Гк рф статья 142: ГК РФ Статья 142. Ценные бумаги / КонсультантПлюс

Возможность выпуска или выдачи определенных документарных ценных бумаг в качестве именных либо ордерных может быть исключена законом.

6. Если иное не установлено настоящим Кодексом, законом или не вытекает из особенностей фиксации прав на бездокументарные ценные бумаги, к таким ценным бумагам применяются правила об именных документарных ценных бумагах, правообладатель которых определяется в соответствии с учетными записями.

Практикум

1. Верны ли сле­ду­ю­щие суж­де­ния о цен­ных бу­ма­гах?

А. К цен­ным бу­ма­гам от­но­сят­ся век­се­ля и об­ли­га­ции.

Б. Цен­ной бу­ма­гой, ко­то­рая при­но­сит доход в форме ди­ви­ден­да, яв­ля­ет­ся акция.

1) верно толь­ко А

2) верно толь­ко Б

3) верны оба суж­де­ния

4) оба суж­де­ния не­вер­ны

2. Фондовая биржа в условиях финансового кризиса объявляет о снижении курса акций крупных компаний. Данный факт иллюстрирует ситуацию на рынке

1) товаров

2) материалов

3) капиталов

4) инноваций

3. Ниже приведён ряд терминов. Все они, за исключением одного, представляют собой деньги.

Квитанция, бумажная банкнота, казначейский билет, монета, денежный знак.

Найдите и укажите термин, «выпадающий» из общего ряда.

4. Ценную бумагу, дающую ее владельцу право требовать от организации, выпустившей бумагу, в установленные сроки выплату ее номинальной стоимости, называют

1) акцией

2) облигацией

3) банкнотой

4) сертификатом

5. Ниже приведён ряд терминов. Все они, за исключением одного, относятся к названиям видов ценных бумаг.

Вексель, облигация, акция, дивиденды, чек.

Найдите и укажите термин, «выпадающий» из общего ряда.

6. На фондовой бирже в условиях финансового кризиса произошло снижение курса акций крупных компаний. Примером функционирования какого рынка является данный факт?

1) недвижимости

2) труда

3) капиталов

4) инноваций

7. Верны ли следующие суждения о ценных бумагах?

А.Ценные бумаги продаются и покупаются на фондовых биржах.

Б.Особенностью ценной бумаги является способность приносить ее владельцу доход.

1) верно только А

2) верно только Б

3) верны оба суждения

4) оба суждения неверны

8. В приведённом ниже ряду найдите понятие, которое является обобщающим для всех остальных представленных понятий. Запишите это слово (словосочетание).

Обыкновенная акция, ценная бумага, облигация, вексель, чек.

9. Запишите слово, пропущенное в таблице.

Ценные бумаги

10. Установите соответствие между правами владельца и видами ценных бумаг: к каждой позиции, данной в первом столбце, подберите соответствующую позицию из второго столбца.

ПРАВА ВЛАДЕЛЬЦА

А) право держателя на получение фиксированного процента

Б) право на участие в управлении компанией

В) право на получение части прибыли фирмы – дивиденда

Г) право на долю капитала в фирме

Д) право держателя на возврат всей суммы долга по истечении срока

ВИДЫ ЦЕННЫХ БУМАГ

1) обыкновенная акция

2) облигация

Эссе

Рынок труда. безработица.

Место в системе социально-гуманитарных наук:экономика

План

1. Понятие рынка труда

2. Особенности рынка труда

2.1. На рынке труда покупаются только трудовые ус­луги, а не сам индивид.

2.2. В отличие от рынка услуг продавцы на рынке труда – домохозяйства, покупатели — фирмы

2.3. Спрос на труд — производный (зависит от спроса на готовую продукцию)

3. Спрос и предложение на рынке труда (см. схему)

4. Факторы, влияющие на величину заработной платы

4.1. Стоимость жизненных благ, необходимых для воспроиз­водства рабочей силы (прожиточный минимум)

4.2. Минимальный уровень оплаты труда работников

4.3. Уровень квалификации работников

4.4. Развитость экономических и социальных условий жизни населения

5. Формы зарплаты

5.1. Постоянная (оклад) – вознаграждение за труд, не зависящее от каких-либо условий.

5.2. Повременная — вознаграждение за труд в зави­симости от про­работанного времени.

5.3. Сдельная — воз­награждение за труд в зависи­мости от коли­чества изготов­ленных изделий

5.4. Смешанные формы — вознаграждение за труд в зависимости не только от количе­ства отработанного работником време­ни, но и от финансо­вого положения пред­приятия, итогов ра­боты каждого работника и фирмы в целом

6. Понятие безработицы

7. Виды безработицы:

7.1. Структурная – невозможность трудоустройства из-за различий в структуре спроса и предложения рабочей силы разной квалификации.

7.2. Фрикционная – невозможность для уволенного работника найти свободное место по своей специальности.

7.3. Циклическая – характерна для экономического кризиса, возникает в результате спада производства.

7.4. Сезонная – зависит от работ в определенное время года (с/х рабочие, гиды).

8. Формы безработицы:

8.1. Открытая

8.2. Скрытая – работник дает согласие на неполный рабочий день или неполную рабочую неделю из-за невозможности иного трудоустройства

8.3. Текучая – связана с периодическим «отталкиванием» и «притягиванием» рабочей силы на рынке труда

8.4. Застойная – длительная безработица, чередующаяся с краткими периодами временной, случайной работы

9. Показатели безработицы

9.1. уровень безработицы

9.2. средняя её продолжительность

10. Негативные экономические и со­циальные последствия безработицы:

10.1. Недоиспользование экономиче­ского потенциала общества, когда реальный ВНП существенно меньше потенциального

10.2. Снижение уровня жизни насе­ления: предпосылки для сокращения доходов работаю­щих по найму; потерявшие работу получают лишь пособия по безработице; сокращается потребительский спрос, уровень сбережений

10.3. Потеря профессиональных зна­ний и навыков, что затрудняет возможность трудоустройства

10.4. Моральная травма, ведущая к алкоголизму, наркомании, само­
убийствам, росту преступности

11. Позитивные последствия безработицы:

11.1. Формируется мобиль­ный «резерв» рабочей си­лы, который можно задей­ствовать при расширении производства

11.2. Сдерживаются требова­ния профсоюзов в части по­вышения заработной пла­ты, что снижает предпола­гаемый уровень инфляции

11.3. Усиливается трудовая мотивация работающих, так как гарантии занятости и опасение потерять ра­боту начинают выступать в качестве самостоятельно­го стимула к труду

11.4. Направления, по которым государство решает проблему безработицы:

11.5. Установление уровня мини­мальной зара­ботной платы.

11.6. Выплата пособий по безработице, установление социальных гарантий.

11.7. Профессиональное обучение и переобучение безработных по востребованным специальностям.

11.8. Организация общественных работ и молодёжных практик.

11.9. Субсидии, информационно-правовая и материальная поддержка малого бизнеса.

12. Методы борьбы с безработицей

13. Специфика современного рынка труда:

13.1. возрастание спроса на сложный, квалифицированный спрос

13.2. установление государственных гарантий прожиточного минимума и минимальной заработной платы

13.3. развитие и совершенствование трудового законодательства

Понятия

Рынок труда — это сфера формирования спроса и предложения рабочей силы (трудовых услуг).

Заработная плата — форма материального воз­награждения за труд (часть стоимости, созданной и реализованной продукции, услуг), поступающего наем­ным работникам предприятий и учреждений.

Номинальная зарплата – вознаграждение за труд, которое назнача­ется работнику в виде определенной суммы де­нег

Реальная зарплата – сумма жизненных благ, ко­торые можно приобрести за номинальную плату при дан­ном уровне цен на товары и услуги

БЕЗРАБОТНЫЕ — часть рабочей силы, экономически активного населения, не имеющего работы, но желающего работать и ищущего работу.
БЕЗРАБОТИЦА — наличие в экономике определенного числа безработных; количество безработных.

Схема

Практикум

1. 1.Кто может пре­тен­до­вать на по­лу­че­ние по­со­бия по без­ра­бо­ти­це?

1) стро­и­тель, утра­тив­ший тру­до­спо­соб­ность в ре­зуль­та­те про­из­вод­ствен­ной трав­мы

2) мно­го­дет­ная мать, ко­то­рая не ра­бо­та­ет и не ищет ра­бо­ту

3) бух­гал­тер, ко­то­рый не ра­бо­та­ет, но ищет ра­бо­ту

4) элек­тро­мон­тер, ра­бо­та­ю­щий не­пол­ный ра­бо­чий день

2. Кто из пе­ре­чис­лен­ных ниже граж­дан яв­ля­ет­ся струк­тур­ным без­ра­бот­ным?

1) уво­лив­ший­ся учи­тель, рас­счи­ты­ва­ю­щий найти более лег­кую ра­бо­ту

2) жен­щи­на, на­хо­дя­ща­я­ся в от­пус­ке по уходу за ре­бен­ком

3) шах­тер, уво­лен­ный в связи с за­кры­ти­ем не­рен­та­бель­ной шахты

4) мед­сест­ра, пе­ре­ехав­шая с мужем в дру­гой город

3. По­вто­ря­ю­щи­е­ся спады про­из­вод­ства по­рож­да­ют без­ра­бо­ти­цу

1) се­зон­ную

2) струк­тур­ную

3) цик­ли­че­скую

4) фрик­ци­он­ную

4. К не­эко­но­ми­че­ским от­ри­ца­тель­ным по­след­стви­ям без­ра­бо­ти­цы от­но­сит­ся

1) рост числа пра­во­на­ру­ше­ний

2) по­вы­ше­ние кон­ку­рен­ции на рынке труда

3) не­до­по­лу­чен­ный вы­пуск про­дук­ции

4) умень­ше­ние шан­сов найти вы­со­ко­опла­чи­ва­е­мую ра­бо­ту в бу­ду­щем

5. Кто из пе­ре­чис­лен­ных ниже граж­дан яв­ля­ет­ся цик­ли­че­ским без­ра­бот­ным?

1) бан­ков­ский слу­жа­щий, уво­лен­ный в связи с банк­рот­ством банка во время фи­нан­со­во-эко­но­ми­че­ско­го кри­зи­са

2) ин­же­нер, уво­лив­ший­ся в связи с пе­ре­ез­дом в дру­гой город

3) про­грам­мист, уво­лен­ный из-за кон­флик­та с ру­ко­вод­ством фирмы

4) сту­дент днев­но­го от­де­ле­ния вуза

6. Повышение уровня безработицы в традиционных отраслях и наличие свободных мест в сфере высоких технологий и услуг характеризует ситуацию на рынке

1) фондовом

2) капиталов

3) труда

4) товаров и услуг

7. Циклическая безработица максимальна

1) на пике экономической активности

2) в нижней точке спада экономической активности

3) в период роста экономической активности

4) в период стабильного экономического развития

8. Установите соответствие между примерами и видами безработицы, которые они иллюстрируют: к каждой позиции, данной в первом столбце, подберите соответствующую позицию из второго столбца.

ПРИМЕРЫ

А) в связи с экономическим кризисом фирмы, производящие различные товары и услуги, сократили численность персонала

Б) выпускники творческих вузов ищут работу по специальности, не соглашаясь ни на какую другую

В) в службе занятости безработные отказываются от рабочих вакансий и просят подобрать работу менеджеров

Г) в связи с изменением спроса на энергоресурсы многие шахты закрылись, а шахтеры остались без работы

Д) полгода жители городка на морском побережье обслуживают туристов, а в остальное время большинство из них не могут найти себе работу

ВИДЫ БЕЗРАБОТИЦЫ

1) циклическая

2) структурная

3) фрикционная

4) сезонная

9. В стране Z сократились потребление и экспорт угля, большинство шахт закрылось, десятки тысяч шахтёров потеряли работу. Выберите из приведённого ниже списка характеристики возникшей безработицы и запишите цифры, под которыми они указаны.

