплуатацию 5 миллионов квадратных метров жилья!

Наши ценности:

Мы строим комфортное и доступное жилье для всех!

Мы всегда доводим начатые проекты до конца!

Мы создаем жилье, отвечающее вашему образу жизни!

Гостиницы Москвы. Официальный сайт гостиницы «Космос», Москва

Перед вами отель с самым большим номерным фондом в российской столице — 1777 номеров разных ценовых категорий. Мы находимся в 15 минутах езды от центра и в 2 минутах ходьбы от станции метро «ВДНХ». Гостиница «Космос» и крупнейший в мире комплекс с экспозициями, музеями, рекреациями — ВДНХ (Выставка достижений народного хозяйства) — ближайшие соседи.

В инфраструктуру отеля у метро ВДНХ входят рестораны, кафе, банкетные и многофункциональные конференц-залы, выставочные площади. В их числе — знаменитый Большой Концертный зал «Космос».

Гостиница рядом с метро предоставляет услуги визовой поддержки, обмена валют, охраны, парковки, обслуживания номеров 24/7. В «Космосе» открыт фитнес-центр с тренажерным залом, банями и бассейном.

Вы можете забронировать гостиницу в Москве на нашем сайте и получить мгновенное подтверждение. Это быстро, просто и удобно. Воспользуйтесь одним из наших спецпредложений, чтобы получить скидку на проживание.

Гости, которые останавливаются у нас впервые, говорят: «Здесь есть всё!». Часто и москвичи заказывают банкет в ресторане, приезжают весело провести вечер.

Персонал окружит вас заботой и вниманием, как только вы разместитесь в отеле. Менеджеры по работе с гостями порекомендуют вам ресторан, вызовут такси. Если необходимы услуги горничной или вы забыли что-то из предметов первой необходимости, служба консьержей придёт на помощь.

В номере вы насладитесь тишиной и прекрасным видом на Москву. В минуты отдыха оставите все мысли о делах и по-настоящему расслабитесь в атмосфере уюта и комфорта.

Величественное 25-этажное здание отеля, способного вместить до 3 000 человек, имеет оригинальную полукруглую форму. «Космос» считается одним из главных символов Москвы. Здесь останавливались участники Летней Олимпиады 1980 года и других мероприятий международного масштаба.

В 2014 году у нас гостили звёзды конькобежного спорта Екатерина Лобышева и Ольга Граф — призёры Олимпиады в Сочи. Уже более 36 лет, начиная с 1979 года, мы получаем благодарные отзывы от гостей.

Вы можете ознакомиться с отзывами о гостинице у ВДНХ, проживании и обслуживании, посмотреть фотографии, узнать контактные данные и увидеть гостиницу «Космос» на карте Москвы на официальном сайте.

Скрыть

Статья 15 ГК РФ. Возмещение убытков

Гражданский кодекс Российской Федерации:

Статья 15 ГК РФ. Возмещение убытков

Вернуться к оглавлению документа: Гражданский кодекс РФ Часть 1 в действующей редакции

Комментарии к статье 15 ГК РФ, судебная практика применения

Разъяснения Пленума ВС РФ 2015:

В пунктах 11-15 Постановления Пленума Верховного Суда РФ от 23.06.2015 г. № 25 «О применении судами некоторых положений раздела I части первой Гражданского кодекса РФ» содержатся следующие разъяснения

Применяя статью 15 ГК РФ, следует учитывать, что по общему правилу лицо, право которого нарушено, может требовать полного возмещения причиненных ему убытков. Возмещение убытков в меньшем размере возможно в случаях, предусмотренных законом или договором в пределах, установленных гражданским законодательством.

Точный размер убытков. Разумная степень достоверности

По делам о возмещении убытков истец обязан доказать, что ответчик является лицом, в результате действий (бездействия) которого возник ущерб, а также факты нарушения обязательства или причинения вреда, наличие убытков (пункт 2 статьи 15 ГК РФ).

Размер подлежащих возмещению убытков должен быть установлен с разумной степенью достоверности. По смыслу пункта 1 статьи 15 ГК РФ в удовлетворении требования о возмещении убытков не может быть отказано только на том основании, что их точный размер невозможно установить. В этом случае размер подлежащих возмещению убытков определяется судом с учетом всех обстоятельств дела, исходя из принципов справедливости и соразмерности ответственности допущенному нарушению.

Вина лица, причинившего вред

Отсутствие вины доказывается лицом, нарушившим обязательство (пункт 2 статьи 401 ГК РФ). По общему правилу лицо, причинившее вред, освобождается от возмещения вреда, если докажет, что вред причинен не по его вине (пункт 2 статьи 1064 ГК РФ). Бремя доказывания своей невиновности лежит на лице, нарушившем обязательство или причинившем вред. Вина в нарушении обязательства или в причинении вреда предполагается, пока не доказано обратное.

Если лицо несет ответственность за нарушение обязательства или за причинение вреда независимо от вины, то на него возлагается бремя доказывания обстоятельств, являющихся основанием для освобождения от такой ответственности (например, пункт 3 статьи 401, пункт 1 статьи 1079 ГК РФ).

Состав реального ущерба

При разрешении споров, связанных с возмещением убытков, необходимо иметь в виду, что в состав реального ущерба входят не только фактически понесенные соответствующим лицом расходы, но и расходы, которые это лицо должно будет произвести для восстановления нарушенного права (пункт 2 статьи 15 ГК РФ).

Если для устранения повреждений имущества истца использовались или будут использованы новые материалы, то за исключением случаев, установленных законом или договором, расходы на такое устранение включаются в состав реального ущерба истца полностью, несмотря на то, что стоимость имущества увеличилась или может увеличиться по сравнению с его стоимостью до повреждения. Размер подлежащего выплате возмещения может быть уменьшен, если ответчиком будет доказано или из обстоятельств дела следует с очевидностью, что существует иной более разумный и распространенный в обороте способ исправления таких повреждений подобного имущества.

Следует также учитывать, что уменьшение стоимости имущества истца по сравнению с его стоимостью до нарушения ответчиком обязательства или причинения им вреда является реальным ущербом даже в том случае, когда оно может непосредственно проявиться лишь при отчуждении этого имущества в будущем (например, утрата товарной стоимости автомобиля, поврежденного в результате дорожно-транспортного происшествия).

Упущенная выгода

По смыслу статьи 15 ГК РФ, упущенной выгодой является неполученный доход, на который увеличилась бы имущественная масса лица, право которого нарушено, если бы нарушения не было.

Поскольку упущенная выгода представляет собой неполученный доход, при разрешении споров, связанных с ее возмещением, следует принимать во внимание, что ее расчет, представленный истцом, как правило, является приблизительным и носит вероятностный характер. Это обстоятельство само по себе не может служить основанием для отказа в иске.

При рассмотрении дел о возмещении убытков следует иметь в виду, что положение пункта 4 статьи 393 ГК РФ, согласно которому при определении упущенной выгоды учитываются предпринятые стороной для ее получения меры и сделанные с этой целью приготовления, не означает, что в состав подлежащих возмещению убытков могут входить только расходы на осуществление таких мер и приготовлений.

Разъяснения Пленума ВС РФ 2016:

В пп. 2, 3 Постановление Пленума Верховного Суда РФ от 24.03.2016 N 7 (в ред. от 07.02.2017) «О применении судами некоторых положений Гражданского кодекса Российской Федерации об ответственности за нарушение обязательств» содержатся, в частности, следующие разъяснения:

Определение понятий «реальный ущерб» и «упущенная выгода»

Согласно статьям 15, 393 ГК РФ в состав убытков входят реальный ущерб и упущенная выгода.

Под реальным ущербом понимаются расходы, которые кредитор произвел или должен будет произвести для восстановления нарушенного права, а также утрата или повреждение его имущества.

Упущенной выгодой являются не полученные кредитором доходы, которые он получил бы с учетом разумных расходов на их получение при обычных условиях гражданского оборота, если бы его право не было нарушено.

Если лицо, нарушившее право, получило вследствие этого доходы, лицо, право которого нарушено, может требовать возмещения наряду с другими убытками упущенной выгоды в размере не меньшем, чем такие доходы (пункт 2 статьи 15 ГК РФ).

Определение размера упущенной выгоды

При определении размера упущенной выгоды учитываются предпринятые кредитором для ее получения меры и сделанные с этой целью приготовления (пункт 4 статьи 393 ГК РФ).

В то же время в обоснование размера упущенной выгоды кредитор вправе представлять не только доказательства принятия мер и приготовлений для ее получения, но и любые другие доказательства возможности ее извлечения.

Например, если заказчик предъявил иск к подрядчику о возмещении убытков, причиненных ненадлежащим исполнением договора подряда по ремонту здания магазина, ссылаясь на то, что в результате выполнения работ с недостатками он не смог осуществлять свою обычную деятельность по розничной продаже товаров, то расчет упущенной выгоды может производиться на основе данных о прибыли истца за аналогичный период времени до нарушения ответчиком обязательства и/или после того, как это нарушение было прекращено.

Должник не лишен права представить доказательства того, что упущенная выгода не была бы получена кредитором.

«Сибколбасы» в суде отбили право на землю, которую используют 15 лет — KVnews.ru

Росимущество отказывалось предоставить предприятию участок на новый срок по основаниям, которые суд счел незаконными.

21 июля вступило в силу решение Арбитражного суда Омской области по иску ООО «Сибирские колбасы» к ТУ Росимущества в Омской области о признании незаконным отказа в заключении договора аренды земельного участка и обязании заключить таковой.

Отказ с основаниями

Предприятие использует спорную землю в производственных целях более 15 лет. Речь о наделе сельскохозяйственного назначения с кадастровым номером 55:20:000000:16 общей площадью около 177,8 га, расположенном в Омском районе в с. Морозовка. Договор аренды этого участка был заключен между Сибирскими колбасами и ТУ Росимущества в Омской области 15 июля 2005 года. Договор вступил в силу с момента его государственной регистрации, т. е. с 16 августа 2005 года. Срок аренды был установлен дополнительным соглашением до 16 августа 2020 года.

Для реализации права, гарантированного п. п. 31 п. 2 ст. 39.6 Земельного кодекса РФ, ООО «Сибирские колбасы» обратилось в Росимущество региона с заявлением о предоставлении используемого участка в аренду еще на 15 лет. Письмом от 1 сентября ведомство отказало заявителю. Основанием для отказа стала необходимость «провести мероприятия по приведению в соответствие сведений относительно земельного участка и объектов недвижимости, учтенных на нем». Кроме того, с точки зрения ответчика, представленная юридическим лицом выписка из ЕГРЮЛ «не была заверена в установленном порядке» – в Росимуществе сочли, что удостовериться в ее подлинности нельзя и документом она не является. Указал ответчик и на дату заявления о предоставлении земельного участка – оно было зарегистрировано в электронной системе документооборота 18 августа 2020 года, т. е. после истечения срока действия заключенного ранее договора аренды.

Таким образом, оказалась под вопросом возможность дальнейшего использования площадки, с которой у предприятия тесно связаны процессы ведения производственной деятельности, и ему ничего не оставалось, кроме как обратиться в арбитражный суд. Заявление было принято к производству 27 октября 2020 года.

В ходе судебного разбирательства участники процесса неоднократно заявляли ходатайства об отложении заседаний, предпринимая попытки мирного урегулирования спора. Однако все эти попытки успехом не увенчались – разрешить спор во внесудебном порядке стороны не смогли.

С точки зрения закона

Согласно Земельному кодексу РФ, основаниями для отказа в заключении договора аренды участка на новый срок могли стать несвоевременная подача заявления или наличие нарушений законодательства при использовании земли.

Разбирая перечисленные Росимуществом причины отказа, суд отметил, что первая из них вообще не предусмотрена ЗК РФ, а кроме того, из текста оспариваемого отказа нельзя установить, в чем именно заключается несоответствие сведений в характеристиках расположенных на спорном участке объектов недвижимости и зарегистрированных правах на них.

Что касается выписки из ЕГРЮЛ, то тут аргументы ответчика также оказались несостоятельны. Потому что такая выписка, заверенная «усиленной квалифицированной электронной подписью», равноценна выписке на бумажном носителе с подписью должностного лица налогового органа, заверенная печатью. Исходя их этого, суд счел, что предприятие приложило к заявлению надлежаще оформленную – как раз «электронную» выписку, а отказ ведомства приять ее является необоснованным.

Заявление о предоставлении участка, как оказалось, ООО «Сибирские колбасы» также подало вовремя. Так, договор аренды был заключен на срок до 16 августа 2020 года, но в этот день было воскресенье, а значит, последним возможным днем его подачи было 17 августа. Заявление действительно зарегистрировали в системе документооборота 18 августа 2020 года, то есть на сутки позже положенного срока, но на почте его приняли еще 13 августа, что было подтверждено приложенным к заявлению почтовым уведомлением. В соответствии с п. 2 ст. 194 Гражданского кодекса РФ, «письменные заявления и извещения, сданные в организацию связи до 24-х часов последнего дня срока, считаются сделанными в срок». Поэтому суд справедливо счел заявление поданным в срок.

Удовлетворяя исковые требования в целом, суд заострил внимание на том, что заявитель длительное время использует, обрабатывает сельскохозяйственный участок, не нарушая при этом законодательство (таких фактов в деле не оказалось). Поскольку ни одно из приведенных ответчиком оснований для отказа в дальнейшем предоставлении земли обществу не подтвердилось, суд пришел к выводу, что своими действиями ТУ Росимущество по Омской области создает препятствия для осуществления предпринимательской деятельности ООО «Сибирские колбасы».

Исковые требования омского предприятия были в полном объеме удовлетворены 21 июня. Ответчик должен заключить договор аренды с истцом еще на 15 лет в течение 10 дней с даты вступления в силу этого решения.

Ранее статья была доступна только в печатной версии газеты «Коммерческие вести» от 7 июля 2021 года.

275600-2-GK-T Манометр

275600-2-GK-T Манометр Обзор
Обзор
Модульный вакуумметр 275600-2-GK-T Mini-Convectron® оснащен позолоченным вольфрамовым датчиком, фитингом NW40 ISO-KF и нелинейным аналоговым выходом.Два реле заданных значений включены для защитной блокировки, а местный дисплей помогает при настройке и диагностике. Манометры Mini-Convectron® сочетают в себе высокоточный датчик Пирани с улучшенной конвекцией и электронику, чтобы обеспечить компактное, удобное, надежное и экономичное решение для измерения вакуума от атмосферного до 10 ^-4 Торр. За более чем 35 лет успешной установки в полевых условиях манометр Convectron® стал отраслевым стандартом. Это уникальная разновидность датчиков теплопроводности, в которых измерение давления основано на скорости потери тепла проводом датчика.В отличие от традиционных термопар и манометров Пирани, которые используют только теплопроводные потери, манометры Convectron используют преимущества теплопотерь из-за конвекции при более высоких давлениях. Это расширяет диапазон точных, повторяемых измерений до атмосферы. Эти вакуумметры Granville-Phillips® идеально подходят для приложений, где критически важны размер контроллера и местное управление.
Технические характеристики
Абсолютный диапазон измерения
1.0 x 10 ^-4 до 1000 торр
Цифровая связь
№
Тип
Вакуумный модуль
Дисплей
3-значный зеленый светодиод
Интерфейс
аналог
Реле
2
Тип штуцера
NW40 ISO-KF
Ориентация при установке
Предпочтительно горизонтальное
Диапазон уставки
1×10 ^{-3 от} до 1000 торр, 1×10 ^{-3 от} до 1300 мбар, 1×10 ^-1 Па до 130 кПа
Рабочая температура
0-40 ° C, без конденсации
Максимальная температура отжига
150 ° C со снятой электроникой
Температура хранения
-40-70 ° С
Аналоговый выход
0.375-5,659 В постоянного тока (0-1000 торр, нелинейное)
Разрешение реле
2 значащих цифры
Требования к питанию
11.5 — 26,5 В постоянного тока, 0,1 А при 11,5 В постоянного тока, 1,6 Вт максимум, 1,8 максимум (с дисплеем)
Внутренний объем
40 см ³ (2.5 в ³)
Открытые материалы
Нержавеющая сталь 304, боросиликатное стекло, Ковар, оксид алюминия, сплав NiFe, полиимид
Корпус и фланец для электроники
Экструзия алюминия
Соответствие
CE
Нить
Позолоченный вольфрам
Номинальное значение контакта уставки
1 А при 30 В постоянного тока резистивный, неиндуктивный переменный ток
Регулировка уставки
Значение, направление и гистерезис через программное обеспечение
Разъемы
15-контактный сверхминиатюрный D-папа
Разрешение дисплея
Наименьшая значащая цифра в каждом диапазоне
Единицы
Торр
Размер шага при минимальном давлении
1 x 10 ^-4 Торр, 1 x 10 ^-4 мбар, 1 x 10 ^-2 Па
Технические характеристики
Абсолютный диапазон измерения
1.0 x 10 ^-4 до 1000 торр
Цифровая связь
№
Тип
Вакуумный модуль
Дисплей
3-значный зеленый светодиод
Интерфейс
аналог
Реле
2
Тип штуцера
NW40 ISO-KF
Ориентация при установке
Предпочтительно горизонтальное
Диапазон уставки
1×10 ^{-3 от} до 1000 торр, 1×10 ^{-3 от} до 1300 мбар, 1×10 ^-1 Па до 130 кПа
Рабочая температура
0-40 ° C, без конденсации
Максимальная температура отжига
150 ° C со снятой электроникой
Температура хранения
-40-70 ° С
Аналоговый выход
0.375-5,659 В постоянного тока (0-1000 торр, нелинейное)
Разрешение реле
2 значащих цифры
Требования к питанию
11.5 — 26,5 В постоянного тока, 0,1 А при 11,5 В постоянного тока, 1,6 Вт максимум, 1,8 максимум (с дисплеем)
Внутренний объем
40 см ³ (2,5 дюйма ³)
Открытые материалы
Нержавеющая сталь 304, боросиликатное стекло, Ковар, оксид алюминия, сплав NiFe, полиимид
Корпус и фланец для электроники
Экструзия алюминия
Соответствие
CE
Нить
Позолоченный вольфрам
Номинальное значение контакта уставки
1 А при 30 В постоянного тока резистивный, неиндуктивный переменный ток
Регулировка уставки
Значение, направление и гистерезис через программное обеспечение
Разъемы
15-контактный сверхминиатюрный D-папа
Разрешение дисплея
Наименьшая значащая цифра в каждом диапазоне
Единицы
Торр
Размер шага при минимальном давлении
1 x 10 ^-4 Торр, 1 x 10 ^-4 мбар, 1 x 10 ^-2 Па
Манометр, мини-конвектрон, дисплей, NW40 ISO-KF, нелинейный аналоговый, 2 реле, вольфрам
Модель: 275600-2-ГК-Т
Дополнительные чертежи для этого продукта недоступны.
Введите ниже свой адрес электронной почты, чтобы сбросить пароль учетной записи.
Удалить этот продукт из списка сравнения?

