Ч 3 ст 193 тк рф: Страница не найдена

Содержание

Сроки применения дисциплинарных взысканий

Коллеги, помогите понять следующую формулировку. «Увольнение за прогул является мерой дисциплинарного взыскания. Поэтому применение наказания возможно не позднее одного месяца со дня обнаружения проступка. При этом не учитывается время болезни, пребывания в отпуске. Наказание не может быть применено по истечении шести месяцев после совершения проступка (ст. 193 ТК)»
Возникает вопрос, формулировка » применение наказания возможно не позднее одного месяца со дня обнаружения проступка», то есть если сотрудник отсутствует к примеру с 27 декабря 12г. (то есть обнаружился факт отсутствия работника 27 декабря) и акты составлялись о невыходе с 27 декабря, + было позднее послано уведомление работнику о даче объяснений по факту отсутствия, и в течении 2х дней оно не было предоставлено, уволить сотрудника нужно не позднее 1 месяца с даты его невыхода?? То есть не позднее 27 января?
Заранее спасибо за разъяснения.

Комментарии

Фактически — не позднее 27 января, но это воскресенье.
Юридически – не позднее 28 января.
Если последний день срока приходится на нерабочий день, то днем окончания срока считается ближайший следующий за ним рабочий день (абз. 4 ст. 14 ТК РФ), следовательно, – не позднее 28 января.

Что значит «уволить»? Вы работника нашли, объяснение письменное с него получили? Небось, он у Вас «потеряшка»?

Было выслано уведомление работнику (с описью вложения и уведомлением о вручении) о явке с дачей объяснений причин отсутствия (на это работнику дается 2 дня с момента получения уведомления), уведомление было получено, работник не явился.. и это не дает основания не увольнять его.. что так и будет «висеть»? Пока не явится?? Вопрос сейчас конкретно стоит о сроках дисциплинарного взыскания..

Закон не совершенен, и когда умные головы его писали, то не предполагали, очевидно, что работники могут отсутствовать на работе ну очень длительное время и не подавать признаков жизни. Зато в комментариях к ТК РФ и судебной практике говориться, что применить к сотруднику дисц.взыскание в виде увольнения без письменных объяснений или отказе самого сотрудника — неправомерно. Вдруг сотрудник похищен инопланетянами, вдруг лежит в коме, или после аварии оказался в другом городе, да с амнезией? И при своем появлении по суду восстановится на работе? И советуют нам в пыдобных случаях работника искать. А ведь согласитесь, что на поиск может уйти гораздо более, чем месяц (из собственной практики знаю: и с амнезией была работница, появившаяся через год как ни в чем не бывало, и умершего разыскивала 2 с половиной года). Вам важен факт, что в течение месяца и более Вы работника разыскивали (посылали уведомления, составляли акты, показания сотрудников), чтобы применить к нем дисциплинарное взыскание, очень важен факт получения работником уведомления, его подпись на этом уведомлении, далее по истечении 2 дней, составляйте Акт, Приказ о применении дисциплинарного взыскания в виде увольнения. Увольняете. И после этого в течение 3 дней не забудьте еще ему выслать уведомление, чтобы он дал Вам письменное согласие на пересылку его трудовой книжки по почте. После получения Вами письменного его согласия вышлите ему книжку.

Если соблюдены все процедуры в соответствии со ст.193 — увольняйте.

Если вы имеете личную подпись работника в уведомлении о вручении письма с описью вложения, то имеете право уволить его и без его присутствия. Данная подпись свидетельствует, что работник получил требование работодателя дать объяснительную. И далее уже отсутствие объяснительной не является препятствием для наложения дисциплинарного взыскания.

T n

Отправление с описью вложения не предполаагет уведомления о прочтении оного

Подпись получившего письмо предполагается при другом виде отправления — с уведомлением о прочтении

Что получаем:

без описи вложения — недоказуемо содержание отправления

письмо с опись вложения не возвращает нам подпись работника

Оба этих вида письма можно совместить. И опись сделать и уведомление о прочтении.

нет уведомления о прочтении, есть уведомление о получении. А письмо с описью и уведомлением (которое — уведомление о получении- кстати, может быть простым, заказным и телеграфным) называется ценное письмо с описью вложения и уведомлением. Уж поверьте бывшему работнику почты.

T n

Готова согласиться, но многие Ваши коллеги иного мнения

Вы, наверное путаете. Это когда просят заказное письмо с описью отправить, тогда работники почты, конечно, возражают, т.к. такой вид почтовых отправлений не предусмотрен Почтовыми правилами. С описью может быть только ценное отправление (письмо, посылка). А с уведомлением можно отправить любое РЕГИСТРИРУЕМОЕ отправление, т.е. то, в приеме которого выдают квитанцию. (короче, кроме простых писем и простых почтовых карточек).

T n

Правильно ли я понимаю, что отправляя ценное письмо с описью вложения, я могу запросить оформить еще и уведомление о прочтении адресатом данного письма?

До применения дисциплинарного взыскания в форме увольнения по пп. «а» п. 6 ч. 1 ст. 81 ТК РФ (однократное грубое нарушение трудовых обязанностей в виде прогула):
1) Запросить письменное объяснение работника (ч. 1 ст. 193 ТК РФ). В Вашем случае – лучше было бы телеграммой с уведомлением о вручении.
2) Ожидать в течение 2 рабочих дней письменное объяснение работника.
3) По истечении этих 2 дней, на третий рабочий день, если объяснение не представлено – составить Акт об отсутствии на рабочем месте с 27.12.2012 г. с обязательной отметкой о том, что телеграммой был направлен запрос на представление объяснения, но оно по истечении 2 рабочих ней с момента вручении телеграммы не поступило.
4) В табеле учета рабочего времени с первого же дня отсутствия работника проставить «НН» или цифровой код «30» (неявка по невыясненным обстоятельствам).
5) При наличии акта и документа, подтверждающего, что у работника запрашивалось объяснение пишется Приказ о наложении дисциплинарного взыскания в форме увольнения по ч. 3 ст. 193 ТК РФ. Утвержденной формы такого приказа нет.
6) В табеле рабочего времени отметку «НН» нужно изменить на «ПР» (прогул) или цифровой код «24», зачеркнув предыдущую отметку, вписав над ней сверху новую и заверив лицом, составившим табель, и лицом его утверждающим.
Этот момент также важен, т.к. суды к табелю рабочего времени относятся очень внимательно.
7) Составляется Приказ о прекращении трудового договора за прогул (ФТ-8) по пп. «а» п. 6 ч. 1 ст. 81 ТК РФ на основании Приказа о наложении дисциплинарного взыскания в форме увольнения.

НО судебная практика в этом случае идёт по тому пути, что увольнение в день получения работником требования о предоставлении объяснения признается незаконным, подлежит отмене, и работника восстанавливают на работе.
ПРИМЕЧАНИЕ:
Соблюдение сроков в этом случае имеет важное значение. Суды на это обращают внимание.
По ч. 3 ст. 193 ТК РФ дисциплинарное взыскание применяется НЕ ПОЗДНЕЕ 1 МЕСЯЦА со дня обнаружения проступка, не считая времени болезни работника, пребывания его в отпуске, а также, если увольнение по п. 5 ч. 1 ст. 81 ТК РФ (неоднократное неисполнение трудовых обязанностей) времени, необходимого на учет мнения представительного органа работников (ч. 2 ст. 82 ТК РФ).
Но когда работник исчезает неожиданно, работодатель не всегда успевает в месячный срок правильно отреагировать на «потеряшку», как выше удачненько так был назван такой работник.
Поэтому судебная практика выработала понятие «длящийся прогул», согласно которому моментом обнаружения прогула является не день, в который было обнаружено отсутствие работника, а момент выяснения причин его отсутствия. Дисциплинарный проступок в этот момент и считается свершившимся и обнаруженным.
Но суд, учитывая свои внутренние убеждения, трудовой спор может разрешить, не учитывая эту сложившуюся судебную практику.
Поэтому лучше уложиться в месячный срок до даты приказа об увольнении.
И всё-таки отдельно хотелось отметить, что п. 34 Постановления Пленума Верховного Суда РФ от 17.03.2004 N2 «О применении судами Российской Федерации Трудового кодекса Российской Федерации» гласит, что по делам о восстановлении на работе лиц, уволенных по п. 5 ч. 1 ст. 81 ТК РФ (неоднократное неисполнение трудовых обязанностей) на ответчике лежит обязанность представить доказательства, свидетельствующие о том, что работодателем были соблюдены предусмотренные ч. 3 и 4 ст. 193 ТК РФ сроки для применения дисциплинарного взыскания.
Может, поэтому у судов и появилось такое понятие как «длящийся прогул» по отношению к основанию увольнения по инициативе работодателя по пп. «а» п. 6 ч. 1 ст. 81 ТК РФ (однократное грубое нарушение трудовых обязанностей в виде прогула). Ведь Постановление Пленума ВС РФ №2 отдельно на сроках по этому основанию увольнения не останавливается.

Но необходимо помнить, что работник, может быть, и заболел. Временная нетрудоспособность может подтверждаться не только больничным листом, но и выпиской из медицинской карты амбулаторного (стационарного) больного.
Поэтому к увольнению «потеряшек» необходимо относиться очень внимательно. Лучше выяснить все обстоятельства отсутствия работника.
Даже при наличии виновных действий работник может быть восстановлен на работе по причине нарушения процесса его увольнения.
Так, согласно п. 41. Постановления Пленума Верховного Суда РФ от 17.03.2004 N2 «О применении судами Российской Федерации Трудового кодекса Российской Федерации», если при разрешении спора о восстановлении на работе лица, уволенного за прогул, и взыскании среднего заработка за время вынужденного прогула выясняется, что отсутствие на рабочем месте было вызвано НЕуважительной причиной, но работодателем НАРУШЕН ПОРЯДОК УВОЛЬНЕНИЯ, суду при удовлетворении заявленных требований необходимо учитывать, что средний заработок восстановленному работнику в таких случаях может быть взыскан не с первого дня невыхода на работу, а СО ДНЯ ИЗДАНИЯ ПРИКАЗА об увольнении, поскольку только с этого времени прогул является вынужденным.

Цурупочка все по делу написала. С такими увольнениями лучше горячку не пороть. сама работала в федеральном предприятии (ооочень крупном) — прогульщиков было не один. и не два (некоторые висели больше года). можт действительно в коме лежит где-нить. а потом через полгода стопку больничных принесет. ТАк что лучше соблюсти все процедуры по актам-запросам и пр.. но пока не увольнять.

Увольнение при длительном прогуле

Безусловно, при увольнении работника за прогул нужно соблюдать процедуру применения дисциплинарных взысканий, установленную ст. 193 Трудового кодекса РФ (далее – ТК РФ). Иначе увольнение будет признано незаконным.

Согласно ч. 3 ст. 193 ТК РФ дисциплинарное взыскание применяется не позднее одного месяца со дня обнаружения проступка, не считая времени болезни работника, пребывания его в отпуске и времени, необходимого на учет мнения представительного органа работников. И, в любом случае взыскание не может быть применено позднее шести месяцев со дня совершения проступка, а по результатам ревизии, проверки финансово-хозяйственной деятельности или аудиторской проверки – позднее двух лет со дня его совершения (ч. 4 ст. 193 ТК РФ).

Однако, здесь нужно учитывать следующее: днем обнаружения проступка, с которого начинается течение месячного срока, считается день, когда лицу, которому по работе (службе) подчинен работник, стало известно о совершении проступка, независимо от того, наделено ли оно правом наложения дисциплинарных взысканий (п. 34 постановления Пленума Верховного Суда РФ от 17.03.2004 № 2 «О применении судами Российской Федерации Трудового кодекса Российской Федерации»).

Если речь идет о прогуле – то это тот день, когда стало известно, что работник совершил именно прогул, а не отсутствовал на работе по уважительным причинам. А узнать это можно не раньше, чем работник выйдет на работу. С этого момента и нужно будет отсчитывать месячный срок. Что касается шести месяцев со дня совершения проступка, то при длительном прогуле их нужно отсчитывать не с первого, а с последнего дня прогула. То есть в любом случае оба указанных срока не исчисляются с первого дня прогула работника. Таким образом, у вас будет достаточно времени уволить работника за прогул, если даже он выйдет на работу спустя длительное время после того, как должен был выйти на работу по окончании отпуска.

Экспертная группа журнала «Справочник кадровика»

ДЕТСКИЙ САД №25 Петродворцового р-на СПб

Ст 193 ТК РФ с комментариями и изменениями 2018 года.

Непредоставление работником объяснения не является препятствием для применения дисциплинарного взыскания.

Дисциплинарное взыскание применяется не позднее одного месяца со дня обнаружения проступка, не считая времени болезни работника, пребывания его в отпуске, а также времени, необходимого на учет мнения представительного органа работников.

Дисциплинарное взыскание не может быть применено позднее шести месяцев со дня совершения проступка, а по результатам ревизии, проверки финансово-хозяйственной деятельности или аудиторской проверки — позднее двух лет со дня его совершения. В указанные сроки не включается время производства по уголовному делу.

За каждый дисциплинарный проступок может быть применено только одно дисциплинарное взыскание.

Дисциплинарное взыскание может быть обжаловано работником в государственную инспекцию труда и (или) органы по рассмотрению индивидуальных трудовых споров.

Комментарий к статье 193 ТК РФ:

1. В соответствии с ч 1 ст 193 ТК РФ, для выяснения всех обстоятельств совершения дисциплинарного проступка, а также степени вины работника, совершившего проступок, руководитель организации обязан затребовать от него письменное объяснение. Такое объяснение должно быть затребовано до применения к работнику той или иной меры взыскания.

Федеральный закон от 30 июня 2006 г. N 90-ФЗ установил 2-дневный срок для предоставления работником письменного объяснения. Если по истечении 2 рабочих дней указанное объяснение не будет представлено, то составляется соответствующий акт с указанием присутствующих при этом свидетелей. Непредставление работником объяснения не препятствует наложению взыскания.

2. Дисциплинарное взыскание должно быть применено к работнику непосредственно за обнаружением проступка, но не позднее одного месяца со дня его обнаружения (ч 3 ст 193 ТК РФ). Днем обнаружения проступка, с которого исчисляется срок применения дисциплинарного взыскания, считается день, когда непосредственному руководителю работника стало известно о совершенном проступке. При этом не имеет значения, наделен ли он правом налагать дисциплинарные взыскания.

Данное правило носит общий характер и распространяется на все случаи применения дисциплинарных взысканий, включая увольнение в случаях, когда виновные действия, дающие основания для утраты доверия, либо соответственно аморальный проступок совершены работником по месту работы и в связи с исполнением им трудовых обязанностей.

Следует обратить внимание на то, что Федеральный закон от 30 июня 2006 г. N 90-ФЗ установил иной срок увольнения работника за утрату доверия либо аморальный проступок, если указанные виновные действия совершены вне места работы или по месту работы, но не в связи с исполнением трудовых обязанностей, и, следовательно, не являются дисциплинарными взысканиями. В этих случаях увольнение не допускается позднее одного года со дня обнаружения проступка работодателем (ч. 5 ст. 81 ТК).

3. Применяя статью 193 ТК РФ следует учитывать, что в срок, в течение которого может быть применено дисциплинарное взыскание, не включается период, когда работник отсутствовал на работе в связи с болезнью или находился в отпуске. В этот же срок не засчитывается время, предоставляемое для учета мотивированного мнения выборного профсоюзного органа при расторжении трудового договора в случае неоднократного неисполнения работником без уважительных причин трудовых обязанностей, если он имеет дисциплинарное взыскание (см. коммент. к ст. 373). Отсутствие на работе по иным основаниям, в т.ч. и в связи с использованием дней отдыха (отгулов) независимо от их продолжительности (например, при вахтовом методе организации работ), не прерывает течение указанного срока (подп. «в» п. 34 Постановления Пленума ВС РФ от 17 марта 2004 г. N 2).

К отпуску, прерывающему течение месячного срока, следует относить все отпуска, предоставляемые работодателем в соответствии с законодательством, в т.ч. ежегодные (основные и дополнительные) отпуска, отпуска в связи с обучением в учебных заведениях, отпуска без сохранения заработной платы (подп. «г» п. 34 Постановления Пленума ВС РФ от 17 марта 2004 г. N 2).

Если в качестве дисциплинарного взыскания к работнику применяют увольнение по подп. «г» п. 6 ч. 1 ст. 81 ТК, месячный срок исчисляется со дня вступления в законную силу приговора, которым установлена вина работника в хищении (в т.ч. мелкого) чужого имущества, растрате, умышленном его уничтожении или повреждении, либо постановления компетентного органа о наложении за это правонарушение административного взыскания.

4. Не допускается применение дисциплинарного взыскания по истечении 6 месяцев со дня совершения проступка, а по результатам ревизии, проверки финансово-хозяйственной деятельности или аудиторской проверки — 2 лет со дня его совершения, не считая времени производства по уголовному делу.

5. Часть 5 статьи 193 ТК РФ гласит, что за каждый дисциплинарный проступок может быть применено только одно дисциплинарное взыскание. Однако, если неисполнение или ненадлежащее исполнение по вине работника возложенных на него трудовых обязанностей продолжалось, несмотря на наложение дисциплинарного взыскания, допустимо применить к нему новое дисциплинарное взыскание, в т.ч. увольнение (п. 33 Постановления Пленума ВС РФ от 17 марта 2004 г. N 2).

6. Дисциплинарные взыскания налагаются руководителем организации. Другие должностные лица могут применять их только в случае, если такие полномочия им предоставлены соответствующими документами (уставом организации, приказом руководителя и др.).

О применении дисциплинарного взыскания издается приказ (распоряжение). В приказе (распоряжении) должны быть указаны мотивы его применения, т.е. конкретный дисциплинарный проступок, за совершение которого работник подвергается взысканию.