1) структурная безработица

2) добровольная безработица

3) скрытая безработица

4) фрикционная безработица

5) сезонная безработица

6) массовая безработица

10. К экономически активному трудоспособному населению относятся

1) старшеклассники общеобразовательных школ

2) студенты дневных отделений вузов

3) выпускники университетов

4) владеющие собственностью пенсионеры

Эссе

Физика вирусной динамики | Nature Reviews Physics

Структурные и спектральные характеристики эйнштейниевого комплекса

Экспрессия Bcl-2 определяет раннюю стадию миогенеза и способствует клональной экспансии мышечных клеток | Журнал клеточной биологии

Мы показываем, что экспрессия Bcl-2 в клетках скелетных мышц определяет раннюю стадию миогенного пути, ингибирует апоптоз и способствует клональной экспансии.Экспрессия Bcl-2 ограничивалась небольшой долей мононуклеарных клеток в культурах мышечных клеток, в диапазоне от ~ 1-4% мышечных клеток новорожденных и взрослых мышей до ~ 5-15% клеток линии мышечных клеток C2C12. В быстрорастущих культурах некоторые из Bcl-2-положительных клеток коэкспрессируют маркеры ранних стадий миогенеза, включая десмин, MyoD и Myf-5. Напротив, Bcl-2 не экспрессируется в многоядерных мышечных трубках или в тех мононуклеарных миобластах, которые экспрессируют маркеры средних или поздних стадий миогенеза, такие как миогенин, фактор регуляции мышц 4 (MRF4) и миозин.Небольшая часть Bcl-2-положительных клеток C2C12, по-видимому, сопротивляется апоптозу, индуцированному стауроспорином. Более того, хотя миогенные клетки от генетически Bcl-2-нулевых мышей обычно образовывали мышечные трубки, мышечные колонии, продуцируемые клонированными Bcl-2-нулевыми клетками, содержали только примерно половину количества клеток, чем колонии, продуцируемые клетками от мышей дикого типа. Этот результат предполагает, что во время клональной экспансии из мышечной клетки-предшественника количество полученного потомства больше, когда экспрессируется Bcl-2.

Формирование волокон скелетных мышц проходит в несколько этапов.У развивающихся позвоночных самые ранние стадии формирования скелетных мышц происходят в сомитах, где возникают клетки-предшественники мышц. Эти клетки-предшественники дают начало миобластам, которые впоследствии сливаются друг с другом с образованием многоядерных миофибрилл (обзоры см. Miller, 1992; Stockdale, 1992). На разных стадиях этого миогенного пути клетки экспрессируют разные наборы специфичных для мышц белков. Десмин, Myf-5 и MyoD, например, экспрессируются на относительно ранних стадиях миогенного пути, тогда как миогенин, регуляторный фактор миогенина 4 (MRF4), ¹ и миозин экспрессируются на более поздних стадиях (George-Weinstein et al. ., 1993; Смит и др., 1993, 1994; Ван и Уолш, 1996). Совместная экспрессия миогенина с p21, по-видимому, маркирует стадию миогенного пути, на котором миобласты предназначены для слияния и терминальной дифференцировки (Skapek et al., 1995; Wang and Walsh, 1996). Изоформа мышечно-специфической молекулы адгезии нервных клеток (NCAM), β7-интегрин, нестин, c-met и M-кадгерин также экспрессируются миобластами (George-Weinstein et al., 1993; Peck and Walsh, 1993; Irintchev et al. др., 1994; Качинский и др., 1994; Корнелисон, Уолд, 1997).Хотя c-met, M-кадгерин, десмин, Myf-5 и MyoD экспрессируются на относительно ранних стадиях миогенеза, эти белки также обнаруживаются в миогенин-экспрессирующих миобластах и ​​/ или мышечных трубках на более поздних стадиях миогенеза (George-Weinstein et al. др., 1993; Смит и др., 1993; Качинский и др., 1994; Ван и Уолш, 1996; Корнелисон и Уолд, 1997). Молекулярные маркеры, которые экспрессируются мышечными клетками только на самых ранних стадиях миогенного пути, отсутствуют.

Поскольку клетки на ранних стадиях миогенеза должны быть долгоживущими in vivo (Webster and Blau, 1990) и запрограммированная гибель клеток (апоптоз) может быть признаком нормального миогенеза (McClearn et al., 1995) и мышечных заболеваний (Matsuda et al., 1995; Tidball et al., 1995; Sandri et al., 1997; Tews and Goebel, 1997; Vachon et al., 1997), мы исследовали экспрессию и функцию Bcl-2, белок, ингибирующий апоптоз (обзоры см. В Korsmeyer, 1995; Kroemer, 1997; Reed, 1997), в мышечных клетках. Bcl-2 — хорошо изученный член семейства белков, регулирующих запрограммированную гибель клеток. При экспрессии в ряде немышечных типов клеток Bcl-2 обладает способностью подавлять или задерживать апоптоз (Korsmeyer, 1995).Однако в миогенных клетках характер экспрессии и функция Bcl-2 не были полностью определены.

В этой работе мы показываем, что только небольшой процент миогенных клеток экспрессирует Bcl-2, и что эти Bcl-2-положительные клетки сопротивляются апоптозу и находятся на ранней стадии процесса, ведущего от мышечной клетки-предшественника к мышечной трубке. Кроме того, мы показываем, что клетки от мышей с нулевым генотипом Bcl-2 образуют мышечные колонии меньшего размера, чем клетки от мышей дикого типа, что указывает на то, что экспрессия Bcl-2 необходима для нормального роста и / или выживания во время клональной экспансии мышечных клеток.Наше открытие, что Bcl-2 защищает мышечные клетки от апоптоза, предполагает, что экспрессия Bcl-2 может быть важной для длительного выживания мышечных клеток. Апоптоз мышечных клеток обнаруживается при нескольких нервно-мышечных заболеваниях, включая дефицит дистрофина, дефицит мерозина и спинальную мышечную атрофию (Matsuda et al., 1995; Tidball et al., 1995; Sandri et al., 1997; Tews and Goebbel, 1997; Vachon et al., 1997). Возможно, апоптоз мышечных клеток можно улучшить, изменив экспрессию семейства Bcl-2.Кроме того, экспрессия Bcl-2 идентифицирует новую стадию миогенного пути, и в культурах, которые содержат клетки на нескольких стадиях пути, экспрессия Bcl-2 может использоваться, чтобы отличить одноядерные клетки на ранней стадии от клеток на более поздних стадиях.

C2C12 и Sol8 (Yaffe и Saxel, 1977; Blau et al., 1985; Montarras et al., 1991) поддерживали в питательной среде (DME с 15% фетальной бычьей сывороткой, 2 мМ l-глутамином, 10 мМ Hepes, pH 7.4 и 100 Ед / мл пенициллина) и индуцировали образование мышечных трубок в среде для дифференцировки (питательная среда с 2% лошадиной сывороткой вместо фетальной бычьей сыворотки). Клетки для исходных первичных культур получали от взрослых мышей CD-1 или C57Bl / 6 в возрасте> 6 недель (Charles River Laboratories, Wilmington, MA). Для дополнительных культур скрещивали мышей Bcl-2 (+/-) B6,129- Bcl2 ^tm1Sjk (Veis et al., 1993; Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME) и генотипировали потомство (Veis et al. ., 1993) и использовали для приготовления клеток.Апоптоз индуцировали переносом в бессывороточную среду для дифференцировки с 0,5 мкМ стауроспорина или без него, а жизнеспособность клеток измеряли с помощью объемного фотометрического анализа функции митохондрий с красителем МТТ (Jacobsen et al., 1994).

Миогенные клетки из мышц задних конечностей взрослых и новорожденных мышей выделяли трипсинизацией ткани (Smith et al., 1993) с последующей очисткой на градиентах Перколла. Высокообогащенные популяции миогенных клеток, содержащие небольшое количество немиогенных клеток, собирали с 35–50% -ного интерфейса Перколла трехступенчатого (35, 50 и 70% Перколла) или двухступенчатого (35 и 50% Перколла) градиентов, как описано (Bischoff и Хайнц, 1994).В некоторых экспериментах также использовали нефракционированные клетки. Клетки культивировали до 8 дней на матрице ECL (Upstate Biotechnology, Лейк-Плэсид, Нью-Йорк) в DME с 15% лошадиной сывороткой, 3% экстрактом куриных эмбрионов, 2 мМ l-глутамином, 10 мМ Hepes, pH 7,4, 100 Ед / мл пенициллина и 1 мМ пирувата. Для культур с высокой плотностью клетки высевали при 3000–5000 клеток / см ² , а для клональных культур клетки высевали при 5–17 клеток / см ² в день выделения. Для сравнения Bcl-2-нулевых и мышечных клеток дикого типа использовали двухэтапную процедуру посева, чтобы гарантировать точность определения плотности посева жизнеспособных клеток.Клетки высевали с высокой плотностью в день выделения, а затем в течение 24 ч трипсинизировали с планшетов. Жизнеспособные клетки (идентифицированные по исключению трипанового синего) подсчитывали и повторно высевали при высокой плотности (320 клеток / см ² ) или клональной плотности (1,7 клетки / см ² ). Планшеты с плотностью клонов фиксировали параформальдегидом (см. Ниже) после 8 дней роста, иммуноокрашивали на экспрессию десмина и подсчитывали для определения количества ядер на колонию и индекса слияния. Генотипы клеток определяли только после подсчета.За пролиферацией клеток в культурах с высокой плотностью наблюдали в течение 4 дней путем подсчета плотности клеток с использованием инвертированного фазового микроскопа с калиброванными областями поля. Время массового удвоения популяции оценивали между 12 и 60 часами после репликации во время логарифмической фазы быстрого роста клеток. Статистический анализ проводился с помощью соответствующего непарного двустороннего критерия t или непараметрического критерия Манна-Уитни с использованием InStat (версия 1.12; Graphpad Software, Сан-Диего, Калифорния).

mAb хомяка, 3F11 (из C.Миллиман и С.Дж. Korsmeyer), специфичен для мышиного Bcl-2 (Krajewski et al., 1993) и использовался в концентрации 25 мкг / мл. Мышиные моноклональные антитела к тяжелой цепи миозина (F59) и миогенину (F5D), а также кроличьи антисыворотки, специфичные к MyoD, Myf-5 и MRF4, использовали, как и раньше (Miller, 1990; Smith et al., 1993; Block et al., 1996. ). Мышиное mAb к десмину (Cappel Laboratories, Malvern, PA) использовали в разведении 1:40. Фиксированные параформальдегидом и проницаемые для Triton X-100 культуры (Smith et al., 1993) инкубировали в течение ночи при комнатной температуре как с кроличьей антисывороткой, так и с Bcl-2 mAb, промывали четыре раза по 20 мин каждое 0.1% Triton X-100 в PBS и инкубировали в течение 1,5 ч при комнатной температуре с комбинацией конъюгированных с Texas red или Cy3 антител против кроличьего IgG (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) и конъюгированных с флуоресцеином антител против хомячка ( Vector Laboratories, Burlingame, CA) в концентрации 1,0 мкг / мл. Для окрашивания мышечных колоний клетки окрашивали кроличьим антидесмином в разведении 1: 1000 (Cappel Laboratories) с использованием системы обнаружения на основе пероксидазы хрена (Vectastain Elite kit; Vector Laboratories) с диаминобензидиновым субстратом (Smith et al., 1994).

