Статья 278 ТК РФ 2016-2019. Дополнительные основания для прекращения трудового договора с руководителем организации. ЮрИнспекция
В принципе так принято юридически и лишь поэтому и внесены поправки в данной части были. Просто юридически «уравняли». Ребус для кадровика Как известно, при увольнении работника запись в трудовой книжке об основании и о причине прекращения трудового договора должна содержать ссылку на соответствующие статью, часть статьи, пункт статьи Трудового кодекса РФ или иного федерального закона. А что является частью статьи? Чем часть статьи отличается от пункта, подпункта или абзаца? Эти вопросы часто возникают у специалистов кадровой службы. Попробуем разобраться. «Начни с начала» Каждая статья в тексте закона посвящена отдельному вопросу. В статье обычно содержатся одна или несколько связанных между собой юридических норм или даже фрагментов нормативных положений. Статьи имеют порядковый номер, обозначаемый арабской цифрой, и наименование. Например, в ТК РФ: «Статья 77. Общие основания прекращения трудового договора » . Первичным (то есть далее неделимым) структурным подразделением текста закона как юридического документа является его абзац, который в силу неодинаковой структуры разных статей закона может иметь различные наименования (часть, пункт, подпункт) . Абзац – это любой фрагмент текста правового акта, заключенный между красной строкой (абзацным отступом) и окончанием предложения либо другим абзацным отступом. От простого… Статья, не разделенная на части, может состоять из одного абзаца текста. В этом случае содержание статьи совпадает с абзацем. Пример: статья 288 ТК РФ. Также существуют статьи закона, состоящие из двух и более абзацев. Тогда каждый абзац признается частью статьи. Часть – это такое структурное подразделение статьи закона, которое образуется не менее чем одним начинающимся с красной строки предложением. В ТК РФ части статей не содержат ни цифрового, ни буквенного обозначения. Пример: статья 309 ТК РФ. …к сложному Однако в том случае, когда статья закона имеет более сложную структуру, части статей могут формироваться и несколькими абзацами. Часть статьи может подразделяться на пункты, которые в ТК РФ обозначаются арабскими цифрами с закрывающей их круглой скобкой (или не обозначаются цифрами, но их нумерация подразумевается) . Пример: статья 278 ТК РФ. Дальше – больше Пункты частей статьи закона могут подразделяться на подпункты, которые образуются абзацами одного предложения, отделяемыми друг от друга точкой с запятой. Подпункты нумеруются, но не цифрами, а строчными буквами русского алфавита с закрывающей их круглой скобкой. Пример: статья 81 ТК РФ. Однако в ряде случаев отдельно взятый абзац может вообще не иметь специального наименования. Например, когда статья образована несколькими непронумерованными абзацами одного предложения, отделяемыми друг от друга точкой с запятой. Обычно такую форму имеют перечни и перечисления (например, статья 356 ТК РФ) . Именно тогда абзац выступает в качестве самостоятельного структурного элемента и ссылку на такой «безымянный» абзац в нормативных правовых актах следует обозначать словом «абзац» (без сокращения) . Таким образом, абзацами образуются все основные структурные элементы статей закона, имеющие специальное наименование: часть статьи, пункт статьи, подпункт статьи. Поэтому абзац может совпадать и не совпадать с каждым из этих структурных элементов. Заполняйте трудовые книжки правильно!прекращение трудового договора — Дайджесты новостей
Сообщаю Вам следующее:
При расторжении договора по решению органа или лица, уполномоченных принимать его от имени РФ, субъекта РФ или муниципального образования как собственника имущества учреждения (в зависимости от вида учреждения), — получите соответствующее решение о расторжении трудового договора с руководителем (п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ).
Далее оформите стандартные документы об увольнении, в частности: издайте приказ, внесите запись в трудовую книжку (в случае ее ведения) и в сведения о трудовой деятельности. При расчете учтите, что руководителю в некоторых случаях полагается компенсация при увольнении.
Оформите приказ об увольнении руководителя по п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ стандартно, в частности используйте унифицированную форму N Т-8 или самостоятельно разработанную вами форму приказа. В приказе правильно отразите основание увольнения — так, как оно сформулировано в п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ, — и поставьте ссылку на эту норму. В качестве основания издания приказа укажите реквизиты решения о прекращении полномочий руководителя.