Укажите номер заказа и почтовый индекс, чтобы проверить статус заказа или загрузить счет-фактуру для заказа, который был отправлен.Войдите, чтобы просмотреть полную историю заказов.

Чтобы получить доступ к этому и другим ценным техническим ресурсам, войдите в систему или зарегистрируйте новую учетную запись в Интернете.
Также доступно в Ньюпорте.com
Код плательщика НДС имеет недопустимый формат. Он не будет сохранен вместе с заказом при отправке.
Манометр, мини-конвектрон, дисплей, NW40 ISO-KF, нелинейный аналоговый, 2 реле, вольфрам
г.К. Честертон: (Мировая классика): Честертон, Г. К .: 9781537681443: Amazon.com: Книги
Гилберт Кейт Честертон (29 мая 1874 — 14 июня 1936), более известный как Дж. К. Честертон, был английским писателем, поэтом, философом, драматургом, журналистом, оратором, светским богословом, биографом, литературным и искусствоведом. Честертона часто называют «принцем парадокса». Журнал «Тайм» отмечает его стиль письма: «По возможности Честертон подчеркивал свои достоинства популярными высказываниями, пословицами, аллегориями — сначала осторожно выворачивая их наизнанку.»Честертон хорошо известен своим вымышленным священником-детективом отцом Брауном и его аргументированной апологетикой. Даже некоторые из тех, кто не согласен с ним, признали широкую привлекательность таких произведений, как» Православие «и» Вечный человек «. Честертон как политический мыслитель, бросают тень и на прогрессизм, и на консерватизм, говоря: «Весь современный мир разделился на консерваторов и прогрессистов. Дело прогрессистов — продолжать ошибаться. Дело консерваторов — не допускать исправления ошибок.«Честертон обычно называл себя« ортодоксальным »христианином и все больше и больше отождествлял эту позицию с католицизмом, в конечном итоге переходя в католицизм из англиканства высокой церкви. Джордж Бернард Шоу,« дружественный враг »Честертона, согласно Time, сказал о нем , «Он был человеком колоссального гения». Биографы определили его как преемника таких викторианских авторов, как Мэтью Арнольд, Томас Карлайл, кардинал Джон Генри Ньюман и Джон Раскин. Честертон родился в Кэмпден-Хилл в Кенсингтоне, Лондон, сын Мари Луизы, урожденной Грожан, и Эдварда Честертона.Он был крещен в возрасте одного месяца в англиканской церкви, хотя его семья нерегулярно практиковала унитарии. Согласно его автобиографии, в молодости Честертон увлекся оккультизмом и вместе со своим братом Сесилом экспериментировал с Уиджей. доски. Честертон получил образование в школе Святого Павла, затем поступил в школу искусств Слейда, чтобы стать иллюстратором. Slade — это отделение Университетского колледжа Лондона, где Честертон также изучал литературу, но не получил диплома ни по одному из предметов.
Г. К. Баттерфилд | Congress.gov
Секция записи Конгресса Ежедневный дайджест Сенат дом Расширения замечаний
Замечания участников Автор: Any House Member Адамс, Альма С.[D-NC] Адерхольт, Роберт Б. [R-AL] Агилар, Пит [D-CA] Аллен, Рик В. [R-GA] Оллред, Колин З. [D-TX] Амодеи, Марк Э. [R -NV] Армстронг, Келли [R-ND] Аррингтон, Джоди К. [R-TX] Auchincloss, Jake [D-MA] Axne, Cynthia [D-IA] Бабин, Брайан [R-TX] Бэкон, Дон [R -NE] Бэрд, Джеймс Р. [R-IN] Балдерсон, Трой [R-OH] Бэнкс, Джим [R-IN] Барр, Энди [R-KY] Барраган, Нанетт Диас [D-CA] Басс, Карен [ D-CA] Битти, Джойс [D-OH] Бенц, Клифф [R-OR] Бера, Ами [D-CA] Бергман, Джек [R-MI] Бейер, Дональд С., младший [D-VA] Байс , Стефани И. [R-OK] Биггс, Энди [R-AZ] Билиракис, Гас М.[R-FL] Бишоп, Дэн [R-NC] Бишоп, Сэнфорд Д., младший [D-GA] Блуменауэр, Эрл [D-OR] Блант Рочестер, Лиза [D-DE] Боберт, Лорен [R-CO ] Бонамичи, Сюзанна [D-OR] Бост, Майк [R-IL] Bourdeaux, Carolyn [D-GA] Bowman, Jamaal [D-NY] Бойл, Брендан Ф. [D-PA] Брэди, Кевин [R-TX ] Брукс, Мо [R-AL] Браун, Энтони Г. [D-MD] Браунли, Джулия [D-CA] Бьюкенен, Верн [R-FL] Бак, Кен [R-CO] Бакшон, Ларри [R-IN ] Бадд, Тед [R-NC] Берчетт, Тим [R-TN] Берджесс, Майкл С. [R-TX] Буш, Кори [D-MO] Бустос, Cheri [D-IL] Баттерфилд, GK [D-NC ] Калверт, Кен [R-CA] Каммак, Кэт [R-FL] Карбаджал, Салуд О.[D-CA] Карденас, Тони [D-CA] Карл, Джерри Л. [R-AL] Карсон, Андре [D-IN] Картер, Эрл Л. «Бадди» [R-GA] Картер, Джон Р. [ R-TX] Картер, Трой [D-LA] Картрайт, Мэтт [D-PA] Кейс, Эд [D-HI] Кастен, Шон [D-IL] Кастор, Кэти [D-FL] Кастро, Хоакин [D- TX] Cawthorn, Мэдисон [R-NC] Chabot, Стив [R-OH] Чейни, Лиз [R-WY] Чу, Джуди [D-CA] Cicilline, Дэвид Н. [D-RI] Кларк, Кэтрин М. [ D-MA] Кларк, Иветт Д. [D-NY] Кливер, Эмануэль [D-MO] Клайн, Бен [R-VA] Клауд, Майкл [R-TX] Клайберн, Джеймс Э. [D-SC] Клайд, Эндрю С. [R-GA] Коэн, Стив [D-TN] Коул, Том [R-OK] Комер, Джеймс [R-KY] Коннолли, Джеральд Э.[D-VA] Купер, Джим [D-TN] Корреа, Дж. Луис [D-CA] Коста, Джим [D-CA] Кортни, Джо [D-CT] Крейг, Энджи [D-MN] Кроуфорд, Эрик А. «Рик» [R-AR] Креншоу, Дэн [R-TX] Крист, Чарли [D-FL] Кроу, Джейсон [D-CO] Куэльяр, Генри [D-TX] Кертис, Джон Р. [R- UT] Дэвидс, Шарис [D-KS] Дэвидсон, Уоррен [R-OH] Дэвис, Дэнни К. [D-IL] Дэвис, Родни [R-IL] Дин, Мадлен [D-PA] ДеФазио, Питер А. [ D-OR] DeGette, Diana [D-CO] DeLauro, Rosa L. [D-CT] DelBene, Suzan K. [D-WA] Delgado, Antonio [D-NY] Demings, Val Butler [D-FL] DeSaulnier , Марк [D-CA] ДеДжарле, Скотт [R-TN] Дойч, Теодор Э.[D-FL] Диас-Баларт, Марио [R-FL] Дингелл, Дебби [D-MI] Доггетт, Ллойд [D-TX] Дональдс, Байрон [R-FL] Дойл, Майкл Ф. [D-PA] Дункан , Джефф [R-SC] Данн, Нил П. [R-FL] Эллзи, Джейк [R-TX] Эммер, Том [R-MN] Эскобар, Вероника [D-TX] Эшу, Анна Г. [D-CA ] Эспайлат, Адриано [D-NY] Эстес, Рон [R-KS] Эванс, Дуайт [D-PA] Фэллон, Пэт [R-TX] Feenstra, Рэнди [R-IA] Фергюсон, А. Дрю, IV [R -GA] Фишбах, Мишель [R-MN] Фицджеральд, Скотт [R-WI] Фитцпатрик, Брайан К. [R-PA] Флейшманн, Чарльз Дж. «Чак» [R-TN] Флетчер, Лиззи [D-TX] Фортенберри, Джефф [R-NE] Фостер, Билл [D-IL] Фокс, Вирджиния [R-NC] Франкель, Лоис [D-FL] Франклин, К.Скотт [R-FL] Фадж, Марсия Л. [D-OH] Фулчер, Расс [R-ID] Gaetz, Мэтт [R-FL] Галлахер, Майк [R-WI] Галлего, Рубен [D-AZ] Гараменди, Джон [D-CA] Гарбарино, Эндрю Р. [R-NY] Гарсия, Хесус Дж. «Чуй» [D-IL] Гарсия, Майк [R-CA] Гарсия, Сильвия Р. [D-TX] Гиббс, Боб [R-OH] Хименес, Карлос А. [R-FL] Гомерт, Луи [R-TX] Голден, Джаред Ф. [D-ME] Гомес, Джимми [D-CA] Гонсалес, Тони [R-TX] Гонсалес , Энтони [R-OH] Гонсалес, Висенте [D-TX] Гонсалес-Колон, Дженниффер [R-PR] Гуд, Боб [R-VA] Гуден, Лэнс [R-TX] Госар, Пол А. [R-AZ ] Gottheimer, Джош [D-NJ] Granger, Kay [R-TX] Graves, Garret [R-LA] Graves, Sam [R-MO] Green, Al [D-TX] Green, Mark E.[R-TN] Грин, Марджори Тейлор [R-GA] Гриффит, Х. Морган [R-VA] Гриджалва, Рауль М. [D-AZ] Гротман, Гленн [R-WI] Гость, Майкл [R-MS] Гатри, Бретт [R-KY] Хааланд, Дебра А. [D-NM] Хагедорн, Джим [R-MN] Хардер, Джош [D-CA] Харрис, Энди [R-MD] Харшбаргер, Диана [R-TN] Хартцлер, Вики [R-MO] Гастингс, Элси Л. [D-FL] Хейс, Джахана [D-CT] Херн, Кевин [R-OK] Херрелл, Иветт [R-NM] Эррера Бейтлер, Хайме [R-WA ] Хайс, Джоди Б. [R-GA] Хиггинс, Брайан [D-NY] Хиггинс, Клэй [R-LA] Хилл, Дж. Френч [R-AR] Хаймс, Джеймс А. [D-CT] Хинсон, Эшли [R-IA] Hollingsworth, Trey [R-IN] Horsford, Steven [D-NV] Houlahan, Chrissy [D-PA] Hoyer, Steny H.[D-MD] Хадсон, Ричард [R-NC] Хаффман, Джаред [D-CA] Huizenga, Билл [R-MI] Исса, Даррелл Э. [R-CA] Джексон, Ронни [R-TX] Джексон Ли, Шейла [D-TX] Джейкобс, Крис [R-NY] Джейкобс, Сара [D-CA] Jayapal, Pramila [D-WA] Джеффрис, Хаким С. [D-NY] Джонсон, Билл [R-OH] Джонсон, Дасти [R-SD] Джонсон, Эдди Бернис [D-TX] Джонсон, Генри К. «Хэнк» младший [D-GA] Джонсон, Майк [R-LA] Джонс, Mondaire [D-NY] Джордан, Джим [R-OH] Джойс, Дэвид П. [R-OH] Джойс, Джон [R-PA] Кахеле, Кайали [D-HI] Каптур, Марси [D-OH] Катко, Джон [R-NY] Китинг , Уильям Р.[D-MA] Келлер, Фред [R-PA] Келли, Майк [R-PA] Келли, Робин Л. [D-IL] Келли, Трент [R-MS] Кханна, Ро [D-CA] Килди, Дэниел Т. [D-MI] Килмер, Дерек [D-WA] Ким, Энди [D-NJ] Ким, Янг [R-CA] Кинд, Рон [D-WI] Кинзингер, Адам [R-IL] Киркпатрик, Энн [D-AZ] Кришнамурти, Раджа [D-IL] Кустер, Энн М. [D-NH] Кустофф, Дэвид [R-TN] ЛаХуд, Дарин [R-IL] Ламальфа, Дуг [R-CA] Лэмб, Конор [D-PA] Лэмборн, Дуг [R-CO] Ланжевен, Джеймс Р. [D-RI] Ларсен, Рик [D-WA] Ларсон, Джон Б. [D-CT] Латта, Роберт Э. [R-OH ] Латернер, Джейк [R-KS] Лоуренс, Бренда Л.[D-MI] Лоусон, Эл, младший [D-FL] Ли, Барбара [D-CA] Ли, Сьюзи [D-NV] Леже Фернандес, Тереза [D-NM] Леско, Дебби [R-AZ] Летлоу , Джулия [R-LA] Левин, Энди [D-MI] Левин, Майк [D-CA] Льеу, Тед [D-CA] Лофгрен, Зои [D-CA] Лонг, Билли [R-MO] Лоудермилк, Барри [R-GA] Ловенталь, Алан С. [D-CA] Лукас, Фрэнк Д. [R-OK] Люткемейер, Блейн [R-MO] Лурия, Элейн Г. [D-VA] Линч, Стивен Ф. [D -MA] Мейс, Нэнси [R-SC] Малиновски, Том [D-NJ] Маллиотакис, Николь [R-NY] Мэлони, Кэролин Б. [D-NY] Мэлони, Шон Патрик [D-NY] Манн, Трейси [ R-KS] Мэннинг, Кэти Э.[D-NC] Мэсси, Томас [R-KY] Маст, Брайан Дж. [R-FL] Мацуи, Дорис О. [D-CA] МакБэт, Люси [D-GA] Маккарти, Кевин [R-CA] МакКол , Майкл Т. [R-TX] Макклейн, Лиза К. [R-MI] МакКлинток, Том [R-CA] МакКоллум, Бетти [D-MN] МакИчин, А. Дональд [D-VA] Макговерн, Джеймс П. [D-MA] МакГенри, Патрик Т. [R-NC] МакКинли, Дэвид Б. [R-WV] МакМоррис Роджерс, Кэти [R-WA] Макнерни, Джерри [D-CA] Микс, Грегори В. [D- NY] Мейер, Питер [R-MI] Мэн, Грейс [D-NY] Meuser, Daniel [R-PA] Mfume, Kweisi [D-MD] Миллер, Кэрол Д. [R-WV] Миллер, Мэри Э. [ R-IL] Миллер-Микс, Марианнетт [R-IA] Мооленаар, Джон Р.[R-MI] Муни, Александр X. [R-WV] Мур, Барри [R-AL] Мур, Блейк Д. [R-UT] Мур, Гвен [D-WI] Морелль, Джозеф Д. [D-NY ] Моултон, Сет [D-MA] Мрван, Фрэнк Дж. [D-IN] Маллин, Маркуэйн [R-OK] Мерфи, Грегори [R-NC] Мерфи, Стефани Н. [D-FL] Надлер, Джерролд [D -NY] Наполитано, Грейс Ф. [D-CA] Нил, Ричард Э. [D-MA] Негусе, Джо [D-CO] Нелс, Трой Э. [R-TX] Ньюхаус, Дэн [R-WA] Ньюман , Мари [D-IL] Норкросс, Дональд [D-NJ] Норман, Ральф [R-SC] Нортон, Элеонора Холмс [D-DC] Нуньес, Девин [R-CA] О’Халлеран, Том [D-AZ] Обернолти, Джей [R-CA] Окасио-Кортес, Александрия [D-NY] Омар, Ильхан [D-MN] Оуэнс, Берджесс [R-UT] Палаццо, Стивен М.[R-MS] Паллоне, Фрэнк, младший [D-NJ] Палмер, Гэри Дж. [R-AL] Панетта, Джимми [D-CA] Паппас, Крис [D-NH] Паскрелл, Билл, мл. [D -NJ] Пейн, Дональд М., младший [D-NJ] Пелоси, Нэнси [D-CA] Пенс, Грег [R-IN] Перлмуттер, Эд [D-CO] Перри, Скотт [R-PA] Питерс, Скотт Х. [D-CA] Пфлюгер, Август [R-TX] Филлипс, Дин [D-MN] Пингри, Челли [D-ME] Пласкетт, Стейси Э. [D-VI] Покан, Марк [D-WI] Портер, Кэти [D-CA] Поузи, Билл [R-FL] Прессли, Аянна [D-MA] Прайс, Дэвид Э. [D-NC] Куигли, Майк [D-IL] Радваген, Аумуа Амата Коулман [R- AS] Раскин, Джейми [D-MD] Рид, Том [R-NY] Решенталер, Гай [R-PA] Райс, Кэтлин М.[D-NY] Райс, Том [R-SC] Ричмонд, Седрик Л. [D-LA] Роджерс, Гарольд [R-KY] Роджерс, Майк Д. [R-AL] Роуз, Джон В. [R-TN ] Розендейл старший, Мэтью М. [R-MT] Росс, Дебора К. [D-NC] Роузер, Дэвид [R-NC] Рой, Чип [R-TX] Ройбал-Аллард, Люсиль [D-CA] Руис , Рауль [D-CA] Рупперсбергер, Калифорния Датч [D-MD] Раш, Бобби Л. [D-IL] Резерфорд, Джон Х. [R-FL] Райан, Тим [D-OH] Саблан, Грегорио Килили Камачо [ D-MP] Салазар, Мария Эльвира [R-FL] Санчес, Линда Т. [D-CA] Сан-Николас, Майкл FQ [D-GU] Сарбейнс, Джон П. [D-MD] Скализ, Стив [R-LA ] Скэнлон, Мэри Гей [D-PA] Шаковски, Дженис Д.[D-IL] Шифф, Адам Б. [D-CA] Шнайдер, Брэдли Скотт [D-IL] Шрейдер, Курт [D-OR] Шрайер, Ким [D-WA] Швейкерт, Дэвид [R-AZ] Скотт, Остин [R-GA] Скотт, Дэвид [D-GA] Скотт, Роберт С. «Бобби» [D-VA] Сешнс, Пит [R-TX] Сьюэлл, Терри А. [D-AL] Шерман, Брэд [D -CA] Шерилл, Мики [D-NJ] Симпсон, Майкл К. [R-ID] Отцы, Альбио [D-NJ] Слоткин, Элисса [D-MI] Смит, Адам [D-WA] Смит, Адриан [R -NE] Смит, Кристофер Х. [R-NJ] Смит, Джейсон [R-MO] Смакер, Ллойд [R-PA] Сото, Даррен [D-FL] Спанбергер, Эбигейл Дэвис [D-VA] Спарц, Виктория [ R-IN] Спейер, Джеки [D-CA] Стэнсбери, Мелани Энн [D-NM] Стэнтон, Грег [D-AZ] Stauber, Пит [R-MN] Стил, Мишель [R-CA] Стефаник, Элиза М.[R-NY] Стейл, Брайан [R-WI] Steube, В. Грегори [R-FL] Стивенс, Хейли М. [D-MI] Стюарт, Крис [R-UT] Стиверс, Стив [R-OH] Стрикленд , Мэрилин [D-WA] Суоззи, Томас Р. [D-NY] Swalwell, Эрик [D-CA] Такано, Марк [D-CA] Тейлор, Ван [R-TX] Тенни, Клаудия [R-NY] Томпсон , Бенни Г. [D-MS] Томпсон, Гленн [R-PA] Томпсон, Майк [D-CA] Тиффани, Томас П. [R-WI] Тиммонс, Уильям Р. IV [R-SC] Титус, Дина [ D-NV] Тлайб, Рашида [D-MI] Тонко, Пол [D-NY] Торрес, Норма Дж. [D-CA] Торрес, Ричи [D-NY] Трахан, Лори [D-MA] Трон, Дэвид Дж. .[D-MD] Тернер, Майкл Р. [R-OH] Андервуд, Лорен [D-IL] Аптон, Фред [R-MI] Валадао, Дэвид Г. [R-CA] Ван Дрю, Джефферсон [R-NJ] Ван Дайн, Бет [R-Техас] Варгас, Хуан [D-CA] Визи, Марк А. [D-TX] Вела, Филемон [D-TX] Веласкес, Нидия М. [D-Нью-Йорк] Вагнер, Энн [R -MO] Уолберг, Тим [R-MI] Валорски, Джеки [R-IN] Вальс, Майкл [R-FL] Вассерман Шульц, Дебби [D-FL] Уотерс, Максин [D-CA] Уотсон Коулман, Бонни [D -NJ] Вебер, Рэнди К., старший [R-TX] Вебстер, Дэниел [R-FL] Велч, Питер [D-VT] Венструп, Брэд Р. [R-OH] Вестерман, Брюс [R-AR] Векстон, Дженнифер [D-VA] Уайлд, Сьюзан [D-PA] Уильямс, Nikema [D-GA] Уильямс, Роджер [R-TX] Уилсон, Фредерика С.[D-FL] Уилсон, Джо [R-SC] Виттман, Роберт Дж. [R-VA] Womack, Стив [R-AR] Райт, Рон [R-TX] Ярмут, Джон А. [D-KY] Янг , Дон [R-AK] Зельдин, Ли М. [R-NY] Любой член Сената Болдуин, Тэмми [D-WI] Баррассо, Джон [R-WY] Беннет, Майкл Ф. [D-CO] Блэкберн, Марша [ R-TN] Блюменталь, Ричард [D-CT] Блант, Рой [R-MO] Букер, Кори А. [D-NJ] Бузман, Джон [R-AR] Браун, Майк [R-IN] Браун, Шеррод [ D-OH] Берр, Ричард [R-NC] Кантуэлл, Мария [D-WA] Капито, Шелли Мур [R-WV] Кардин, Бенджамин Л. [D-MD] Карпер, Томас Р. [D-DE] Кейси , Роберт П., Младший [D-PA] Кэссиди, Билл [R-LA] Коллинз, Сьюзан М. [R-ME] Кунс, Кристофер А. [D-DE] Корнин, Джон [R-TX] Кортез Масто, Кэтрин [D -NV] Коттон, Том [R-AR] Крамер, Кевин [R-ND] Крапо, Майк [R-ID] Круз, Тед [R-TX] Дейнс, Стив [R-MT] Дакворт, Тэмми [D-IL ] Дурбин, Ричард Дж. [D-IL] Эрнст, Джони [R-IA] Файнштейн, Dianne [D-CA] Фишер, Деб [R-NE] Гиллибранд, Кирстен Э. [D-NY] Грэм, Линдси [R -SC] Грассли, Чак [R-IA] Хагерти, Билл [R-TN] Харрис, Камала Д. [D-CA] Хассан, Маргарет Вуд [D-NH] Хоули, Джош [R-MO] Генрих, Мартин [ D-NM] Гикенлупер, Джон В.[D-CO] Hirono, Mazie K. [D-HI] Hoeven, John [R-ND] Hyde-Smith, Cindy [R-MS] Inhofe, James M. [R-OK] Johnson, Ron [R-WI] ] Кейн, Тим [D-VA] Келли, Марк [D-AZ] Кеннеди, Джон [R-LA] Кинг, Ангус С., младший [I-ME] Klobuchar, Amy [D-MN] Ланкфорд, Джеймс [ R-OK] Лихи, Патрик Дж. [D-VT] Ли, Майк [R-UT] Леффлер, Келли [R-GA] Лухан, Бен Рэй [D-NM] Ламмис, Синтия М. [R-WY] Манчин , Джо, III [D-WV] Марки, Эдвард Дж. [D-MA] Маршалл, Роджер В. [R-KS] МакКоннелл, Митч [R-KY] Менендес, Роберт [D-NJ] Меркли, Джефф [D -ИЛИ] Моран, Джерри [R-KS] Мурковски, Лиза [R-AK] Мерфи, Кристофер [D-CT] Мюррей, Пэтти [D-WA] Оссофф, Джон [D-GA] Падилла, Алекс [D-CA ] Пол, Рэнд [R-KY] Питерс, Гэри К.[D-MI] Портман, Роб [R-OH] Рид, Джек [D-RI] Риш, Джеймс Э. [R-ID] Ромни, Митт [R-UT] Розен, Джеки [D-NV] Раундс, Майк [R-SD] Рубио, Марко [R-FL] Сандерс, Бернард [I-VT] Sasse, Бен [R-NE] Schatz, Брайан [D-HI] Шумер, Чарльз Э. [D-NY] Скотт, Рик [R-FL] Скотт, Тим [R-SC] Шахин, Жанна [D-NH] Шелби, Ричард К. [R-AL] Синема, Кирстен [D-AZ] Смит, Тина [D-MN] Стабеноу, Дебби [D-MI] Салливан, Дэн [R-AK] Тестер, Джон [D-MT] Тьюн, Джон [R-SD] Тиллис, Том [R-NC] Туми, Пэт [R-PA] Тубервиль, Томми [R -AL] Ван Холлен, Крис [D-MD] Уорнер, Марк Р.[D-VA] Варнок, Рафаэль Г. [D-GA] Уоррен, Элизабет [D-MA] Уайтхаус, Шелдон [D-RI] Уикер, Роджер Ф. [R-MS] Уайден, Рон [D-OR] Янг , Тодд [R-IN]