Для двойного окрашивания на Bcl-2 и антигены, обнаруживаемые мышиными mAb, культуры инкубировали последовательно с (a ) мышиным mAb, (b ) конъюгированным с лиссамином родамином Fab-фрагментом козьего антимышиного IgG (Jackson ImmunoResearch ) при 10 мкг / мл, ( c ) mAb против Bcl-2 хомяка и ( d ) конъюгированный с флуоресцеином антител к IgG хомяка при 1,0 мкг / мл. Если не указано иное, исследовали ≥300 клеток, экспрессирующих Bcl-2, по крайней мере в двух независимых культурах.Для двойного окрашивания на бромдезоксиуридин (BrdU) и Bcl-2 культуры, которые инкубировали с 10 мкМ BrdU, фиксировали при комнатной температуре в течение 15 минут в 2% параформальдегиде, проницаемость в 0,1% Triton X-100 в течение 15 минут и блокировали в течение ночи при 4 ° C (Smith et al., 1993). Фиксированные культуры дважды промывали дистиллированной H ₂ O, инкубировали в 4 н. HCl в течение 10 мин при комнатной температуре, дважды промывали по 5 мин в PBS, блокировали в течение 1 ч при комнатной температуре и инкубировали с анти-BrdU (mAb G3G4; Developmental Studies Hybridoma Bank, Балтимор, Мэриленд) при 37 ° C в течение 1 ч при комнатной температуре.После промывания культуры инкубировали с козьими антимышиными антителами, конъюгированными с родамином лиссамина (фрагмент Fab; Jackson ImmunoResearch), при 1 мкг / мл в течение 30 мин при 37 ° C, блокировали в течение ночи и инкубировали последовательно с mAb против Bcl-2 и флуоресцеином. -конъюгированные вторичные антитела, как указано выше.

Когда мы иммуноокрашивали клетки линий мышечных клеток C2C12 и Sol8 с помощью mAb, специфичного для Bcl-2, мы обнаружили, что небольшая подгруппа мононуклеарных клеток показала ожидаемое точечное окрашивание цитоплазмы (Krajewski et al., 1993) для Bcl-2 (рис.1, A и B , не показаны). Напротив, ни одна из многоядерных мышечных трубок не показала окрашивания Bcl-2 (фиг. 1, A и B ). Процент Bcl-2-положительных клеток колеблется от ~ 5-20% для клеток C2C12 и от ~ 3-5% для клеток Sol8. Точно так же Bcl-2 экспрессировался небольшим процентом одноядерных, но не многоядерных клеток в первичных культурах мышечных клеток взрослых мышей (фиг. 1, C и D ). В первичных культурах клеток мы обнаружили двумя методами, что клетки, экспрессирующие Bcl-2, были миогенными.Во-первых, десмин коэкспрессируется с большинством Bcl-2-положительных клеток в культурах первичных мышечных клеток мышей, включая Bcl-2-положительные клетки на рис. 1 C (не показано), подтверждая, что эти клетки были миогенными (George-Weinstein и др., 1993). Во-вторых, Bcl-2 экспрессировался ~ 2-5% мононуклеарных клеток в клональных мышечных колониях, содержащих мышечные трубки, образованных потомством одиночных мышечных клеток взрослых мышей (не показано).

Иммуноблоттинг, Нозерн-блоттинг и ОТ-ПЦР подтвердили, что мРНК и белок Bcl-2 экспрессируются в культурах миогенных клеток.На иммуноблотах, исследованных с помощью mAb против Bcl-2, лизаты как тимуса мыши, который экспрессирует высокие уровни Bcl-2 (Haldar et al., 1996), так и клеток C2C12, показали идентичные полосы ~ 26 кДа, как и ожидалось (Haldar et al. al., 1996) для белка Bcl-2 (рис. 1, E ). На Нозерн-блоттинге мы обнаружили транскрипт размером ~ 7,5 т.п.н., размер ожидаемого (Negrini et al., 1987) для мРНК Bcl-2, как в растущих, так и в дифференцированных клетках C2C12 (не показано). Когда мы исследовали мРНК головного мозга взрослых мышей, в которых экспрессируется Bcl-2 (Negrini et al., 1987) и клетках C2C12, мы обнаружили, что ОТ-ПЦР с праймерами, специфичными для Bcl-2, дает единственную полосу ДНК ожидаемого размера (480 п.н.) и гибридизируется с зондом Bcl-2 (рис. 1 F ). ).

При сравнении паттернов экспрессии Bcl-2 и нескольких специфичных для мышц белков мы обнаружили, что Bcl-2-положительные клетки C2C12 находятся на очень ранней стадии миогенной дифференцировки. В частности, Bcl-2 не экспрессируется совместно с белками, которые маркируют среднюю и позднюю стадии миогенного пути.При исследовании ≥300 Bcl-2-положительных клеток C2C12 для каждого маркера мы не обнаружили отдельных клеток, в которых Bcl-2 коэкспрессировался с миозином, миогенином, MRF4 или нестином (рис. 2, A – D , и не показаны). ). В первичных культурах также не было коэкспрессии Bcl-2 с миогенином или миозином (не показано). Миозин и MRF4 отмечают поздние стадии миогенеза C2C12 и в значительной степени ограничиваются мышечными трубками, тогда как миогенин и нестин отмечают средние стадии миогенеза и обнаруживаются во многих мононуклеарных миобластах, а также во всех мышечных трубках (Kachinsky et al., 1994; Ван и Уолш, 1996).

Затем мы исследовали возможную коэкспрессию Bcl-2 с тремя маркерами более ранних стадий миогенного пути: десмин, Myf-5 и MyoD (George-Weinstein et al., 1993; Smith et al., 1993). Как отмечалось выше, Bcl-2 экспрессируется только ~ 10% мононуклеарных клеток C2C12, и мы сначала исследовали это небольшое подмножество Bcl-2-позитивных клеток на коэкспрессию десмина. Мы обнаружили, что десмин экспрессировался ~ 85% Bcl-2-положительных клеток C2C12, когда быстрорастущие культуры приближались к слиянию в питательной среде (рис.2, G и H и таблица I), но только ~ 15% Bcl-2-положительных клеток в более покоящихся культурах через 3-4 дня в среде для дифференцировки (таблица I). Как отмечалось ранее, десмин также коэкспрессируется с большинством Bcl-2-положительных клеток в первичных культурах мышечных клеток мышей, включая Bcl-2-положительные клетки на рис. 1, C (не показано), подтверждая, что эти клетки были миогенными. (Джордж-Вайнштейн и др., 1993). В экспериментах с двойным окрашиванием> 99% растущих клеток C2C12 экспрессировали десмин, Bcl-2 или оба белка.В частности, десмин экспрессировался примерно 90% всех мононуклеарных клеток, которые были Bcl-2-отрицательными. (Оставшиеся ~ 10% мононуклеарных клеток были Bcl-2-положительными, с паттернами коэкспрессии Bcl-2 и десмина, отмеченными выше и в таблице I.)

MyoD и Myf-5 экспрессировались гораздо меньшим процентом Bcl-2-положительных клеток, чем десмин. По мере того, как культуры C2C12 приближались к слиянию в ростовой среде, только ∼20% Bcl-2-положительных клеток экспрессировали MyoD или Myf-5 (рис.2, E и F, вставки и таблица I), тогда как ∼80% клеток, экспрессирующих Bcl-2, не экспрессировали ни MyoD, ни Myf-5 (рис. 2, E и F , рис. и Таблица I). Когда культуры переводили в среду для дифференцировки, процент Bcl-2-положительных клеток, коэкспрессирующих MyoD или Myf-5, быстро снижался до тех пор, пока через 4 дня в среде с низким содержанием сыворотки ни MyoD, ни Myf-5 не экспрессировались ни в одном из Bcl. -2 – положительные клетки (Таблица I). Как и в случае с десмином, большинство клеток C2C12, экспрессирующих MyoD или Myf-5, были Bcl-2-отрицательными.Когда клетки C2C12 достигли слияния в среде для выращивания, например, мы обнаружили, что около 50% мононуклеарных клеток экспрессировали Myf-5 или MyoD, но не Bcl-2, тогда как только около 2% экспрессировали Myf-5 или MyoD вместе с Bcl-2. В клональных культурах первичных клеток около 50% Bcl-2-положительных клеток также экспрессировали Myf-5 (не показано).

Согласно измерениям по включению BrdU, клетки C2C12, которые были Bcl-2-положительными, имели примерно такую ​​же вероятность находиться в S-фазе, как и клетки, которые были Bcl-2-отрицательными.В одном эксперименте, например, мы инкубировали почти конфлюэнтные клетки C2C12 в течение 1 дня в ростовой среде с добавлением 10 мкМ BrdU, а затем дважды иммуноокрашивали клетки на BrdU и Bcl-2. BrdU был включен на ~ 24% (35 из 148 наблюдаемых) Bcl-2-положительных клеток и на ~ 36% (207 из 574) Bcl-2-отрицательных клеток.

Затем мы исследовали, как экспрессия Bcl-2, жизнеспособность клеток и способность к дифференцировке были изменены обработками, вызывающими апоптоз.Поскольку бессывороточная среда и стауроспорин (ингибитор протеинкиназы) вызывают апоптоз во многих типах клеток (Jacobsen et al., 1994, 1996), включая клетки Sol8 (Mampuru et al., 1996), мы переключили растущие клетки C2C12 в одну из трех сред: дифференцировочная среда с 2% лошадиной сывороткой, бессывороточная среда или бессывороточная среда с 0,5 мкМ стауроспорином. Через 1-2 дня после переключения количество жизнеспособных клеток, измеренное по функции митохондрий (Jacobsen et al., 1994), уменьшилось в бессывороточных культурах, но увеличилось в сывороточных культурах (рис.3, а ). Пикнотические ядра, которые указывают на апоптотические клетки (Korsmeyer, 1995; Jacobsen et al., 1994), были в большом количестве в бессывороточных культурах через 1-2 дня, но редко в сывороточных культурах (не показаны). Процент клеток C2C12, экспрессирующих Bcl-2, оставался на уровне <20% в культурах, содержащих сыворотку, но значительно ( P <0,01) увеличивался до 50–80% через 2 дня в бессывороточной культуре со стауроспорином или без него (рис. . 3, б ). Например, после обработки стауроспорином и бессывороточной средой в течение 2 дней количество жизнеспособных клеток снизилось до 10% от исходного числа, тогда как процент Bcl-2-положительных клеток увеличился примерно в четыре раза до 75% от исходного. 16% (рис.3). Таким образом, экспрессия Bcl-2 связана с устойчивостью к апоптозу. Некоторые из клеток C2C12, которые выжили в бессывороточной среде и стауроспорине, были способны пролиферировать и осуществлять все стадии миогенеза, включая образование мышечных трубок и клональных мышечных колоний, при возвращении в среду, содержащую сыворотку (не показано).

Для дальнейшего изучения взаимосвязи между экспрессией Bcl-2 и миогенными клетками мы сравнили экспрессию Bcl-2 в клетках C2C12 раннего и позднего пассажа.При раннем пассаже почти все клетки таких линий, как C2C12, способны экспрессировать миогенин и образовывать мышечные трубки, тогда как после повторного пассажа клетки с дефектом дифференцировки накапливаются, и процент клеток, образующих мышечные трубки, уменьшается (см., Wright, 1984; Clegg and Hauschka, 1987; Растинежад, Блау, 1993). Мы сравнили линию раннего пассажа C2C12, в которой ~ 90% клеток экспрессировали миогенин и слились с мышечными трубками, с линией позднего пассажа, в которой только ~ 60% клеток экспрессировали миогенин и слились с мышечными трубками.В одном эксперименте мы исследовали параллельные культуры этих двух линий по мере того, как они приближались к слиянию в питательной среде, и мы обнаружили, что Bcl-2 экспрессировался 6,9% (178 из 1903) вновь клонированных клеток, но только 4,2% (56 из 1339) многократно пассированных клеток. Аналогичным образом, через 3 дня дифференцировки Bcl-2 экспрессировался 8,1% (116 из 1437) мононуклеарных вновь клонированных клеток, но только 3,1% (26 из 845) мононуклеарных многократно пассированных клеток. Таким образом, более высокий процент Bcl-2-положительных клеток был связан с более высоким процентом миогенных клеток.