Работник, подвергшийся взысканию, должен быть ознакомлен с этим приказом (распоряжением) под роспись в течение 3 рабочих дней, не считая времени его отсутствия на работе. Отказ от подписи удостоверяется соответствующим актом.

Приказ (распоряжение) о применении взыскания доводится до сведения всех работников данной организации.

7. Если работник считает, что дисциплинарное взыскание применено неправомерно или мера взыскания является слишком суровой, он имеет право обратиться с жалобой в государственную инспекцию труда и (или) в органы по рассмотрению индивидуальных трудовых споров в установленном законом порядке (см. гл. 60 и коммент. к ее статьям).

Вправе ли работодатель требовать от работника объяснений по поводу совершенного им дисциплинарного проступка, если работник находится на больничном?

Вопрос: Вправе ли работодатель требовать от работника объяснений по поводу совершенного им дисциплинарного проступка, если работник находится на больничном?

Ответ: Работодатель вправе запросить от работника объяснения в связи с неисполнением или ненадлежащим исполнением работником по его вине возложенных на него трудовых обязанностей в период нахождения работника на больничном. Следует учесть, что представить такие объяснения работник должен в течение двух рабочих дней. Время нахождения на больничном рабочим временем не является.

Обоснование: За совершение дисциплинарного проступка, то есть неисполнение или ненадлежащее исполнение работником по его вине возложенных на него трудовых обязанностей, работодатель имеет право применить следующие дисциплинарные взыскания: замечание; выговор; увольнение по соответствующим основаниям (ч. 1 ст. 192 Трудового кодекса РФ).

До применения дисциплинарного взыскания работодатель должен затребовать от работника письменное объяснение. Если по истечении двух рабочих дней указанное объяснение работником не представлено, то составляется соответствующий акт. Непредставление работником объяснения не является препятствием для применения дисциплинарного взыскания (ч. 1, 2 ст. 193 ТК РФ).

Рабочее время — время, в течение которого работник в соответствии с правилами внутреннего трудового распорядка и условиями трудового договора должен исполнять трудовые обязанности, а также иные периоды времени, которые в соответствии с ТК РФ, другими федеральными законами и иными нормативными правовыми актами РФ относятся к рабочему времени (ст. 91 ТК РФ).

Работник, находящийся на больничном, обязан, в частности, соблюдать режим лечения, определенный на период временной нетрудоспособности. При этом листок нетрудоспособности подтверждает необходимость временного освобождения от работы (п. 3 ч. 2 ст. 4.3 Федерального закона от 29.12.2006 N 255-ФЗ «Об обязательном социальном страховании на случай временной нетрудоспособности и в связи с материнством», п. 5 Порядка выдачи листков нетрудоспособности, утвержденного Приказом Минздравсоцразвития России от 29.06.2011 N 624н).

Трудовое законодательство и иные нормативные правовые акты, содержащие нормы трудового права, не содержат ограничений в части запроса от работника объяснений за совершенный проступок в период его нетрудоспособности.

Вместе с тем следует учесть, что представить такие объяснения работник должен в течение двух рабочих дней. Время нахождения на больничном рабочим временем не является.

Вопрос: Вправе ли работодатель требовать от работника объяснений по поводу совершенного им дисциплинарного проступка, если работник находится на больничном? (Консультация эксперта, Минтруд России, 2020)

Дисциплинарное взыскание не может быть применено позднее, 193 ТК

Текущая редакция ст. 193 ТК РФ с комментариями и дополнениями на 2018 год

До применения дисциплинарного взыскания работодатель должен затребовать от работника письменное объяснение. Если по истечении двух рабочих дней указанное объяснение работником не предоставлено, то составляется соответствующий акт .
Непредоставление работником объяснения не является препятствием для применения дисциплинарного взыскания .

За каждый дисциплинарный проступок может быть применено только одно дисциплинарное взыскание.

Приказ (распоряжение) работодателя о применении дисциплинарного взыскания объявляется работнику под роспись в течение трех рабочих дней со дня его издания, не считая времени отсутствия работника на работе. Если работник отказывается ознакомиться с указанным приказом (распоряжением) под роспись, то составляется соответствующий акт .
Дисциплинарное взыскание может быть обжаловано работником в государственную инспекцию труда и (или) органы по рассмотрению индивидуальных трудовых споров .

Комментарий к статье 193 ТК РФ

1. Комментируемая статья устанавливает порядок применения дисциплинарных взысканий, отступить от которого работодатель не вправе.

Прежде чем решать вопрос о наложении на работника дисциплинарного взыскания, работодатель обязан затребовать от него письменное объяснение. Прогул работника может быть объяснен уважительными причинами, на которые работник должен иметь право сослаться.

Далее работнику предоставляется срок для дачи объяснений в течение двух рабочих дней (соответственно, выходные, праздничные дни из этого периода исключаются). Если по истечении двух рабочих дней никакого объяснения работником не представляется, составляется соответствующий акт. Это обстоятельство не является препятствием для применения дисциплинарного взыскания, на что прямо указывается в комментируемой статье.

Работник также может дать объяснение, в котором прямо или косвенно будет признана его вина или же из которого будет очевидна невиновность работника. В любом случае полученные объяснения должны быть тщательно проанализированы работодателем для решения вопроса о наложении дисциплинарного взыскания.

2. По общему правилу, дисциплинарное взыскание применяется не позднее одного месяца со дня обнаружения проступка.

В п.34 постановления Пленума ВС РФ о применении судами ТК РФ разъясняется:
— месячный срок для наложения дисциплинарного взыскания необходимо исчислять со дня обнаружения проступка;
— днем обнаружения проступка, с которого начинается течение месячного срока, считается день, когда лицу, которому по работе (службе) подчинен работник, стало известно о совершении проступка, независимо от того, наделено ли оно правом наложения дисциплинарных взысканий;
— в месячный срок для применения дисциплинарного взыскания не засчитывается время болезни работника, пребывания его в отпуске, а также время, необходимое для соблюдения процедуры учета мнения представительного органа работников; отсутствие работника на работе по иным основаниям, в том числе и в связи с использованием дней отдыха (отгулов) независимо от их продолжительности (например, при вахтовом методе организации работ), не прерывает течение указанного срока;
— к отпуску, прерывающему течение месячного срока, следует относить все отпуска, предоставляемые работодателем в соответствии с действующим законодательством, в том числе ежегодные (основные и дополнительные) отпуска, отпуска в связи с обучением в учебных заведениях, отпуска без сохранения заработной платы.

В любом случае дисциплинарное взыскание не может быть применено позднее шести месяцев со дня совершения проступка, а по результатам ревизии, проверки финансово-хозяйственной деятельности или аудиторской проверки — позднее двух лет со дня его совершения, исключая время производства по уголовному делу.

3. Комментируемая статья устанавливает, что за каждый дисциплинарный проступок может быть применено только одно дисциплинарное взыскание (то есть нельзя, например, применить замечание и выговор одновременно).

О наложении любого дисциплинарного взыскания работодателем выносится приказ, к которому прикладываются имеющиеся документы. В приказе (распоряжении) работодателя о применении дисциплинарного взыскания, с учетом содержания прилагаемых документов, должна быть полная информация о совершенном работником дисциплинарном проступке.

В случае применения дисциплинарного взыскания в виде увольнения при заполнении реквизита «Основание (документ, номер, дата)» в форме приказа Т-8, утвержденного постановлением Госкомстата РФ от 5 января 2004 года N 1, указываются сведения, в частности, о таких документах, как акт об отсутствии на рабочем месте, докладная записка, объяснения работника (в случае прогула) и т.д.

Приказ объявляется работнику под роспись в течение трех рабочих дней со дня его издания.

Дисциплинарные взыскания

В указанный период не включается время отсутствия работника на работе.

Если работник отказывается ознакомиться с указанным приказом (распоряжением) под роспись, то обязательным является составление соответствующего акта.

4. Дисциплинарное взыскание может быть обжаловано работником как в государственную инспекцию труда, так и в КТС или в суд.

Нужно отметить, что нарушение работодателем установленного порядка наложения дисциплинарного взыскания влечет за собой признание приказа незаконным и, соответственно, отмену взыскания (что в случае увольнения работника связано с его восстановлением на работе, оплатой вынужденного прогула и, как правило, возмещением морального вреда).

Так, в определении Санкт-Петербургского городского суда от 7 февраля 2013 года N 33-1930/2013 указывается на нарушение прав работника, уволенного на основании пп.»б» п.6 ст. 81 ТК РФ за появление на работе в состоянии алкогольного опьянения, поскольку работодателем был нарушен установленный ст. 193 ТК РФ порядок применения дисциплинарного взыскания за совершенный проступок, в частности, оказалось невозможно однозначно установить, было ли истребовано объяснение по факту совершения проступка.

Консультации и комментарии юристов по закондательной системе РФ

Если у вас остались вопросы по законодательству РФ и вы хотите быть уверены в актуальности представленной информации, вы можете проконсультироваться у юристов нашего сайта.

Задать вопрос можно по телефону или на сайте. Первичные консультации проводятся бесплатно с 9:00 до 21:00 ежедневно по Московскому времени. Вопросы, полученные с 21:00 до 9:00, будут обработаны на следующий день.

2. Дисциплинарное взыскание должно быть применено к работнику непосредственно за обнаружением проступка, но не позднее одного месяца со дня его обнаружения (ч 3 ст 193 ТК РФ).

Сроки для наложения дисциплинарного взыскания

Днем обнаружения проступка, с которого исчисляется срок применения дисциплинарного взыскания, считается день, когда непосредственному руководителю работника стало известно о совершенном проступке. При этом не имеет значения, наделен ли он правом налагать дисциплинарные взыскания.

Приказ (распоряжение) о применении взыскания доводится до сведения всех работников данной организации.

Статья 193 ТК РФ. Порядок применения дисциплинарных взысканий

1. Комментируемая статья устанавливает порядок (правила) привлечения работников к дисциплинарной ответственности.

В соответствии с ч. 1 данной статьи работодатель до применения дисциплинарного взыскания должен потребовать от работника объяснение в письменной форме. Такое объяснение необходимо для выяснения всех обстоятельств совершения дисциплинарного проступка, его противоправности, а также степени вины работника, совершившего проступок. Однако непредставление работником письменного объяснения не является препятствием для применения взыскания. Если по истечении двух рабочих дней указанное объяснение работником не представлено, то составляется соответствующий акт. В случае спора о правомерности применения дисциплинарного взыскания такой акт будет являться доказательством соблюдения работодателем правил привлечения к дисциплинарной ответственности.

2. Часть 3 комментируемой статьи ограничивает возможность применения дисциплинарного взыскания определенными сроками давности.

Дисциплинарное взыскание может быть применено к работнику не позднее одного месяца со дня его обнаружения. Месячный срок для наложения дисциплинарного взыскания исчисляется со дня обнаружения проступка. Днем обнаружения проступка, с которого начинается течение месячного срока, считается день, когда лицу, которому по работе (службе) подчинен работник, стало известно о совершении проступка. При этом не имеет значения, наделено ли это лицо правом наложения дисциплинарных взысканий.

В срок, установленный для применения взыскания, не засчитывается время, в течение которого работник отсутствовал на работе из-за болезни или в связи с нахождением в отпуске. При этом к отпуску, прерывающему течение месячного срока, относятся все отпуска, предоставляемые работодателем в соответствии с законодательством, в т.ч. ежегодные (основные и дополнительные), отпуска в связи с обучением в учебных заведениях, отпуска без сохранения заработной платы (п. 34 Постановления Пленума ВС РФ от 17.03.2004 N 2).

В тех случаях, когда в качестве дисциплинарного взыскания применяется увольнение, в указанный срок не включается также время, необходимое на соблюдение процедуры учета мнения представительного органа работников, если учет такого мнения является обязательным (ст. ст. 82, 373 ТК РФ, см. коммент. к ним).

Отсутствие работника на работе по другим основаниям, в т.ч. в связи с использованием дней отдыха (отгулов) независимо от их продолжительности (например, при вахтовом методе организации работы), не прерывает течения указанного срока.

При применении дисциплинарного взыскания в виде увольнения по подп. «г» п. 6 ч. 1 ст. 81 ТК месячный срок исчисляется со дня вступления в силу приговора суда либо постановления судьи, органа, должностного лица, уполномоченных рассматривать дела об административных нарушениях (п. 44 Постановления Пленума ВС РФ от 17.03.2004 N 2).

Не допускается применение дисциплинарного взыскания по истечении одного месяца со дня обнаружения проступка или по истечении шести месяцев со дня его совершения. Если дисциплинарный проступок обнаружен в результате ревизии, проверки финансово-хозяйственной деятельности или аудиторской проверки, работодатель вправе применить к работнику дисциплинарное взыскание в течение двух лет со дня совершения проступка. В указанные сроки не засчитывается время производства по уголовному делу.

3. За каждый дисциплинарный проступок к работнику может быть применено только одно дисциплинарное взыскание. Однако в тех случаях, когда неисполнение или ненадлежащее исполнение по вине работника возложенных на него трудовых обязанностей продолжалось, несмотря на наложение дисциплинарного взыскания, работодатель вправе применить к нему новое дисциплинарное взыскание, в т.ч. увольнение на основании п. 5 ч. 1 ст. 81 ТК РФ. При этом необходимо иметь в виду, что работодатель вправе применить к работнику дисциплинарное взыскание и тогда, когда он до совершения проступка подал заявление о расторжении трудового договора по своей инициативе, поскольку трудовое отношение в данном случае прекращается лишь по истечении срока предупреждения об увольнении (п. 33 Постановления Пленума ВС РФ от 17.03.2004 N 2).

Однако работника, прекратившего трудовое отношение с работодателем, нельзя подвергнуть дисциплинарному взысканию.

Дисциплинарное взыскание применяется руководителем организации. Другие должностные лица могут применять дисциплинарные взыскания, если такие полномочия им предоставлены соответствующими документами (уставом организации, приказом руководителя и др.).

Применение взыскания за совершение дисциплинарного проступка является правом, а не обязанностью работодателя. Поэтому работодатель может, учитывая все обстоятельства дела, не налагать взыскание на работника, совершившего дисциплинарный проступок, а ограничиться беседой с ним или устным замечанием. Применяя дисциплинарное взыскание, необходимо строго соблюдать установленные для этого правила. Если при наложении дисциплинарного взыскания эти правила будут нарушены работодателем, орган, рассматривающий трудовой спор о правомерности наложения взыскания, может признать применение дисциплинарного взыскания неправомерным.

4. Применение дисциплинарного взыскания оформляется приказом (распоряжением) работодателя. В приказе (распоряжении) указывается основание применения взыскания, т.е. конкретный дисциплинарный проступок, за совершение которого работник подвергнут дисциплинарному взысканию, и его вид (замечание, выговор и др.). При этом необходимо иметь в виду, что в случае применения дисциплинарного взыскания в виде увольнения издается один приказ об увольнении, а не два отдельных приказа (приказ о наложении взыскания в виде увольнения и приказ о прекращении трудового договора), как это иногда имеет место на практике.

На это обстоятельство обратила внимание Судебная коллегия по гражданским делам Верховного Суда РФ. В Апелляционном определении от 09.11.2012 N 60-АПГ12-7 по делу Ш. указано, что оформление применения к работнику дисциплинарного взыскания в виде увольнения и прекращения трудового договора с работником отдельными приказами основано на ошибочном толковании норм трудового права.

Издание приказа о применении к истцу дисциплинарного взыскания в виде увольнения само по себе свидетельствовало о расторжении с ним трудового договора, поскольку указанное в этом приказе основание увольнения, а именно п. 5 ч. 1 ст. 81 ТК РФ, содержится в перечне оснований расторжения трудового договора по инициативе работодателя, предусмотренном ст. 81 ТК РФ. В силу п. 4 ч.

Дисциплинарные взыскания — ошибки применения

1 ст. 77 ТК расторжение трудового договора по инициативе работодателя (ст. ст. 71 и 81 ТК РФ) является основанием прекращения трудового договора. Таким образом, оснований для издания приказа от 04.07.2012 N 236-к о прекращении с истцом трудового договора после увольнения его на основании приказа от 30.05.2012 N 194-к у ответчика не имелось.

Приказ (распоряжение) о наложении взыскания объявляется работнику под роспись в течение трех рабочих дней со дня его издания, не считая времени отсутствия работника на работе. Если работник по тем или иным причинам отказывается ознакомиться с приказом (распоряжением) о применении к нему дисциплинарного взыскания под роспись, то составляется соответствующий акт.

По сложившейся практике приказ о применении взыскания доводится до сведения всех работников организации.

Если, по мнению работника, дисциплинарное взыскание применено к нему необоснованно или мера взыскания не соответствует тяжести совершенного проступка, он вправе обжаловать дисциплинарное взыскание в государственную инспекцию труда и (или) органы по рассмотрению индивидуальных трудовых споров в установленном законом порядке.

За каждый дисциплинарный проступок может быть применено только одно дисциплинарное взыскание.

Комментарий к Ст. 193 ТК РФ

1. При применении дисциплинарных взысканий является обязательным одновременное соблюдение сроков (со дня обнаружения проступка и со дня его совершения), учет обстоятельств, при которых был совершен проступок, степени его тяжести, предшествующего поведения работника.

2. Недопустимо одновременное применение к работнику за один дисциплинарный проступок нескольких дисциплинарных взысканий.

3. В случае причинения работодателю материального ущерба возможно привлечение работника одновременно как к дисциплинарной, так и к материальной ответственности (см. комментарий к гл. 39 ТК РФ).

4. Работодатель при отказе работника ознакомиться под роспись с приказом (распоряжением) о применении дисциплинарного взыскания составляет соответствующий акт.