Улучшенный метаболический стимул для индуцированной глюкозой секреции инсулина за счет коэкспрессии GK и PFK-2 / FBPase-2 в инсулин-продуцирующих клетках RINm5F | Эндокринология
Сенсорный фермент глюкозы глюкокиназа играет ключевую роль в регуляции индуцированной глюкозой секреции инсулина β-клетками поджелудочной железы. Активация глюкокиназы представляет собой многообещающую концепцию лечения диабета 2 типа.Таким образом, мы проанализировали активацию глюкокиназы через ее партнера по физиологическому взаимодействию, бифункциональный фермент 6-фосфофрукто-2-киназу / фруктозо-2,6-бисфосфатазу (PFK-2 / FBPase-2) и результирующее влияние на метаболизм глюкозы в инсулиновой кислоте. продуцирующие клетки. В клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2, стабильно сверхэкспрессирующих глюкокиназу плюс островковая PFK-2 / FBPase-2, совместная локализация между обоими ферментами, а также повышение активности глюкокиназы были значительно увеличены при стимулирующей концентрации глюкозы 10 ммоль / л. .Клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 показали в этих условиях культивирования значительное увеличение утилизации глюкозы и отношения АТФ / АДФ по сравнению с клетками RINm5F-GK, которые только сверхэкспрессируют глюкокиназу. Также индуцированная глюкозой секреция инсулина была повышена в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 по сравнению с клетками RINm5F-GK. Кроме того, накопление пирувата и продукция лактата в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 были значительно ниже как при 10, так и при 30 ммоль / л глюкозы, чем в клетках RINm5F-GK и RINm5F.Значительное улучшение метаболизма глюкозы после сверхэкспрессии PFK-2 / FBPase-2, по-видимому, не является исключительно результатом высокой активности фермента глюкокиназы. Стабилизация закрытой конформации глюкокиназы с помощью PFK-2 / FBPase-2 может не только активировать фермент, но также улучшить метаболические каналы в β-клетках.
ФОСФОРИЛИРУЮЩИЙ ГЛЮКОЗУ фермент глюкокиназа в β-клетках поджелудочной железы и печени, а также в энтероэндокринных клетках, клетках гипофиза и нейронах выполняет функцию сенсора глюкозы благодаря своей кооперативной кинетике и высокой силе контроля в регуляции гликолиза (1, 2 –8).В β-клетках глюкокиназа катализирует лимитирующую стадию индуцированной глюкозой секреции инсулина (6). Поэтому выяснение механизмов, лежащих в основе регуляции глюкокиназы в β-клетках на уровне транскрипции генов и особенно посттрансляционных механизмов, вызывает особый интерес (8). Конформационное изменение глюкозозависимой глюкокиназы между закрытой и сверхоткрытой формой играет фундаментальную роль в модуляции активности глюкокиназы (9). Более того, партнеры по связыванию глюкокиназы, такие как белки β-клеточного матрикса и секреторные гранулы инсулина, могут влиять на цитоплазматическую компартментацию глюкокиназы (10, 11–14).Интересно, что недавно открытые небольшие химические соединения активируют глюкокиназу, связываясь с аллостерическим участком ферментного белка. Эти так называемые активаторы глюкокиназы обладают способностью увеличивать стимулируемое глюкозой высвобождение инсулина и, таким образом, служат обоснованием для многообещающей новой концепции фармакотерапии диабета 2 типа (9, 15-17). Активация глюкокиназы также физиологически опосредуется взаимодействием с бифункциональным ферментом 6-фосфофрукто-2-киназа / фруктозо-2,6-бисфосфатаза (PFK-2 / FBPase-2) (18, 19).β-Клетки экспрессируют изоформу мозга PFK-2 / FBPase-2, которая не регулируется фосфорилированием и дефосфорилированием (20). В недавних исследованиях мы смогли показать, что сверхэкспрессия PFK-2 / FBPase-2 в инсулин-продуцирующих клетках приводит к значительному увеличению активности фермента глюкокиназы и окисления глюкозы, что указывает на положительный эффект на индуцированную глюкозой секрецию инсулина (18).
Таким образом, цель нашего настоящего исследования состояла в том, чтобы охарактеризовать ключевые особенности метаболизма глюкозы в инсулин-продуцирующих клетках RINm5F, сверхэкспрессирующих глюкокиназу, плюс островковые клетки PFK-2 / FBPase-2 (клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2) или только глюкокиназа (клетки RINm5F-GK).Результаты показывают, что активированная глюкокиназа играет центральную роль в контроле потока гликолиза и улучшает окислительный метаболизм глюкозы и индуцированную глюкозой секрецию инсулина с одновременным снижением накопления пирувата и лактата.
Материалы и методы
Материалы
Усовершенствованная система обнаружения хемилюминесценции, авторадиографические пленки и радиохимические вещества были от Amersham Pharmacia Biotech (Фрайбург, Германия).Форсколин был от ICN Biomedicals (Ирвин, Калифорния). Все реактивы аналитической чистоты были от Merck (Дармштадт, Германия). Все оборудование для культивирования тканей было от Invitrogen (Карлсруэ, Германия).
Культура клеток RINm5F
Инсулинпродуцирующие клетки RINm5F, сверхэкспрессирующие глюкокиназу (клетки RINm5F-GK), были получены путем стабильной трансфекции кДНК глюкокиназы β-клеток человека, как описано ранее (11, 21). Клетки RINm5F-GK, сверхэкспрессирующие PFK-2 / FBPase-2, были получены второй стабильной трансфекцией кДНК для печени крысы (RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 L 11) для двойного мутанта S32A / h358A печени крысы. (RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 LM 12) или для островков крысы (RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 I 4), как описано ранее (18).Клетки выращивали в среде RPMI 1640 с добавлением 10 ммоль / л глюкозы, 10% (об. / Об.) Эмбриональной телячьей сыворотки (FCS), пенициллина и стрептомицина в увлажненной атмосфере при 37 ° C и 5% CO ₂. В среду для клеток RINm5F-GK дополнительно добавляли 250 мкг / мл G418, а в среду для клеток RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 — 250 мкг / мл G418 и 250 мкг / мл зеоцина. Для подавления гена островковые клетки RINm5F-GK-PFK-FBPase-2 (I 4) высевали в шестилуночные микропланшеты с плотностью 1,5 × 10 ⁵.На следующий день клетки трансфицировали либо 1,5 мкг островковой кДНК PFK-2 / FBPase-2 кДНК-специфической малой интерферирующей РНК (миРНК), либо контрольной миРНК и 4 мкл jetSI-ENDO (Polyplus, Illkirch, Франция) в течение 4 ч в RPMI. 1640 в отсутствие FCS в соответствии с инструкциями производителя. После этого клетки инкубировали в течение 48 ч в среде RPMI 1640 с добавлением 10 ммоль / л глюкозы и 5% FCS. Дуплекс миРНК, специфичный для островковой кДНК PFK-2 / FBPase-2, был разработан против целевой последовательности островковой кДНК PFK-2 / FBPase-2 (CCA GAG TAA GAT TGT CTA CTA, номер доступа GenBank.S67900) с помощью алгоритма проектирования HiPerformance по лицензии Novartis AG (QIAGEN, Хильден, Германия).
Фосфорилирование глюкозы и активность фермента глюкокиназы
Активность фосфорилирования глюкозы измеряли при различных концентрациях глюкозы (1, 1,56, 3,12, 6,25, 12,5 и 25 ммоль / литр) в растворимых клеточных фракциях RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2. (I 4) клетки с помощью фотометрического анализа с использованием ферментов, как описано ранее (22). За одну единицу активности фермента принимали 1 мкмоль глюкозо-6-фосфата, образованного из глюкозы и АТФ в минуту при 37 ° C.Активность фермента выражали в единицах на мг клеточного белка. Активность глюкокиназы определяли путем вычитания активности гексокиназы, измеренной при 1 ммоль / литр глюкозы, из активности, измеренной при 100 ммоль / литр глюкозы.
Вестерн-блот анализ
Анализ глюкокиназы и PFK-2 / FBPase-2 Вестерн-блоттинг и измерения активности глюкокиназы были выполнены из идентичных образцов, чтобы позволить прямое сравнение между экспрессией белка и активностью фермента.Клетки гомогенизировали в PBS (pH 7,4), и нерастворимый материал осаждали центрифугированием. Концентрацию белка определяли количественно с помощью анализа белка Bio-Rad. Сорок микрограммов клеточного белка фракционировали восстановлением 10% SDS-PAGE и подвергали электроблоттингу на мембранах из дифторида поливинилидина. Мембраны окрашивали по Понсо, чтобы проверить перенос сопоставимых количеств клеточного белка. Сайты неспецифического связывания мембран блокировались обезжиренным сухим молоком в течение ночи при 4 ° C.Иммунодетекцию глюкокиназы и PFK-2 / FBPase-2 проводили, как описано (11, 18).
Иммуноокрашивание
Клетки высевали на покровные стекла и выращивали в течение 24 ч в среде с 10 ммоль / л глюкозы. После этого клетки инкубировали в течение следующих 24 ч в среде с 3 или 10 ммоль / л глюкозы. Наконец, клетки дважды промывали PBS (pH 7,4), фиксировали ледяным ацетоном в течение 5 минут и обрабатывали в течение 20 минут 0,2% Triton X-100 и 1% BSA в PBS. Покровные стекла трижды промывали PBS и инкубировали в течение 1 ч с антителом к глюкокиназе (11) и антителом к FBPase-2 (18), оба разведенных 1: 1000 в PBS с добавлением 0.1% Triton X-100 и 1% BSA. После этого покровные стекла промывали трижды PBS и инкубировали в течение 1 ч с флуоресцеинизотиоцианатом (FITC) ослиным антителом к глюкокиназе и ослиным антителом против курицы Texas Red (TxRed) к FBPase-2, оба разведенных 1: 200 в PBS с добавлением 0,1 % Triton X-100 и 1% BSA. Наконец, покровные стекла трижды промывали PBS и наносили на слайды с антифадным реагентом ProLong в монтажной среде (Molecular Probes Invitrogen Detection Technologies, Юджин, штат Орегон).Изображения были получены с помощью системы Olympus IX81 / ячейка, как описано ранее (23). Фильтры возбуждения S 492/18 и S 572/23 использовались для FITC и TxRed, соответственно, и трехдиапазонного светоделителя и излучателя DAPI / FITC / TxRed (AHF Analysentechnik, Тюбинген, Германия). Колокализация была рассчитана с помощью Image J 1.32 (W. Rasband, National Institutes of Health) с использованием подключаемого модуля Colocalization Finder (C. Laummonerie, Страсбург, Франция).
Измерения фруктозо-2,6-бисфосфата (F-2,6-P
₂)
RINm5F, RINm5F-GK, RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (L 11), RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (LM 12) и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase- 2 (I 4) клетки выращивали в течение 24 ч в среде с 10 ммоль / л глюкозы.После этого клетки инкубировали в течение 2 ч в присутствии 10 мкМ форсколина. Наконец, клетки были проницаемы с помощью 10 мкг / мл α-токсина из Staphylococcus aureus (Sigma, Taufkirchen, Германия), как описано (18). F-2,6-P ₂ определяли в надосадочной жидкости ферментативно-связанным методом с использованием пирофосфат-зависимой фруктозо-6-фосфаткиназы (Sigma).
Метаболизм глюкозы
Степень использования глюкозы оценивалась как производство ³ H ₂ O из d- [5- ³ H] глюкозы.Метаболизм глюкозы измеряли, как описано (24, 25), в партиях по 5 × 10 ⁵ клеток в течение 1 ч инкубации при 37 ° C в 40 мкл буфера Кребса-Рингера, содержащего различные концентрации глюкозы (0,5, 1, 2, 5 , и 10 ммоль / литр). Общая радиоактивность, добавленная к клеткам, составила 0,4 мкКи / мл. Клеточный метаболизм был остановлен добавлением 50 мкл 0,2 м HCl, и продуцируемый ³ H ₂ O был захвачен 500 мкл H ₂ O. После инкубации в течение ночи при 37 ° C лунки, содержащие клетки, были удалены и добавляли сцинтилляционную жидкость.Радиоактивность подсчитывали на жидкостном сцинтилляционном спектрометре.
Определение АТФ и АДФ
Клетки высевали в шестилуночные микропланшеты с плотностью 5 × 10 ⁵ клеток и выращивали в течение 24 ч в среде с 10 ммоль / л глюкозы. После этого клетки инкубировали следующие 48 ч в среде с 3 или 10 ммоль / л глюкозы. Анализ АТФ выполняли с помощью системы анализа ATPlite Detection Assay System (PerkinElmer Life Sciences, Завентем, Бельгия) в соответствии с инструкциями производителя.Эта система основана на производстве света, вызванном реакцией АТФ с добавленной люциферазой и d-люциферином (26). Присоединенный раствор для лизиса клеток млекопитающих высвобождает адениновые нуклеотиды и инактивирует эндогенные ферменты, разрушающие АТФ. Для определения содержания АДФ сумму содержания АТФ и содержания АДФ измеряли путем преобразования АДФ в АТФ с помощью пируваткиназы и фосфоенолпирувата в течение 15 мин. Световое излучение регистрировали как интеграл в 1 секунду в микропланшете с использованием люминометра Victor ² (Wallac, Freiburg, Германия), и концентрацию белка определяли количественно с помощью анализа белка Bio-Rad (Геркулес, Калифорния).Значения АТФ / АДФ были рассчитаны относительно стандартных значений АТФ и содержания белка.
Измерения пирувата и лактата
Клетки выращивали в течение 72 ч в среде с 10 ммоль / л глюкозы или в течение 24 ч в среде с 10 ммоль / л глюкозы и в течение следующих 48 ч в среде с 30 ммоль / л глюкозы. После этого партии из 2 × 10 ⁶ клеток инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C и 300 об / мин в 1 мл буфера Кребса-Рингера в присутствии различных концентраций глюкозы (0.5, 1, 2, 5 и 10 ммоль / литр). Клеточный раствор осторожно центрифугировали для удаления клеток, а супернатант нагревали до 95 ° C в течение 5 минут для денатурирования белков. После этого продукцию пирувата определяли путем измерения окисления восстановленного никотинамидадениндинуклеотида в присутствии лактатдегидрогеназы, а продукцию лактата определяли путем измерения восстановления никотинамидадениндинуклеотида в присутствии лактатдегидрогеназы, глутамината и глутамат-пируваттрансферазы. описано (27, 28).
Секреция инсулина и содержание инсулина
Клетки высевали в шестилуночные микропланшеты при плотности 5 × 10 ⁵ клеток и выращивали в течение 48 ч в среде с 10 ммоль / л глюкозы. Затем клетки дважды промывали средой без глюкозы и предварительно инкубировали в течение 1 ч в среде без глюкозы. Секрецию инсулина в течение 1-часового инкубационного периода измеряли в буфере Кребса-Рингера без глюкозы или в присутствии различных концентраций глюкозы (1, 3, 5, 10 и 25 ммоль / литр) или в присутствии 25 ммоль / литр. KCl.После этого для измерения секреции инсулина инкубационный буфер осторожно удаляли и осторожно центрифугировали для удаления отслоившихся клеток. Содержание инсулина измеряли в растворимой фракции гомогенизированных клеток. Инсулин определяли с помощью РИА с использованием стандарта инсулина крысы.
Анализ жизнеспособности клеток MTT
клеток RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) высевали в 96-луночные микропланшеты с плотностью 5000 клеток на лунку в 100-мкл среды с 10 ммоль / л глюкозы. и культивировали в течение 24 часов.После этого клетки инкубировали следующие 48 ч в среде с 3, 10 или 30 ммоль / л глюкозы. Жизнеспособность клеток определяли с использованием МТТ-анализа на микротитровальном планшете, как описано (29). Снижение активности МТТ (3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолий бромид) является надежным метаболическим тестом для количественной оценки жизнеспособности клеток (30).
Статистический анализ
Данные выражены как среднее ± сем. Статистический анализ был выполнен с помощью ANOVA с последующим тестом Бонферрони для множественного сравнения или тестом Стьюдента t с использованием программы анализа Prism (GraphPad Software, Inc., Сан-Диего, Калифорния).
Результаты
Взаимосвязь между активацией глюкокиназы и уровнем фермента PFK-2 / FBPase-2