Затем мы клонировали клетки C2C12 и определили размер и характер экспрессии Bcl-2 в полученных мышечных колониях. Клеткам C2C12 давали 4 дня для образования мышечных колоний, при этом размер колоний сильно варьировался, от 2 до 184 ядер на колонию. Из 67 колоний, исследованных методом иммунофлуоресценции, 33 не содержали Bcl-2-положительных клеток, а 34 содержали. Колонии без Bcl-2-положительных клеток имели среднее значение ± SE 44.4 ± 6,7 ядра и были значительно ( P <0,02) меньше, чем колонии с Bcl-2-положительными клетками, которые имели в среднем 70,2 ± 7,5 ядер. На этой ранней стадии образования колонии многоядерные клетки не образовывались.

Наконец, для дальнейшего изучения взаимосвязи между экспрессией Bcl-2 и миогенезом мы исследовали миогенез с помощью генотипически Bcl-2-нулевых клеток и клеток дикого типа. Мы обнаружили, что Bcl-2-нулевые клетки продуцируют мышечные трубки, но образуют меньшие мышечные колонии, чем клетки дикого типа.Мы сравнили клетки, полученные от конечностей новорожденных мышей Bcl-2 (- / -), с клетками, полученными от однопометников дикого типа. В культурах с высокой плотностью Bcl-2-нулевые клетки и клетки дикого типа имели сходные логарифмические скорости пролиферации клеток в среде для выращивания со временем удвоения популяции ~ 10 ч и не демонстрировали различий в образовании мышечной трубки (не показано). Напротив, клональный анализ показал четкое различие между Bcl-2-нулевыми клетками и клетками дикого типа.

Для клональных анализов клетки культивировали при клональной плотности и позволяли 8 дней формировать мышечные колонии.Независимые клональные культуры были получены от трех новорожденных с нулевым Bcl-2 и четырех новорожденных дикого типа от двух пометов. Культуры окрашивали на десмин, чтобы отличить десмин-положительные мышечные колонии от десмин-отрицательных немышечных колоний. Мышечные колонии исследовали, чтобы определить как общее количество ядер в колонии, так и процент ядер в мышечных трубках.

Мышечные колонии, образованные из клеток Bcl-2 (- / -), содержали в среднем 112 ± стандартное отклонение.6 ± 9,7 ядер ( n = 178), тогда как мышечные колонии, сформированные из клеток дикого типа, содержали в среднем ± SE 202,8 ± 11,8 ядер ( n = 274), что является очень значимым ( P <0,0001) различием. . Как Bcl-2-нулевые клетки, так и клетки дикого типа продуцировали колонии с широким диапазоном ядерных чисел, хотя Bcl-2-нулевые клетки продуцировали относительно больше маленьких колоний и относительно меньше больших колоний, чем клетки дикого типа (Рис. 4). В отличие от различий в размере колоний, индексы слияния и эффективность клонирования были сходными для Bcl-2-нулевых клеток и клеток дикого типа.Средний процент ядер в мышечных трубках составлял 24,9 ± 1,3% для клеток без Bcl-2 и 22,3 ± 0,9% для клеток дикого типа, а процент клонированных клеток, которые образовывали мышечные колонии, варьировался в разных экспериментах от ~ 20 до 40. % как для Bcl-2 – нулевых, так и для клеток дикого типа.

В клетках скелетных мышц наши результаты показывают, что экспрессия Bcl-2 является маркером для небольшого подмножества клеток, которые находятся на ранней стадии пути от клетки-предшественника мышцы к мышечной трубке.Кроме того, экспрессия Bcl-2 ингибирует апоптоз этих клеток и необходима для образования мышечных колоний нормального размера. Результаты предполагают, что экспрессия Bcl-2 может быть важной для длительного выживания мышечных клеток-предшественников и для регенерации большого количества мышечных клеток. Кроме того, экспрессия Bcl-2 идентифицирует новую стадию в клоне миогенных клеток и обеспечивает первый молекулярный маркер, который экспрессируется мышечными клетками только на ранних стадиях перехода от клетки-предшественника к мышечной трубке.Т.о., анализируя смешанные группы миогенных клеток, оказывается, что экспрессия Bcl-2 может быть использована для прямого различения мононуклеарных клеток на ранних (Bcl-2-положительных) и более поздних (Bcl-2-отрицательных) стадиях пути.

Наблюдаемые паттерны экспрессии мышечных генов предполагают, что по мере того, как Bcl-2-положительные мышечные клетки и их потомство прогрессируют в направлении образования мышечной трубки, экспрессия Bcl-2 прекращается, поскольку сначала экспрессируются Myf-5 и MyoD, а затем более поздние маркеры терминальной дифференцировки (рис. .5). Эта серия событий, в которой одноядерные мышечные клетки прогрессируют от ранней стадии, когда ни один из MRF не экспрессируется, до более поздних стадий, на которых MRF экспрессируются в определенной последовательности, также была продемонстрирована в массовых культурах и прямым анализом отдельных мышц. сателлитные клетки (Smith et al., 1993; Cornelison, Wold, 1997). Эта предложенная последовательность экспрессии генов в мышечных клетках и миобластах на ранней стадии подтверждается нашими исследованиями иммуноокрашивания и клонирования. На всех этапах культивирования, в том числе во вновь образованных мышечных колониях, присутствовали Bcl-2-положительные клетки, которые не экспрессировали детектируемых количеств какого-либо из протестированных мышечно-специфических генов, включая MRF, а также Bcl-2-положительные клетки. которые коэкспрессируют десмин, MyoD или Myf-5.Однако процент клеток, коэкспрессирующих Bcl-2 с десмином, MyoD или Myf-5, был намного выше в быстрорастущих культурах с низкой плотностью (когда миобласты, экспрессирующие миогенин, производились бы с большой скоростью), чем в более спокойных культурах. , дифференцирующиеся культуры (когда клетки, экспрессирующие миогенин, будут продуцироваться медленно).

Наши результаты повышают вероятность того, что Bcl-2-положительные клетки могут включать или быть идентичными мышечным стволовым клеткам.Bcl-2-положительные мышечные клетки могут делиться и, по-видимому, продуцировать миогенин-положительные миобласты в качестве потомства, но сами они не дифференцируются окончательно. Эти свойства ожидаются от мышечных стволовых клеток (т.е. самообновляющихся клеток, которые продуцируют миобласты в качестве потомства, но сами по себе не дифференцируются окончательно). О существовании мышечных стволовых клеток свидетельствуют исследования клонирования in vitro (Baroffio et al., 1996), в которых потомки клонированных стволовых клеток включают новые стволовые клетки, миобласты и мышечные трубки, которые составляют большие мышечные колонии in vitro.Мышечные стволовые клетки, вероятно, идентичны мышечным колониеобразующим клеткам (Hauschka et al., 1978; Rutz et al., 1982), поскольку оба они определяются способностью при клонировании самообновляться и генерировать потомство, которое формирует мышечные трубки. . Оценки доли стволовых клеток варьируются от 1-2% мышечных клеток взрослого человека (Baroffio et al., 1996) до 28% эмбриональных мышечных клеток курицы (Rutz et al., 1982). Таким образом, процент одноядерных мышечных клеток, экспрессирующих Bcl-2, находился в том же диапазоне, что и процент стволовых клеток, выведенный из исследований клонирования.Анатомические исследования (Polakowska et al., 1994; Krajewski et al., 1995; Merritt et al., 1995) предполагают, что стволовые клетки некоторых эпителий экспрессируют Bcl-2. Необходимы дополнительные эксперименты для очистки Bcl-2-положительных клеток и определения, включают ли они мышечные стволовые клетки или идентичны им.

Мононуклеарные клетки C2C12, экспрессирующие Bcl-2, по-видимому, противостоят апоптозу, потому что клетки, которые пережили индукцию апоптоза бессывороточной средой и стауроспорином, в основном были теми, которые экспрессировали Bcl-2.Таким образом, экспрессия Bcl-2 из эндогенного промотора, по-видимому, защищает небольшую субпопуляцию экспрессирующих Bcl-2 мышечных клеток от апоптоза, тогда как Bcl-2-отрицательные мышечные клетки были относительно более восприимчивыми. Этот результат согласуется с ингибирующей апоптоз функцией эндогенного или эктопического Bcl-2 во многих других типах клеток, включая двигательные нейроны и сердечные миоциты (Korsmeyer, 1995; Michaelidis et al., 1996; Kroemer, 1997; Kirschenbaum and de Moissac, 1997). Кроме того, эктопическая экспрессия Bcl-2 может защищать миотрубки с дефицитом мерозина от апоптоза (Vachon et al., 1997). Поскольку экспрессия Bcl-2, по-видимому, достаточна для повышения устойчивости миобластов и мышечных трубок к стауроспорин-индуцированному апоптозу, мы делаем вывод, что другие антиапоптотические члены семейства Bcl-2, которые могут нормально экспрессироваться после прекращения экспрессии Bcl-2 в миогенных клетках, недостаточны для предотвратить смерть этим сигналом. Наши результаты и результаты Vachon et al. (1997), повышают вероятность того, что заболевания с признаками апоптоза мышечных клеток, такие как дефицит мерозина, дефицит дистрофина и спинальная мышечная атрофия (Matsuda et al., 1995; Tidball et al., 1995; Vachon et al., 1997), может быть улучшено за счет изменения экспрессии семейства Bcl-2.

Полная степень, в которой функция мышечных клеток зависит от недостатка Bcl-2, еще предстоит определить. Bcl-2-нулевые мыши с нокаутом образуют мышцы, но после рождения они растут медленнее, чем однопометники дикого типа, и имеют множественные аномалии в немышечных тканях, включая двигательные нейроны (Veis et al., 1993; Nakayama et al., 1994; Камада и др., 1995; Михаэлидис и др., 1996). Как показано здесь, Bcl-2-нулевые клетки могут также продуцировать мышечные трубки в культуре, хотя наши анализы образования колоний показывают, что Bcl-2-нулевые мышечные клетки продуцируют меньшие мышечные колонии, чем клетки дикого типа. Поскольку Bcl-2-нулевые клетки образуют мышечные колонии in vitro и миофибриллы in vivo, оказывается, что Bcl-2 не является абсолютно необходимым для образования или функционирования клеток с качествами, ожидаемыми от мышечных стволовых клеток. Скорее, экспрессия Bcl-2, по-видимому, количественно способствует клональной экспансии, вероятно, за счет регулирования выживания и / или пролиферации мышечных клеток-предшественников.Роль Bcl-2 в клональной экспансии согласуется с открытием, что Bcl-2 ограничен мышечными клетками, которые находятся на ранней стадии миогенного пути, потому что это клетки ранней стадии, до экспрессии миогенина и p21 (Wang and Walsh , 1996), которые, вероятно, являются предшественниками мышечных колоний.