5. Дисциплинарные взыскания налагаются руководителем организации или другими должностными лицами, которым такое право предоставлено уставными документами организации.

6. Меры дисциплинарного взыскания следует отличать от мер дисциплинарного воздействия (лишение премии полностью или частично, уменьшение размера или невыплата вознаграждения по итогам работы за год — так называемой 13-й зарплаты — и др.), устанавливаемых в локальных нормативных актах.

Второй комментарий к Статье 193 Трудового кодекса

1. В соответствии с ч. 1 комментируемой статьи до применения дисциплинарного взыскания от работника должно быть затребовано письменное объяснение причин проступка. Работник обязан дать объяснение в течение двух рабочих дней, если же такового не представлено, составляется соответствующий акт. Отказ дать объяснение не является препятствием для дисциплинарного взыскания. Требование к работнику предоставить объяснения — одна из гарантий того, что наложение взыскания будет правомерно.

Отсутствие объяснения должно быть подтверждено соответствующим актом об отказе работника дать объяснение.

Работодатель имеет право привлекать работников к дисциплинарной ответственности (см. ст. 22 и комментарий к ней). От имени работодателя — юридического лица (организации) таким правом обладает руководитель. Он может делегировать это право другому лицу, например одному из своих заместителей, руководителей филиала, представительства и др. Это касается замечания и выговора. Что касается увольнения как меры взыскания, то это право предоставлено тем лицам, которые наделены правом приема на работу и увольнения.

2. Днем обнаружения дисциплинарного проступка считается день, когда должностному лицу, которому подчинен работник, стало известно о проступке, независимо от того, наделено это лицо правом наложения взысканий или нет. В месячный срок для наложения взыскания не засчитывается время болезни работника или нахождения его в отпуске (очередном, учебном, оплачиваемом или без сохранения содержания). Отсутствие на работе по другим основаниям не прерывает течение указанного срока. Однако на практике время прогула, когда работник мог не знать о наложении взыскания, обычно не включается в данный месячный срок, и последний начинает исчисляться с момента выхода работника на работу.

Но в любом случае взыскание не может быть наложено по истечении шести месяцев со дня совершения проступка, независимо от времени его обнаружения. Исключение составляют проступки, которые обнаружены по результатам ревизий и проверок финансово-хозяйственной деятельности или аудиторской проверки. В этом случае срок удлиняется до двух лет со дня совершения проступка. В указанные сроки не включается время производства по уголовному делу.

3. Часть 5 ст. 193 ТК РФ не допускает применения нескольких дисциплинарных взысканий за один проступок. Однако при причинении ущерба работником возможно сочетание дисциплинарных и материальных санкций, поскольку дисциплинарная и материальная ответственность имеют разное целевое назначение и могут совмещаться.

Это же правило распространяется и на так называемые длящиеся правонарушения, когда противоправное действие (бездействие) продолжается, несмотря на применение взыскания. Здесь также возможно повторение санкции за невыполнение трудовых обязанностей до прекращения правонарушения.

4. Если работник увольняется по подп. «г» п. 6 ст. 81 Кодекса, месячный срок в данном случае будет исчисляться со дня вступления в законную силу приговора суда, которым установлена вина работника в совершении по месту работы хищения чужого имущества (в том числе мелкого), растраты, умышленного уничтожения или повреждения имущества, либо постановления органа, уполномоченного на применение административных взысканий.

5. Наложение на виновного работника дисциплинарного взыскания не препятствует привлечению его к материальной ответственности за ущерб, причиненный работодателю (см.

Разбираем статью 193 ТК РФ: порядок применения дисциплинарных взысканий

ст. 238 и комментарий к ней).

6. В трудовую книжку работника сведения о наложении взысканий не заносятся. Не вносятся они и в личную карточку работника (унифицированная форма N Т-2, утвержденная Постановлением Госкомстата России от 6 апреля 2001 г. N 26). Исключение составляет увольнение работника как дисциплинарное взыскание.

7. Приказ (распоряжение) о применении дисциплинарного взыскания объявляется работнику под расписку в течение трех рабочих дней со дня его издания, не считая времени отсутствия работника на работе. В случае его отказа расписаться составляется соответствующий акт, который подписывают свидетельствующие этот факт лица.

8. Трудовой кодекс РФ установил дополнительные гарантии для некоторых категорий работников при наложении дисциплинарных взысканий. Так, ст. 374 ТК РФ установлены дополнительные гарантии работникам, входящим в состав выборных профсоюзных коллективных органов и не освобожденным от основной работы. А в ст. 376 ТК РФ предусмотрены гарантии работникам, являющимся ранее членами выборного профсоюзного органа.

Кроме того, закреплены гарантии для работников, участвующих в забастовке, за исключением случаев неисполнения ими обязанности прекратить забастовку в соответствии с ч. 6 ст. 413 ТК РФ (см. ст. 414 и комментарий к ней).

9. Наложенное дисциплинарное взыскание может быть обжаловано работником в органы по рассмотрению индивидуальных споров (комиссию по трудовым спорам и суд) или в государственную инспекцию труда.

10. Орган, рассматривающий трудовой спор работника о неправомерности наложенного взыскания, может его отменить, если найдет, что оно, в частности, не соответствует тяжести совершенного правонарушения. Однако заменить его другим он не вправе. Администрация же в этом случае может применить иное взыскание, но только с соблюдением сроков, указанных в ч. 3 и 4 ст. 193 ТК РФ.

Порядок применения дисциплинарного взыскания — Официальный сайт Администрации Санкт‑Петербурга

Вопрос: В каком порядке накладывается дисциплинарное взыскание в виде увольнения и как его можно оспорить.

Ответ: Порядок наложения дисциплинарного взыскания, в т.ч. в виде увольнения, установлен ст. 193 Трудового кодекса РФ (ТК РФ).

До применения взыскания от работника истребуется письменное объяснение причин неисполнения или ненадлежащего исполнения возложенных на него трудовых обязанностей, при непредоставлении которого в течение 2-х рабочих дней составляется соответствующий акт.

Отказ представить объяснение не препятствует наложению дисциплинарного взыскания.

Срок на применение взыскания – 1 месяц со дня обнаружения проступка, не считая времени болезни работника, нахождения его в отпуске, а также времени, необходимого на учет мнения представительного органа работников.

Дисциплинарное взыскание, за исключением дисциплинарного взыскания за несоблюдение ограничений и запретов, неисполнение обязанностей, установленных законодательством Российской Федерации о противодействии коррупции, не может быть применено позднее 6 месяцев со дня совершения проступка, а по результатам ревизии, проверки финансово-хозяйственной деятельности или аудиторской проверки — позднее 2-х лет со дня его совершения.

Дисциплинарное взыскание за несоблюдение ограничений и запретов, неисполнение обязанностей, установленных законодательством Российской Федерации о противодействии коррупции, не может быть применено позднее 3-х лет со дня совершения проступка. В указанные сроки не включается время производства по уголовному делу.

Работодатель обязан объявить работнику приказ о наказании под роспись в течение 3-х рабочих дней со дня его издания не считая времени отсутствия работника на работе. В случае отказа от ознакомления составляется акт.

Если работник не согласен с наложенным дисциплинарным взысканием он вправе оспорить его в 3-х месячный срок, исчисляемый с момента, когда он узнал или должен был узнать о нарушении своего права, а по спорам об увольнении — в течение одного месяца со дня вручения ему копии приказа об увольнении либо со дня выдачи трудовой книжки в судебном порядке (ст. 392 ТК РФ).

При подаче заявления в суд госпошлина не уплачивается (ст. 393 ТК РФ).

Требования к форме и содержанию заявления в суд изложены в ст. 131 Гражданского процессуального кодекса РФ.

Меры воздействия на нелояльного работника

Работник ведет себя некорректно с руководителем и коллегами, саботирует и дестабилизирует рабочий процесс в подразделении. Какие меры воздействия могут быть применены к такому работнику, рассказывают эксперты службы Правового консалтинга ГАРАНТ Анна Мазухина и Максим Золотых.

В соответствии с частью второй ст. 21 ТК РФ работник обязан добросовестно исполнять свои трудовые обязанности, возложенные на него трудовым договором. Добросовестное исполнение трудовых обязанностей означает, что работник должен, с одной стороны, совершать действия, входящие в его обязанности, а с другой — воздерживаться от выполнения действий, которые в его обязанности не входят. Ненадлежащее поведение работника должно быть связано с исполнением трудовых обязанностей, носить противоправный характер, а совершенное действие или бездействие должно быть совершено виновно. Такое понимание данной нормы разделяют и специалисты (смотрите, например, статьи: Е.П. Таноновой «Работник снова не исполнил свои обязанности? Увольняем!», опубликованную в журнале «Отдел кадров коммерческой организации», N 2, февраль 2010 г.; С. Кляйн «Дисциплинарное взыскание: знать и уметь» в журнале «Практический бухгалтерский учет», N 11, ноябрь 2009 г.; Л.В. Куревиной «Привлекаем к дисциплинарной ответственности, не совершая ошибок» в журнале «Отдел кадров коммерческой организации», N 4, апрель 2009 г.).

Согласно ст. 13 Федерального закона от 21.11.2011 N 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» сведения о факте обращения гражданина за оказанием медицинской помощи, состоянии его здоровья и диагнозе, иные сведения, полученные при его медицинском обследовании и лечении, составляют врачебную тайну. Не допускается разглашение сведений, составляющих врачебную тайну, в том числе после смерти человека, лицами, которым они стали известны при обучении, исполнении трудовых, должностных, служебных и иных обязанностей, за исключением случаев, установленных ч.ч. 3 и 4 ст. 13 данного закона. Соответственно, присутствие постороннего лица в кабинете врача при приеме пациента нарушает врачебную тайну.

В соответствии с частью первой ст. 192 ТК РФ за совершение дисциплинарного проступка, то есть неисполнение или ненадлежащее исполнение работником по его вине возложенных на него трудовых обязанностей, работодатель имеет право применить следующие дисциплинарные взыскания:

1) замечание;

2) выговор;

3) увольнение по соответствующим основаниям.

Федеральными законами, уставами и положениями о дисциплине для отдельных категорий работников могут быть предусмотрены также и другие дисциплинарные взыскания (часть вторая ст. 192 ТК РФ).

Пункт 5 части первой ст. 81 ТК РФ предусматривает возможность расторжения работодателем трудового договора в случае неоднократного неисполнения работником без уважительных причин трудовых обязанностей, если он имеет дисциплинарное взыскание; такое увольнение само по себе является видом дисциплинарного взыскания. При этом, как разъяснено в п. 33 постановления Пленума ВС РФ от 17.03.2004 N 2 «О применении судами Российской Федерации Трудового кодекса Российской Федерации» (далее — Постановление N 2), работодатель вправе расторгнуть трудовой договор по данному основанию при условии, что к работнику ранее было применено дисциплинарное взыскание и на момент повторного неисполнения им без уважительных причин трудовых обязанностей оно не снято и не погашено. Применение к работнику нового дисциплинарного взыскания, в том числе и увольнение по пункту 5 части первой статьи 81 ТК РФ, допустимо также, если неисполнение или ненадлежащее исполнение по вине работника возложенных на него трудовых обязанностей продолжалось, несмотря на наложение дисциплинарного взыскания.

В случае судебного разбирательства каждое оспариваемое работником дисциплинарное взыскание проверяется судом на предмет соблюдения работодателем порядка применения дисциплинарных взысканий, предусмотренного ст. 193 ТК РФ (вопрос 8 Обзора законодательства и судебной практики Верховного Суда РФ за II квартал 2007 г., утвержденного постановлением Президиума Верховного Суда РФ от 01.08.2007). Этот порядок предполагает, что до применения дисциплинарного взыскания у сотрудника в обязательном порядке запрашивается письменное объяснение причин неисполнения (ненадлежащего исполнения) трудовых обязанностей. Объяснение необходимо для решения вопроса о том, являются ли причины совершения дисциплинарного проступка неуважительными, поскольку нарушение трудовой дисциплины по уважительным причинам не является дисциплинарным проступком и, как следствие, не дает оснований для увольнения по п. 5 части первой ст. 81 ТК РФ (смотрите, например, определение Президиума Челябинского областного суда от 24.12.2003 — надзорное производство 4г03-2922). Если сотрудник не предоставил письменные объяснения по истечении двух рабочих дней или отказался от дачи объяснений, то об этом составляется акт. Отсутствие объяснения работника не препятствует применению дисциплинарного взыскания (части первая и вторая ст. 193 ТК РФ).

Применение дисциплинарного взыскания допускается не позднее одного месяца со дня обнаружения проступка, не считая времени болезни работника, пребывания его в отпуске, а также времени, необходимого на соблюдение процедуры учета мнения представительного органа работников (часть третья ст. 193 ТК РФ). При этом дисциплинарное взыскание не может быть применено позднее шести месяцев со дня совершения проступка, а по результатам ревизии, проверки финансово-хозяйственной деятельности или аудиторской проверки — позднее двух лет со дня его совершения. В указанные сроки не включается время производства по уголовному делу, если оно было возбуждено (смотрите также п. 52 Постановления N 2). Как разъяснил Пленум Верховного Суда РФ, днем обнаружения проступка, с которого начинается течение месячного срока, считается день, когда лицу, которому по работе (службе) подчинен работник, стало известно о совершении проступка независимо от того, наделено ли оно правом наложения дисциплинарных взысканий (п. 34 Постановления N 2).

Принимая решение о применении к работнику дисциплинарного взыскания работодатель, согласно части пятой ст. 192 ТК РФ, должен учитывать тяжесть совершенного проступка и обстоятельства, при которых он был совершен, а также предшествующее поведение работника, его отношение к труду (п. 53 Постановления N 2). Если нарушение трудовых обязанностей настолько малозначительно, что лишь формально подпадает под признаки дисциплинарного проступка, привлечь работника к дисциплинарной ответственности нельзя (Обзор судебной практики Липецкого областного суда по гражданским делам — определение от 09.12.2002 по делу N 33-2273/2002).

Приказ о применении дисциплинарного взыскания должен быть объявлен работнику под подпись в течение трех рабочих дней со дня его издания, не считая времени отсутствия работника на работе. Если работник отказывается ознакомиться с указанным приказом (распоряжением) под подпись, то составляется соответствующий акт. Дисциплинарное взыскание может быть обжаловано работником в государственную инспекцию труда и (или) органы по рассмотрению индивидуальных трудовых споров (части шестая и седьмая ст. 193 ТК РФ).

Фото: www.healthandsoul.ru

% PDF-1.2 % 1 0 obj > эндобдж 2 0 obj > эндобдж 7 0 объект > эндобдж 8 0 объект > / XObject> >> эндобдж 11 0 объект > / Длина 12 0 R >> поток i58`U $ z] W B #) ‘O ؔ t # CD ~ T? GttwHd |, XZ # ČA [ $ XGzrpm «m5 | zu7 @ =! 0DzDv ر d # 3 {~ w {zҥMӥbb,) j n # | убежать ’̆3N 8F — GPa & xOMm} Tuh # qьa.9 «.`v5F: TuG [#G) #p # G93h Z. Sa [PAA 䜛 r-AQ +8.c/c#tGˣh@G9n] |; I>] ˂8dDDX; Hs? I \ 2; «QU0DDDDDDDʂK9’3 \ Rr # 8Bb # j» «» «» «Vrm9 | l # dtmr86cTi_ ~ Mlǂg> Ss9 5 + eQq ~ u ~ «» «» «» «MFÙs9 yAyCD» M q = ~ 0 «> qE:> @ + # 2 | ehFB (ϢF»! RN rrC) և ti) B8pnGGQeDDDDDGg | Ds; 6GGdp \ ‘B «» «» $ iwmrs DDDDD9 & 0] YU rw) r-naȣW & C8GDa # yvneB, TIȣJ-v (E # o # | _._DDDDDDDDEkKh52U`ЈBh] _ ___ zZm / WqE & h # t`1C3Gɹj3Fy> fM6 | 83a * LT «ijI;% ޟ˞ k pSƙ7’J [2L ݃ u o» G ߯ D F ޷ х ׻ КŊ ֪ g8m \ qlba0 aXa_v4 L B ק M_Ǧ’vҿpT ֆ + P «8D $ 7 | $ j4b ַ ָ iN \ rBG» MS_pȮEI «2 & lB, 3W» Јlq «? Œ & KW30 @ F9N ~ MD! D \ dvaDDY71B # & \ «>! # B #! *: Ԃ9Weȓ» «U 蛪

՘ G» «» «? .W k_ K. ~ ׮ k 它 $ tLGR \ e.;? Q> EmTX- $] e>% |> pFM2aB [_. zjUzGcwpEG 縃 _4: TNpFd ؍ / N- [jy # «? xFU’o {gz, A_qƣ & o} ZO { ] {T ~ eZvh8zS] -3l * Ɯ, s> m ~ a ~ $ , Kw3’ʷu .kJZ! z / O ~ B, SCnzU. ~ 0D ‘> 2; vY} 85 / hEbPbǋwz [״ T «Cqi9GOXeӰ» ʅmBPS: b.: chA

Вариант h4.3 гистона h4 регулирует метилирование ДНК тела гена у Arabidopsis thaliana | Геномная биология

Talbert PB, Henikoff S. Варианты гистонов в движении: субстраты для динамики хроматина. Nat Rev Mol Cell Biol. 2017; 18: 115–26.

CAS Статья PubMed Google Scholar

Филипеску Д., Мюллер С., Альмоузни Г. Варианты гистона h4 и их шапероны во время развития и болезни: вклад в эпигенетический контроль.Annu Rev Cell Dev Biol. 2014; 30: 615–46.