Стабильная сверхэкспрессия островковой изоформы PFK-2 / FBPase-2 в клетках RINm5F-GK привела к значительному увеличению уровня белка PFK-2 / FBPase-2 до 364% и к значительному увеличению активности фермента глюкокиназы до 178%. , тогда как на уровни экспрессии белка глюкокиназы это не повлияло (18). Значения S _0,5 для фосфорилирования глюкозы составили 3.2 ммоль / литр в клетках RINm5F-GK и 3,1 ммоль / литр в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4), и, таким образом, были ниже, чем в островках поджелудочной железы, вероятно, из-за высокого уровня активности низко- K _m гексокиназ (18). Хотя клетки RINm5F не показали заметного увеличения фосфорилирующей активности в ответ на глюкозу, клетки RINm5F-GK, сверхэкспрессирующие глюкокиназу, показали увеличение фосфорилирующей активности при концентрациях глюкозы 3,12 ммоль / л и выше (рис. 1). Интересно, что только при этих концентрациях глюкозы RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) проявляет более высокую фосфорилирующую активность, чем клетки RINm5F-GK (рис.1). Таким образом, увеличение фосфорилирующей активности в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) по сравнению с клетками RINm5F-GK, по-видимому, связано с активацией фермента глюкокиназы и, по-видимому, не зависит от фермента гексокиназы. Кроме того, продуцирующие инсулин клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) трансфицировали островковой кДНК PFK-2 / FBPase-2 кДНК-специфичной миРНК, что приводило к снижению уровня PFK-2 / FBPase- 2 на 48% по сравнению с клетками, трансфицированными контрольной миРНК (рис.2А). Увеличение активности фермента глюкокиназы в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) до 178% может быть значительно снижено до 133% путем трансфекции островковой кДНК PFK-2 / FBPase-2 siRNA, но не с контрольной siRNA (рис. 2B). На уровни экспрессии белка глюкокиназы не влияло подавление PFK-2 / FBPase-2 (фиг. 2C). Таким образом, глюкокиназа активируется PFK-2 / FBPase-2 на посттрансляционном уровне.
Рис. 1
Влияние сверхэкспрессии одной глюкокиназы и совместной сверхэкспрессии глюкокиназы плюс островков PFK-2 / FBPase-2 в RINm5F-клетках на активность фосфорилирования глюкозы.Клетки выращивали в течение ночи при 10 ммоль / л глюкозы. После этого клетки RINm5F ( белых столбцов ), клетки RINm5F-GK ( серых столбцов ) и клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) ( черных столбцов ) были гомогенизированы обработкой ультразвуком. и фосфорилирующую активность определяли спектрофотометрически в присутствии различных концентраций глюкозы (1, 1,56, 3,12, 6,25, 12,5 и 25 ммоль / л). Показаны средние значения ± стандартная ошибка четырех отдельных экспериментов. *, P <0,05; **, P <0.01 по сравнению с клетками RINm5F-GK (ANOVA / тест Бонферрони).
Рис. 1
Влияние сверхэкспрессии одной глюкокиназы и совместной сверхэкспрессии глюкокиназы и островков PFK-2 / FBPase-2 в RINm5F-клетках на активность фосфорилирования глюкозы. Клетки выращивали в течение ночи при 10 ммоль / л глюкозы. После этого клетки RINm5F ( белых столбцов ), клетки RINm5F-GK ( серых столбцов ) и клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) ( черных столбцов ) были гомогенизированы обработкой ультразвуком. и фосфорилирующую активность определяли спектрофотометрически в присутствии различных концентраций глюкозы (1, 1.56, 3,12, 6,25, 12,5 и 25 ммоль / литр). Показаны средние значения ± стандартная ошибка четырех отдельных экспериментов. *, P <0,05; **, P <0,01 по сравнению с клетками RINm5F-GK (ANOVA / тест Бонферрони).
Рис. 2
Подавление PFK-2 / FBPase-2 в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) с помощью siRNA. Клетки трансфицировали островковой кДНК PFK-2 / FBPase-2 siRNA ( черная полоса ) или контрольной миРНК ( белая полоса ) в течение 4 ч в среде RPMI 1640 в отсутствие FCS.После этого клетки инкубировали в течение 48 ч в среде RPMI 1640 с добавлением 10 ммоль / л глюкозы и 5% FCS. Для вестерн-блоттинга 40 мкг клеточного белка анализировали на дорожку иммуноблоттингом с использованием специфических антител против FBPase-2 (A) или глюкокиназы (C). Показаны репрезентативные блоты четырех независимых экспериментов. Активность фермента глюкокиназы (B) измеряли спектрофотометрически в экстрактах клеток после обработки ультразвуком. Данные выражены в процентах от активности фермента, измеренной в контрольных клетках RINm5F-GK.Показаны средние значения ± стандартная ошибка четырех отдельных экспериментов. **, P <0,01 по сравнению с клетками, трансфицированными контрольной миРНК (тест Стьюдента t ).
Рис. 2
Подавление PFK-2 / FBPase-2 в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) с помощью siRNA. Клетки трансфицировали островковой кДНК PFK-2 / FBPase-2 siRNA ( черная полоса ) или контрольной миРНК ( белая полоса ) в течение 4 ч в среде RPMI 1640 в отсутствие FCS. После этого клетки инкубировали в течение 48 ч в среде RPMI 1640 с добавлением 10 ммоль / л глюкозы и 5% FCS.Для вестерн-блоттинга 40 мкг клеточного белка анализировали на дорожку иммуноблоттингом с использованием специфических антител против FBPase-2 (A) или глюкокиназы (C). Показаны репрезентативные блоты четырех независимых экспериментов. Активность фермента глюкокиназы (B) измеряли спектрофотометрически в экстрактах клеток после обработки ультразвуком. Данные выражены в процентах от активности фермента, измеренной в контрольных клетках RINm5F-GK. Показаны средние значения ± стандартная ошибка четырех отдельных экспериментов. **, P <0,01 по сравнению с клетками, трансфицированными контрольной миРНК (тест Стьюдента t ).
F-2,6-P
₂ Метаболизм в клетках RINm5F
Сверхэкспрессия островковой изоформы PFK-2 / FBPase-2 в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) не влияла на концентрацию F-2,6-P ₂ по сравнению с RINm5F- ГК клетки. Активатор протеинкиназы А форсколин вызывал незначительное снижение концентрации F-2,6-P ₂ на 26% в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4), что также наблюдалось в RINm5F. -GK (23%) и нетрансфицированные клетки RINm5F (24%) (рис.3). Таким образом, ни глюкокиназа, ни сверхэкспрессия тканеспецифической изоформы островка PFK-2 / FBPase-2 не влияли на регуляцию концентрации F-2,6-P ₂ в инсулин-продуцирующих клетках.
Рис.3
Влияние форсколина на содержание F-2,6-P ₂ в RINm5F, RINm5F-GK, RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (L 11), RINm5F-GK-PFK -2 / FBPase-2 (LM 12) и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). Клетки выращивали в течение 24 ч в среде с глюкозой 10 ммоль / л.После этого клетки инкубировали в течение 2 ч в отсутствие ( белых столбцов, ) или в присутствии ( черных столбцов, ) 10 мкм форсколина. Наконец, клетки были проницаемы 10 мкг / мл α-токсина из S. aureus , и F-2,6-P ₂ определяли спектрофотометрически. Показаны средние ± среднеквадратичные от четырех до семи индивидуальных экспериментов. *, P <0,05 по сравнению с соответствующими необработанными клетками; ##, P <0,01 по сравнению с клетками RINm5F-GK (тест Стьюдента t ).
Рис. 3
Влияние форсколина на содержание F-2,6-P ₂ в RINm5F, RINm5F-GK, RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (L 11), RINm5F-GK- Клетки PFK-2 / FBPase-2 (LM 12) и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). Клетки выращивали в течение 24 ч в среде с глюкозой 10 ммоль / л. После этого клетки инкубировали в течение 2 ч в отсутствие ( белых столбцов, ) или в присутствии ( черных столбцов, ) 10 мкм форсколина. Наконец, клетки были проницаемы 10 мкг / мл α-токсина из S. aureus , и F-2,6-P ₂ определяли спектрофотометрически.Показаны средние ± среднеквадратичные от четырех до семи индивидуальных экспериментов. *, P <0,05 по сравнению с соответствующими необработанными клетками; ##, P <0,01 по сравнению с клетками RINm5F-GK (тест Стьюдента t ).
Хотя сверхэкспрессия изоформы PFK-2 / FBPase-2 печени в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (L11) значительно снижает клеточную концентрацию F-2,6-P ₂ на 66%, Клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (LM 12), сверхэкспрессирующие нечувствительный к фосфорилированию мутант, показали на 53% более высокую концентрацию F-2,6-P ₂, чем RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) клетки.Это указывает на изменения в концентрации F-2,6-P ₂ из-за экспрессии другой изоформы PFK-2 / FBPase-2 в инсулин-продуцирующих клетках. Кроме того, по сравнению с клетками RINm5F-GK наблюдалось сопоставимое увеличение уровня белка PFK-2 / FBPase-2 до 364% в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) и до 362% в клетках. Клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (L11), тогда как в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (LM 12) уровень мутантного белка печени PFK-2 / FBPase-2 был повышен до 415 %. Учитывая этот несколько более высокий уровень экспрессии последнего клона, клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (LM 12) показали только на 38% более высокую концентрацию F-2,6-P ₂ по сравнению с RINm5F- Клетки GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4).Форсколин значительно снижает концентрацию F-2,6-P ₂ на 68% в клетках, сверхэкспрессирующих изоформу PFK-2 / FBPase-2 печени, тогда как клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (LM 12) показали только уменьшение концентрации F-2,6-P ₂ на 24% по сравнению с клетками RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4), RINm5F-GK и RINm5F (рис. 3). Таким образом, низкая концентрация F-2,6-P ₂ и ингибирующий эффект форсколина в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (L 11) могут быть опосредованы через сайт регуляторного фосфорилирования протеинкиназы A. в изоформе печени, которая не присутствует в изоформе островков PFK-2 / FBPase-2.
Глюкозозависимое взаимодействие глюкокиназы с островком PFK-2 / FBPase-2
PFK-2 / FBPase-2 и иммунофлуоресценция глюкокиназы была обнаружена в цитоплазме клеток RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). Совместная локализация глюкокиназы и PFK-2 / FBPase-2, указывающая на взаимодействие между обоими белками, наблюдалась в клетках RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4), культивируемых при концентрации глюкозы 10 ммоль / л (данные не показаны). Интересно, что клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) показали меньшую совместную локализацию между глюкокиназой и PFK-2 / FBPase-2 при 3 ммоль / литр глюкозы (рис.4A), чем при 10 ммоль / л глюкозы (фиг. 4B). Количественный анализ выявил значительное 3-кратное увеличение колокализации в клетках, культивируемых при концентрации глюкозы 10 ммоль / литр, по сравнению с клетками, культивируемыми при концентрации глюкозы 3 ммоль / литр (рис. 4C).
Рис. 4
Влияние глюкозы на совместную локализацию глюкокиназы и PFK-2 / FBPase-2 в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). Клетки высевали на покровные стекла и выращивали в течение 24 ч в среде с 10 ммоль / л глюкозы.После этого клетки инкубировали в течение следующих 24 ч в среде с 3 (A) или 10 (B) ммоль / л глюкозы. Наконец, клетки фиксировали и дважды иммуноокрашивали на глюкокиназу ( зеленый ) и PFK-2 / FBPase-2 ( красный ). Желтый цвет указывает на совместную локализацию. C. Колокализация была рассчитана с помощью Image J / Colocalization Finder (C. Laummonerie, Страсбург, Франция). Показаны средние значения ± стандартная ошибка трех отдельных экспериментов. **, P <0,01 по сравнению с клетками, культивированными при 3 ммоль / литр глюкозы (тест Стьюдента t ).
Рис. 4
Влияние глюкозы на совместную локализацию глюкокиназы и PFK-2 / FBPase-2 в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). Клетки высевали на покровные стекла и выращивали в течение 24 ч в среде с 10 ммоль / л глюкозы. После этого клетки инкубировали в течение следующих 24 ч в среде с 3 (A) или 10 (B) ммоль / л глюкозы. Наконец, клетки фиксировали и дважды иммуноокрашивали на глюкокиназу ( зеленый ) и PFK-2 / FBPase-2 ( красный ). Желтый цвет указывает на совместную локализацию.C. Колокализация была рассчитана с помощью Image J / Colocalization Finder (C. Laummonerie, Страсбург, Франция). Показаны средние значения ± стандартная ошибка трех отдельных экспериментов. **, P <0,01 по сравнению с клетками, культивированными при 3 ммоль / литр глюкозы (тест Стьюдента t ).
Влияние избыточной экспрессии островковой PFK-2 / FBPase-2 на утилизацию глюкозы в клетках RINm5F-GK
Производство ³ H ₂ O из d- [5- ³ H] глюкозы измеряли для оценки общей скорости гликолиза.Скорость использования глюкозы увеличивалась в зависимости от концентрации в клетках RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). Показатели утилизации глюкозы были значительно выше в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4), чем в клетках RINm5F-GK при 5 и 10 ммоль / литр глюкозы (рис. 5). Таким образом, избыточная экспрессия островковой PFK-2 / FBPase-2 приводит к усилению гликолитического потока в инсулин-продуцирующих клетках.
Рис. 5
Влияние избыточной экспрессии островковой PFK-2 / FBPase-2 на утилизацию глюкозы в клетках RINm5F-GK.Клетки RINm5F-GK ( белые кружки, ) и клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) ( черные кружки, ) выращивали в среде с 10 ммоль / л глюкозы. Через 48 часов клетки инкубировали в течение 1 часа при 37 ° C в буфере Кребса-Рингера без глюкозы. После этого метаболизм глюкозы измеряли в присутствии различных концентраций глюкозы (0,5, 1, 2, 5 и 10 ммоль / литр). Утилизацию глюкозы рассчитывали из продукции ³ H ₂ О. Показаны средние значения ± среднеквадратичная из семи отдельных экспериментов.*, P <0,05 по сравнению с клетками RINm5F-GK (тест Стьюдента t ).
Рис. 5
Влияние избыточной экспрессии островковой PFK-2 / FBPase-2 на утилизацию глюкозы в клетках RINm5F-GK. Клетки RINm5F-GK ( белые кружки, ) и клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) ( черные кружки, ) выращивали в среде с 10 ммоль / л глюкозы. Через 48 часов клетки инкубировали в течение 1 часа при 37 ° C в буфере Кребса-Рингера без глюкозы. После этого метаболизм глюкозы измеряли в присутствии различных концентраций глюкозы (0.5, 1, 2, 5 и 10 ммоль / литр). Утилизацию глюкозы рассчитывали из продукции ³ H ₂ О. Показаны средние значения ± среднеквадратичная из семи отдельных экспериментов. *, P <0,05 по сравнению с клетками RINm5F-GK (тест Стьюдента t ).
Соотношение АТФ / АДФ, содержание АТФ и содержание АДФ в клетках RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4)
Внутриклеточное соотношение АТФ / АДФ (рис. 6А) не отличалось в клетках RINm5F, культивируемых при 3 ммоль / л или 10 ммоль / л глюкозы из-за сопоставимого содержания АТФ и АДФ (рис.6, Б и В). Напротив, клетки RINm5F-GK, сверхэкспрессирующие глюкокиназу, показали на 14% больше, а клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4), ко-гиперэкспрессирующие глюкокиназу плюс островковые PFK-2 / FBPase-2, — 32% более высокое содержание АТФ / Соотношение АДФ при 10 ммоль / литр глюкозы, чем при 3 ммоль / литр глюкозы (фиг. 6A), опосредовано увеличением содержания АТФ (фиг. 6B) и снижением содержания ADP (фиг. 6C). Хотя при 3 ммоль / литр глюкозы соотношение АТФ / АДФ было сопоставимым в контрольных и трансфицированных клетках RINm5F, при 10 ммоль / литр глюкозы клетки RINm5F-GK и, в частности, клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). показали значительно более высокое соотношение АТФ / АДФ, чем клетки RINm5F (рис.6А). Инкубация контрольных и трансфицированных клеток RINm5F при 30 ммоль / литр глюкозы приводила к сопоставимым отношениям АТФ / АДФ, наблюдаемым для клеток, культивированных при 10 ммоль / литр глюкозы (данные не показаны).