Мышечные клетки и ткани экспрессируют несколько членов семейства Bcl-2 разными паттернами (Krajewski et al., 1994, 1996; Иби и др., 1996; Sandri et al., 1997), поэтому один или несколько членов семейства Bcl-2 могут быть важны на всех стадиях миогенеза. Быстрые мышечные волокна типа IIB взрослого человека, по-видимому, экспрессируют Bcl-2 (Ibi et al., 1996). Поскольку мы не обнаружили Bcl-2 в мышечных трубках, сформированных в культуре (включая человеческие мышечные трубки; Dunn, J.J., and J.B. Miller, неопубликованные наблюдения), то специфическая для типа волокон экспрессия Bcl-2 может зависеть от иннервации. Кроме того, необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, идентифицирует ли экспрессия Bcl-2 клетки на ранних стадиях миогенеза в каждой из различных линий миогенных клеток, обнаруживаемых во время развития (Miller, 1992; Stockdale, 1992).

Теперь стало возможным использовать экспрессию промотора Bcl-2 в качестве маркера для выделения обогащенных популяций ранних мышечных клеток для молекулярной и функциональной характеристики. Например, будет важно определить дополнительные маркеры для этих клеток, разработать анализы для измерения их возможной функции стволовых клеток, изучить механизмы ранней экспрессии генов, специфичных для мышечных клеток, и определить молекулы, которые влияют на раннее деление мышечных клеток и продвижение к терминальной дифференцировке.Более того, миогенные клетки с переменным успехом использовались (см. Обзор Brown and Miller, 1996) в качестве средств доставки для генной терапии. Вскоре должно стать возможным изучить, можно ли улучшить успех за счет использования миогенных клеток, обогащенных для тех, кто находится на ранней стадии миогенного пути.

Врожденный двусторонний стеноз поперечного отверстия C2, вызывающий вертебробазилярную недостаточность у взрослых и инсульт заднего кровообращения — FullText — Case Reports in Neurology 2017, Vol.9, № 2

Аннотация

Вертебробазилярная недостаточность, приводящая к инфарктам заднего кровообращения, вызванная врожденной гипоплазией двусторонних поперечных отверстий на уровне C2, влияющая на калибр и кровоток в двусторонних дистальных шейных позвоночных артериях у взрослых, ранее не сообщалась. Мужчина 41 года обратился с жалобой на эпизодическое головокружение в течение 1 года до консультации. Компьютерная томографическая ангиография головы и шеи показала врожденную гипоплазию двусторонних поперечных отверстий С2, с отсутствием позвоночных артерий в каждом из отверстий и реконструкцией крошечных сегментов внутричерепной позвоночной артерии.МРТ головного мозга показала постинфарктную энцефаломаляцию двусторонних полушарий мозжечка. Пациент считался не хирургическим или эндоваскулярным кандидатом и лечился консервативно с помощью антитромбоцитарной терапии. Врожденные аномалии двусторонних шейных поперечных отверстий могут проявляться вертебробазилярной недостаточностью и инфарктом во взрослом возрасте.

© 2017 Автор (ы). Опубликовано S. Karger AG, Базель

Введение

Вертебробазилярная недостаточность и ишемический инсульт в области заднего кровообращения могут быть трудными для диагностики и более сложными, чем стеноз сонной артерии и инсульты переднего кровообращения.Вертебробазилярная недостаточность обычно проявляется более расплывчатыми жалобами, которые трудно отличить от болезней внутреннего уха или сердца [1]. Мы сообщаем о случае длительной вертебробазилярной недостаточности и инсульта заднего кровообращения, вызванных врожденным двусторонним стенозом поперечного отверстия C2.

История болезни

Мужчина 41 года с историей болезни коронарных артерий и установкой нескольких стентов, обструктивным апноэ во сне, смешанной гиперлипидемией, реактивным заболеванием дыхательных путей, статусом после лапароскопической рукавной гастрэктомии, депрессией и сезонным аллергическим ринитом представил эпизодическое головокружение.Симптомы появились примерно за 1 год до консультации. Первое событие характеризовалось легким чувством головокружения, замедлением мышления и неустойчивой походкой. Эти симптомы длились примерно 2–3 дня до исчезновения. За последний год у него было еще 3 эпизода с аналогичными симптомами, которые функционально не ограничивали.

Компьютерная томографическая ангиография (КТА) головы и шеи выявила врожденный двусторонний стеноз поперечного отверстия С2 с интрафораминальным отсутствием шейных позвоночных артерий (рис.1a – c) и реконструкция миниатюрных внутричерепных позвоночных артерий из коллатералей (рис. 2a, b). МРТ головного мозга показала области энцефаломаляции в нижних полушариях мозжечка, двусторонние совместимые с небольшими удаленными инфарктами (рис. 3a, b). Пациент проходил лечение, которое включало аспирин 325 мг в день.

Рис. 1.

Выберите аксиальное ( a ) и парамедианное сагиттальное правое ( b ) и левое ( c ) изображения компьютерной томографии шеи, демонстрирующие двустороннее гипопластическое поперечное отверстие на C2 без визуализации интрафораминального сегменты шейных позвоночных артерий (черные стрелки).

Рис. 2.

Выберите 3D переформатированные правые боковые ( a ) и левосторонние ( b ) изображения компьютерной томографии шеи, демонстрирующие ход экстрафораминальной коллатерализованной шейной позвоночной артерии на уровне C2 (белые стрелки) .

Рис. 3.

Осевое Т2 ( a ) и корональное Т2 ( b ) изображения МРТ головного мозга, демонстрирующие установленные корковые и подкорковые инфаркты двустороннего нижнего полушария мозжечка (белые стрелки).

Обсуждение

Вертебробазилярная недостаточность обычно проявляется одним или несколькими из следующих симптомов: головокружение или головокружение, обморок или почти обморочное состояние, моторный или сенсорный дефицит, дизартрия, атаксия, нистагм, тошнота с рвотой или без нее, синдром Хорнера, нечеткость зрения , диплопия, головная боль и инфаркт заднего кровообращения [1-3]. Причины вертебробазилярной недостаточности многочисленны и варьируются от внутрисосудистой этиологии, такой как атеросклероз и фиброзно-мышечная дисплазия, до внесосудистой этиологии, такой как остеофиты, фасциальные связки, гипертрофия шейной мускулатуры и, в редких случаях, врожденные костные аномалии шейного отдела позвоночника и позвонков [2] .

Вертебробазилярная недостаточность может возникнуть в любом возрасте, но обычно проявляется в 5–7-м десятилетии. Он поражает мужчин чаще, чем женщин в соотношении 2: 1, и средний возраст диагностики составляет 57 ± 11 лет [4]. Этиология внесосудистого сдавления позвоночной артерии зависит от возраста [2]. Педиатрические пациенты обычно имеют врожденные аномалии, такие как костная деформация на атлантоаксиальном уровне или субокципитальный костный бугорок, сдавливающий позвоночную артерию [2].У несовершеннолетних пациентов обычно наблюдаются шпоры мыщелков затылочной кости, аномалии шейного отдела позвоночника или аномальное шунтирование позвоночной артерии. У взрослых обычно наблюдаются аномальные костные образования, такие как остеофиты, спондилотические изменения и идиопатический гиперостоз скелета или грыжа диска, гипертрофия шейных мышц, нестабильность унковертебрального сустава и расслоение позвоночной артерии [2]. Внесосудистое сдавление позвоночной артерии также может быть осложнением операции на шейном отделе позвоночника [4].

При ротационной окклюзии позвоночной артерии (синдром Боу-Хантера) вертебробазилярная недостаточность вызывается окклюзией проксимальной позвоночной артерии до уровня C7 (сегмент V1) в 4% случаев, окклюзией между C3 и C7 (сегмент V2) в 58% случаев, окклюзией между C1 и C2 (сегмент V3) в 36% случаев и окклюзией дистальнее C1 (сегмент V4) в 2% случаев [4]. Левая позвоночная артерия поражена в 49,5% случаев, правая позвоночная артерия поражена в 36% и 13 случаях.В 7% случаев поражаются двусторонние заболевания. Из случаев двустороннего поражения большинство связано с аномалиями, наблюдаемыми на разных уровнях шейки матки и происходящими в нижнем шейном отделе позвоночника, или они возникают из-за приобретенных аномалий, таких как образование остеофитов, а не в результате врожденных аномалий [5-7]. В нашем случае описаны двусторонние врожденные аномалии С2. Врожденные вариации шейных поперечных отверстий характеризуются чередованием внекостных путей позвоночной артерии [8].

Вертебробазилярная недостаточность должна быть включена в дифференциальный диагноз для пациентов с жалобами на эпизодическое головокружение и головокружение, поскольку она часто поддается лечению и потенциально обратима. Первоначально рекомендуется визуализация сосудов с помощью КТА или магнитно-резонансной ангиографии [2]. Катетерная ангиография является эталонным стандартом, поскольку она позволяет лучше визуализировать цервикальную и церебральную сосудистую сеть и может быть полезна для определения постурального компонента ограничения кровотока в позвоночной артерии [1].

Консервативная терапия ротационной вертебробазилярной недостаточности включает отказ от вращения головы и шеи и антиагрегантную или антикоагулянтную терапию [2]. Из 21 пациента, получавшего консервативное лечение, у 19 пациентов не было дальнейших инсультов заднего кровообращения, а у 4 пациентов симптомы исчезли самостоятельно [2].

Хирургическая декомпрессия с массовым воздействием на позвоночную артерию или шейный спондилодез или комбинация декомпрессии и спондилодеза являются типичными хирургическими методами лечения вертебробазилярной недостаточности, вызванной внесосудистым сдавлением.В исследовании 126 случаев ротационной окклюзии позвоночной артерии, приведшей к вертебробазилярной недостаточности, 73% подверглись декомпрессивной хирургии (сегмент V1 — 80%; сегмент V2 — 83%; сегменты V3 / V4 — 60%), в то время как остальные имели только шейный спондилодез или реже декомпрессия и спондилодез (сегмент V2, 11%; сегмент V3 / V4, 29%). Из пациентов, перенесших декомпрессионную операцию, 87% не имели симптомов, а из тех пациентов, которые получали декомпрессию и спондилодез, 100% не имели симптомов [4].При двусторонней компрессии позвоночных артерий рекомендуется комбинация декомпрессии и спондилодеза [2]. Хирургический вариант для нашего пациента был рассмотрен с высоким риском из-за потенциального повреждения паравертебральных коллатеральных сосудов. Пациент также отказался от хирургического сращения позвонков C1 / C2 из-за проблем с ограничением подвижности.

Данные по эндоваскулярному лечению ограничены и без клинических испытаний. Существует серия случаев Дархабани и др. [9] из 4 пациентов, которым было проведено стентирование позвоночной артерии, у 3 — в доминантной позвоночной артерии и у 1 — в недоминирующей позвоночной артерии.В этом исследовании все стенты были размещены в сегменте C2 – C6. Все 4 пациента, получавших этот метод, сообщили об облегчении симптомов. Учитывая степень и двусторонний характер костного стеноза, этот метод не считался возможным вариантом для нашего пациента.

Заключение

Этот клинический случай демонстрирует редкую причину вертебробазилярной недостаточности и инфаркта заднего кровообращения. Двусторонняя врожденная гипоплазия поперечного отверстия C2 с агенезом сегментарной позвоночной артерии, приводящая к двустороннему инфаркту мозжечка у взрослых, ранее не описывалась.Следует поддерживать высокое клиническое подозрение на вертебробазилярную недостаточность у пациентов с перемежающимся позиционным головокружением (синдром Боу-Хантера).

Заявление об этике

У авторов нет этических конфликтов.

Заявление о раскрытии информации

У авторов нет конфликта интересов, о котором следует раскрывать.