CAS Статья PubMed Google Scholar

Talbert PB, Ahmad K, Almouzni G, Ausió J, Berger F, Bhalla PL, et al. Единая номенклатура вариантов гистонов, основанная на филогенезе. Эпигенетика хроматина. 2012; 5: 7.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

Ахмад К., Хеникофф С.Вариант гистона h4.3 маркирует активный хроматин за счет независимой от репликации сборки нуклеосом. Mol Cell. 2002; 9: 1191–200.

CAS Статья PubMed Google Scholar

Ходл М., Баслер К. Транскрипция в отсутствие гистона h4.3. Curr Biol. 2009. 19: 1221–6.

CAS Статья PubMed Google Scholar

Сакаи А., Шварц Б. Е., Гольдштейн С., Ахмад К.Транскрипционные и онтогенетические функции варианта гистона h4.3 в Drosophila . Curr Biol. 2009; 19: 1816–20.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

Couldrey C, Carlton MB, Nolan PM, Colledge WH, Evans MJ. Вставка ловушки ретровирусного гена в ген гистона 3.3A вызывает частичную неонатальную летальность, задержку роста, нервно-мышечный дефицит и самцовскую субфертильность у трансгенных мышей.Hum Mol Genet. 1999; 8: 2489–95.

CAS Статья PubMed Google Scholar

Szenker E, Lacoste N, Almouzni G. Потребность в развитии HIRA-зависимого отложения h4.3, выявленная при гаструляции у Xenopus . Cell Rep. 2012; 1: 730–40.

CAS Статья PubMed Google Scholar

Акияма Т., Сузуки О, Мацуда Дж., Аоки Ф.Динамическая замена вариантов гистона h4 репрограммирует эпигенетические метки у ранних эмбрионов мыши. PLoS Genet. 2011; 7: e1002279.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

10.

Джуллиен Дж., Астранд С., Зенкер Э., Гарретт Н., Альмоузни Дж., Гурдон Дж. Б.. HIRA-зависимое отложение h4.3 необходимо для транскрипционного репрограммирования после переноса ядра в ооциты Xenopus . Эпигенетика хроматина.2012; 5: 17.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

11.

Loppin B, Bonnefoy E, Anselme C, Laurencon A, Karr TL, Couble P. Шаперон гистона h4.3 HIRA необходим для сборки хроматина в мужском пронуклеусе. Природа. 2005; 437: 1386–90.

CAS Статья PubMed Google Scholar

12.

Орси Г.А., Альгазери А., Мейер Р.Э., Капри М., Сапей-Триумф Л.М., Хорард Б. и др.Йемануклеин дрозофилы и HIRA кооперируются для сборки de novo h4.3-содержащих нуклеосом в мужском пронуклеусе. PLoS Genet. 2013; 9: e1003285.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

13.

Santenard A, Torres-Padilla M-E. Эпигенетическое репрограммирование в репродукции млекопитающих: вклад вариантов гистонов. Эпигенетика. 2009; 4: 80–4.

CAS Статья PubMed Google Scholar

14.

Ингуфф М., Радемахер С., Холец С., Шолич Л., Синь Н., Ридшоу А. и др. Зиготический сброс репертуара вариантов HISTONE 3 участвует в эпигенетическом репрограммировании у Arabidopsis . Curr Biol. 2010; 20: 2137–43.

CAS Статья PubMed Google Scholar

15.

Nie X, Wang H, Li J, Holec S, Berger F. Комплекс HIRA, который откладывает гистон h4.3, сохраняется в Arabidopsis и способствует динамике транскрипции.Биол Открытый. 2014; 3: 794–802.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

16.

МакКиттрик Э., Гафкен П.Р., Ахмад К., Хеникофф С. Гистон h4.3 обогащен ковалентными модификациями, связанными с активным хроматином. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2004; 101: 1525–30.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

17.

Шу Х, Накамура М., Сирецкий А., Борги Л., Мораес И., Вильдхабер Т. и др. Arabidopsis замещающий вариант гистона h4.3 занимает промоторы регулируемых генов. Genome Biol. 2014; 15: R62.

Артикул PubMed Central PubMed Google Scholar

18.

Страуд Н., Отеро С., Десвойес Б., Рамирес-Парра Е., Якобсен С. Е., Гутьеррес К. Полногеномный анализ вариантов гистона h4.1 и h4.3 в Arabidopsis thaliana . Proc Natl Acad Sci U S. A. 2012; 109: 5370–5.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

19.

Wollmann H, Holec S, Alden K, Clarke ND, Jacques PE, Berger F. Динамическое отложение варианта гистона h4.3 сопровождает онтогенетическое ремоделирование транскриптома Arabidopsis . PLoS Genet. 2012; 8: e1002658.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

20.

Голдберг А.Д., Банашинский Л.А., Но К.М., Льюис П.В., Эльзаэссер С.Дж., Штадлер С. и др. Различные факторы контролируют вариант гистона h4.3 локализация в определенных областях генома. Клетка. 2010; 140: 678–91.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

21.

Рей-Галле Д., Вулф А., Васиас И., Пелленц С., Лакост Н., Пури А. и др. Динамика отложения гистона h4 in vivo выявляет механизм заполнения нуклеосомных промежутков для h4.3, чтобы поддерживать целостность хроматина. Mol Cell. 2011; 44: 928–41.

CAS Статья PubMed Google Scholar

22.

Банашинский Л.А., Вен Д., Дьюэлл С., Уиткомб С.Дж., Лин М., Диаз Н. и др. Hira-зависимое отложение гистона h4.3 облегчает рекрутирование prc2 в онтогенетические локусы в ES-клетках. Клетка. 2013; 155: 107–20.

CAS Статья PubMed Google Scholar

23.

Земах А., МакДэниэл И.Е., Сильва П., Зильберман Д. Полногеномный эволюционный анализ метилирования эукариотической ДНК. Наука. 2010; 328: 916–9.

CAS Статья PubMed Google Scholar

24.

Зильберман Д., Геринг М., Тран Р.К., Баллинджер Т., Хеникофф С. Полногеномный анализ метилирования ДНК Arabidopsis thaliana обнаруживает взаимозависимость между метилированием и транскрипцией. Нат Жене. 2007; 39: 61–9.

CAS Статья PubMed Google Scholar

25.

To TK, Saze H, Kakutani T. Метилирование ДНК в транскрибируемых областях. Plant Physiol. 2015; 168: 1219–25.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

26.

Баубек Т., Коломбо Д.Ф., Вирбелауэр С., Шмидт Дж., Бургер Л., Кребс А.Р. и др. Геномное профилирование ДНК-метилтрансфераз показывает роль DNMT3B в метилировании генов. Природа. 2015; 520: 243–7.

CAS Статья PubMed Google Scholar

27.

Вагнер Э.Дж., Плотник ПБ. Понимание языка метилирования Lys36 гистона h4. Nat Rev Mol Cell Biol. 2012; 13: 115–26.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

28.

Бьюик А.Дж., Джи Л., Нидерхут С.Е., Уиллинг Э.М., Хофмайстер Б.Т., Ши Х и др. О происхождении и эволюционных последствиях метилирования ДНК тела гена. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2016; 113: 9111–6.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

29.

Takuno S, Ran J-H, Gaut BS. Эволюционные паттерны метилирования генной ДНК варьируются в зависимости от наземных растений. Nat Plants. 2016; 2: 15222.

CAS Статья PubMed Google Scholar

30.

Видалис А., Живкович Д., Варденаар Р., Рокис Д., Телье А., Йоханнес Ф. Эволюция метиломов у растений. Genome Biol. 2016; 17: 264.

Артикул PubMed Central PubMed Google Scholar

31.

Ausin I, Feng S, Yu C, Liu W, Kuo HY, Jacobsen EL, et al. Метилом ДНК 20-гигабазного генома ели европейской. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2016; 113: E8106–13.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

32.

Okada T, Endo M, Singh MB, Bhalla PL. Анализ семейства генов гистона h4 в Arabidopsis и идентификация специфичного для мужских гамет варианта AtMGh4. Плант Дж. 2005; 44: 557–68.

CAS Статья PubMed Google Scholar

33.

Рудье Ф., Ахмед И., Берар С., Саразин А., Мэри-Юард Т., Кортижо С. и др. Интегративное эпигеномное картирование определяет четыре основных состояния хроматина в Arabidopsis . EMBO J.2011; 30: 1928–38.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

34.

Асейтуно Ф.Ф., Мосейко Н., Ри С.Ю., Гутьеррес Р.А. Правила экспрессии генов у растений: идентичность органов и метилирование тел генов являются ключевыми факторами для регуляции экспрессии генов у Arabidopsis thaliana . BMC Genomics. 2008; 9: 438.

Артикул PubMed Central PubMed Google Scholar

35.

Cokus SJ, Feng S, Zhang X, Chen Z, Merriman B, Haudenschild CD и др. Бисульфитное секвенирование генома Arabidopsis выявляет паттерн метилирования ДНК. Природа. 2008; 452: 215–9.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

36.

Листер Р., О’Мэлли Р.С., Тонти-Филиппини Дж., Грегори Б.Д., Берри С.К., Миллар А.Х. и др. Высокоинтегрированные карты эпигенома с одним базовым разрешением Arabidopsis .Клетка. 2008. 133: 523–36.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

37.

Чжан Х, Язаки Дж., Сундаресан А., Кокус С., Чан С.В., Чен Х. и др. Полногеномное картирование с высоким разрешением и функциональный анализ метилирования ДНК в Arabidopsis . Клетка. 2006; 126: 1189–201.

CAS Статья PubMed Google Scholar

38.

Тран Р.К., Хеникофф Дж. Г., Зильберман Д., Дитт РФ, Якобсен С.Е., Хеникофф С.Профилирование метилирования ДНК позволяет идентифицировать кластеры метилирования CG в генах Arabidopsis . Curr Biol. 2005; 15: 154–9.

CAS Статья PubMed Google Scholar

39.

Зильберман Д., Колман-Дерр Д., Баллинджер Т., Хеникофф С. Метилирование гистона h3A.Z и ДНК являются взаимно антагонистическими метками хроматина. Природа. 2008; 456: 125–9.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

40.

Коулман-Дерр Д., Зильберман Д. Отложение гистона варината h3A.Z в телах генов регулирует гены ответа. PLoS Genet. 2012; 8 (10): e1002988.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

41.

Woodcock CL, Skoultchi AI, Fan Y. Роль линкерного гистона в структуре и функции хроматина: стехиометрия h2 и длина нуклеосомных повторов. Chromosom Res. 2006; 14: 17–25.

CAS Статья Google Scholar

42.

Hergeth SP, Schneider R. Гистоны-линкеры h2: многофункциональные белки за пределами ядерной ядерной частицы. EMBO Rep. 2015; 16: 1439–53.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

43.

Routh A, Sandin S, Rhodes D. Длина нуклеосомного повтора и стехиометрия линкерного гистона определяют структуру волокна хроматина. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2008; 105: 8872–7.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

44.

Земах А., Ким М.Ю., Се П.Х., Коулман-Дерр Д., Эшед-Вильямс Л., Тао К. и др. Ремоделирующий нуклеосомы Arabidopsis DDM1 позволяет ДНК-метилтрансферазам получать доступ к h2-содержащему гетерохроматину. Клетка. 2013; 153: 193–205.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

45.

Jin C, Felsenfeld G. Стабильность нуклеосом опосредована вариантами гистона h4.3 и h3A.Z. Genes Dev. 2007; 21: 1519–29.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

46.

Коулман-Дерр Д., Зильберман Д. Метилирование ДНК, h3A.Z и регуляция конститутивной экспрессии. Колд Спринг Харб Symp Quant Biol. 2012; 77: 147–54.

CAS Статья PubMed Google Scholar

47.

Страуд Х., Гринберг М.В.К., Фенг С., Бернатавичуте Ю.В., Якобсен С.Е. Всесторонний анализ сайленсирующих мутантов показывает сложную регуляцию метилома Arabidopsis .Клетка. 2013; 152: 352–64.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

48.

Braunschweig U, Hogan GJ, Pagie L, van Steensel B. Связывание гистона h2 ингибируется вариантом гистона h4.3. EMBO J. 2009; 28: 3635–45.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

49.

Lin C-J, Conti M, Ramalho-Santos M. Вариант гистона h4.3 поддерживает состояние деконденсированного хроматина, необходимое для доимплантационного развития мышей. Разработка. 2013; 140: 3624–34.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

50.

Робинсон П.Дж., Родс Д. Структура «30 нм» хроматинового волокна: ключевая роль линкерного гистона. Curr Opin Struct Biol. 2006; 16: 336–43.

CAS Статья PubMed Google Scholar

51.

Henikoff S. Лабильные нуклеосомы h4.3 + h3A.Z маркируют «участки, свободные от нуклеосом». Нат Жене. 2009. 41: 865–6.

CAS Статья PubMed Google Scholar

52.

Tsutsui H, Higashiyama T. Векторы pKAMA-ITACHI для высокоэффективного CRISPR / Cas9-опосредованного нокаута гена в Arabidopsis thaliana . Physiol растительной клетки. 2017; 58: 46–56.

PubMed Google Scholar

53.

Schwab R, Ossowski S, Riester M, Warthmann N, Weigel D. Высокоспецифичное замалчивание генов с помощью искусственных микроРНК в Arabidopsis . Растительная клетка. 2006; 5: 1121–33.

Артикул Google Scholar

54.

Yelagandula R, Stroud H, Holec S, Zhou K, Feng S, Zhong X и др. Вариант гистона h3A.W определяет гетерохроматин и способствует конденсации хроматина в Arabidopsis . Клетка. 2014; 158: 98–109.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

55.

da Huang W, Sherman BT, Lempicki RA. Инструменты обогащения биоинформатики: пути к всестороннему функциональному анализу больших списков генов. Nucleic Acids Res. 2009; 37: 1–13.

Артикул Google Scholar

56.

da Huang W, Sherman BT, Lempicki RA. Систематический и комплексный анализ больших списков генов с использованием ресурсов биоинформатики DAVID. Nat Protoc. 2009. 4: 44–57.

CAS Статья Google Scholar

57.

Wu Z, Irizarry RA. Предварительная обработка данных массива олигонуклеотидов. Nat Biotechnol. 2004. 22: 656–8.

CAS Статья PubMed Google Scholar

58.

Langmead B, Schatz MC, Lin J, Pop M, Salzberg SL. Поиск SNP с помощью облачных вычислений. Genome Biol. 2009; 10: R134.

Артикул PubMed Central PubMed Google Scholar

59.

Chen P-Y, Cokus SJ, Pellegrini M.BS Seeker: точное картирование для бисульфитного секвенирования. BMC Bioinformatics. 2010; 11: 203.

CAS Статья PubMed Central PubMed Google Scholar

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера на прием файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Идентификация пищевой добавки капсаицина как ингибитора проникновения вируса Ласса

Реферат

Ограниченные возможности лечения увеличивающегося числа случаев геморрагической лихорадки Ласса в Западной Африке создают острую необходимость в открытии и разработке новых терапевтических средств.Пищевые добавки, особенно натуральные продукты, которые съедобны и безопасны для использования человеком, являются хорошим источником открытий лекарств с потенциалом для открытия новых применений. В этом исследовании мы протестировали 40 натуральных продуктов в виде пищевых добавок и определили капсаицин, обычную пищевую добавку, изобилующую перцем чили, в качестве ингибитора проникновения вируса Ласса (LASV) с ЕС ₅₀ 6,9–10,0 мкмоль / л с использованием ВИЧ. на базе псевдовирусной платформы. Капсаицин подавляет проникновение пяти штаммов LASV, но не против вируса аренавирусного лимфоцитарного хориоменингита Старого Света (LCMV), проявляя предпочтительную активность против LASV.Капсаицин ингибирует проникновение LASV, блокируя pH-зависимое слияние вирусов, воздействуя на трансмембранную область стабильного сигнального пептида (SSP) -GP2 (GP2 _TM) поверхностного гликопротеина LASV. Мутационное исследование выявило ключевые остатки Ala25, Val431, Phe434 и Val435 в области SSP-GP2 _TM в противовирусном действии капсаицина. Это исследование впервые демонстрирует противовирусный эффект прямого действия капсаицина против геморрагической лихорадки, вызывающей LASV, обеспечивая подробные горячие точки взаимодействия в уникальном интерфейсе SSP-GP2 _TM гликопротеина LASV, который имеет решающее значение для ингибирования слияния, и предлагает новый стратегия открытия и разработки противовирусных препаратов из натуральных продуктов, безопасных для использования человеком.

Графический реферат

Капсаицин был идентифицирован как ингибитор проникновения вируса Ласса (LASV). Он блокирует слияние вирусов, опосредованное LASV-GP, воздействуя на трансмембранную область стабильный сигнальный пептид-GP2 гликопротеина LASV. Остатки Ala25 в SSP _TM1 и Val431, Phe434, Val435 в GP2 _TM являются ключевыми остатками для анти-LASV активности капсаицина.