Рис.6
Соотношение АТФ / АДФ (A), содержание АТФ (B) и содержание ADP (C) в клетках RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) культивировали при 3 и 10 ммоль / л глюкозы. Клетки выращивали в течение 24 ч в среде с глюкозой 10 ммоль / л. После этого клетки инкубировали в течение следующих 48 ч в среде либо с 3 ( серых столбцов, ), либо с 10 ммоль / литр ( черные столбцы ) глюкозы.После пермеабилизации клеток содержание АТФ и АДФ измеряли люминометрическим анализом и рассчитывали соотношение АТФ / АДФ. Показаны средние ± средн. От трех до пяти индивидуальных экспериментов. **, P <0,01 по сравнению с клетками RINm5F (ANOVA / тест Бонферрони).
Рис.6
Соотношение АТФ / АДФ (A), содержание АТФ (B) и содержание ADP (C) в RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) клетки культивировали при 3 и 10 ммоль / л глюкозы. Клетки выращивали в течение 24 ч в среде с глюкозой 10 ммоль / л.После этого клетки инкубировали в течение следующих 48 ч в среде либо с 3 ( серых столбцов, ), либо с 10 ммоль / литр ( черные столбцы ) глюкозы. После пермеабилизации клеток содержание АТФ и АДФ измеряли люминометрическим анализом и рассчитывали соотношение АТФ / АДФ. Показаны средние ± средн. От трех до пяти индивидуальных экспериментов. **, P <0,01 по сравнению с клетками RINm5F (ANOVA / тест Бонферрони).
Жизнеспособность клеток RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4)
На жизнеспособность клеток RINm5F не влияла инкубация в течение 48 часов при 3 ммоль / литр глюкозы (105 ± 12%) или при 30 ммоль / литр глюкозы (94 ± 9%) по сравнению с 10 ммоль / литр глюкозы (100 ± 12%) в питательной среде.Клетки RINm5F-GK и клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) также не показали разницы в жизнеспособности клеток после инкубации при 3 ммоль / литр глюкозы (99 ± 9 и 97 ± 9%) или 30 ммоль. / литр глюкозы (98 ± 6 и 97 ± 10%) по сравнению с 10 ммоль / литр (данные не показаны). Таким образом, ни глюкокиназа, ни гиперэкспрессия глюкокиназы плюс островковые PFK-2 / FBPase-2 не вызывали токсичности глюкозы в клетках RINm5F. Активность фермента глюкокиназы дифференцированно регулировалась высокими концентрациями глюкозы в культуральной среде в клетках RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4).Клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4), культивированные при 30 ммоль / литр глюкозы, показали на 15% более высокую активность фермента глюкокиназы по сравнению с клетками, инкубированными при 10 ммоль / литр глюкозы. Напротив, активность фермента глюкокиназы в клетках RINm5F-GK была снижена на 10% в клетках, культивируемых при 30 ммоль / литр глюкозы, по сравнению с клетками, инкубированными при 10 ммоль / литр глюкозы (данные не показаны).
Влияние сверхэкспрессии глюкокиназы и ко-гиперэкспрессии глюкокиназы плюс островков PFK-2 / FBPase-2 на продукцию пирувата и лактата в клетках RINm5F
Для дальнейшей характеристики метаболизма глюкозы клетки RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) культивировали в течение 48 ч при 10 или 30 ммоль / л глюкозы (рис.7). Производство лактата и пирувата увеличивалось в зависимости от концентрации глюкозы во всех типах клеток. Хотя продукция пирувата была сопоставима в клетках RINm5F и RINm5F-GK, культивируемых при 10 ммоль / литр глюкозы (рис. 7A), продукция лактата клетками RINm5F была немного выше, со значительно более высокими значениями лактата при концентрациях глюкозы 0,5 и 2 ммоль / литр. по сравнению с клетками RINm5F-GK (фиг. 7B). Продукция пирувата и лактата была значительно ниже в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4), чем в клетках RINm5F-GK, культивируемых при концентрации глюкозы 10 ммоль / л (рис.7, А и Б). Продукция пирувата снижалась в клетках RINm5F и RINm5F-GK, но не в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) при 30 ммоль / литр глюкозы по сравнению с 10 ммоль / литр глюкозы. Таким образом, при высокой концентрации глюкозы продукция пирувата в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) была ниже, но существенно не отличалась от клеток RINm5F-GK (фиг. 7C). Продукция лактата увеличивалась во всех клетках после инкубации при 30 ммоль / л глюкозы. Клетки RINm5F показали по сравнению с клетками RINm5F-GK значительно более низкие значения лактата при концентрациях глюкозы 5 и 10 ммоль / л (рис.7D). Примечательно, что продукция лактата в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) была значительно ниже при всех концентрациях глюкозы по сравнению с клетками RINm5F-GK (фиг. 7D).
Рис. 7
Продукция пирувата и лактата в клетках RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). Измерения проводили в клетках RINm5F ( черные квадраты, /, пунктирная линия ), клетках RINm5F-GK ( белые кружки, /, закрытая линия ) и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). ячеек ( черные кружки / замкнутая линия ).Клетки либо выращивали в течение 72 часов в среде с глюкозой 10 ммоль / литр (A, B), либо выращивали в течение 24 часов в среде с глюкозой 10 ммоль / литр и в течение следующих 48 часов в среде с глюкозой 30 ммоль / литр (C, D). После этого клетки инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C и 300 об / мин в буфере Кребса-Рингера в присутствии различных концентраций глюкозы (0,5, 1, 2, 5 и 10 ммоль / л). После центрифугирования содержание лактата и пирувата измеряли спектрофотометрически в супернатанте. Показаны средние ± среднеквадратичные от четырех до семи индивидуальных экспериментов.*, P <0,05; **, P <0,01; ***, P <0,001 по сравнению с клетками RINm5F-GK (ANOVA / тест Бонферрони).
Рис. 7
Продукция пирувата и лактата в клетках RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). Измерения проводили в клетках RINm5F ( черные квадраты, /, пунктирная линия ), клетках RINm5F-GK ( белые кружки, /, закрытая линия ) и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4). ячеек ( черные кружки / замкнутая линия ).Клетки либо выращивали в течение 72 часов в среде с глюкозой 10 ммоль / литр (A, B), либо выращивали в течение 24 часов в среде с глюкозой 10 ммоль / литр и в течение следующих 48 часов в среде с глюкозой 30 ммоль / литр (C, D). После этого клетки инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C и 300 об / мин в буфере Кребса-Рингера в присутствии различных концентраций глюкозы (0,5, 1, 2, 5 и 10 ммоль / л). После центрифугирования содержание лактата и пирувата измеряли спектрофотометрически в супернатанте. Показаны средние ± среднеквадратичные от четырех до семи индивидуальных экспериментов.*, P <0,05; **, P <0,01; ***, P <0,001 по сравнению с клетками RINm5F-GK (ANOVA / тест Бонферрони).
Секреция инсулина клетками RINm5F-GK, сверхэкспрессирующими островковую PFK-2 / FBPase-2
Хотя клетки RINm5F показали базальную скорость секреции инсулина 18,5% по отношению к содержанию инсулина и не продемонстрировали явного секреторного ответа инсулина на глюкозу (данные не показаны), гиперэкспрессирующие глюкокиназу клетки RINm5F-GK, а также глюкокиназу плюс островковые PFK-2 / FBPase- 2 клетки со сверхэкспрессией RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) реагировали на глюкозу (рис.8). Клетки RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) показали уровни базальной секреции инсулина 10,9 и 11,1%, соответственно, и сопоставимую секрецию инсулина при 0 и 1 ммоль / литр глюкозы (рис. 8). ). Примечательно, однако, что клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) показали более высокую скорость секреции инсулина, чем клетки RINm5F-GK, в ответ на 3, 5, 10 и 25 ммоль / литр глюкозы (рис. 8). Секреция инсулина в ответ на KCl (25 ммоль / литр), стимул, не связанный с питанием, не различалась для обоих типов клеток, и на содержание инсулина не влияла сверхэкспрессия островковой PFK-2 / FBPase-2 в клетках RINm5F-GK (данные не показано).
Рис. 8
Влияние избыточной экспрессии островковой PFK-2 / FBPase-2 на секрецию инсулина клетками RINm5F-GK. Клетки RINm5F-GK ( белых полос, ) и клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) ( черных полос, ) инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C без или в присутствии различных концентраций глюкозы. (1, 3, 5, 10 и 25 ммоль / литр). После этого в супернатанте измеряли инсулин. Показаны средние ± средн. От четырех до шести индивидуальных экспериментов.*, P <0,05 по сравнению с клетками RINm5F-GK (ANOVA / тест Бонферрони).
Фиг. 8
Влияние избыточной экспрессии островковой PFK-2 / FBPase-2 на секрецию инсулина клетками RINm5F-GK. Клетки RINm5F-GK ( белых полос, ) и клетки RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) ( черных полос, ) инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C без или в присутствии различных концентраций глюкозы. (1, 3, 5, 10 и 25 ммоль / литр). После этого в супернатанте измеряли инсулин. Показаны средние ± средн. От четырех до шести индивидуальных экспериментов.*, P <0,05 по сравнению с клетками RINm5F-GK (ANOVA / тест Бонферрони).
Обсуждение
Регуляция сенсорного фермента глюкозы глюкокиназы в β-клетках поджелудочной железы сложна и изучена лишь частично. Посттрансляционные механизмы важны для адаптации активности фермента глюкокиназы к физиологическим потребностям β-клетки (6, 7, 11). Хотя глюкоза является основным стимулом в процессе регуляции глюкокиназы (2, 5), другие модуляторы имеют решающее значение для обеспечения точной адаптации активности фермента глюкокиназы к потребностям связывания метаболического стимула и секреции.Внутриклеточные структуры, такие как секреторные гранулы инсулина и растворимые белки, рассматриваются как потенциальные регуляторы активности глюкокиназы (10, 11–14, 20, 31, 32). Бифункциональный фермент PFK-2 / FBPase-2 является цитоплазматическим партнером по связыванию глюкокиназы, которая посттрансляционно активирует фермент в β-клетках (18, 20). Сверхэкспрессия PFK-2 / FBPase-2 приводила к значительному увеличению активности фермента глюкокиназы в инсулин-продуцирующих клетках RINm5F-GK и INS1 (18). Наши настоящие результаты показывают, что, помимо физиологической активации глюкокиназы посредством эндогенной PFK-2 / FBPase-2 в β-клетках, дальнейшая активация может быть достигнута за счет дополнительной экспрессии PFK-2 / FBPase-2.Таким образом, уровень активности фермента глюкокиназы коррелирует с уровнем экспрессии белка PFK-2 / FBPase-2. В островковых клетках PFK-2 / FBPase-2, сверхэкспрессирующих инсулин-продуцирующие клетки RINm5F-GK, подавление PFK-2 / FBPase-2 с помощью siRNA приводило к сопутствующему снижению активности фермента глюкокиназы.
Из-за ключевой метаболической роли глюкокиназы изменения статуса активности фермента будут напрямую влиять на гликолитический поток и инициирование секреции инсулина в β-клетках поджелудочной железы. Эта основная функция, в частности, проиллюстрирована у пациентов, несущих активирующие или инактивирующие мутации гена глюкокиназы (7, 8, 33).Поскольку активация глюкокиназы является многообещающей концепцией лечения диабета 2 типа, этот фермент оказался интересной мишенью для противодиабетических препаратов (15–17). Недавно разработанные небольшие химические соединения активируют глюкокиназу, связываясь с аллостерическим участком ферментного белка. Активаторы глюкокиназы RO281675, RO0274375 и LY2121260 представляют собой особенно интересные молекулы, потому что они способны увеличивать значение глюкокиназы V _max вместе с уменьшением уровня глюкозы S _0.5 (15, 17, 34). Единственное уменьшение S _0,5 для глюкозы привело бы к нежелательному сдвигу влево на характеристической кривой сигмоидального ответа фермента. Таким образом, увеличение значения глюкокиназы V _max, которое улучшает сенсорную функцию в пределах миллимолярного диапазона концентраций глюкозы, является основной целью активации глюкокиназы (34). Интересно, что активация глюкокиназы посредством PFK-2 / FBPase-2 отражает физиологическую регуляцию с увеличением значения V _max, тогда как S _0.5 для глюкозы остается без изменений (18). Активация активности фермента глюкокиназы с помощью PFK-2 / FBPase-2 улучшала метаболическое связывание стимула и секреции в инсулин-продуцирующих клетках (18). Важно отметить, что активаторы глюкокиназы RO281675, RO0274375 и LY2121260 индуцировали стимуляцию индуцированной глюкозой секреции инсулина в островках поджелудочной железы крыс (15, 17, 34).
Хорошо известно, что разумная сверхэкспрессия белка глюкокиназы в β-клетках увеличивает активность фермента глюкокиназы и, соответственно, метаболизм глюкозы (21, 35).Однако неясно, будет ли большое количество белка глюкокиназы оказывать такое же влияние на метаболизм глюкозы в β-клетках, что и активация конститутивных физиологических уровней белка глюкокиназы. Активированная глюкокиназа присутствует в закрытой конформации и предотвращает конформационный переход в супероткрытую форму, как показали кристаллографические анализы (9). Это важный аспект, основанный на том факте, что нарушение секреции инсулина и потеря жизнеспособности клеток были описаны в продуцирующих инсулин клетках после чрезмерной сверхэкспрессии глюкокиназы (36).Более того, недавно сообщалось, что усиление окислительного стресса усиливает токсичность глюкозы в секретирующих инсулин клетках даже после умеренной сверхэкспрессии глюкокиназы (37).
В настоящем исследовании метаболизм глюкозы был проанализирован в клетках RINm5F-GK, сверхэкспрессирующих эндогенный активатор глюкокиназы PFK-2 / FBPase-2, и сравнен с клетками RINm5F-GK и RINm5F. Эти эксперименты были выполнены на инсулинпродуцирующих клетках с островковой изоформой PFK-2 / FBPase-2, которая, в отличие от изоформы печени, не регулируется фосфорилированием и дефосфорилированием (20, 38).Изменения уровня F-2,6-P ₂, полученные в результате сверхэкспрессии другой PFK-2 / FBPase-2 в клетках RINm5F-GK, а именно печени или мутантной изоформы печени, выявили различия с островковой PFK-2 / FBPase -2 изоформа. Тем не менее, однако, эта сверхэкспрессия в продуцирующих инсулин клетках не может отражать метаболическую регуляцию в гепатоцитах. Очевидно, что контроль клеточной концентрации F-2,6-P ₂ и регуляция глюкокиназы с помощью PFK-2 / FBPase-2 в β-клетках отличаются от регуляторных принципов в печени (39–42).В β-клетках F-2,6-P ₂ имеет второстепенное физиологическое значение, а в активности фермента доминирует домен PFK-2 (43, 44). Наши настоящие результаты показывают, что избыточная экспрессия островковой изоформы PFK-2 / FBPase-2 не влияла на регуляцию клеточных концентраций F-2,6-P ₂ и, таким образом, не оказывала прямого влияния на метаболизм глюкозы в инсулинпродуцирующих клетках. .
Активация глюкокиназы PFK-2 / FBPase-2 оказалась глюкозозависимой. Сверхэкспрессия островковой PFK-2 / FBPase-2 в клетках RINm5F-GK приводила к большему стимулирующему эффекту глюкозы на активность фермента глюкокиназы при увеличении концентрации глюкозы с 2 до 10 ммоль / л (18).Важно отметить, что наши настоящие результаты демонстрируют также глюкозозависимое увеличение совместной локализации между глюкокиназой и PFK-2 / FBPase-2 в этих клетках. Таким образом, есть свидетельства того, что сайт связывания глюкокиназы в основном доступен для взаимодействия с PFK-2 / FBPase-2 в закрытой конформации фермента при связывании субстрата глюкозы (9). Это может объяснить, почему активация глюкокиназы PFK-2 / FBPase-2 влияет только на V _max фермента, но не на S _0,5 для глюкозы, и это должно быть выяснено в дальнейших экспериментах.