Список литературы

1. Намини А., Нейлор М., Кенигсберг Р.А.: Вертебробазилярная недостаточность и инсульт — обзор диагностической визуализации заднего кровообращения и вариантов эндоваскулярного лечения.J Am Osteopath Coll Radiol 2015; 4: 15–23.
2. Дуань Дж., Сюй Дж., Ши Дж., Цао И .: Достижения в патогенезе, диагностике и лечении синдрома Боу-Хантера: всесторонний обзор литературы. Interv Neurol 2016; 5: 29–38.
3. Пак Дж., Ли К., Ю Н., Ким С., Чо К.: Цервикогенное головокружение, леченное декомпрессией поперечного отверстия С1: отчет о клиническом случае.Корейский J Spine 2014; 11: 209–211.
4. Йост Г.Ф., Дейли А.Т.: Повторный визит к синдрому Боу Хантера: 2 новых случая и обзор литературы по 124 случаям. Нейрохирург Фокус 2015; 38: E7.
5. Цуцуми С., Ито М., Ясумото Ю.: Одновременная двусторонняя окклюзия позвоночных артерий нижнего шейного отдела позвоночника, проявляющаяся как синдром Боу Хантера.Neurol Med Chir (Токио) 2008; 48: 90–94.
6. Шинохара Н., Коно К., Такеда С., Охта С., Сакаки С.: Случай инсульта Лук-Хантера, вызванного двусторонним окклюзионным изменением позвоночной артерии при повороте головы вправо. Но Шинкей Гека 1998; 26: 417–422.
7. Флеминг Дж. Б., Вора Т. К., Харриган М. Р.: Редкий случай двустороннего стеноза позвоночной артерии, вызванного спондилотическими изменениями C4-5, проявляющимися двусторонним синдромом Боу-Хантера.World Neurosurg 2013; 79: 799.E1 – E5.
8. Zibis AH, Mitrousias V, Baxevanidou K, Hantes M, Karachalios T., Arvanitis D: Анатомические вариации поперечного отверстия шейных позвонков: результаты, обзор литературы и клиническое значение во время хирургии шейного отдела позвоночника.Eur Spine J 2016; 25: 4132–4139.
9. Дархабани М.З., Томпсон М.К., Лаззаро М.А., Таки М.А., Зайдат О.О .: Стентирование позвоночной артерии для лечения синдрома Боу-Хантера: отчет о 4 случаях. J Stroke Cerebrovasc Dis 2012; 21: 908.e1 – e5.

Автор Контакты

Catherine Lockhart, MD

Адвокат Броменн, медицинский центр

1300 Franklin Ave Suite 110

Блумингтон, Индиана (США)

Электронная почта Кэтрин[email protected]

Подробности статьи / публикации

Получено: 27 марта 2017 г.
Принято: 24 апреля 2017 г.
Опубликовано онлайн: 17 мая 2017 г.
Дата выпуска: май — август

Количество страниц для печати: 6
Количество рисунков: 3
Количество столов: 0

eISSN: 1662-680X (онлайн)

Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/CRN

Лицензия открытого доступа / Дозировка лекарства / Заявление об ограничении ответственности

Эта статья находится под международной лицензией Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 (CC BY-NC). Для использования и распространения в коммерческих целях требуется письменное разрешение. Дозировка лекарства: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарства, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Однако ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новый и / или редко применяемый препарат. Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, причиненный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

Адренергическая активация модулирует сигнал от волокна Рейсснера к нейронам, контактирующим с спинномозговой жидкостью, во время развития

Существенных изменений:

1) Инъекция моноаминов в задний мозг.Неясно, какие концентрации использовались, как долго моноамины считались биологически активными, как это оценивалось и в какой степени они диффундировали. Авторы должны предоставить контроль и подтвердить свой анализ. Также необходимы четкие и подробные протоколы.

Мы согласны с авторами обзора в том, что это критический момент для валидации анализа изображений кальция после инъекции моноаминов в желудочек заднего мозга (HBV) у 30 эмбрионов HPF.

Во-первых, концентрации адреналина и норэпинефрина уже были описаны в разделе «Материалы и методы» (адреналин и норэпинефрин разводили до 3 мМ в aCSF перед инъекциями в желудочек заднего мозга, см. Подраздел «Визуализация кальция in vivo»).Время после инъекции, в которое были визуализированы эмбрионы, не упоминалось и теперь описано в отредактированной версии рукописи (эмбрионы были визуализированы через 20–60 минут после инъекции, см. Подраздел «Результаты» «Адреналин и норадреналин восстанавливают клетчатку Рейсснера. передача сигналов кальция в вентральных CSF-cNs мутантов скоспондина »и в подразделе« Материалы и методы »« Визуализация кальция in vivo »).

Во-вторых, мы оценили экспериментально, попадал ли норэпинефрин, доставленный через инъекцию HBV, в центральный канал спинного мозга, был ли он стабильным и присутствовал в избытке в спинномозговой жидкости для запуска передачи сигналов на большие расстояния вдоль переднезадней оси эмбрионов.Чтобы решить эти проблемы, мы провели иммуноокрашивание против норадреналина (антитела для определения адреналина отсутствуют) через 30 и 60 минут после инъекции HBV норадреналина, разведенного до 3 мМ только в aCSF или aCSF («контрольная инъекция»). Результаты теперь представлены на Рисунке 5 — добавлении к рисунку 1. Наш анализ показывает, что норадреналин-положительный сигнал присутствует в центральном канале через 30 и 60 минут после инъекции в избытке по сравнению с контрольными инъекциями. Эти наблюдения дополнительно подтверждают, что норэпинефрин, вводимый в HBV, может диффундировать по центральному каналу и стабилен в условиях, используемых для визуализации кальция in vivo.Эти результаты описаны в подразделе «Адреналин и норэпинефрин восстанавливают зависимую от Райсснера передачу сигналов кальция в вентральных CSF-cNs мутантов скоспондина ». Обратите внимание, что наши наблюдения согласуются с предыдущими исследованиями с использованием тритированного норэпинефрина ( ³ H-NE), вводимого в желудочки головного мозга собак (Maas and Landis, 1965), овец (Forbes and Bail, 1974) и крыс (Fuxe и Ungerstedt, 1966, Levitt, Kowalik and Barkai, 1983), показывающее, что ³ H-NE истощается через 5-6 часов после первоначальной инъекции (см. Подраздел «Адреналин и норадреналин восстанавливают зависимую от клетчатки передачу сигналов Рейсснера в вентральных CSF-cNs . мутанты скоспондина »).

2) Двойное иммуноокрашивание с использованием анти-GFP и анти-норадреналина, а также анти-Adrb2 у рыб pkd2l1: GCAMP.

Мы благодарим рецензентов за просьбу о внесении здесь важных исправлений.

Во-первых, мы оценили, может ли норэпинефрин быть связан с волокном Рейсснера и / или веществом, положительным по волокну Рейсснера in vivo через 30 часов после оплодотворения в центральном канале спинного мозга. Мы провели двойное иммуноокрашивание против норэпинефрина (NE) и GFP у эмбрионов Tg (скоспондин-GFP) .Мы расширили наше первоначальное наблюдение на 16 других эмбрионов, как показано на новом рисунке 6А. Наши результаты показывают, что у 10 из 16 вновь проанализированных эмбрионов, NE-положительные пятна также обнаруживаются на самом волокне или связаны с GFP-положительными отложениями в центральном канале. Более того, NE-положительные сигналы также были обнаружены в непосредственной близости к massa caudalis , структуре, образованной агрегацией Reissner-положительного материала на каудальной границе центрального канала. Чтобы выделить эти различные паттерны совместной локализации или сопоставления, мы теперь показываем объединенные изображения обоих сигналов на новом рисунке 6А, проиллюстрированном на нескольких эмбрионах, и далее описываем этот результат в подразделе «Норадреналин может быть обнаружен в спинномозговой жидкости эмбриона и экспрессируются адренергические рецепторы. спинальными клетками, контактирующими с CSF ».

Во-вторых, мы указали локализацию сигнала Adrb2 относительно CSF-cNs. Чтобы ответить на этот вопрос, мы выполнили двойное иммуноокрашивание против Adrb2 и GFP на Tg (pkd2l1: GCaMP5) 30 hpf эмбрионов (рис. 6B). Наши результаты показывают, что Adrb2 экспрессируется не в CSF-cNs, а скорее в более медиальных клетках, которые — в соответствии с их кубовидной формой и медиальной локализацией в вентральной части нервной трубки — вероятно, соответствуют медиальной пластине дна (см. Новый рисунок 6B. ).Это подтверждает, что адренергический сигнал может быть получен в центральном спинномозговом канале, и предполагает, что моноамины косвенно действуют на CSF-cNs. Важно отметить, что этот паттерн экспрессии законсервирован у мутантов scospondin , предполагая, что дефект передачи сигналов кальция, наблюдаемый в CSF-cNs, маловероятен из-за дефекта локализации рецептора в отсутствие RF (см. Вышеупомянутый подраздел).

3) Обоснование использования эмбрионов на относительно поздних стадиях (т. Е. 30 hpf vs.24 hpf). Предоставьте изображения мутантов скоспондина в окне 20-26 hpf.

Как указано в нашей предыдущей публикации (Cantaut-Belarif et al., 2018), фенотип свернутого вниз становится очевидным у мутантов скоспондина через 28-30 часов после оплодотворения. Мы заметили, что мутанты скоспондина не могли быть фенотипически распознаны ранее этой стадии. Это причина, по которой эмбрионы 28-30 hpf и 48 hpf были использованы исключительно для идентификации мутантов скоспондина в соответствии с их специфическим завитым фенотипом.Стадия 28-30 hpf соответствует времени развития, когда вариации кальция очень важны в вентральных CSF-cNs дикого типа (Sternberg et al., 2018). Это указано в пересмотренной рукописи, чтобы оправдать наш выбор (подразделы «Волокно Рейсснера контролирует экспрессию гена urp2 » и «Волокно Рейсснера необходимо для передачи сигналов кальция в urp2 , экспрессирующих CSF-cNs»).

Кроме того, чтобы лучше проиллюстрировать эволюцию геометрии задней оси между 20 и 30 hpf, мы визуализировали эволюцию геометрии задней оси с течением времени на животных, полученных из скрещивания взрослых scospondin ^{icm15 / *} родителей.Теперь мы предоставляем изображения репрезентативного мутанта scospondin ^{icm15 / icm15} и контрольного родственника через 20, 22, 24, 28 и 30 часов после оплодотворения в исправленной версии рукописи, как на рисунке 1 — рисунок в приложении 1, что еще раз подтверждает наши предыдущее наблюдение относительно возникновения фенотипа свернутого вниз (Cantaut-Belarif et al., 2018).

4) Требуются подробные протоколы.

Мы подробно описали протоколы в новой версии рукописи, особенно лекарственные препараты, инъекции в желудочки мозга и процедуры иммуногистохимии (см. Раздел «Материалы и методы»).

5) Редакционная редакция должна включать комментарии о сходствах и различиях с Lu et al.

Мы выделили сходства и различия с Lu et al. в исправленной версии рукописи.

Аналогично Lu et al., 2020: мы обнаружили, что у мутантов скоспондина эпинефрин может компенсировать потерю волокна Рейсснера на дефектах кривизны оси тела и экспрессию нейропептидов urp . Однако мы добавляем к этому предыдущему наблюдению, что норэпинефрин также может действовать одинаково (см. Подраздел «Адренергическая активация» восстанавливает зависимую от Райсснера передачу сигналов и выравнивание осей »).

Обратите внимание, что в отличие от Лу и др., Мы использовали здесь количественный подход для измерения влияния обоих моноаминов на экспрессию гена urp (с использованием количественной ПЦР на многочисленных независимых образцах вместо in situ гибридизации) и кривизны оси тела. (систематические измерения угла от уха до хвоста в независимых экспериментальных группах).