Загрузить: Загрузить изображение в высоком разрешении (225KB)
Загрузить: Загрузить полноразмерное изображение

Ключевые слова

Вирус Ласса

Ингибитор слияния

Капсаицин

Пищевая добавка

Натуральные противовирусные препараты

запись

Геморрагическая лихорадка

SSP-GP2 _TM регион

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

Цитирующие статьи

Разработка антител против Lewis-Y hu3S193 с улучшенным терапевтическим соотношением для радиоиммунотерапии эпителиального рака | EJNMMI Research

Конструирование мутантных антител hu3S193

Конструирование и продукция hu3S193 и huA33 были описаны ранее [31, 32]. Тяжелую цепь (HC) hu3S193 лигировали в вектор экспрессии млекопитающих pEE6.4 (Lonza Biologics, Slough, UK) с помощью двойного переваривания Hin dIII и Eco RI (pEE6.4 / hu3S193 HC). pEE6.4 / hu3S193 HC использовали в качестве матрицы для сайт-направленного мутагенеза (система сайт-направленного мутагенеза GeneTailor ™ (Invitrogen) или QuickChange II XL Site-Directed Mutagenesis Kit (Stratagene) для введения следующих замен в доменах Ch3 и Ch4 : I253A, h410A, h535A и I253A / h410A [25]. Легкая каппа-цепь hu3S193 была лигирована в вектор экспрессии млекопитающих pEE14.4, содержащий ген глутаминсинтетазы (Lonza Biologics) через двойной переваривать.Для одновременной экспрессии каждого мутированного антитела hu3S193 гены легкой и мутированной тяжелой цепи клонировали в вектор с двойным геном (pDGV) с использованием двойного переваривания Not I и Pvu I. Клетки Freestyle 293-F (1 × 10 ⁶ клеток / мл) трансфицировали конструкциями pDGV в соответствии с инструкциями производителя (Invitrogen). Супернатанты собирали через 96 ч после трансфекции. Антитела Hu3S193 очищали с использованием колонок HiTrap KappaSelect (GE Healthcare).Очищенные белки анализировали с помощью SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях и оценивали эксклюзионной хроматографией на колонке Superdex 200 HR 10/30 (GE Healthcare), используя 0,01 моль / л фосфата натрия и 0,15 моль / л NaCl (pH 7,2) в качестве буфер для элюирования.

Связывание in vitro с Lewis-Y и белком A мутантных антител hu3S193

Связывающую активность антител hu3S193 по Lewis-Y определяли анализом BIAcore с использованием синтетического тетрасахарида Lewis-Y, связанного с BSA (Исследовательский совет Альберты, Эдмонтон, Альберта). , Канада) на микросхеме CM5 с использованием BIAcore 2000, как описано (BIAcore AB, Упсала, Швеция) [30].Образцы антител Hu3S193 разводили в буфере HBS (10 мМ HEPES, pH 7,4, 150 мМ NaCl, 3,4 мМ ди-Na-EDTA и 0,005% Твин 20). Аликвоты (60 мкл) впрыскивали на поверхность сенсорного чипа со скоростью 30 мкл / мин. После фазы впрыска за диссоциацией следили, пропуская HBS по поверхности чипа в течение 300 с. Связанные антитела элюировали, и поверхность чипа регенерировали между образцами путем инъекции 100 мМ HCl. Для кинетического анализа вводили различные концентрации hu3S193 дикого типа и мутантов (10, 19, 38, 75 и 150 нмоль / л).Общий анализ с использованием подгонки модели Ленгмюра 1: 1 был выполнен с использованием программного обеспечения для оценки BIA версии 4.1.1.

Сортировщик клеток с активацией флуоресценции (FACS) анализировали на Lewis-Y-положительных клетках рака кожи A431. Аликвоты 2 × 10 клеток ⁵ инкубировали с антителами hu3S193 (200 нмоль / л) в среде DMEM / F12, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, на льду. После промывания клеток PBS клетки инкубировали с козьим фикоэритрином, конъюгированным с IgG человека (Sigma), и инкубировали на льду в течение 30 мин.Клетки промывали фосфатно-солевым буфером и ресуспендировали до конечного объема 300 мкл. В контрольных образцах первичное антитело не использовалось. Проточный цитометрический анализ проводили с использованием проточного цитометра Guava EasyCyte Plus. Популяции раковых клеток определялись на основе переменных прямого и бокового рассеяния. Анализ данных проводился с использованием WinMDI (Джозеф Троттер).

Радиоактивная метка антител hu3S193

Антитела Hu3S193 были радиоактивно мечены четырьмя изотопами: ¹²⁵ I, ¹³¹ I, ¹¹¹ In и ¹⁷⁷ Lu.Йод-125 и лютеций-177 были получены от PerkinElmer (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Уолтем, Массачусетс), йод-131 был получен от ANSTO (ANSTO, Menai, Австралия), а индий-111 был получен от MDS Nordion (Канада).

Радиойодирование проводили с использованием нейтрализованных pH изотопов, катализируемого стеклянными шариками, покрытыми йодогеном, как было опубликовано ранее [12, 33]. После 10-минутного инкубационного периода реакционную смесь очищали с помощью обессоливающей колонки Sephadex G50 (Sigma-Aldrich, Сидней, Австралия), уравновешенной 0.9% NaCl, содержащий 0,05% сывороточного альбумина человека.

Радиоактивное мечение конструкций антитела hu3S193 индием-111 и лютецием-177 было выполнено с использованием бифункционального хелата ионов металла, C-функционализированного транс -циклогексилдиэтилентриаминпентауксусной кислоты (CHX-A ″ DTPA) [34, 35]. Использовали соотношение хелата к антителу 3: 1, используя буфер 0,1 М бикарбонат натрия (pH 8,6), содержащий 0,9% NaCl. Инкубацию оставляли в течение 16 ч при комнатной температуре. В этих условиях ожидается от одного до двух хелатов на молекулу антитела.Смесь с радиоактивной меткой очищали через обессоливающую колонку Sephadex G50, уравновешенную 0,9% NaCl, содержащим 0,05% сывороточного альбумина человека.

Радиоактивную метку проводили в день инъекции мышам. Перед инъекцией процент содержания несвязанного радионуклида определяли с помощью ITLC, как описано ранее [36]. Определение иммунореактивности радиоактивно меченных конструкций антител hu3S193 проводили с помощью анализа одноточечного связывания, в котором 10 × 10 ⁶ Le ^y -положительных клеток A431 инкубировали с 20 нг радиоактивно меченых конструкций антител в течение 45 минут при комнатной температуре с непрерывное перемешивание, чтобы клетки оставались в суспензии.Клетки промывали три раза и осадки измеряли на гамма-счетчике (Cobra II, модель 5002, Packard Instruments, Канберра, Австралия). Три образца меченого радиоактивным изотопом антитела в той же концентрации, что и первоначально добавленные к клеткам, измеряли в то же время, что и осадок клеток, и рассчитывали иммунореактивность: (осажденных клеток в минуту / средние импульсы в минуту по стандартам радиоактивных антител) × 100. Анализировали стабильность сыворотки. путем определения иммунореактивности в день инъекции, через 48 часов и 7 дней после того, как 20 нг радиоактивно меченного антитела инкубировали в сыворотке человека при 37 ° C.

Исследования клиренса крови

Самкам бестимусных мышей (BALB / c nu / nu ; 4–6 недель; Центр ресурсов животных) в хвостовую вену вводили 0,185 МБк. ¹²⁵ I-мутант (2,5–5 мкг, 5 мкКи) и 0,185 МБк ¹³¹ I-hu3S193 (2,5–5 мкг, 5 мкКи) антитела дикого типа ( n = 5). Отдельной группе бестимусных мышей вводили 0,185 МБк ¹²⁵ I-hu3S193 (2,5–5 мкг, 5 мкКи) и 0,185 МБк ¹¹¹ In-hu3S193 (2.5–5 мкг, 5 мкКи) мутант ( n = 5). Все исследования на животных были одобрены Комитетом по этике животных больницы Остина и проводились в соответствии с австралийским кодексом практики NHMRC по уходу и использованию животных в научных целях. Образцы крови (10–20 мкл) отбирали у групп из пяти человек через 5 мин, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 120, 168, 240 и 336 ч после инъекции радиоактивных антител. Образцы подсчитывали на гамма-счетчике (Cobra II). Стандарты, приготовленные из введенного материала, каждый раз подсчитывались с образцами крови, что позволяло вносить поправки в вычисления на физический распад изотопа.

Исследования биораспределения

Исследования биораспределения проводились на бестимусных мышах без опухолей (BALB / c nu / nu , самки, 4-6 недель) или на мышах с опухолями A431 (¹¹¹ In, 0,657 ± 0,216 г; ¹³¹ I, 0,515 ± 0,195 г; ¹⁷⁷ Lu, 0,466 ± 0,086 г). Для изучения поглощения опухолью и биораспределения в нормальных тканях радиоактивного йода вариантов hu3S193 мышам BALB / c nu / nu , несущим опухоль A431, внутривенно внутривенно вводили 0.185–0,74 МБк (5–20 мкКи) ¹³¹ Варианты I-hu3S193 (2–6 мкг белка) и 0,185–0,74 МБк ¹²⁵ I-hu3S193 дикого типа (2–6 мкг белка). Во втором исследовании 0,185–0,74 МБк ¹¹¹ In-CHX-A ″ DTPA-меченный мутант (2–6 мкг белка) и 0,185–0,74 МБк ¹²⁵ I-меченный hu3S193 дикого типа (2–6 мкг белка) были введены совместно. ¹¹¹ In-CHX-A ″, меченный DTPA дикого типа, и ¹²⁵ I-hu3S193 дикого типа также вводили в качестве контрольной группы. ¹²⁵ I-hu3S193 дикого типа использовали в качестве внутреннего контроля для всех инъецированных животных, чтобы сделать возможным прямое сравнение между различными мутантами.Обычно группы из четырех-пяти мышей умерщвляли через 4, 24, 48, 72, 120, 168 и 240 или 288 ч после инъекции радиоактивно меченных антител. Для оценки ¹⁷⁷ Lu-меченых антител мышей умерщвляли через 48 часов после инъекции. В указанные моменты времени группы мышей ( n = 4–5) гуманно умерщвляли путем чрезмерного вдыхания изофлурана. У мышей брали кровь путем пункции сердца, и опухоли и органы (кожа, печень, селезенка, тонкий кишечник, желудок, почки, мозг, кость (бедренная кость), легкие и сердце) немедленно удаляли и промокали насухо.Все образцы взвешивали и подсчитывали на двойном гамма-сцинтилляционном счетчике (Cobra II, Packard Instruments). Стандарты в трех экземплярах, приготовленные из вводимого материала, подсчитывали в каждый момент времени с образцами тканей и опухолей, что позволяло вносить поправки в вычисления на физический распад изотопов. Результаты распределения радиоактивно меченых антител во времени рассчитывали как средний процент введенной дозы на грамм (% ID / г ± стандартное отклонение) для каждого мутанта и родительского hu3S193 на момент времени.

Фармакокинетический анализ и прогностическая дозиметрия

Концентрации антител в сыворотке выражали как процент введенной дозы на миллилитр (% ID / мл), и рассчитывали концентрации в крови (мкг / мл).Двухкомпонентная модель болюса для внутривенного введения с макропараметрами, без задержки и элиминацией первого порядка (WinNonlin Model 8) была адаптирована к данным сыворотки, полученным в исследованиях клиренса крови для каждого животного с использованием невзвешенного нелинейного метода наименьших квадратов с WinNonLin версии 5.2 ( Pharsight Corp., Маунтин-Вью, Калифорния). Оценки были определены для фармакокинетических параметров: период полувыведения альфа ( т _{1 / 2α}), период полураспада бета ( т _{1 / 2β}), площадь под кривой, экстраполированная на бесконечность (AUC _0-∞), и среднее время пребывания (MRT).Период полужизни альфа мутантного hu3S193 должен был быть меньше или равным периоду полужизни альфа hu3S193 дикого типа. Значительные различия в этих значениях были изучены путем сравнения коэффициента вариации (CV%) для оцененных параметров.

Для оценки радиоиммунотерапевтических применений для ⁹⁰ Y- или ¹⁷⁷ Lu-меченых мутантов, данные биораспределения, полученные с ¹¹¹ In-CHX-A ″ DTPA-меченными антителами, были использованы для построения кривых зависимости активности от времени для расчета прогнозные дозы облучения для костного мозга, печени, почек и опухоли.Предполагалось идентичное биораспределение и биологический клиренс ¹¹¹ In-, ⁹⁰ Y- и ¹⁷⁷ Lu-меченных антител. Прогностический дозиметрический анализ был также проведен для антител, меченных ¹³¹ I, на основании данных биораспределения, полученных с антителами, меченными ¹²⁵ I. Поскольку поглощенные дозы излучения пропорциональны% ID / г, кривые зависимости активности от времени для крови, печени, почек и опухоли были интегрированы с течением времени для расчета площади под кривой (AUC).Кривые зависимости активности от времени, полученные на основе данных биораспределения, были скорректированы на радиоактивный распад. Следовательно, фармакокинетические значения, рассчитанные на основе таких данных, относятся к фармакологическим значениям антител в отсутствие радиоизотопа. Соответствующие поправки на физический период полураспада применялись для преобразования% ID _{фармакологического} / г в% ID _{радиоизотопа} / г, а кривые время-активность соответствовали двух- или трех экспоненциальной функции, из которой определялась AUC для ^{. 90} Y, ¹⁷⁷ Lu и ¹³¹ I.Интегрирование AUC от нуля до бесконечности было выполнено путем суммирования трапецеидального интегрирования диапазона измерения (AUC _{0–288 ч}) плюс экстраполированная модель, подходящая для экстраполированного диапазона (AUC _{288 ч – ∞}). Для расчета накопленной активности не учитывались доза фотонов и краевые эффекты. Дозу для красного костного мозга определяли по концентрациям в крови с использованием исходного значения 0,1 [21].

Нано-ОФЭКТ и МРТ

Все сканирование ОФЭКТ и МРТ проводилось на системе визуализации нано-ОФЭКТ / КТ мелких животных и системе визуализации нано-ПЭТ / МРТ мелких животных (Mediso nano-Scan ^PM, Mediso Medical Imaging Systems, Будапешт, Венгрия) индивидуально.Группам из двух мышей инъецировали 3,7 МБк (270 мкг) ¹⁷⁷ Lu-CHX-A ″ DTPA-меченное антитело (huA33 дикого типа, hu3S193 дикого типа или hu3S193 I253A / h410) и последовательно визуализировали через 2 дня после инъекции. Процедуры визуализации включали анестезию мышей изофлураном. Каждую мышь сканировали в положении лежа на спине с закреплением головы с помощью ушей и зубных планок. Дыхание контролировалось чувствительной к давлению подушечкой, прикрепленной к животу. Исследование изображений началось с Т1-взвешенного МРТ-сканирования всего тела, за которым следовало 60-минутное сканирование ОФЭКТ, которое было преобразовано в объемное изображение с размером вокселя 0.3 мм × 0,3 мм × 0,3 мм с использованием алгоритма Mediso Tera-TOMO® на основе Монте-Карло. Впоследствии восстановленные изображения SPECT и MR были переданы в исследовательскую систему PACS, где изображения можно было извлечь для дальнейшей обработки и анализа.

Для подтверждения данных, полученных при визуализации, группам из пяти мышей с опухолями A431 инъецировали 6,29 МБк (100 мкг) ¹⁷⁷ Lu-CHX-A ″ DTPA-меченное антитело (huA33 дикого типа, hu3S193 дикого типа или hu3S193 I253A / h410) и умерщвляли через 48 ч после инъекции.Органы и кровь собирали, как описано ранее, и распределение радиоактивно меченых антител с течением времени рассчитывали как среднее значение% ID / г ± SD для каждого антитела на момент времени.

Статистический анализ

Для сравнения поглощения опухолью в разные моменты времени для мутантов и hu3S193 дикого типа был проведен двухфакторный дисперсионный анализ с пост-тестом Бонферрони с использованием GraphPad Prism версии 5.00 для Windows, GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США, www. graphpad.com. Отношение опухоли к ткани или поглощение тканью в определенные моменты времени анализировали с использованием однофакторного дисперсионного анализа ANOVA с пост-тестом множественного сравнения Тьюки.Когда сравнивалось менее трех групп, использовался непараметрический тест t (односторонний).

Интегрированная катушка радиочастотного приема / B0-шумоподавителя повышает производительность МР-спектроскопической визуализации всего мозга при 7 Тл

Наша методика была разработана и реализована на 7-тонном МРТ сканере Magnetom (Siemens Healthcare, Эрланген, США) Германия) с программным обеспечением IDEA VB17A и оснащенной градиентной системой 7 T-SC72CD, обеспечивающей максимальную силу градиента 70 мТл / м и номинальную скорость нарастания 200 мТл / м / с.

Аппаратное и программное обеспечение для регулировки шиммирования переменного / постоянного тока

Мы использовали недавно разработанное интегрированное ВЧ-приемное оборудование и многокатушечную матрицу регулировочных катушек B0 для динамического регулирования. Массив состоит из 31-канальной катушки переменного / постоянного тока, нанесенной на плотно прилегающий 3D-напечатанный поликарбонатный шлем (на 3D-принтере используется Fortus 360mc, Stratasys, Реховот, Израиль) (рис. 9A). Катушка AC / DC имела 31 канал приема ВЧ и 31 канал B ₀-компенсатора. В 25 контурах была добавлена возможность прокладки B ₀ путем создания пути постоянного тока с использованием витой пары и индуктивных дросселей для подключения постоянного тока к радиочастотной цепи.Шесть петель на нижне-задней части шлема, которые считались менее важными для шиммирования B ₀, были сохранены как петля только для приема РЧ. Шесть четырехвитковых петлевых катушек B ₀, предназначенных только для прокладки, были помещены на лицо для нацеливания на префронтальную кору, построенную на предшествующей работе с локальной прокладочной катушкой ⁶² из других групп. Эта конструкция AC / DC была продемонстрирована при моделировании ⁹ для обеспечения сопоставимых характеристик регулировочной прокладки B ₀ с вставкой регулировочной прокладки со сферическими гармониками порядка 4 ^th.Таким образом, эта аппаратная установка сохраняет чувствительность приема близко подогнанного радиочастотного приемного массива мозга, а также обеспечивает возможность локального управления полем B ₀ с использованием того же массива — обе эти функции имеют решающее значение для получения высококачественных данных MRSI. Для передачи РЧ сигнала использовалась самодельная регулируемая квадратурная катушка в виде птичьей клетки.