Общий метаболизм глюкозы повышается в клетках RINm5F-GK, сверхэкспрессирующих активатор глюкокиназы PFK-2 / FBPase-2. Таким образом, повышение активности фермента глюкокиназы не только усиливает фосфорилирование глюкозы, но также значительно улучшает связь между гликолизом и окислительным потоком. Более того, это улучшенное метаболическое связывание также может быть продемонстрировано меньшим накоплением пирувата и превращением в лактат в клетках RINm5F-GK, сверхэкспрессирующих PFK-2 / FBPase-2 как в нормальной культуре, так и в культуре с высоким содержанием глюкозы.Следует отметить, что клетки RINm5F проявляют высокую активность лактатдегидрогеназы, тем самым провоцируя анаэробное превращение пирувата в лактат (25). Улучшенный метаболизм в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) также демонстрируется увеличением отношения АТФ / АДФ при 10 ммоль / литр глюкозы по сравнению с клетками RINm5F-GK и RINm5F. В контрольных клетках RINm5F метаболизм глюкозы определяется значительными уровнями высокоаффинных гексокиназ (21). При сверхэкспрессии глюкокиназы в клетках RINm5F-GK можно было установить характеристическую чувствительность β-клеток к миллимолярной концентрации глюкозы.Клетки RINm5F-GK показали как значительно более низкое базальное высвобождение инсулина, чем клетки RINm5F, так и порог глюкозо-индуцированного метаболизма, который несколько ниже, чем в β-клетках, вероятно, из-за высоких уровней гексокиназ с низким K _m. Тем не менее, клетки RINm5F-GK показали увеличение отношения АТФ / АДФ, а также стимулированную глюкозой секрецию инсулина в зависимости от миллимолярной концентрации глюкозы. Важно отметить, что дополнительная сверхэкспрессия PFK-2 / FBPase-2 в клетках RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4) вызвала удвоение активности глюкокиназы с сопутствующим увеличением скорости метаболического потока без какого-либо влияния на жизнеспособность клеток.Это привело к более высокому соотношению АТФ / АДФ и к значительному увеличению секреции инсулина, стимулированной глюкозой, по сравнению с клетками RINm5F-GK. Это соответствует сообщению о том, что активатор глюкокиназы RO0281675 усиливал клеточное дыхание параллельно с увеличением секреции инсулина, стимулированной глюкозой (34).
В отличие от печени, функция сенсора глюкозы в β-клетках зависит от относительно низкой активности глюкокиназы, контролируемая активация которой посредством PFK-2 / FBPase-2 или небольших химических соединений, по-видимому, оказывает более интегративный эффект на метаболизм глюкозы, чем чрезмерная сверхэкспрессия фермента.Вероятно, закрытая конформация глюкокиназы может играть ключевую роль в канализации макромолекул промежуточных продуктов гликолита. Метаболическая компартментация — общепринятый биологический феномен (45–47), но из-за его большой сложности его детали недостаточно изучены. Основываясь на конформационных данных (9), кажется вероятным, что стабилизированная глюкокиназа благоприятна для динамического комплексообразования в процессе формирования каналов.
Настоящее исследование подтверждает предположение, что активация глюкокиназы через взаимодействие с бифункциональным ферментом PFK-2 / FBPase-2 является важным элементом посттрансляционной регуляции глюкокиназы в β-клетках поджелудочной железы (8, 48–50).Кроме того, активация глюкокиназы является привлекательной терапевтической стратегией, и недавно были описаны многообещающие активирующие небольшие химические соединения (15, 17, 34). Благоприятное влияние на ключевые метаболические параметры в β-клетках поджелудочной железы активацией глюкокиназы, опосредованной PFK-2 / FBPase-2, будет способствовать лучшему пониманию регуляции глюкокиназы β-клеток и способствовать дальнейшим исследованиям метаболических механизмов, лежащих в основе взаимодействия между активацией глюкокиназы и индуцированная глюкозой секреция инсулина.
Благодарности
Выражаем признательность за квалифицированную техническую помощь M. Boeger и B. Lueken.
Эта работа была поддержана Немецкой диабетической ассоциацией и Фондом доктора Будинга (в адрес S.B.). Л.М. был получателем гранта от Министерства науки и культуры Нижней Саксонии по увольнению Центра экспериментальной и прикладной эндокринологии CENEXA Медицинской школы Национального университета Ла-Платы, Ла-Плата, Аргентина.
Заявление о раскрытии информации: авторам нечего заявлять.
Сокращения:
F-2
6-P ₂, Фруктозо-2,6-бисфосфат
FCS
FITC
изотиоцианат флуоресцеина
PFK-2 / FBPase -фосфофрукто-2-киназа / фруктозо-2,6-бисфосфатаза
siRNA
TxRed
1
Meglasson
MD
,
Matschinsky
910
Новинка
FM
глюкокиназа островков поджелудочной железы
.
Am J Physiol
246
:
E1
—
E13
2
Lenzen
S
,
Panten
U
1988
Распознавание сигналов B-клетками поджелудочной железы
.
Biochem Pharmacol
37
:
371
—
378
3
Magnuson
MA
1990
Структура гена глюкокиназы. Функциональные последствия молекулярно-генетических исследований
.
Диабет
39
:
523
—
527
4
Iynedjian
PB
1993
Глюкокиназа млекопитающих и ее ген
.
Biochem J
293
:
1
—
13
5
Matschinsky
F
,
Liang
Y
,
Kesavan
P
,
Wang
L
,
Wang
L
,
Wang
L
,
,
Velho
G
,
Cohen
D
,
Permutt
MA
,
Tanizawa
Y
,
Jetton
TL
,
Niswender
K
, 9107
Magnus
1993
Глюкокиназа как сенсор глюкозы в β-клетках поджелудочной железы и ген диабета
.
J Clin Invest
92
:
2092
—
2098
6
Матчинский
FM
1996
Лекция Бантинга 1995. Урок метаболической регуляции, вдохновленный парадигмой глюкокиназного сенсора глюкозы
.
Диабет
45
:
223
—
241
7
Мачинский
FM
2002
Регулирование β-клеточной глюкокиназы поджелудочной железы: от основ до терапии
.
Диабет
51
(
Suppl 3
):
S394
—
S404
8
Мачинский
FM
,
Магнусон
MA
,
Zelent
D Jetton
10
Doliba
N
,
Han
Y
,
Taub
R
,
Grimsby
J
2006
Сеть экспрессирующих глюкокиназу клеток в гомеостазе глюкозы и потенциале активаторов глюкокиназы Терапия
.
Диабет
55
:
1
—
12
9
Камата
K
,
Mitsuya
M
,
Nishimura
T
,
Eiki
J
,
07 Nagata
2004
Структурная основа аллостерической регуляции мономерного аллостерического фермента глюкокиназы человека
.
Структура
12
:
429
—
438
10
Toyoda
Y
,
Yoshie
S
,
Shironoguchi
H
,
Miwa
I
is концентрируется в инсулин-секреторных гранулах В-клеток поджелудочной железы
.
Histochem Cell Biol
112
:
35
—
40
11
Tiedge
M
,
Steffeck
H
,
Elsner
M
,
Lenzen
S
S
Метаболическая регуляция, состояние активности и внутриклеточное связывание глюкокиназы в секретирующих инсулин клетках
.
Диабет
48
:
514
—
523
12
Rizzo
MA
,
Magnuson
MA
,
Дренажный
PF
,
Поршень
2002
DW7 A Функциональный связь между связыванием глюкокиназы с гранулами инсулина и конформационными изменениями в ответ на глюкозу и инсулин
.
J Biol Chem
277
:
34168
—
34175
13
Rizzo
MA
,
Piston
DW
2003
Регулирование β-клеточной глюкокиназы с помощью S-нитрозилирования и ассоциации синтаза
.
J Cell Biol
161
:
243
—
248
14
Arden
C
,
Harbottle
A
,
Baltrusch
S
,
Tiedge
M
M
L
2004
Глюкокиназа является неотъемлемым компонентом гранул инсулина в чувствительных к глюкозе секреторных клетках инсулина и не перемещается во время стимуляции глюкозой
.
Диабет
53
:
2346
—
2352
15
Гримсби
J
,
Сарабу
R
,
Корбетт
WL
,
Хейнс
NE
ro
7 FT
7 ,
Coffey
JW
,
Guertin
KR
,
Hilliard
DW
,
Kester
RF
,
Mahaney
PE
,
Marcus
L
10,
Qi
Spence
CL
,
Tengi
J
,
Magnuson
MA
,
Chu
CA
,
Dvorozniak
MT
,
Matschinsky
FM
7
Gruppo
7
GF
7
2003
Аллостерические активаторы глюкокиназы: потенциальная роль в терапии диабета
.
Science
301
:
370
—
373
16
Brocklehurst
KJ
,
Payne
VA
,
Davies
RA
,
Carroll
D
L,
Carroll
D
L,
,
Wightman
HJ
,
Aiston
S
,
Waddell
ID
,
Leighton
B
,
Coghlan
MP
,
Agius
L
гепатит метаболизм глюкозы новыми низкомолекулярными активаторами глюкокиназы
.
Диабет
53
:
535
—
541
17
Ефанов
AM
,
Barrett
DG
,
Brenner
MB
,
Briggs
SL
,
Briggs
SL
,
,
Durbin
JD
,
Giese
U
,
Guo
H
,
Radloff
M
,
Gil
GS
,
Швейное дело
S
,
Wang
,
Wang
,
Wang
Weichert
A
,
Zaliani
A
,
Gromada
J
2005
Новый активатор глюкокиназы модулирует функцию островков поджелудочной железы и гепатоцитов
.
Эндокринология
146
:
3696
—
3701
18
Масса
L
,
Baltrusch
S
,
Okar
DA
,
Lange
A Len
,
Lange
AJ
,
,
Tiedge
M
2004
Взаимодействие 6-фосфофрукто-2-киназы / фруктозо-2,6-бисфосфатазы (PFK-2 / FBPase-2) с глюкокиназой активирует фосфорилирование глюкозы и метаболизм глюкозы при производстве инсулина. Ячейки
.
Диабет
53
:
1020
—
1029
19
Baltrusch
S
,
Wu
C
,
Okar
DA
,
Tiedge
M
10
Lange
2004
Взаимодействие ГК с бифункциональным ферментом 6-фосфофрукто-2-киназа / фруктозо-2,6-бисфосфатаза (6PF2K / F26P2ase)
. В:
Matschinsky
FM
,
Magnuson
MA
, ред.
Глюкокиназа и гликемическая болезнь
.
Базель, Швейцария
:
Каргер
;
262
—
274
20
Baltrusch
S
,
Lenzen
S
,
Okar
DA
,
Lange
AJ
,
Tiedge
M
9000
M
9000 9000 эпитопы белков, связывающих глюкокиназу, с помощью библиотеки пептидов, отображаемых на фаге. Идентификация 6-фосфофрукто-2-киназы / фруктозо-2,6-бисфосфатазы как нового партнера по взаимодействию
.
J Biol Chem
276
:
43915
—
43923
21
Стяжка
M
,
Elsner
M
,
McClenaghan
NH
,
Hedrich
Hedrich
Hedrich
D
,
Klempnauer
J
,
Lenzen
S
2000
Разработка суррогатной клетки, чувствительной к глюкозе, для инсулино-заместительной терапии экспериментального инсулинозависимого диабета
.
Hum Gen Ther
11
:
403
—
414
22
Lenzen
S
,
Tiedge
M
,
Panten
U
1987
Глюкокиназа в клетках поджелудочной железы его ингибирование аллоксаном
.
Acta Endocrinol Copenh
115
:
21
—
29
23
Baltrusch
S
,
Francini
F
,
Lenzen
S
,
Tiedge
07 M
2005 Взаимодействие глюкокиназы с регуляторным белком печени обеспечивается лейцин-аспарагиновыми мотивами фермента
.
Диабет
54
:
2829
—
2837
24
Lenzen
S
,
Panten
U
1980
2-оксокарбоновые кислоты и функция островков поджелудочной железы при ожирении и гипергликемии10.
Biochem J
186
:
135
—
144
25
Alcazar
O
,
Tiedge
M
,
Lenzen
S
2000
Важность лактат-дегидрогеназы гликолитический поток и секреция инсулина в инсулин-продуцирующих клетках
.
Biochem J
352
:
373
—
380
26
Hampp
R
1986
Методы ферментативного анализа
. В:
Bergmeyer
HU
, ed. 3-е изд.
Вайнхайм, Германия
:
VCH Verlagsgesellschaft Weinheim
;
370
—
379
27
Noll
F
1986
Методы ферментативного анализа
. В:
Bergmeyer
HU
, ed.3-е изд.
Вайнхайм, Германия
:
VCH Verlagsgesellschaft Weinheim
;
582
—
588
28
Lamprecht
W
,
Heinz
F
1986
Методы ферментативного анализа
. В:
Bergmeyer
HU
, ed. 3-е изд.
Вайнхайм, Германия
:
VCH Verlagsgesellschaft Weinheim
;
570
—
577
29
Tiedge
M
,
Lortz
S
,
Drinkgern
J
,
Lenzen
S
1997
Взаимосвязь между экспрессией антиоксидантной защиты гена и антиоксидантной защитой статус инсулинпродуцирующих клеток
.
Диабет
46
:
1733
—
1742
30
Мосманн
T
1983
Быстрый колориметрический анализ роста и выживаемости клеток: применение для анализа пролиферации и цитотоксичности
.
J Immunol Methods
65
:
55
—
63
31
Murata
T
,
Katagiri
H
,
Ishihara
H
,
Shibasaki
Y
Y T
,
Toyoda
Y
,
Pekiner
B
,
Pekiner
C
,
Miwa
I
,
Oka
Y
1997
Co-локализация глюкокиназных волокон
.
FEBS Lett
406
:
109
—
113
32
Shiraishi
A
,
Yamada
Y
,
Tsuura
Y
,
Fijimoto
S
,
Fijimoto
S
,
,
Mukai
E
,
Toyoda
Y
,
Miwa
I
,
Seino
Y
2001
Новый регулятор глюкокиназы в β-клетках поджелудочной железы: предшественник карбоксил-β-CoA субъединица взаимодействует с глюкокиназой и увеличивает ее активность
.
J Biol Chem
276
:
2325
—
2328
33
Gloyn
AL
2003
Мутации глюкокиназы (GCK) при гипер- и гипогликемии: диабет в зрелом возрасте у молодых, перманентный неонат диабет и гиперинсулинемия в младенчестве
.
Hum Mutat
22
:
353
—
362
34
Grimsby
J
,
Matschinsky
FM
,
Grippo
JF
2004
9000 Discovery 9000 DiscoВ:
Matschinsky
FM
,
Magnuson
MA
, ред.
Глюкокиназа и гликемическая болезнь
.
Базель, Швейцария
:
Каргер
;
360
—
378
35
Wang
H
,
Iynedjian
P
1997
Модуляция глюкозной чувствительности β-клеток инсулиномы за счет ступенчатой сверхэкспрессии глюкокиназы
.
Proc Natl Acad Sci USA
94
:
4372
—
4377
36
Wang
H
,
Iynedjian
PB
1997
Острая непереносимость глюкозы в клетках сверхэкспрессии инсулиномы 900 с несбалансированной глюкозой 10 из несбалансированных клеток глюкозы10. .
J Biol Chem
272
:
25731
—
25736
37
Wu
L
,
Nicholson
W
,
Knobel
SM
,
Steffner
Steffner
JM
,
Piston
DW
,
Powers
AC
2004
Окислительный стресс является медиатором токсичности глюкозы в линиях инсулин-секретирующих клеток островков поджелудочной железы
.
J Biol Chem
279
:
12126
—
12134
38
Okar
DA
,
Manzano
A
,
Navarro-Sabate
A
Liera
,
Riera
R
,
Lange
AJ
2001
PFK-2 / FBPase-2: производитель и разрушитель основного биофактора фруктозо-2,6-бисфосфата
.
Trends Biochem Sci
26
:
30
—
35
39
Wu
C
,
Okar
DA
,
Newgard
CB
,
Lange
AJ
AJ
Сверхэкспрессия 6-фосфофрукто-2-киназы / фруктозо-2,6-бисфосфатазы в печени мышей снижает уровень глюкозы в крови путем подавления продукции глюкозы в печени
.
J Clin Invest
107
:
91
—
98
40
Wu
C
,
Okar
DA
,
Newgard
CB
,
Lange
AJ
2002
2002
Повышение уровня фруктозо-2,6-бисфосфата преодолевает печеночную инсулинорезистентность при диабете 2 типа
.
Am J Physiol Endocrinol Metab
282
:
E38
—
E45
41
Wu
C
,
Okar
DA
,
Stoeckman
AK
,
Peng
,
Peng
9000
AH
,
Herrera
JE
,
Towle
HC
,
Lange
AJ
2004
Потенциальная роль фруктозо-2,6-бисфосфата в стимуляции экспрессии гена глюкокиназы в печени
.
Эндокринология
145
:
650
—
658
42
Payne
VA
,
Arden
C
,
Wu
C
,
Lange
AJ
10
Agius
10
Agius
2005
Двойная роль фосфофруктокиназы-2 / фруктозобисфосфатазы-2 в регуляции компартментации и экспрессии глюкокиназы в гепатоцитах
.
Диабет
54
:
1949
—
1957
43
Sener
A
,
Van Schaftingen
E
,
Van de Winkel
M
,
Pipeleers
DG Malse
Lagae
F
,
Malaisse
WJ
,
Hers
HG
1984
Влияние глюкозы и глюкагона на содержание 2,6-бисфосфата фруктозы в островках поджелудочной железы и очищенных B-клетках поджелудочной железы.Сравнение с изолированными гепатоцитами
.
Biochem J
221
:
759
—
764
44
Burch
PT
,
Berner
DK
,
Najafi
H
,
Meglasson
MD
FM
MD
1985
Регуляторная роль фруктозо-2,6-бисфосфата в метаболизме глюкозы в островках поджелудочной железы остается неустановленной
.
Диабет
34
:
1014
—
1018
45
Srere
PA
,
Ovadi
J
1990
Ферментно-ферментные взаимодействия и их метаболическая роль
.
FEBS Lett
268
:
360
—
364
46
Ovadi
J
,
Srere
PA
2000
Макромолекулярная компартментация и образование каналов
.
Int Rev Cytol
192
:
255
—
280
47
Ovadi
J
,
Saks
V
2004
О происхождении внутриклеточной компартментации и организованных метаболических систем
.
Mol Cell Biochem
256–257
:
5
—
12
48
Сарабу
R
,
Grimsby
J
2005
Активация глюкокиназы для лечения диабета 2 типа — a обзор статуса
.
Curr Opin Drug Discov Devel
8
:
631
—
637
49
Printz
RL
,
Granner
DK
2005
Настройка сенсора глюкозы: регулировка активности активатора глюкокиназы 10 .
Эндокринология
146
:
3693
—
3695
50
Leighton
B
,
Atkinson
A
,
Coghlan
MP
New
2005
Малые молекулы-активаторы диабета Малые молекулы глюкозы Агенты
.
Biochem Soc Trans
33
:
371
—
374
Авторские права © 2006 Общество эндокринологов
Удержание супероксидного ритма менадионом в клетках рака толстой кишки HCT116
1.
Конклин, К. А. Окислительный стресс, связанный с химиотерапией: влияние на химиотерапевтическую эффективность. Integr Cancer Ther. 3 , 294–300 (2004).
CAS Статья Google Scholar
2.
Liou, G. Y. & Storz, P. Активные формы кислорода при раке. Free Radic Res. 44 , 479–496 (2010).
CAS Статья Google Scholar
3.