В отличие от Lu et al., 2020: здесь мы сообщаем о подавлении экспрессии urp2 гена только , а не urp1 в мутантах скоспондина (подраздел « urp2 экспрессии в вентральных CSF-cNs зависит от наличие волокна Рейсснера и влияние на кривизну эмбриональной оси »).Таким образом, мы опровергаем идею, что волокно Рейсснера необходимо для экспрессии обоих нейропептидов, и скорее показываем, что экспрессия urp2 зависит только от волокна Рейсснера.

Введение

Распространенность диабета 2 типа (СД2) в последние десятилетия экспоненциально росла.1 Вероятно, что факторы, связанные с образом жизни, являются доминирующей причиной наряду со старением населения и генетической предрасположенностью.2 Среди факторов образа жизни метаболически нездоровые пищевые привычки играют ключевую роль в этиологии и прогрессировании СД2. , было бы логично уделить питанию и образу жизни видное место в профилактике и лечении СД2.5 СД2 потенциально обратим, что отражается в нормализации уровней Hb1Ac и снижении и / или отмене лечения СД2.6 Последнее также можно назвать безмедикаментозной ремиссией СД2. Устойчивая ремиссия СД2 сопровождается улучшением физического здоровья и самочувствия пациента, меньшим количеством сопутствующих заболеваний и значительным сокращением медицинских расходов. До сих пор вмешательства для обращения вспять СД2 основывались на (1) бариатрической хирургии 7 8 (2) очень низкокалорийных диетах9 10 или (3) питательном кетозе.11–14 Основным ограничением последних двух вариантов является то, что они основаны на данные исследований с рядом недостатков, например, относительно короткие по продолжительности, 12, 15, выполненные в относительно небольших популяциях, 10–13, не приводящие к долгосрочным изменениям или обращению вспять СД2, 16–20 и / или в долгосрочной перспективе. соблюдение этих стратегий относительно низкое.9 18 21–23 Более того, ни одно из этих исследований не оценивало использование лекарств от СД2 в качестве основного результата. Исследования общего образа жизни, включая питание, физическую активность и снижение стресса, при СД2 встречаются еще реже. Проведенные исследования показали долгосрочные улучшения. 24–26

Общие аргументы против управления образом жизни как части стандартной клинической практики включают то, что отсутствие мотивации пациента препятствует устойчивости любых потенциальных результатов, что это было бы непрактично, и что эффективность первичной медико-санитарной помощи не подтверждена доказательствами.Действительно, исследований в учреждениях первичной медико-санитарной помощи, которые демонстрируют эффективность вмешательств, связанных с образом жизни, относительно мало27.

Таким образом, целью данного исследования было опробовать недавно разработанную 6-месячную многокомпонентную программу, предусматривающую интенсивное консультирование по вопросам питания и образа жизни, цифровой коучинг и образовательная платформа, курсы приема лекарств под руководством врача и кулинарные классы. Эта программа называется «Обратный диабет2» ( на голландском «Keer Diabetes2 Om» ) и была разработана Foundation Nutrition Alive ( на голландском «Voeding Leeft» ).Новизна этой программы заключается в ее многокомпонентности. Это включает в себя предоставление навыков, а не просто знаний о питании и образе жизни, в индивидуальном подходе с использованием биометрической обратной связи и использовании группового подхода. Кроме того, в программе используется динамический подход «доказательства практики »38, и поэтому она постоянно обновляется по мере того, как со временем появляются новые сведения о СД2.29 Гипотеза исследования заключалась в том, что пациенты с СД2 могут значительно снизить уровень Hb1Ac и использовать глюкозоснижающие препараты в ответ на лечение. 6-месячная многокомпонентная мультидисциплинарная программа.

Методы

Популяция исследования

Пациенты, завершившие программу «Обратный диабет2» (см. Ниже) в период с февраля 2015 г. по март 2016 г., были включены в это обсервационное исследование. Информированное согласие было предоставлено как пациентом, так и его терапевтом (GP). Пациенты были включены в исследование по схеме «ступенчатый клин» с примерно 20 пациентами в группе, начиная каждый месяц в каждом месте (так называемая «удобная выборка»). Критериями включения были диагноз сахарного диабета 2 типа, возраст 18–75 лет, индекс массы тела (ИМТ) 25–41 кг / м ² , способность бегло говорить по-голландски и мотивация принять участие в программе коррекции образа жизни.Критериями исключения были диагноз диабета 1 типа, использование инсулиновой помпы, серьезные сопутствующие заболевания, например тяжелая форма хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) (Gold III или IV), бариатрическая хирургия, расстройства пищевого поведения, сердечная недостаточность (класс 2–4) или почечной недостаточности (расчетная скорость клубочковой фильтрации (eGFR) / изменение диеты при почечной недостаточности (MDRD), eGFR / MDRD <45 единиц). Исследование было одобрено институциональным наблюдательным советом партнеров по здравоохранению Фрисландии. Использование лекарств участниками всегда контролировалось медицинским работником (GP) в соответствии со стандартной медицинской практикой.Исследователи не повлияли на возможные изменения в приеме глюкозоснижающих препаратов.

Программа коррекции образа жизни

Программа «Обратный диабет2» — это 6-месячная программа коррекции образа жизни, разработанная с целью помочь пациентам с СД2 восстановить контроль над своим заболеванием путем улучшения образа жизни и питания. В рамках этой программы люди с СД2 получают поддержку и расширяют возможности, предоставляя им знания и навыки для структурной адаптации их диетических привычек и общего образа жизни.Эта программа вмешательства отличается от обычной медицинской помощи пациентам с СД2 в Нидерландах своей групповой структурой, интенсивностью передачи знаний, структурной ориентацией на снижение стресса, кулинарным классом и построением сообщества через Интернет. Руководство предоставляется в течение 6 месяцев многопрофильной группой поддержки, состоящей из диетолога, личного тренера и практикующей медсестры в сотрудничестве с терапевтом пациента. Партнеры и семья пациентов также активно участвовали в процессе, поскольку было показано, что это повышает эффективность программ коррекции образа жизни.30 Была объяснена причина и лежащая в основе физиология СД2, и особое внимание было уделено таким аспектам, как развитие кулинарных навыков, управление стрессом, психические препятствия и режимы упражнений. Прежде всего, важным принципом групповой программы было поощрение участников и их партнеров поддерживать друг друга и делиться своим опытом, что, как было показано, повышает эффективность программ вмешательства в образ жизни.30 С этой целью социальные сети такие как Facebook и WhatsApp, использовались для создания онлайн-сообществ.Участники также получали мгновенную биометрическую обратную связь, регулярно измеряя уровень глюкозы в крови после еды, измеряя кровь их собственным терапевтом и регулярно измеряя окружность талии.31 Ядром программы являются рекомендации по питанию, основанные на фактических данных: основаны на диетических рекомендациях Голландской диабетической федерации для T2D32 и включают повышенное потребление свежих, необработанных продуктов с высокой питательной ценностью и здоровыми натуральными жирами при низком содержании углеводов с высоким гликемическим индексом (быстро усваиваемых).Вместо этого поощрялось потребление углеводов с низким гликемическим индексом. Важно отметить, что диета не была диетой с ограничением калорий и высоким содержанием жиров. Практическое руководство было адаптировано к индивидуальным предпочтениям, то есть каждому человеку предлагалось найти свой собственный предпочтительный диетический выбор. Чтобы повысить соблюдение участниками программы, их попросили внести финансовый вклад в покрытие расходов по программе (295 евро, из которых 100 евро были возмещены после того, как участники заполнили все анкеты, и были отклонены, если этот взнос препятствовал участию высокомотивированных людей с бюджетными ограничениями) .

Программа началась с 2-дневного группового тренинга, всегда проводимого в тихом месте за городом. Через 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев, соответственно, группы были приглашены на дневную контрольную встречу. Членам группы было рекомендовано поддерживать регулярные контакты друг с другом и с командой поддержки с помощью социальных сетей, таких как Facebook и WhatsApp.30

Дизайн исследования

Предварительный тест-посттестовый дизайн был использован для пилотной программы «Обратный диабет2». Анализы, представленные в этом исследовании, включали пациентов с диагнозом СД2, которые завершили 6-месячную программу и заполнили как исходные, так и последующие анкеты по здоровью, качеству жизни, параметрам СД2 (измеренным медицинским работником, таким как практикующая медсестра или терапевт). и соблюдение программы.За неделю до начала программы и за 1 неделю до заключительной встречи участники получили электронное письмо с приглашением и ссылкой для заполнения онлайн-анкеты. Основными критериями результатов исследования были уровни Hb1Ac и использование глюкозоснижающих препаратов; вторичные исходы включали другие биомаркеры СД2, включая самооценку липидного профиля крови (глюкоза натощак, холестерин), рост, вес, окружность талии, приверженность программе и оценку, субъективные параметры здоровья и уровни физической активности.

Расчет мощности на основе значений Hb1Ac первичного исхода со средней разницей 5 ммоль / моль (согласованные пары) и стандартным отклонением 11 ммоль / моль (на основе неопубликованных, но собранных самостоятельно данных, 2014 г.) с альфа 0,05 и beta 0.95 (двусторонняя) показала, что необходимо 46 участников.

Первичные критерии оценки: регуляция уровня глюкозы (HbA1c) и использование глюкозоснижающих препаратов

Уровни HbA1c были измерены участником общей практики или медсестрой, и препараты для снижения глюкозы были прописаны в соответствии с руководящими стандартами голландских врачей общей практики (Nederlands Huisartsen Genootschap [NHG] ).33 Участники сообщили эту информацию следователям; не было прямого обмена данными между врачами общей практики и следователями. Использование лекарств оценивалось, попросив участников сообщить о дозе и частоте принимаемых ими препаратов для снижения уровня глюкозы. Использование глюкозоснижающих препаратов классифицировалось как 0 (отсутствие лекарств), 1 (только метформин), 2 (сульфонилмочевины [SU] -производные и метформин) и 3 (инсулин и SU-производные и метформин). Оба параметра оценивались на исходном уровне и через 6 месяцев.

Вторичные критерии оценки

Вторичные критерии оценки включали уровень глюкозы в крови натощак, холестерин (липопротеины высокой плотности [ЛПВП], липопротеины низкой плотности [ЛПНП], триглицериды), рост, вес, окружность талии, соблюдение программы и оценку, субъективные параметры здоровья и уровни физической активности. Участников попросили сообщить самые последние измеренные значения их терапевтом или медсестрой в соответствии с руководящими стандартами голландских терапевтов (NHG) .33 Воспринимаемое здоровье и качество жизни оценивались с помощью 10-балльной шкалы Лайкерта (например, как вы оцениваете свое здоровье / качество работы за последние 14 дней по шкале от 1 до 10?).Проверенная анкета «Контрольный список индивидуальной силы (CIS)» 34 для оценки переутомления в течение последних 2 недель по 7-балльной шкале (от (нет) до (очень применимо)). Проблемы со сном и физическая активность (умеренная и интенсивная, за последние 14 дней) оценивались по 5-балльной шкале Лайкерта (например, испытывали ли вы какие-либо проблемы со сном и / или выполняли ли вы умеренную или интенсивную физическую активность?). Приверженность программе и ее одобрение оценивались по 5-балльной шкале Лайкерта за время приема пищи (завтрак, обед, ужин, закуски и напитки) (в диапазоне от (нет) до (почти полностью)).Оценка программы оценивалась по 10-балльной шкале Лайкерта. Кроме того, на исходном уровне собиралась информация о дате рождения, поле, уровне образования (наивысший достигнутый уровень классифицируется как низкий / средний или высший уровень образования) и структуре семьи (женат / сожительствует или одинок с детьми или без детей, живущих дома).