Рисунок 9

(A) Интегрированный радиочастотный приемник / B ₀ — матричная катушка регулировочной прокладки (переменный / постоянный ток) (слева) и платы питания регулировочных прокладок с цифровым программированием (справа). (B) Трехмерная диаграмма последовательности импульсов MRSI с коррекцией движения в реальном времени и динамическим обновлением прокладки AC / DC. Время эха TE = 78 мс (TE1 / TE2 = 50/28 мс), задержка восстановления инверсии TI = 270 мс, TR = 1800 мс, FOV = 220 × 220 × 80 мм ³, матрица 44 × 44 × 8, номинальная воксель 5 × 5 × 10 мм ³, спектральное окно 2700 Гц, время сбора данных = 11:38 мин: с. 2SH = сферические гармоники 2-го порядка; AC / DC = переменный / постоянный ток ; AHP = адиабатический полупроход; GOIA = адиабатический, независимый от смещения градиента; EPI = эхо-планарное изображение; HGSB = гипергеометрическая одинарная полоса; WET = подавление воды, усиленное эффектами T ₁.Внизу показаны: B ₀ карты поля для шимминга 2SH и 2SH + ACDC; спиральная траектория выхода в k-пространстве; профиль среза импульсов GOIA, смоделированный для смещения ± 1 ppm; профиль инверсии импульса HGSB с переходной полосой с центром (красная пунктирная линия) при 1,6 ppm.

Петли катушки диаметром 9,5 см, изготовленные из сплошного провода AWG16, выстроены в гексагонально-пятиугольный узор с критическим перекрытием для разделения соседних элементов. Другие подробности катушки RF приведены в ^26,63.Регулирующие токи катушки переменного / постоянного тока управлялись группой низковольтных усилителей с цифровым программированием, которые обеспечивают постоянный ток до ± 2,5 А на канал и позволяют очень быстро переключаться менее чем за 1 мс между различными шаблонами поля B ₀ ²⁸. Устройства выходного каскада монтируются на радиаторах с проложенными трубопроводами для водяного охлаждения. ВЧ возбуждение достигалось с помощью регулируемой квадратурной катушки типа «птичья клетка». По бокам головы пациента были добавлены диэлектрические прокладки для улучшения однородности передачи B ₁₊ и достижения более однородного качества данных MRSI по всему мозгу ⁶⁴.

Регулировочная прокладка AC / DC была наложена на регулировочную прокладку 2SH, создаваемую оборудованием сканера. В дополнение к различным комбинациям аппаратного обеспечения было исследовано несколько алгоритмов прокладки на основе целевого объема прокладки, который включал только мозг или представлял собой прямоугольную «коробку», которая включала все отделы головы (мозг, кость и скальп) внутри плиты MRSI. Всего было изучено пять комбинаций прокладок: (1) 2SH _box, (2) 2SH _brain, (3) 2SH _box + AC / DC _brain, (4) 2SH _brain + AC / DC _мозг и (5) (2SH _мозг + AC / DC _мозг) _сустав.Коробка 2SH — это метод установки прокладок, предоставляемый производителем, к которому имеют доступ все пользователи. Ранее сообщалось, что 2SH _brain — это ²⁰ для улучшения 2SH _box, и здесь нам нужно было исследовать, может ли регулировка по переменному / постоянному току обеспечить дальнейшее улучшение. Совместная оптимизация шимминга 2SH и AC / DC (2SH _brain + AC / DC _brain) _сустав, как ожидается, наилучшим образом использует ортогональные пространственные базисные функции всех каналов шиммирования.Для расчета прокладки 2SH _box мы использовали поставляемое поставщиком программное обеспечение, используя три итерации прокладки с последовательностью двойного эхо-сигнала (DESS).

Для калибровки регулировочных катушек переменного / постоянного тока использовалась предоставленная поставщиком последовательность отображения градиентного эхо-сигнала (GRE) с двумя эхо-сигналами (∆TE = 1,02 мс) для измерения полей B ₀, вызванных каждым отдельным AC / DC прокладку катушки в большом фантоме, который полностью заполняет катушку. Та же самая последовательность отображения B ₀ также использовалась для калибровки прокладочных катушек 2SH сканера для прокладки 2SH _brain.Во время проведения измерений были измерены полевые карты B ₀ с использованием той же последовательности. Все карты поля были получены с полем обзора (FOV) 224 × 224 × 200 мм ³, размером матрицы 112 × 112 × 100 и 2 × 2 × 2 мм ³ изотропный воксель, время сбора данных 1: 55 мин: с. Изображение GRE разности фаз было пространственно развернуто с помощью FSL PRELUDE ⁶⁵, преобразовано в карту поля B ₀ и перенесено на автономный компьютер, где оптимальные токи прокладки для 31 канала прокладки были вычислены менее чем за одну минуту с использованием программы Matlab » quadprog »(The MathWorks, Natick, MA).Одиночная итерация с прокладкой выполнялась следующим образом. Прокладочные токи были рассчитаны с использованием штрафа по методу наименьших квадратов для ΔB ₀ с целью минимизировать стандартное отклонение ΔB ₀ на исследуемой пластине мозга, которая имела толщину 70 мм у всех субъектов. Мозг был замаскирован с помощью FSL Brain Extraction Tool из магнитудного изображения первого эхо-сигнала GRE. Целевая функция представляет собой квадратичную программу с ограничениями линейного неравенства, обеспечивающими максимальный ток на канал (2 А) и полный ток на массив (25 А).Из-за малых токов происходит минимальный нагрев контуров, не требующий водяного охлаждения змеевика. Аналогичная оптимизация была проведена для 2SH _brain с использованием текущих ограничений и полевой калибровки регулировочных катушек сканера 1-го и 2-го порядка.

Поскольку регулировочная прокладка переменного / постоянного тока оптимизирована для мозга, поле B ₀ может быстро изменяться за пределами мозга в подкожно-жировой клетчатке, и это может ухудшить подавление липидов, используемое нашей последовательностью. Чтобы избежать этой проблемы, запускающий импульс из последовательности используется для отключения регулировочной прокладки AC / DC непосредственно перед подавлением липидов.Второй пусковой импульс используется для повторного включения оптимальной прокладки переменного / постоянного тока непосредственно перед импульсами подавления воды. Из-за низкой индуктивности катушек и возможности быстрого переключения управляющей электроники, поля могут быть быстро обновлены во время сбора данных таким образом, без появления артефактов MRSI.

Таким образом, предлагаемая нами методология установки регулировочных прокладок состоит из четырех компонентов: (1) регулировочная прокладка 2SH сканера, которая обеспечивает «базовую» регулировочную прокладку, (2) катушка переменного / постоянного тока, которая добавляет локализованные поля ΔB ₀, ( 3) возможность динамически переключать эти поля переменного / постоянного тока в каждом TR, позволяя отдельно оптимизировать прокладку для обнаружения метаболитов и подавления липидов; (4) наше программное обеспечение прокладки, которое с большей готовностью, чем программное обеспечение прокладки сканера, позволяет прокладывать прокладку только для мозга вместо всей головы.

Получение и обработка MRSI

Последовательность 3D MRSI всего мозга (рис. 9B) состояла из пяти модулей: (1) возбуждение пластины адиабатическим спин-эхо (ASE) ⁶⁶ с использованием импульса возбуждения AHP4 и двух модулей GOIA-W (16,4) импульсы перефокусировки; (2) подавление жира с восстановлением инверсии с использованием асимметричного адиабатического гипергеометрического (HGSB) импульса ⁶⁷ и времени инверсии 270 мс; (3) четырехимпульсный модуль WET ⁵ с общей длительностью 160 мс, который был оптимизирован для подавления воды при 7 Тл и разыгрывался во время инверсии; (4) набор спиральных траекторий выхода ^49,50, предназначенных для градиента 7 T-SC72CD; (5) объемный навигатор EPI, который чередовался с каждым TR для коррекции движения в реальном времени, картирования поля и коррекции дрейфа частоты ^{52, 53,68}.При возбуждении ASE

использовался импульс AHP4 ⁶⁹ длительностью 4 мс, полоса пропускания 5 кГц, амплитуда 12 мкТл B ₁₊ и два импульса перефокусировки GOIA-W (16,4) ⁷⁰ длительностью 5 мс, 20 полоса пропускания кГц, амплитуда 14 мкТл B ₁₊ (на 20% выше адиабатического порога). Последовательность ASE представляет собой последовательность двойной перефокусировки, аналогичную PRESS, и время эхо-сигнала было оптимизировано для обнаружения 2HG при 7 T с использованием TE1 / TE2 = 58/20 мс (TE = 78 мс), как предложено для последовательности PRESS ⁴⁵.Моделированием было подтверждено, что аналогично PRESS, ASE с TE1 / TE2 = 58/20 мс дает отрицательный пик для 2HG при 2,25 ppm (рис. 1). Однако последовательность ASE имеет гораздо меньшую ошибку смещения химического сдвига (1,5% для 1 ppm при 7 T) по сравнению с PRESS ⁴⁷ (21% для 1 ppm при 7 T), а также компенсирует неоднородность пропускания B ₁₊. . Профиль среза импульсов GOIA, использованных в нашем исследовании MRSI, был смоделирован для смещения химического сдвига ± 1 ppm (рис. 9B) и указывает на минимальное значение (2.5%) искажение плоской вершины полосы пропускания в диапазоне химического сдвига 2 ppm. Также очевидны узкая переходная полоса (10% полосы пропускания) и отсутствие внеполосного возбуждения.

Импульс HGSB имел длительность 30 мс (A = 3,2842; B = 0,1751; C = -1,7; D = 1,4231; Ω = 9,1809), амплитуду 12 мкТл B ₁₊, полосу инверсии 2 кГц и полосу перехода 90 Гц, который был сосредоточен на 1,6 ppm, обеспечивая полную инверсию ниже 1,4 ppm и не инверсию выше 1,8 ppm, следовательно, подавлял основные липидные пики при 1.2 и 0,9 ppm при сохранении SNR метаболита. Моделирование профиля инверсии HGSB показано на рис. 9B. Триггеры, размещенные до и после импульса HGSB, использовались для выключения / включения регулировки переменного / постоянного тока. В модуле WET использовались гауссовские импульсы с полосой пропускания 150 Гц, углами поворота 83,6 °, 99,7 °, 74,7 °, 160 ° и задержками между импульсами 40 мс. Спиральные траектории выхода были разработаны для человеческого 7 T MRSI со спектральным окном 2,7 кГц, полем обзора 220 × 220 мм ² и матрицей 44 × 44, что требовало максимальной амплитуды градиента G _max = 14 .19 мТл / м, а максимальная скорость нарастания S _max = 158,89 мТл / м / с. Конструкция со спиральным выходом исключает перемоточные устройства, используемые для спирального выхода, что увеличивает эффективность отбора проб и SNR MRSI ^49,50.

Следующие параметры были использованы для получения 3D MRSI цельного мозга сляба: TR = 1800 мс; TE = 78 мс (TE1 / TE2 = 58/20 мс), TI = 270 мс; FOV 220 × 220 × 80 мм ³; матрица 44 × 44 × 8; номинальный размер вокселя 5 × 5 × 10 мм ³; спектральное окно 2,7 кГц; 24 угловых чередования, 2 временных чередования для спирального выхода; 8 фазовых кодировок; 1 средний; время сбора = 11:38 мин: сек.ASE возбудил пластинку мозга толщиной 60 мм, которая содержала шесть последовательных срезов MRSI с фазовым кодированием по 10 мм каждый. Пластина с возбуждением ASE диаметром 60 мм была немного меньше, чем пластина с прокладкой шириной 70 мм, чтобы обеспечить небольшой запас для перехода от неоднородного к однородному полю B ₀. Для всех измерений MRSI удельный коэффициент поглощения (SAR) находился в пределах 60–95% от максимального предела SAR, отслеживаемого системой МРТ. Параметры сбора навигатора: водоселективное возбуждение с углом поворота 2 °, TR = 8.8 мс, двойное эхо TE1 / TE2 = 3,5 / 4,5 мс, FOV 256 × 256 × 176 мм ³, матрица 32 × 32×22, коэффициент EPI 16, частичная дискретизация Фурье 6/8, полоса 4596 Гц / пик, изотропный воксель 8 × 8 × 8 мм ³ и время сбора данных 0,6 с, как показано в Ref. ⁶⁸.

В дополнение к данным о метаболитах MRSI, данные MRSI без подавления воды (матрица 22 × 22 × 8; время сбора данных 4:19 мин: с) были получены для комбинации катушек и фазирования спектров метаболитов. Катушечная комбинация данных метаболитов была выполнена с использованием S / N ², взвешивающего ^71,72 индивидуальных данных канала на основе данных по воде.После объединения катушек реконструкция не декартовых выборочных данных была выполнена с помощью неравномерного дискретного преобразования Фурье (NUDFT) ⁷³ с последующим удалением остаточного липидного сигнала со штрафом L1 ⁷⁴ и пространственной фильтрацией Хэмминга. Необработанные данные MRSI были реконструированы и проанализированы с помощью собственного пакета обработки с использованием MATLAB R2018b, Bash V4.2.25 (Free Software Foundation, Бостон, Массачусетс, США), MINC tools V2.0 (McConnell Brain Imaging Center, Монреаль, КК, США). Канада), FSL ⁷⁵ и Freesurfer ⁷⁶.

MR-спектры были скорректированы по фазе / частоте и подогнаны с помощью LCModel ⁷⁷ между 1,8 и 4,2 ppm, с базисным набором, смоделированным в GAMMA ⁷⁸, с использованием тех же импульсов и градиентной модуляции, что и сканер, и включая 20 метаболитов: D-2-гидроксиглутарат (2HG), аспартат (Asp), креатин (Cr), гамма-аминомасляная кислота (GABA), глутамат (Glu), глутамин (Gln), глутатион (GSH), глицин (Gly), глицерофосфохолин (GPC). ), глицерофосфоэтаноламин (GPE), мио-инозитол (Ins), лактат (Lac), N-ацетиласпартат (NAA), N-ацетил-аспартилглутамат (NAAG), фосфохолин (PCh), фосфокреатин (PCr), фосфорилэтаноламин ( PE), сцилло-инозитол (Scy), серин (Ser) и таурин (Tau).Общая NAA (tNAA) представлена как сумма вклада NAA и NAAG, общего холина (tCho) как суммы GPC и PCh и общего креатина (tCr) как суммы Cr и PCr. Обратите внимание, что сигналы макромолекул (MM) при 2,25 ppm и 4 ppm, перекрывающих 2HG, имеют релаксацию T2 (T2 ~ 20 мс ^79,80) примерно в пять раз короче, чем релаксация T2 2HG при 7 T (T2 ~ 100 мс, предполагается аналогичный на глутамат ⁸¹), следовательно, сигналы MM будут затухать в 20 раз больше, чем 2HG для TE = 78 мс, что минимизирует потенциальное смещение количественной оценки 2HG из-за MM.Метаболические карты и параметрические карты качества для SNR, CRLB и ширины линии (FWHM, полная ширина, половина максимума) составляются для каждого набора данных MRSI, как оценивается с помощью процедуры подбора LCModel. Ширина линии менее 0,1 ppm и нижняя граница Крамера-Рао (CRLB) менее 20% и SNR> 10 использовались для определения приемлемого качества соответствия для количественной оценки метаболитов.

В дополнение к MRSI было получено трехмерное анатомическое изображение с изотропным разрешением 1 мм с помощью T ₂ Fluid Attenuated Inversion Recovery (FLAIR, TR = 5000 мс, TE = 335 мс, TI = 3100 мс) и T ₁ мультиэхо-MPRAGE (MEMPRAGE ⁸², TR = 2,550 мс, TE1 / TE2 / TE3 / TE4 = 1.57 / 3,35 / 5,13 / 6,91 мс, TI = 1100 мс, угол поворота 7 °) также были получены.

Люди

Три здоровых субъекта (2 женщины и 1 мужчина, возраст 28–33 лет) и один пациент с мутантной глиомой IDh2 (женщина, возраст 42 года) были измерены для проверки нашей методологии. Все эксперименты и методы проводились в соответствии с соответствующими инструкциями и правилами. Исследование было одобрено этическим комитетом Массачусетской больницы по этике, проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией и руководящими принципами правительства США.Информированное согласие было получено от каждого субъекта с использованием протокола исследования, одобренного институциональным наблюдательным советом (IRB). Пациент с мутантной глиомой IDH ранее перенес операцию на опухоли головного мозга, и мутационный статус IDh2 был установлен иммуногистохимическим (ИГХ) анализом с использованием антитела против человеческого R132H (DIANOVA ⁸³), а также впоследствии подтвержден генетическим секвенированием (SNaPshot ^{). 84}).

Невозможно было проверить все пять условий слияния у всех четырех субъектов, потому что некоторые субъекты не могли выдержать всю двухчасовую продолжительность полного протокола визуализации.Данные 3D MRSI были измерены следующим образом: (а) 2SH _бокс и 2SH _бокс + AC / DC _мозг у всех четырех субъектов; (b) 2SH _ящик, 2SH _brain, 2SH _box + AC / DC _brain, 2SH _brain + AC / DC _brain, (2SH _brain + AC / DC _brain) _сустав у одного здорового добровольца; (c) 2SH _ящик, 2SH _мозг, 2SH _ящик + AC / DC _мозг, 2SH _мозг + AC / DC _мозг в пациенте.Мы выбрали для измерения 2SH _box и 2SH _box + AC / DC _brain у всех испытуемых, потому что сравнение этих двух условий прокладки является наиболее актуальным: (a) 2SH _box является инструментом для регулировки прокладок от производителя, который используется всеми пользователями, и (b) 2SH _box + AC / DC _brain представляет собой наиболее справедливое сравнение для измерения улучшений регулировочных прокладок переменного / постоянного тока в дополнение к регулировочным прокладкам производителя. У двух субъектов (один здоровый и один пациент) мы исследовали дополнительные улучшения, которые были бы возможны, если бы лучшая прокладка, сфокусированная только на головном мозге (2SH _brain), могла быть выполнена с помощью аппаратного обеспечения сканера.Для пациента с глиомой отношение контрастности опухоли к шуму (CNR) в метаболических изображениях было рассчитано с использованием следующего определения \ (CNR: = \ frac {{mean \ left ({\ left [{Metab} \ right] _ {Tumor }} \ right) — означает \ left ({\ left [{Metab} \ right] _ {Background}} \ right)}} {{std \ left ({\ left [{Metab} \ right] _ {Background} } \ right)}} \), где [Metab] — концентрация метаболита в опухоли или вне опухоли (фон).