Ван, Х. и др. . Направленное производство активных форм кислорода в митохондриях для преодоления лекарственной устойчивости против рака. Nat. Commun. 9 , 562, https://doi.org/10.1038/s41467-018-02915-8 (2018).
ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
4.
Kasiappan, R. & Safe, S. Агенты, вызывающие ROS, для химиотерапии рака. Реактивные формы кислорода. 1 , 22–37 (2016).
Артикул Google Scholar
5.
Модинг, Э. Дж., Кастан, М. Б. и Кирш, Д. Г. Стратегии оптимизации реакции рака и нормальных тканей на радиацию. Nat Rev Drug Discov 12 , 526–542 (2013).
CAS Статья Google Scholar
6.
Саидния, С. и Абдоллахи, М. Антиоксиданты: друзья или враг в профилактике или лечении рака. Споры века. Toxicol. Прил. Pharmacol. 271 , 49–63 (2013).
CAS Статья Google Scholar
7.
Eriguchi, M. et al . Хронотерапия рака. Biomed. Фармакотер. 57 , 92–95 (2003 г.).
CAS Статья Google Scholar
8.
Леви, Ф. и др. . Значение циркадных часов для ритмичной доставки лекарств от рака. Adv. Препарат Делив. Ред. 59 , 1015–1035 (2007).
Артикул Google Scholar
9.
Мормонт, М. К. и Леви, Ф. Хронотерапия рака: принципы, применения и перспективы. Рак. 97 , 155–169 (2003).
CAS Статья Google Scholar
10.
Holcslaw, T. L. et al . Циркадные ритмы действия и метаболизма лекарств у мышей. J Pharmacol Exp Ther. 195 , 320–32 (1975).
CAS PubMed Google Scholar
11.
Гриффетт К. и Беррис Т. П. Часы млекопитающих и хронофармакология. Bioorg. Med. Chem. Lett. 23 , 1929–1934 (2013).
CAS Статья Google Scholar
12.
Баральдо М. Влияние циркадных ритмов на кинетику лекарств у человека. Expert Opin Drug Metab Toxicol. 4 , 175–192 (2008).
CAS Статья Google Scholar
13.
Саллам, Х. и др. . Влияние циркадного ритма на фармакокинетику и метаболизм ингибитора Cdk, росковитина, на модели опухоли на мышах. Chronobiol Int. 32 , 608–14 (2015).
CAS Статья Google Scholar
14.
Леви Ф. и Окьяр А. Циркадные часы и системы доставки лекарств: влияние и возможности хронотерапии. Экспертное заключение Drug Deliv. 8 , 1535–41 (2011).
Артикул Google Scholar
15.
Balan, R. & Suraishkumar, G.K. UVA-индуцированная перезагрузка ультрадианного ритма гидроксильных радикалов улучшает производство временных липидов у Chlorella vulgaris. Biotechnol Prog. 30 , 673–680 (2014).
CAS Статья Google Scholar
16.
Криддл, Д. Н. и др. . Вызванная менадионом генерация активных форм кислорода посредством окислительно-восстановительного цикла способствует апоптозу ацинарных клеток поджелудочной железы мышей. J. Biol. Chem. 281 , 40485–40492 (2006).
CAS Статья Google Scholar
17.
Фукуи, М., Чой, Х. Дж. И Чжу, Б.T. Быстрая генерация митохондриального супероксида индуцирует митохондриально-зависимую, но независимую от каспаз гибель клеток в нейрональных клетках гиппокампа, что морфологически напоминает некроптоз. Toxicol. Прил. Pharmacol. 262 , 156–166 (2012).
CAS Статья Google Scholar
18.
Чжу, Х. и др. . Окислительно-восстановительная биология доксорубицина: окислительно-восстановительный цикл, ингибирование топоизомеразы и окислительный стресс. React Oxyg Species (Apex). 1 , 189–198 (2016).
Артикул Google Scholar
19.
Wang, Y. et al. . Различная роль редуктазы цитохрома P450 в окислительно-восстановительном цикле митомицина c и цитотоксичности. Mol Cancer Ther. 9 , 1852–1863 (2010).
CAS Статья Google Scholar
20.
Шимада, Х. и др. . Возможный механизм образования супероксида за счет окислительно-восстановительного цикла плюмбагина в сердце свиньи. Toxicol In vitro. 26 , 252–257 (2012).
CAS Статья Google Scholar
21.
Лоор, Г. и др. . Менадион запускает гибель клеток через ROS-зависимые механизмы, включающие активацию PARP, не требуя апоптоза. Free Radic Biol Med. 49 , 1925–1936 (2010).
CAS Статья Google Scholar
22.
Abdelmohsen, K., Gerber, P.A., Von Montfort, C., Sies, H. & Klotz, L.O. Рецептор эпидермального фактора роста является распространенным медиатором индуцированной хиноном передачи сигналов, приводящей к фосфорилированию коннексина-43. Роль глутатиона и тирозинфосфатаз. J. Biol Chem. 278 , 38360–38367 (2003).
CAS Статья Google Scholar
23.
Chowdhury, R., Chowdhury, S., Roychoudhury, P., Mandal, C. & Chaudhari, K. Индуцированный мышьяком апоптоз в клетках злокачественной меланомы усиливается менадионом посредством генерации ROS, передачи сигналов p38 и активации p53. Апоптоз. 14 , 108–123 (2009).
CAS Статья Google Scholar
24.
Li, Z. et al . АФК приводит к активации MnSOD через транслокацию ERK2 и активацию p53 в индуцированном селенитом апоптозе клеток NB4. FEBS Lett . 584 , 2291–2297 (2010).
25.
Арис Р. Методы математического моделирования. ( Dover Inc ., Нью-Йорк, 1994).
26.
Вагнер Б. А., Венкатараман С. и Бюттнер Г. Р. Скорость использования кислорода клетками. Free Radic Biol Med . 51 (2011).
27.
Fujioka, A. et al . Динамика каскада Ras / ERK MAPK по данным флуоресцентных зондов. J. Biol. Chem. 281 , 8917–8926 (2006).
CAS Статья Google Scholar
28.
Сантильян М. Об использовании функций Хилла в математических моделях регуляторных сетей генов. Math. Модель. Nat. Феном. 3 , 85–97 (2008).
MathSciNet Статья Google Scholar
29.
Фоллис, А. В. и др. .ДНК-связывающий домен опосредует как ядерную, так и цитозольную функции p53. Nat Struct Mol Biol. 21 , 535–543 (2014).
CAS Статья Google Scholar
30.
Сем, Д. С. и Каспер, К. Б. Кинетический механизм модельной реакции оксидоредуктазы НАДФН-цитохром Р450 с цитохромом С. Биохимия. 25 , 4438–43 (1986).
Артикул Google Scholar
31.
Сонг, Ю. и Бюттнер, Г. Р. Термодинамические и кинетические соображения для реакции семихиноновых радикалов с образованием супероксида и пероксида водорода. Free Radic. Биол. Med. 49 , 919–962 (2010).
CAS Статья Google Scholar
32.
Сын Ю. и др. . Активированные митогеном протеинкиназы и активные формы кислорода: как АФК могут активировать пути MAPK? J. Signal Transduct. 2011 , 1–6 (2011).
Артикул Google Scholar
33.
She, Q. B., Chen, N. & Dong, Z. ERK и киназа p38 фосфорилируют белок p53 по серину 15 в ответ на УФ-излучение. J. Biol. Chem. 275 , 20444–20449 (2000).
CAS Статья Google Scholar
34.
Ван С. и Ши X. Механизмы индуцированной Cr (VI) активации p53: роль фосфорилирования, mdm2 и ERK. Канцерогенез 22 , 757–762 (2001).
35.
Barcia, R., López-Borges, S., Vega, F. M. & Lazo, P. A. Кинетические свойства фосфорилирования p53 киназой, связанной с осповакциной человека 1. Arch. Biochem. Биофиз. 399 , 1–5 (2002).
CAS Статья Google Scholar
36.
Шалтиэль И.А. и др. . Определенные фосфатазы противодействуют ответу p53 на разных фазах клеточного цикла. Proc . Нац. . Акад. . Sc i. 111 , 7313–7318 (2014).
37.
Takekawa, M. et al . p53-индуцируемая фосфатаза wip1 опосредует регуляцию отрицательной обратной связи передачи сигналов p38 MAPK-p53 в ответ на УФ-излучение. EMBO J. 19 , 6517–26 (2000).
CAS Статья Google Scholar
38.
Gibellini, L. et al. .A. Вмешательство в метаболизм ROS в раковых клетках: потенциальная роль кверцетина. Раки (Базель). 2 , 1288–1311 (2010).
CAS Статья Google Scholar
39.
Hussain, S. P. et al . p53-индуцированная повышающая регуляция MnSOD и GPx, но не каталазы, увеличивает окислительный стресс и апоптоз. Cancer Res. 64 , 2350–2356 (2004).
CAS Статья Google Scholar
40.
Оловников И.А., Кравченко Ю.Е., Чумаков П.М. Гомеостатические функции опухолевого супрессора р53: регуляция энергетического обмена и антиоксидантная защита. Semin Cancer Biol. 19 , 32–41 (2009).
CAS Статья Google Scholar
41.
Hsu, J. L. et al. . Каталитические свойства супероксиддисмутазы марганца человека. J. Biol Chem. 271 , 17687–17696 (1996).
CAS Статья Google Scholar
42.
Wang, S. et al. . Восстановление NADP ⁺ восстановленным ферредоксином и восстановление NADP ⁺ с помощью NADH связаны через электрон-бифурцирующий ферментный комплекс в Clostridium kluyveri . J Bacteriol. 192 , 5115–5123 (2010).
CAS Статья Google Scholar
43.
Холливелл, Б. и Гаттеридж, Дж. М. С. Свободные радикалы в биологии и медицине. 896p ( Oxford University Press , 2015).
44.
Хаммер, О., Харпер, Д. А. Т. и Райан, П. Д. ПРОШЛОЕ: Пакет программного обеспечения для палеонтологической статистики для обучения и анализа данных. Palaeontol Electron. 4 , 1–9 (2001).
Google Scholar
45.
Refinetti, R., Lissen, G.C. & Halberg, F.Процедуры численного анализа циркадных ритмов. Biol Rhythm Res. 38 , 275–325 (2007).
Артикул Google Scholar
46.
Basri, D. F. et al. . Механизм цитотоксической активности Canarium odontophyllum Miq. (dabai) против линии клеток рака толстой кишки человека HCT 116. J. Chem. Pharm. Sci. 10 , 109–115 (2017).
CAS Google Scholar
47.
Ачарья А., Дас И., Чандок Д. и Саха Т. Редокс-регулирование при раке: палка о двух концах с терапевтическим потенциалом. Oxid Med Cell Longev. 3 , 23–34 (2010).
Артикул Google Scholar
48.
Хок, М. А., Шафер, З. Т. и Дэйм, Н. Окислительно-восстановительный метаболизм во время отслоения ЕСМ. J Biol Chem , https://doi.org/10.1074/jbc.TM117.000260 (2018).
49.
Наварро, Р.& Busnadiego, I. Супероксидные анионы участвуют в индуцированной доксорубицином активации ERK в культурах гепатоцитов. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1090 , 419–428 (2006).
ADS CAS Статья Google Scholar
50.
Chou, S., Chang, S. & Chuang, J. Экспрессия через митоген-активированные протеинкиназы в фибробластах роговицы. Invest Ophthalmol Vis Sci. 48 , 2009–2016 (2007).
Артикул Google Scholar
51.
Xu, Y., Porntadavity, S. & St Clair, D. Регуляция транскрипции гена супероксиддисмутазы марганца человека: роль специфичного белка 1 (Sp1) и активирующего белка-2 (AP-2). Biochem. J. 362 , 401–412 (2002).
CAS Статья Google Scholar
52.
Хэм, С. В., Джин, С. и Сонг, Дж. Х. Механизм ингибирования роста клеток менадионом. Bull. Korean Chem. Soc. 23 , 1371–1372 (2002).
CAS Статья Google Scholar
53.
Хэм, С. В., Сонг, Дж. Х., Ким, Х. И. и Джин, С. Механизм остановки клеточного цикла менадионом. Bull. Korean Chem. Soc. 21 , 1173–1174 (2000).
CAS Google Scholar
54.
Lee, Y. R. & Park, S. Y. Экспрессия P53 в гепатоцеллюлярной карциноме: влияние на радиотерапевтический ответ гепатоцеллюлярной карциномы. Clin Mol Hepatol. 21 , 230–231 (2015).
Артикул Google Scholar
55.
Thacker, P. & Karunagaran, D. Эмодин подавляет передачу сигналов Wnt в клетках колоректального рака человека SW480 и SW620. Eur. J. Pharmacol. 742 , 55–64 (2014).
Артикул Google Scholar
56.
Суреш, С., Рагху, Д. и Карунагаран, Д.Менадион (витамин К3) индуцирует апоптоз раковых клеток ротовой полости человека и снижает их метастатический потенциал, модулируя экспрессию эпителиальных маркеров мезенхимального перехода и подавляя миграцию. Asian Pac J Cancer Prev. 14 , 5461–5465 (2013).
Артикул Google Scholar
57.
Balsalobre, A., Damiola, F. & Schibler, U. Сывороточный шок вызывает экспрессию циркадных генов в клетках культуры ткани млекопитающих. Ячейка. 93 , 929–37 (1998).
CAS Статья Google Scholar
58.
Назаревич Р. Р., Бикинеева А. и Дикалов С. И. Быстрые и специальные измерения супероксида с помощью флуоресцентной спектроскопии. J Экран Biomol. 18 , 498–503 (2013).
Артикул Google Scholar
59.
Galbusera, C., Orth, P., Fedida, D. & Spector, T. Производство супероксидных радикалов аллопуринолом и ксантиноксидазой. Biochem. Pharmacol. 71 , 1747–1752 (2006).
CAS Статья Google Scholar
60.
Weydert, C. J. & Cullen, J. J. Измерение супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в культивируемых клетках и тканях. Nat. Protoc. 5 , 51–66 (2010).
CAS Статья Google Scholar
Неокрашенный EVA Asuka Langley Soryu 1/6 GK Resin Uncoated GARAGE KIT Модель InStock
Условие: Новый: Совершенно новый, неиспользованный, неоткрытый, неповрежденный предмет (включая предметы ручной работы).Посмотреть продавца перечисление для полной информации. … Прочитайте больше о состоянии Страна / регион производства: Китай
MPN: Не применяется Тема: Аниме
Семья персонажей: Евангелион Масштаб: 1: 6
Торговая марка: Безымянный Функции: Набор
UPC: Не применяется
Renault Alpine A 443 # 1 LM 1978 стр.Depailler — JP Jabouille Spark S1552 1:43 TEKNO 76814 ARKEEN SCANIA 3 СЕРИИ STREAMLINE 4×2 МОДЕЛЬ TRI-ANG MINIC МОДЕЛЬ № 32M «ТОРГОВАЯ ПЫЛЕСОСА» / «ГРУЗОВИК ДЛЯ ОТКАЗОВАТЕЛЯ» Norton 66261138754 25 дюймов с покрытием из волокон, 5 дюймов, 50 г pack 662611387545 & nbsp Choro Ep3 Civicr Spoon Ed & nbsp Ixo ixoclc 360n-opel record p2 1961 синий / белый 1/43 & nbsp Neo 45765 cadillac v16 всепогодный фаэтон Fleetwood 1935 бордо 1,43 & nbsp BMW série 5 E34 HART18GE serie 5 E34 HART18GE HART Diecast Masters 85522 Caterpillar 18M3 Motor Grader — Onyx Black 1/50 MIB & nbsp Toei Bus Yamanoted Line Other & nbsp FORD CAPRI MK3 ZAKSPEED TURBO RACE CAR WHITE 1:24 POLISTIL DIECAST UNBOXED & nbsp KK Scale 1/18 SEC 180334 — 1985 Mercedes Benz 560 SEC 180334 — 1985 (C126) Coupe — Black & nbsp Распродажа Atoz, 15 шт. РЕГУЛИРУЕМЫЙ РУЧНОЙ ФРЕЙМЕР НАБОР HV — H-11 РАЗМЕРЫ от 1/4 «до 1».Блокнот размером 1/16 дюйма, 120 страниц: АДРЕСНАЯ КНИГА — ДНЕВНИК — СКАЧЕТНИК — СЛОВАРЬ. ТОЧЕЧНАЯ МАТРИЦА 9781661768225 Почти настоящий alm460101-brabus 900 mercedes maybach s600 белый алмаз 1/43 Norev 181002 citroen c3 nbspiel 1:43 Фигурка Build Burning Gundam «Gundam Build Fighters Try» Tekno Car — Volvo Iron Knight 2018, размер 1:50, новая модель Dinky Toys Road Hoarding # 765 NM и усилитель TOA PA серии A-503A 500 30 Вт
Неокрашенный EVA Asuka Langley Soryu 1/6 GK Resin Без покрытия GARAGE KIT Модель InStock
Неокрашенный EVA Asuka Langley Soryu 1/6 GK Resin Uncoated GARAGE KIT Модель InStock
Игрушки и хобби
Результаты через 15 лет после замены клапана механическим клапаном по сравнению с биопротезом: окончательный отчет рандомизированного исследования по делам ветеранов
Цели: Целью этого исследования было сравнить долгосрочную выживаемость и связанные с клапанами осложнения между биопротезами и механическими клапанами сердца.
Задний план: Различные сердечные клапаны могут иметь разные результаты для пациентов.
Методы: Пятьсот семьдесят пять пациентов, перенесших однократную замену аортального клапана (AVR) или замену митрального клапана (MVR) в 13 медицинских центрах VA, были рандомизированы для получения биопротеза или механического клапана.
Результаты: Согласно анализу выживаемости через 15 лет, смертность от всех причин после AVR была ниже с механическим клапаном по сравнению с биопротезом (66% против 79%, p = 0,02), но не после MVR. Первичная недостаточность клапана произошла в основном у пациентов <65 лет (биопротез против механического, 26% против 0%, p <0,001 для AVR и 44% против 4%, p = 0,0001 для MVR), а также у пациентов> или = 65 лет после AVR, отказ первичного клапана в биопротезе по сравнению с механическим клапаном составил 9 +/- 6% по сравнению с 0%, p = 0.16. Повторная операция была значительно выше для биопротезной AVR (p = 0,004). Кровотечение чаще возникало у пациентов с механическим клапаном. Статистически значимых различий для других осложнений, включая тромбоэмболию и все клапанные осложнения, между двумя рандомизированными группами не было.
Выводы: В 15 лет пациенты, перенесшие AVR, имели лучшую выживаемость с механическим клапаном, чем с биопротезным клапаном, в основном потому, что отказ первичного клапана практически отсутствовал с механическим клапаном.Первичная недостаточность клапана была более выраженной при использовании биопротезов, как для AVR, так и для MVR, и чаще возникала у лиц в возрасте <65 лет; у лиц в возрасте> или = 65 лет первичная недостаточность клапана после AVR существенно не различалась между биопротезом и механическим клапаном. Повторные операции чаще выполнялись при ЗАК с биопротезом.