Статистический анализ

SPSS (V.23.0) использовался для проведения статистического анализа. Сначала был проведен описательный анализ для описания социально-демографических характеристик участников.Данные были описаны как среднее ± стандартное отклонение, поскольку они были нормально распределены, или n (процент). Затем были выполнены парные выборочные t-тесты для изменения каждого измеренного параметра (последующее наблюдение минус исходный уровень). Кроме того, стратифицированный анализ HbA1c был проведен у участников со значениями HbA1c ниже (« низкие стартовые ») или выше 53 ммоль / моль на исходном уровне (« высокие стартовые »), поскольку это значение HbA1c рассматривается как целевое значение для пациентов с СД2. .6 Результаты интерпретировались как статистически значимые, когда р <0,05 (двусторонний).Недостающие данные обрабатывались в соответствии с подходом по протоколу.

Обсуждение

Результаты этого пилотного исследования показывают, что эта 6-месячная многокомпонентная групповая программа по питанию и изменению образа жизни привела к улучшению контроля глюкозы, что отражается в более низких уровнях Hb1Ac и сокращении использования глюкозоснижающих лекарств в мотивированные пациенты с СД2. Кроме того, участники сообщили об улучшении воспринимаемого качества жизни, качества сна и утомляемости, и они дали высокую оценку программе через 6 месяцев.

Наиболее заметным эффектом было снижение приема глюкозоснижающих препаратов. В целом, у 49% участников, принимавших препараты, снижающие уровень глюкозы, было сочтено оправданным с медицинской точки зрения уменьшить количество принимаемых препаратов для снижения уровня глюкозы или даже полностью прекратить прием препаратов для снижения уровня глюкозы в течение 6 месяцев программы (11 пациентов смогли отказаться от инсулина). Это согласуется с двумя недавними международными статьями об обращении СД2 у пациентов с ожирением, в которых также описывается, что сокращение приема лекарств достижимо с помощью интенсивного образа жизни и программ питания.В исследовании DiRECT35, а также в исследовании VirtaHealth36 была достигнута частота ремиссии СД2 на 46–58%, что отражается снижением уровня HbA1c и сокращением использования лекарств. В исследовании DiRECT использовалась полная замена очень низкокалорийной диеты и структурированная поддержка долгосрочного контроля веса у 306 пациентов с СД235. пищевой кетоз у 349 пациентов с СД2.36 И DiRECT, и VirtaHealth наблюдали за участниками в течение 1 года. Сокращение использования лекарств может способствовать снижению затрат на здравоохранение. В настоящее время мы проводим анализ экономики здравоохранения, чтобы подробнее разобраться в этом.

В этом исследовании мы наблюдали среднюю потерю веса на 4,9 кг за 6 месяцев, небольшое, но статистически значимое снижение веса. Более кетогенный диетический подход в исследовании VirtaHealth у пациентов с СД2 показал снижение веса в среднем на 14 кг за 12 месяцев.36 Другие исследования не обнаружили эффекта от низкоуглеводной диеты через 12 месяцев, 19, 24 месяца, 18 и 64 месяца, 20 соответственно. Другая программа вмешательства в образ жизни в условиях преддиабета, SLIMMER (Нидерланды), зафиксировала снижение веса в среднем на 2,5 кг через 18 месяцев.37 При сравнении этих исследований важно отметить, что участники, включенные в эту программу, имели несколько более низкий показатель. начальный вес и ИМТ по сравнению с предыдущими исследованиями; в среднем их начальный вес составлял 93 кг по сравнению с 85–114 кг в предыдущих исследованиях 18–20 36 37, а их ИМТ в среднем составлял 31 кг / м ² по сравнению с 29–41 кг / м ² в предыдущих исследованиях 18–20 36 37.Наши результаты по массе тела и HbA1c аналогичны недавним открытиям по обращению СД2. диетический подход и электронное здоровье / онлайн-мониторинг) в целом показали снижение массы тела на 3–14 кг в течение 10–12 месяцев14. 24 Аналогичным образом, в этих исследованиях изменения образа жизни сообщалось о снижении HbA1c на 5–15 ммоль. / моль.Наше исследование показало снижение уровня HbA1c на 5 ммоль / моль через 6 месяцев. Различия в исходных характеристиках (вес в начале программы, ИМТ, HbA1c и т. Д.) Участников этих исследований могут объяснить общие различия в величине эффекта.

Кроме того, это исследование показывает, что воспринимаемое качество жизни улучшилось, и люди чувствовали себя более энергичными и менее утомленными. Это контрастирует с систематическим обзором Snorgaard и др. , которые не обнаружили улучшений качества жизни, оцененных в 2 из 10 включенных рандомизированных контролируемых исследований (РКИ) их систематического обзора.38 Следует отметить, что не все участники ответили на вопросы об воспринимаемом качестве жизни, и поэтому возможно, что будут получены разные результаты для тех, кто не заполнил анкеты. Однако, сравнивая характеристики участников тех, кто заполнил анкеты, с исходными данными от тех, кто не заполнил, мы не наблюдали никаких или небольших различий в возрасте, поле, образовании и использовании лекарств.

Мы признаем, что следует проявлять осторожность при интерпретации результатов этого пилотного исследования.Во-первых, это пилотное исследование не включало контрольную группу и имело относительно небольшой размер выборки. В настоящее время мы расширяем эту программу вмешательства, и мы также будем сравнивать результаты с данными пациентов, получающих стандартную медицинскую помощь (с использованием квазиэкспериментального плана). Еще одним ограничением является то, что участники программы присоединились к программе по собственной инициативе, что неизбежно вызовет предвзятость отбора в отношении их соответствия и мотивации к завершению. Кроме того, участников попросили внести финансовый вклад в покрытие затрат на вмешательство, чтобы стимулировать внутреннюю мотивацию, что могло привести к смещению отбора в пользу людей с большими финансовыми возможностями.Однако если финансовый взнос означал, что люди не могли участвовать, от него отказывались, что на практике происходило редко.

Данные в этом исследовании основаны на онлайн-анкетах с самопровозглашенными ответами, которые могут дать социально желательные ответы. Однако анкеты были заполнены анонимно, и участники были проинструктированы, что нет правильных или неправильных ответов. Кроме того, по возможности использовались проверенные анкеты (например, CIS). Ограничением исследований на основе вопросников может быть относительно низкий уровень удержания, особенно в долгосрочных исследованиях, однако показатель выбытия в этом пилотном исследовании через 6 месяцев был аналогичен другим интервенционным исследованиям.18 35 Наконец, следует также отметить, что использование лекарств участниками всегда контролировалось медицинским работником (GP) и в соответствии со стандартной медицинской практикой. Исследователи не повлияли на возможные изменения в использовании лекарств.

Программа Voeding Leeft извлекает выгоду из своего динамичного подхода, основанного на практике. В то же время доказательство практического плана этого исследования вводит ограничения на точный и оптимальный сбор данных. Желательно, чтобы в будущих исследованиях с большим количеством участников этому вопросу уделялось особое внимание.Принимая во внимание растущее внимание к использованию вмешательств, связанных с образом жизни, в качестве лекарств и для обеспечения оптимального сбора данных в первичных условиях, было бы желательно разработать специальную инфраструктуру для сбора и анализа данных.

Основные результаты этого оценочного исследования программы Voeding Leeft включали медицинские и биохимические параметры, то есть уровни Hb1Ac и использование лекарств, а также субъективные параметры здоровья, такие как качество жизни. Это пилотное исследование и другие исследования показали, что можно улучшить контроль уровня глюкозы, изменив образ жизни.Однако устойчивое следование изменению образа жизни имеет решающее значение для его долгосрочного успеха. Это пилотное исследование показало высокую оценку программы и высокую степень соблюдения рекомендаций по питанию через 6 месяцев. Настоящая программа извлекает выгоду из ее многокомпонентного характера, включая групповой подход, а также мгновенную индивидуальную обратную связь, и уделяет внимание санитарной грамотности, а также навыкам здоровья (например, уроки кулинарии). Было бы интересно проследить за участниками после завершения 6-месячного вмешательства, чтобы получить представление о долгосрочной эффективности.

В заключение, это пилотное исследование показывает, что эта 6-месячная многокомпонентная программа привела к улучшению контроля уровня глюкозы и сокращению использования глюкозоснижающих препаратов у мотивированных пациентов с СД2. Это шаг в направлении получения доказательств, основанных на практике, но для подтверждения этих результатов необходимо полномасштабное исследование.

Объединение взглядов фермеров и ученых на поддающиеся исследованию ограничения на производство органического какао в Гане: результаты диагностического исследования

Abstract

Диагностическое исследование было проведено для выявления основных ограничений на производство органического какао в Бронг-Денсусо и близлежащих населенных пунктах в районе Сухум-Крабоа-Коалтар, Восточный регион, Гана.Исследование последовало за технографическим исследованием, в котором какао было выделено как общественная культура, требующая широких техносоциальных инноваций. В технографическом исследовании были выявлены проблемы, в том числе низкая урожайность, постоянные ограничения по борьбе с вредителями и низкий уровень внедрения технологий, разработанных Исследовательским институтом какао Ганы. В диагностическом исследовании использовался подход совместного обучения и исследования действий для организации и проведения полевых работ с соответствующими заинтересованными сторонами, ведущих к выявлению проблем, установлению приоритетов и коллективной разработке плана действий (повестки дня исследования).Фермеры, выращивающие какао в районе исследования, осознают экологические проблемы, связанные с использованием неорганических пестицидов, и высокую стоимость их использования. Следовательно, они производят какао без применения каких-либо пестицидов. Однако совсем недавно их сотрудничество с компанией по органическому маркетингу привело к поиску нехимических мер борьбы с вредителями и болезнями, а также способов сертификации какао-бобов как органических. Заблуждение относительно того, какие виды вредителей какао представляют собой «капсиды», было улажено между фермерами и учеными с помощью клеточного эксперимента по повреждению капсида.Фермеры убедились, что какао-комар ( Helopeltis spp.) (Hemiptera: Miridae), который ранее считался серьезным вредителем, был разновидностью капсида, который наносил незначительный или нулевой ущерб бобам внутри стручков. После этого уточнения, повреждение, вызванное коричневым капсидом ( Sahlbergella singularis ; Hemiptera: Miridae) и черным капсидом ( Distantiella theobroma ; Hemiptera: Miridae), стало наиболее серьезным ограничением производства, за которым последовала болезнь черных стручков (вызванная Phytophtora palmivora ).Нарушение соглашений о владении и недоверие между арендодателями, которые в основном являются отсутствующими фермерами, и ухаживающими за ними фермерами какао представляют серьезную угрозу инновациям в борьбе с вредителями, особенно в том, что касается обрезки для борьбы с болезнью черных стручков и выкорчевывания деревьев, инфицированных болезнью опухших побегов. Ключевые заинтересованные стороны, участвовавшие в исследовании, согласовали три инновационных (органических) метода контроля капсида для дальнейших исследований: использование ловушек для половых феромонов, неочищенных водных экстрактов семян нима ( Azadirachta indica ) и использование муравья ( Oecophylla longinoda ). ) колонии в качестве агентов биологической борьбы, причем последние предлагаются фермерами.В статье диагностическое исследование рассматривается как непрерывный процесс в ответ на постоянно меняющийся контекст даже после завершения фазы диагностического исследования.

Дополнительные ключевые слова

совместное исследование

Вредители и болезни какао

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

Copyright © 2004 Koninklijke Landbouwkundige Vereniging (KLV).