Измерения фантома

Структурно-метаболический фантом (рис. 2) был изготовлен на заказ с шестью трубками (диаметром 25 мм), расположенными симметрично внутри большего цилиндрического контейнера (диаметром 110 мм).Шесть пробирок содержали забуференный (pH = 7) раствор метаболитов головного мозга и 2HG следующим образом: (a) концентрация D-2HG была выбрана так, чтобы она была различной в шести отсеках, соответственно 0, 1, 2, 3, 4 и 5. мМ, в то время как (b) одинаковый фон метаболитов мозга использовался во всех компартментах, предполагая метаболический профиль опухоли с 6 мМ NAA, 8 мМ глутамата, 1 мМ ГАМК, 4 мМ креатина, 5 мМ холина, 8 мМ мио-инозитола и 4 мМ лактата. Пробирки были легированы магневистом 1 мл / л для укорочения T ₁, в то время как вне пробирок для заполнения цилиндра использовали буферный водный раствор без метаболитов и магневиста.Все пять условий прокладки 2SH _box, 2SH _brain, 2SH _box + AC / DC _brain, 2SH _brain + AC / DC _brain, (2SH _brain + AC / DC _brain ) _сустав были использованы для проверки метаболической визуализации 3D MRSI на основании фактов.

Моделирование

Для того, чтобы оценить влияние ширины линии на количественное определение 2HG, мы выполнили квантово-механическое моделирование (GAMMA ⁷⁸) спектров опухоли головного мозга для различной ширины спектральной линии, предполагая, что параметры последовательности импульсов ASE используются in vivo.Спектры синтетических опухолей были получены путем объединения смоделированных спектров 14 метаболитов мозга и 2HG. Концентрация 2HG была установлена на 5 мМ, в то время как для других 14 метаболитов концентрации были: 4 мМ глутамата, 7 мМ глутамина, 1 мМ ГАМК, 0,5 мМ глутатиона, 2 мМ глицина, 8 мМ миоионитола, 3 мМ лактата, 5 мМ NAA, 2 мМ NAAG, 2 мМ PC, 2 мМ GPC, 3 мМ Cr, 3 мМ PCr, 2 мМ таурин. T ₂, время релаксации 132 мс для NAA, 152 мс для фосфохолина и глицерин-фосфохолина, 95 мс для Cr и PCr и 93 мс для всех других метаболитов, включая 2HG, считались ⁸¹.

Чтобы имитировать эффекты неоднородности B ₀, мы применили уширение линии в диапазоне 3–60 Гц (0,01–0,2 ppm при 7 T) с шагом 1 Гц (0,0033 ppm). После уширения линии во всех симуляциях был добавлен 10% белый шум, что дало SNR 50 для самой узкой ширины линии и SNR 10 для самой широкой ширины линии. Диапазон отношения сигнал / шум и ширина линии при моделировании покрывали диапазон, измеренный в спектрах in vivo. Смоделированные спектры были подогнаны с помощью LCModel ⁷⁷, что эквивалентно экспериментальным спектрам.

Статистический анализ

Статистический анализ выполняли с использованием GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc. V4.03, Калифорния, США). Средние различия сравнивали с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни с порогом статистической значимости, определяемым как P <0,05. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Корреляция Пирсона была проведена для фантомных измерений.