Ст. 15 ГК РФ с Комментариями 2020-2021 года (новая редакция с последними изменениями)

Комментарий к Ст. 15 ГК РФ

Взыскание и возмещение упущенной выгоды: расчет, стоимость и практика

ГРАЖДАНСКИЙ КОДЕКС РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Глава 59. Обязательства вследствие причинения вреда

ЖК Новоград Павлино — новостройки в Балашихе от застройщика ГК МИЦ

Гостиницы Москвы. Официальный сайт гостиницы «Космос», Москва

Статья 15 ГК РФ. Возмещение убытков

Комментарии к статье 15 ГК РФ, судебная практика применения

«Сибколбасы» в суде отбили право на землю, которую используют 15 лет — KVnews.ru

Росимущество отказывалось предоставить предприятию участок на новый срок по основаниям, которые суд счел незаконными.

275600-2-GK-T Манометр

Обзор

Обзор

Технические характеристики

Технические характеристики

Модель: 275600-2-ГК-Т

Также доступно в Ньюпорте.com

г.К. Честертон: (Мировая классика): Честертон, Г. К .: 9781537681443: Amazon.com: Книги

Г. К. Баттерфилд | Congress.gov

Материалы и методы

Материалы

Культура клеток RINm5F

Фосфорилирование глюкозы и активность фермента глюкокиназы

Вестерн-блот анализ

Иммуноокрашивание

Измерения фруктозо-2,6-бисфосфата (F-2,6-P

Метаболизм глюкозы

Определение АТФ и АДФ

Измерения пирувата и лактата

Секреция инсулина и содержание инсулина

Анализ жизнеспособности клеток MTT

Статистический анализ

Результаты

Взаимосвязь между активацией глюкокиназы и уровнем фермента PFK-2 / FBPase-2

F-2,6-P

Глюкозозависимое взаимодействие глюкокиназы с островком PFK-2 / FBPase-2

Влияние избыточной экспрессии островковой PFK-2 / FBPase-2 на утилизацию глюкозы в клетках RINm5F-GK

Соотношение АТФ / АДФ, содержание АТФ и содержание АДФ в клетках RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4)

Жизнеспособность клеток RINm5F, RINm5F-GK и RINm5F-GK-PFK-2 / FBPase-2 (I 4)

Влияние сверхэкспрессии глюкокиназы и ко-гиперэкспрессии глюкокиназы плюс островков PFK-2 / FBPase-2 на продукцию пирувата и лактата в клетках RINm5F

Секреция инсулина клетками RINm5F-GK, сверхэкспрессирующими островковую PFK-2 / FBPase-2

Обсуждение

Благодарности

Сокращения:

Удержание супероксидного ритма менадионом в клетках рака толстой кишки HCT116

Неокрашенный EVA Asuka Langley Soryu 1/6 GK Resin Uncoated GARAGE KIT Модель InStock

Неокрашенный EVA Asuka Langley Soryu 1/6 GK Resin Без покрытия GARAGE KIT Модель InStock

Неокрашенный EVA Asuka Langley Soryu 1/6 GK Resin Uncoated GARAGE KIT Модель InStock

Оставить комментарий Отменить ответ