Миннесотский исторический журнал: MNHS.ORG

в 1849 г., 2: 115, 2: 119, 5: 287, 6:37, 7:55
в 1850-е годы, 7: 127, 7: 128, 7: 336, 8: 431, 9:73, 9: 139– 9: 141, 10: 103
в 1860 году, 2: 330, 5: 161, 8: 167, 8: 207
в 1864 году, 9: 283, 9: 379–9: 381, 9: 388
в 1870-х, 8 : 389, 8: 394, 8: 413, 10:93, 10: 165, 10: 166–10: 169
в 1887 году, 6:47
в 1890-х годах, 5: 380
преимущества местоположения, 7: 8, 7 : 11, 7: 219, 7: 223
загрязнение воздуха, 62: 228–239
аэропорт, 42: 143
воздушное сообщение, 50:96
апартаменты Albion, 57:45
Американский Красный Крест, 47: 336
Американский Красный Перекрестные волонтеры в Первой мировой войне, 63: 24–25 годовщины
, 5: 162, 5: 428, 5: 429, 5: 473, 6:22
мероприятия по борьбе с сегрегацией, 62: 201 (обложка), 62: 201 (лицом)
архитекторов и архитекторов, 42: 23–42: 34, 46: 127, 46: 207, 46: 245, 47: 114, 51:80, 52: 36–37, 52: 244, 53: 232, 53: 292, 54: 235, 55:40, 55: 228–229, 55: 234–248, 57: 39–48, 57: 245, 57: 260
архивы, 16: 211
искусство и художники, 53: 25 (лицом), 53: 318, 53: 319, 53: 320, 53: 322, 55: 185 (лицом), 57:76
Атлетик Па rk, 63:15, 63:16, 63:17, 63:18
Auditorium (Franklin) Street, 62:47
авторов, 55: 232
грабители банков, 54: 190
банки и банковское дело, 2: 121–2 : 168, 3: 381, 8: 180, 16:24, 20: 345, 33:31, 40: 109–40: 119, 42: 271, 42: 274, 58:97, 58: 101
Баптистские церкви, 12: 397, 12: 398, 15: 254, 16: 120, 18: 331, 20: 330, 23: 110, 28: 320, 29: 359, 38:75, 41: 115, 43:78
Баптистский холм изображено, 55:50
бейсбольных стадионов, 58: 338–352, 63: 15–18
велосипедов, 54: 276, 54: 277
велосипедов и велосипедов, 62:86, 62:90, 62:91
противозачаточные движение, 54: 362, 54: 368
черных, 43:77, 43: 284n, 44: 255, 44: 256, 44: 258, 44: 262, 51:24, 51:26, 51:31, 55: 63, 55: 206, 55: 209–55: 13, 55: 215–55: 16, 56: 412, 57: 117, 57: 280, 57: 281, 57: 282, 57: 420, 57: 420– 57: 421, 57: 422, 58:37, 59:64, 59:65, 59:67, 59:68, 59:69
рецензия на книгу, 10:71
книжные магазины, 56: 3, 56: 6, 56 : 8, 56: 9, 56:17
пивоварен и пивоварен, 51: 323, 57: 104
предприятий, 11: 130, 11: 143, 14: 278, 14: 386, 17: 214, 24: 287, 24 : 297, 26: 1 32, 29:88, 29: 199, 30: 154, 34: 106–34: 113, 34: 329, 35: 245, 37: 190, 37: 192, 51: 196, 52:40 (лицевая сторона), 52 : 114, 55: 332, 56: 240, 57: 427, 58: 163, 60: 278
деловые и трудовые отношения, 53: 324
Канада, торговые отношения с, 2:21, 2: 299–2: 301
Канадская аннексия, отношение к, 10: 349
соборов, 52: 128
католических церквей, 11: 217, 12: 397, 13: 123, 15: 104, 15: 254, 15: 361, 15: 456, 15: 481 , 16: 121, 16: 274n, 16: 369, 17:84, 17: 102, 18: 117, 19: 115, 19: 335, 20:92, 20: 103, 20: 446, 21:77, 21 : 210, 22:51, 22: 111, 22: 347, 24:72, 24:90, 24:92, 24: 264, 25: 9, 25:10, 26: 173, 26: 182, 29: 209 , 30: 7, 30: 9, 30: 206, 30: 207, 30: 266, 38: 187, 39: 131, 40: 4, 51: 151, 51: 164, 54: 365
Католическая епархия, 7: 178, 9: 169, 10: 117, 18: 436, 19: 460, 21: 102, 33:56, 34: 313, 35: 139, 39:35, 39: 153, 39: 299
праздников и фестивалей, 12: 392, 16: 382, 17: 325, 22: 372, 26:67, 31: 237, 36: 130, 38: 287–38: 297, 41: 184, 41: 191, 44: 223, 45: 75, 48: 119–48: 123, 48: 121, 49: 322–49: 331, 49: 323, 49: 327–49: 331, 55: 107–10 8
кладбищ, 15:10, 55: 184, 55: 320, 56: 319, 57:68, 57:69
разногласия по переписи населения, 8:79
столетие, 19: 190, 19: 237, 21: 409, 22 : 50–22: 52, 22: 346, 22: 347, 22: 436, 29:96, 30: 177, 34: 128
Centennial Office Building, 61: 3
Central House, 56:68, 56:69
часовня, 1: 351, 4: 276, 8: 30n, 8:39, 8:41, 8:51, 9: 202, 10: 168
охарактеризовано, 13: 198, 20: 362, 22: 1–22: 12, 24:62, 27: 251, 56: 206
детские больницы, 56: 147–148
Битва Чиппева-Сиу, 6:45, 9: 320–9: 324
мануальные терапевты, 59: 203, 59: 204, 59: 211n
эпидемия холеры, 14: 291–14: 301
Рождество, 1849 г., 5: 396
церквей, 4: 301, 5: 526
церковно-государственные противоречия, 53: 295, 53: 296, 53: 303, 53: 304, 53: 305, 53: 307
городское управление, 5: 397, 21: 342, 21: 376, 21: 378, 21: 381, 21: 385–21: 387, 21: 394, 22: 377 , 22: 382, 22: 385, 28:23, 30: 144
карта города, 55: 355
планирование города, 13: 115, 19: 342, 36: 328
гражданских улучшений, 4: 201
в гражданской войне, 2: 329н, 2: 331, 2: 344, 2: 345, 2: 363, 2: 364, 1 7: 112, 39: 175, 57:61, 57:67
климат, 16: 116, 18: 130, 33: 195, 33: 198
клубы, изображены, 54:54, 54:58, 54:59, 54:65, 54:66
колледжи, 56:52
Комитет по честной игре в боулинг, 56:63
Коммунистическая партия, 54: 2–3, 58: 168
Общественный ящик, 4: 127
Пристройка Комо-Хайтс, 59 : 67
Конгрегационные церкви, 11: 120, 12: 318, 13: 176, 15:35, 17: 351, 18:96, 18: 460, 23:97, 23: 221, 38:75, 39:53, 39:57, 39:58, 39: 60–39: 63
строительство общественных зданий, 59:65, 59:66, 59:70, 61: 3
округа, 57: 335
преступность, 47: 242– 47: 248, 50: 241–50: 251, 55: 40–41
Crispus Attucks Home, 56: 102–119, 56: 355, 57: 368–369, 57: 370, 57: 375 Изображен Хрустальный театр, 54: 349
молочное животноводство, 55: 170–171
молочный рынок, 27: 113, 27: 114, 27: 120
танцы и танцы, 55: 217–227
Глава «Дочери американской революции», 55: 192
Демократическая партия Партия фермеров и лейбористов, 51: 302
изображено, 1: 230, 1: 329, 2: 197, 2: 468, 3:95, 3: 147, 5: 448, 10: 339, 15: 210, 17:14 6, 17: 147, 17: 221, 22: 333, 26: 359, 27: 271, 30: 157, 30: 291, 33:90, 33: 113, 33: 114n, 33: 121, 33: 134, 33: 141 (обложка), 33: 197, 34:27, 34: 30n, 34:85 (обложка), 34:98, 35: 249 (обложка), 35: 357, 36: 4, 36:43, 36 : 250, 37: 308, 39:37 (обложка), 39: 316, 40: 221 (обложка), 40: 250–40: 253, 41:30, 41:31, 41:81, 41: 153 (обложка ), 41: 366, 41: 367, 41: 375, 41: 376, 41: 377, 43: 226, 43: 238, 43: 244, 44: 277 (обложка), 46: 210, 46: 222, 47 : 126, 47: 127, 47: 131, 47: 242, 47: 243, 47: 246, 47: 247, 49: 129, 49: 189, 50: 280, 58: 409, 60: 168 (облицовка), 60: 208, 61: 24–25
депо, 3:43, 4: 291, 4: 304, 5: 243, 5: 474 Описание
, 3: 531, 12: 161, 12: 175, 12: 391, 15: 414, 16: 274, 17: 129, 17: 225, 17: 394, 20: 193, 21: 193, 25: 110, 25: 113, 28: 311, 29: 167, 29: 211, 30: 195, 30: 204–30: 210, 31:19, 31: 109, 31: 153, 33: 119, 36:41, 36:42, 36: 239, 39: 316, 40: 359, 46: 221, 46: 223, 47: 168, 48: 133
описано / изображено, 53: 274, 53: 282–283, 53: 314, 54: 60–61, 55:22, 55: 121, 56: 2, 56: 212, 57:76, 57:81, 57:85, 57: 102
справочников, 16: 332, 19: 432, 27: 252, 64: 9, 64:11
отличительные черты, 7:12
районный суд, 51: 169
собачьи бега, 42: 282–42: 294
в центре города, 58: 194, 58: 241–58: 242
противников призыва , 55: 288–301
Борьба с голландской болезнью вяза, 65: 44–53
Визит Дворжака, 41: 133–41: 134
Ранняя драма и театры, 5:44, 5: 520, 9:32, 9:35
ранние земельные титулы, 9: 87–9: 90
ранняя печать, 10: 206
ранние поселенцы, 8: 27–8: 51
экономическая история, 56: 167, 56: 171, 56: 181, 56: 189
Восьмой Ward, 65: 211, 65: 211
Епископальные церкви, 11: 340, 12: 105, 12: 397, 12: 398, 13: 346, 15: 481, 18: 444, 23:76, 25: 9, 27 : 81, 28: 396, 30: 207, 33: 5, 33:95, 38:75
этнических групп, 12: 279, 16: 338, 18: 453, 22: 2, 23: 290, 25: 319, 27: 256, 29: 105–29: 113, 31:23, 31:29, 35: 209, 35: 212, 35: 213, 41: 134, 41: 362–41: 371, 51: 143, 55: 161 (лицевая сторона), 55: 174, 55: 182, 56:99, 56: 360, 57: 52–53, 57:81, 57: 134, 57: 155, 57: 164, 57: 168, 57: 169 , 57: 171, 57: 172, 57: 173, 57: 174, 57: 176, 57: 177–57: 179, 57: 435, 57: 440
казней, 58:84, 58:86 , 58:87
ярмарки, 22: 256
знаменитые посетители, 43:79, 45: 322
Партия фермеров и лейбористов, 51: 174, 58: 175
Конвенция Союза фермеров, 1892, 5: 543 паром
, 7: 110
в художественной литературе, 45: 141–45: 148
пожарная часть, 5: 497, 18: 317, 19:49, 19:50, 30: 163, 46:84
пожаров, 4:92
первое восхождение на воздушном шаре, 5: 246
первая телеграмма, 5: 308, 6: 220
первая ратуша, 3: 145, 47: 247
первый мэр, 9:24
первый день памяти, 4: 200
первый военный оркестр, 4: 203
«firsts» 2: 289
первая воскресная школа, 6: 313
первый телеграф, 8: 172
первые телефоны, 4: 201, 10: 234
первый день благодарения, 5:82
наводнения, 8: 279, 34: 306, 57: 411
флористы и флористическая промышленность, 54: 312, 55: 183
народное искусство, 52: 126
усилия по сохранению продуктов питания во время Первой мировой войны, 59: 284
Франклин (Аудитория)-стрит, 62:47
фрахтовые ставки в Виннипег, 10: 348
центр торговли мехом, 9: 379, 22: 3, 30: 133, 34: 102–34: 104, 36: 260, 36: 262, 36: 263, 40: 219
garment w orkers, 52: 217
GAR post, 16: 432n, 16: 434–16: 437, 47: 136
geography, 1: 319
Немецкие газеты, 27: 327, 28:22, 28:24, 34: 130
золотая лихорадка, 44:45, 44:46, 44: 47–44: 48, 44: 52n
гидов, 51: 164
Район Хэмлайн, 7: 303
Университет Хэмлайн, 9: 378, 51: 110–51: 111 , 51: 117, 51: 119, 56: 407
справочник, 7: 375
департамент здравоохранения, 11: 108, 14: 290–14: 292, 14: 297, 14: 298
Хилл (Джеймс Дж.) House, 55: 234–55: 249, 56: 140
Hill (James J.) Изображена справочная библиотека, 55: 118, 55: 120, 55: 124, 55: 126–55: 127, 55: 129
исторических сохранение, 46: 75–46: 77, 54: 194–54: 195, 54: 196–209, 54: 203, 54: 204, 55: 304, 57: 103–104
исторических мест, 37:64, 37 : 263, 39: 124, 59:62, 59:65, 59:67
история, 1: 297, 1: 547, 2: 586, 3: 238, 3: 317, 4: 303, 4: 304, 4 : 477, 5:43, 5: 163, 5: 473, 15: 479, 21: 310, 22: 193, 22: 225, 26: 184, 30: 202, 44: 160, 46: 127, 47: 242 , 53: 167, 53: 276, 54:68, 54: 373, 55: 218, 56: 169, 56: 198, 58: 187, 61: 250
садоводческих клубов, 53:75
отелей, 2: 378, 8: 310, 12: 392, 16:37, 16: 251, 16: 272, 22: 57n, 30: 197, 30: 200, 30: 301, 34:96, 34:97, 34: 101, 36: 264–36: 266, 39: 144–39: 146, 39: 149, 40:15, 40: 135, 40: 331, 41: 317, 42: 145, 43: 242, 43: 291, 45: 145, 48:92, 48: 209, 48: 309, 49:55, 56:44
ледовых дворцов, 2: 468, 4:74, 10: 208
ледовые гонки, 41: 372–41: 384, 41: 375– 41: 377
приют для иммигрантов, 41: 217
инкорпорированный, 4: 444
Индийская битва, 15: 306n, 19: 140
I ndians, 55: 48–49, 55:51, 55:60, 55:61
индустриальное развитие, 5:82, 5: 497 интерпретация
, 10:58
Irish, 56: 215–217
Штаб-квартира колонизации Ирландии, 9 : 332, 9: 334, 9: 340
изображена тюрьма, 53: 277, 58:86
Иудейские храмы, 13: 217, 17:99, 22: 348, 28: 294, 30: 163, 35: 293, 36 : 320
Евреи, 51: 3–4, 51:12, 52: 167, 53: 296, 53: 304, 55: 229, 59: 17–21
журналисты, 57: 160
Дополнение Китсона, 6: 251
Ку-клукс-кланская деятельность, 61: 362, 61: 365, 61: 368, 61: 369
труд, 54: 178, 58: 126, 60: 26–39
правоохранительные органы, 53: 273, 53: 275–286
дамба, 46: 210, 46: 315, 47: 242, 48:86, 49:47, 53:46, 56: 207
библиотеки, 18: 362–18: 364, 29: 177, 42: 264, 46: 132, 48:90, 49:80, 49: 257, 50:83, 50: 296, 54: 144, 55: 118–130, 57: 160
Праздник Линдберга, 42: 143–42: 145, 42: 151
литературная культура, 56: 3, 56: 4, 56: 6, 56: 8, 56: 9, 56:10, 56:14, 56:17
литературные посетители, 11: 147, 11: 149, 11: 151 , 11: 155–11: 157, 16:31, 16:37, 17:38, 17:45, 17: 371, 17: 373, 17: 375, 17: 3 76, 18:30, 19: 400–19: 402, 19: 407, 19: 414, 20: 393, 34:48, 34:49, 34: 51–34: 53, 40: 12–40: 20
рынок животноводства, 26: 110, 26: 125, 27: 357
замков и плотин, 54: 254–54: 257, 54: 261, 54: 263, 54: 265, 54: 266, 54: 267
лесная промышленность, 5: 469
Лютеранские церкви, 11: 468, 12: 344, 13: 323, 14:52, 14:53, 14: 362, 16: 235, 16: 484, 17:97, 17: 118, 19: 126 , 20: 193, 21: 223, 22:88, 23: 371, 24: 373, 25: 213, 26:69, 28: 203, 34: 356, 38:75
почтовая служба, 7: 298, 11: 400, 11: 404, 11: 407, 61: 250
мандолинистов, 57: 220, 57: 222, 57: 223–57: 228, 57: 231–57: 233, 57: 232, 57: 235
производителей в , 15: 186, 39: 329, 62: 238n
карт, 1: 411, 1: 544, 4: 455, 16: 215, 18:50
маркеров и памятников, 56: 306, 57: 150, 57: 151
мэров, 5: 146, 54: 159, 54: 197
медицина, 17: 220, 20: 206, 20: 344, 24: 182, 35: 221
торговцев, 54: 200
Методистских церквей, 13: 100, 14: 363, 15: 254, 15: 362, 16: 274n, 17: 118, 17: 467, 39: 151
изображены метисы, 56: 236
Миннеаполис, соперничество с, 35:65, 35: 119, 65: 12 8–129, 65: 201
Миннесотская пионерская гвардия, 55: 175, 55: 184 (лицом)
миссионеров, 52: 144
Река Миссисипи и, 51:80, 53: 129 (обложка)
киноиндустрия, рабочая сила отношения, 53: 325, 53: 326
кинотеатры, 53: 245, 54: 345, 54: 349, 54: 350, 54: 354, 54: 355, 56: 100
муниципальный орган, 4: 197
фрески, 53: 322, 55: 263
процессы убийства, 55: 350–55: 363
музыка, 44: 123, 44: 129, 49:37
музыкальный центр, 12:84, 16:32, 16: 497, 22: 115, 26: 155, 32: 239, 32: 240, 34: 39–34: 51, 34: 240, 34: 242, 34: 319–34: 322
музыкальная история, 4: 305
имя, 26 : 250, 49: 130n
Отделение Национальной ассоциации содействия развитию цветных людей, 55:71, 55:74
Сторонники Национальной ассоциации фермерских праздников, изображены, 51: 273
кварталы, 41: 362, 41: 362–41: 371 , 41: 365–41: 371, 42:23, 44:41 (обложка), 45: 144–45: 145, 45: 206, 45: 304, 46: 75–46: 77, 46: 206–46: 207, 46: 302, 47:39, 47: 259, 48: 310, 49: 124 (лицом), 50: 280
New Century Club, 58: 192
газеты , 43: 284n, 47: 118, 50: 241–50: 251, 52: 215, 54:92, 55: 219, 56: 5, 56: 394–56: 396, 56: 398, 56: 399
Непартийный Офис лиги, 52:96
Норвежские иммигранты, 52:91
Дом Нойеса, 57:44
самый старый дом, 61: 30–31
планировка открытого пространства, 49: 281–49: 285
Дома для сирот и престарелых, 56: 102–119, 57: 368–57: 374, 57: 375–57: 379
центр оснащения, 35: 249–35: 251 конкурс
, 1:79 приход
, 9:68
парки, 5: 527, 12 : 458, 17: 363, 21: 194, 39: 132, 39: 154, 42:27, 49: 289–49: 290, 53: 144, 58:57
фотографов, 52:41 (обложка), 52: 43, 52: 45–52: 54, 52: 57–52: 59, 57: 65–66
фотоателье, 47: 124, 47: 127, 47: 131, 47: 185–47: 188, 47: 332 , 51:40, 52:48, 54: 193 (лицом), 56: 101 (лицом)
жизнь пионера, 7: 99–7: 121, 9: 200, 11:95, 13: 303, 14:99, 16:98, 19: 357, 22: 55–22: 59, 26:66, 27:17, 28: 314, 28: 319, 28: 322, 29: 114–29: 129, 29: 188, 29: 222, 29: 283, 34: 96–34: 105, 34: 267, 37: 200
Пионерские дороги в, 7: 220, 7: 222
топонимов, 3: 319, 4: 301
План св. .Пол (1922), 65: 127
плуг, 24: 297
политика, 51: 225, 51: 273, 52:92
списки опросов, 2: 279, 3:93
загрязнение, 58: 114
население, 13 : 175, 14: 225, 14: 290, 20: 190, 21: 329, 29: 319, 32: 211, 35: 356n, 37: 154, 38:82, 39:67, 39: 327, 44: 255 , 44: 265, 46: 131, 46: 221, 46: 223, 46: 244, 47: 240, 47: 242, 50:66, 55: 141, 56: 198, 57: 111, 61: 254
Популисты конвенция, 1892, 5: 543
Управление порта, 51: 283
почтовое отделение, 4: 172, 4: 304, 4: 465, 5: 397, 18: 472, 36:70, 36: 206–36: 208, 36: 212, 40: 82–40: 84, 40: 86–40: 89, 55: 106, 56: 239, 65: 202
Пресвитерианские церкви, 6:39, 12: 105, 15: 373, 15: 481 , 16:74, 16: 276n, 16: 485, 18:96, 18: 378, 18: 379, 19: 213, 20:35, 21: 314, 22: 58n, 26: 289, 27: 320, 28 : 396, 29: 115, 29: 118, 29: 211, 29: 212, 30: 202, 30: 207, 30: 274, 30: 297, 33: 4, 38:49, 38: 74–38: 76 , 38:78, 38:85, 39:35, 39:53, 40: 1, 40: 4, 40: 9, 40:10, 46: 244
печать, 15:18
матчи профессионального бокса, 59:85 Изображен бальный зал для выпускного вечера
, 54: 308
продвижение, 42: 219
профи titution, 50: 241–50: 251, 57: 53–54
панк-рок групп, 58:31
расовые отношения, 58: 387
радиостанции, 41: 327, 41: 329, 41: 331, 41: 333
Район Рейлроуд-Айленд, 58: 366–367, 59: 72–73, 59: 153–157, 59: 335–339, 62:82
железные дороги, 4:28, 5: 473, 7: 224, 11: 215 , 14: 102, 20: 373, 20: 374, 21: 239, 24: 373, 28: 375, 29:13, 29: 170, 30: 158, 30: 379, 35: 364, 36: 179, 37 : 102, 37: 153, 38: 45–38: 52, 40: 247, 53: 319, 54: 28–29, 55: 204, 55: 208, 57: 199–57: 200, 57: 206, 61 : 252–254, 61: 252–256, 61: 257
недвижимость, 11: 109, 13: 321, 17: 211, 23:97, 23: 273, 25: 212, 25: 412, 34: 268, 39: 150
дилеры по недвижимости, 56: 235–237
отдых, 17: 362
Ред-Ривер трейд, 5: 391, 5: 412, 5: 417, 5: 423, 5: 494, 5: 566, 5: 572, 5: 614, 6: 228, 6: 236n, 6: 246n, 6: 247, 6: 249, 6: 280–6: 282, 7: 139, 8:69, 8: 201, 10: 196, 10: 310, 10: 456, 13: 240, 13: 241, 15: 120, 15: 291, 16: 231, 17: 217, 21: 249, 21: 258, 22: 148, 22: 156, 22: 281, 23: 186, 24: 328, 24: 333, 33: 199, 36:37, 36: 39n, 36:47, 38:63, 38:71, 46: 118, 49: 180
Республиканская партия, 56:72
Райс Парк, 56: 407
речной порт, 11: 132, 11: 137, 11: 138, 11: 143, 13: 223, 14: 100, 14: 379, 17: 269, 20 : 386, 20: 387, 22:94, 24: 331, 24: 369, 27: 8, 27: 283, 27: 285, 28: 212, 28: 310, 29: 198, 29: 219, 33: 194 , 33: 199, 34: 133, 34: 138, 35: 102, 35: 118, 35: 181, 35: 381, 36: 251–36: 258, 36: 326, 37:53, 37:87, 37 : 154, 37: 160, 37: 196, 37: 225, 37: 226, 38:74, 39:66, 39:68, 56: 157, 58: 254
дорог, 11: 388, 11: 398, 12 : 61, 16: 283, 16: 285, 16: 287–16: 291, 16: 293, 21: 229, 21: 233, 21: 234, 40: 148, 40: 358, 40: 388
Румынская православная церковь , 15: 481
школ, 3: 332n, 5: 397, 5: 497, 6: 412, 12: 398–12: 400, 14: 330, 16: 123, 16: 275, 18: 229, 25: 109 , 28: 133–28: 141, 28: 356, 29: 354, 30: 154, 30: 175, 40: 146, 48:13, 48: 15–48: 16, 48:17, 48: 18–48 : 20, 48:21, 51: 110–122, 55:93 (лицевая сторона), 55: 139, 55: 140, 55: 141, 55: 142, 55: 143, 55: 144, 55: 145, 55: 146, 55: 148, 55: 149, 56: 244
скульптура, 55: 364, 55: 366, 55: 368, 55: 369, 55: 372
Пророчество Сьюарда, 8: 152, 8: 154
Визит Сьюарда, 1: 186, 8: 150–8: 169
Маршруты шелковых поездов, 54:18, 54:19, 54:21, 54:22, 54:26, 54:28, 54:29, 54:30, 54:31
Деревня Су , 21: 163n
Внутренняя гвардия шестнадцатого батальона, 65: 209, 65: 211–212, 65: 215, 65: 216
зарисовок, 1:67, 1: 223, 1: 241, 1: 341, 3: 230 , 6:68, 6:83, 7:95 Лыжный клуб
, 17: 228, 33: 187
Постановления о выбросах дыма, 62: 230–233, 62: 237–238
Дерби с мыльницей, 55: 324–325
Социалистическая рабочая партия, 51: 142, 56: 364, 56: 365, 56: 368, 56: 369
общественная жизнь, 6:72, 19: 440, 22: 8–22: 11, 26: 307, 28: 313, 28: 317, 28: 320, 33: 1–33: 6, 33: 196, 33: 200, 39: 145, 42: 316, 43: 303–43: 307, 45: 258–45: 272, 46: 246, 47: 128–47: 129, 48:87, 49: 54–49: 55
исходный материал, 5:62, 5:63, 5:75, 5: 225, 5: 506, 7: 360
спорт, 19: 162–19: 176, 19: 178, 19: 180, 47: 327, 47: 328, 53: 240
этапы сцены, 11: 401–11: 403, 11: 405, 13: 335, 16: 284, 28: 190, 33: 277
столица штата, 10: 197, 14: 130, 15: 111, 35: 106, 35: 107, 35: 182, 36: 283, 56: 169, 56: 179 , 56: 192, 56: 203, 56: 231, 56: 237
столица штата полемика, 43: 238–43: 254, 44: 176, 49: 130n, 63: 281–293
зона подхода Капитолия штата, 65: 120, 65: 121, 65: 123, 65: 124, 65: 125, 65 : 126–128, 65: 129, 65: 130–131, 65: 134n16, 65: 134n18
здание Капитолия штата, 54: 308, 54: 323–324, 56: 239, 57:50
празднование государственности, 14: 178–14: 187
прибытие пароходов, 2: 119n, 2: 131n, 2: 132, 2: 209, 2: 394
пароходов, 61: 250
Стиллуотер и, 55: 268–269
каменотесов, 55: 380 ( облицовка)
трамвай ж / д, 4: 292, 57: 297 улицы
, 12: 212, 17: 307, 29: 272, 33: 141 (крышка), 44: 160, 60: 208, 65: 130, 65: 135n38
забастовок, 50: 2, 50: 11–50: 14, 51:78
пригород, 51:79
летний курорт, 16: 273, 29: 122
опросы, 13: 218
Шведское поселение, 2:82
Швейцарский в, 8: 175
движение воздержания в, 65: 157
территориальная столица, 9:75
территориальное здоровье и безопасность, 56: 165, 56: 210, 56: 231
территориальный законодательный орган, 56: 158
территориальные газеты, 56: 224, 56: 226, 56: 229
театр, 23:76, 23: 305–23: 315, 23: 369, 26: 373, 28:99, 28: 103, 28: 107, 28: 109, 28: 110, 28: 115, 28: 117, 28: 118n, 32: 100–32: 105, 32: 127, 32: 166, 32: 168, 32: 172, 33: 188, 33: 315, 34: 240, 48: 208, 51: 238, 53: 239–246, 53: 266, 53: 270, 55: 107
торнадо, 5: 620
торговый центр, 46:46, 46:48, 46:49, 46: 51–46: 52, 46:55, 46: 118, 46: 336, 57: 327
транспорт центр, 9: 426
Общества Тернера, 55: 332
Подземная железная дорога, 57: 123–128
профсоюзов, 51: 231
Унитарная церковь, 12: 397
Объединенные сервисные организации, 54: 320
Университетская деревня, 60: 155
незамужние матери, 65: 229–241
, район Аппер-Ливи, 56: 379
U.

Сроки применения дисциплинарных взысканий

Увольнение при длительном прогуле

ДЕТСКИЙ САД №25 Петродворцового р-на СПб

Вправе ли работодатель требовать от работника объяснений по поводу совершенного им дисциплинарного проступка, если работник находится на больничном?

Дисциплинарное взыскание не может быть применено позднее, 193 ТК

Комментарий к статье 193 ТК РФ

Дисциплинарные взыскания

Консультации и комментарии юристов по закондательной системе РФ

Сроки для наложения дисциплинарного взыскания

Дисциплинарные взыскания — ошибки применения

Комментарий к Ст. 193 ТК РФ

Второй комментарий к Статье 193 Трудового кодекса

Разбираем статью 193 ТК РФ: порядок применения дисциплинарных взысканий

Порядок применения дисциплинарного взыскания — Официальный сайт Администрации Санкт‑Петербурга

Меры воздействия на нелояльного работника

Вариант h4.3 гистона h4 регулирует метилирование ДНК тела гена у Arabidopsis thaliana | Геномная биология

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Настройка вашего браузера на прием файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

Идентификация пищевой добавки капсаицина как ингибитора проникновения вируса Ласса

Реферат

Графический реферат

Ключевые слова

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Разработка антител против Lewis-Y hu3S193 с улучшенным терапевтическим соотношением для радиоиммунотерапии эпителиального рака | EJNMMI Research

Конструирование мутантных антител hu3S193

Связывание in vitro с Lewis-Y и белком A мутантных антител hu3S193

Радиоактивная метка антител hu3S193

Исследования клиренса крови

Исследования биораспределения

Фармакокинетический анализ и прогностическая дозиметрия

Нано-ОФЭКТ и МРТ

Статистический анализ

Интегрированная катушка радиочастотного приема / B0-шумоподавителя повышает производительность МР-спектроскопической визуализации всего мозга при 7 Тл

Аппаратное и программное обеспечение для регулировки шиммирования переменного / постоянного тока

Получение и обработка MRSI

Люди

Измерения фантома

Моделирование

Статистический анализ

Миннесотский исторический журнал: MNHS.ORG

Оставить комментарий Отменить ответ