Документы КонсультантПлюс для ознакомления:
Трудовой договор с руководителем организации может быть прекращен в связи с принятием уполномоченным органом юридического лица, либо собственником имущества организации, либо уполномоченным собственником лицом (органом) решения о прекращении трудового договора (п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ).
Прекращение трудового договора оформляется приказом (распоряжением) работодателя. В день прекращения трудового договора работодатель обязан выдать работнику трудовую книжку (ч. 1, 4 ст. 84.1 ТК РФ).
Вопрос: Кто должен подписать приказ об увольнении и как выдается трудовая книжка, если учредители ООО приняли решение о прекращении полномочий директора и назначении нового? (Консультация эксперта, 2021) {КонсультантПлюс}
Документы, необходимые для расторжения договора, зависят от основания увольнения. Например, при расторжении договора:
- по решению органа или лица, уполномоченных принимать его от имени РФ, субъекта РФ или муниципального образования как собственника имущества учреждения (в зависимости от вида учреждения), — получите соответствующее решение о расторжении трудового договора с директором (п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ).
Как издать приказ (распоряжение) об увольнении директора
Необходимость оформления приказа (распоряжения) об увольнении установлена ч. 1 ст. 84.1 ТК РФ.
Форму приказа (распоряжения) разработайте самостоятельно либо воспользуйтесь унифицированной формой N Т-8, утвержденной Постановлением Госкомстата России от 05.01.2004 N 1.
Подписанный приказ (распоряжение) зарегистрируйте. Дата регистрации не должна быть позднее даты прекращения трудового договора.
Ознакомьте директора под подпись. Если приказ (распоряжение) невозможно довести до его сведения или он отказывается ознакомиться с ним под подпись, на приказе (распоряжении) сделайте соответствующую запись (ч. 2 ст. 84.1 ТК РФ).
Подлинник приказа (распоряжения) подшейте в дело согласно установленной в учреждении номенклатуре дел, а его копию — в личное дело директора, если они ведутся в учреждении.
Готовое решение: Как отделу кадров и бухгалтерии оформить документы при смене директора учреждения (КонсультантПлюс, 2021) {КонсультантПлюс}
Как досрочно прекратить трудовой договор с руководителем (генеральным директором) по инициативе учредителей
Обычно, чтобы досрочно прекратить трудовой договор с руководителем по инициативе учредителей, используется основание увольнения в связи с принятием решения уполномоченным органом, собственником имущества организации или уполномоченным им лицом (органом).
Далее оформите стандартные документы об увольнении, в частности: издайте приказ, внесите запись в трудовую книжку (в случае ее ведения) и в сведения о трудовой деятельности. При расчете учтите, что руководителю в некоторых случаях полагается компенсация при увольнении.
- По каким основаниям можно досрочно уволить руководителя (генерального директора) по инициативе учредителей
Обычно досрочное увольнение генерального директора по инициативе учредителей происходит по п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ — «в связи с принятием уполномоченным органом юридического лица, либо собственником имущества организации, либо уполномоченным собственником лицом (органом) решения о прекращении трудового договора». Для увольнения по этому основанию не важен срок заключенного трудового договора и не требуется мотивировка принятого решения. Единственное, генеральному директору нужно будет выплатить компенсацию при отсутствии с его стороны виновных действий (бездействия) (ст. 279 ТК РФ, абз. 1 п. 9 Постановления Пленума Верховного Суда РФ от 02.06.2015 N 21, Определение Конституционного Суда РФ от 28.09.2017 N 2059-О).
Кто принимает решение об увольнении руководителя (генерального директора) по инициативе учредителей
Решение об увольнении генерального директора по п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ принимает уполномоченный орган юридического лица, либо собственник имущества организации, либо уполномоченное собственником лицо (орган).
В решении рекомендуем указать дату прекращения трудового договора. Это позволит правильно оформить документы об увольнении и произвести расчет при увольнении. Руководителя также рекомендуем ознакомить с принятым решением или направить уведомление о принятом решении, если он не присутствовал при его принятии.
Как оформить приказ об увольнении руководителя (генерального директора) по инициативе учредителей и кто его подписывает
Оформите приказ об увольнении генерального директора по п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ стандартно, в частности используйте унифицированную форму N Т-8 или самостоятельно разработанную вами форму приказа. В приказе правильно отразите основание увольнения — так, как оно сформулировано в п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ, — и поставьте ссылку на эту норму. Формулировка будет отличаться в зависимости от того, кто принял решение об увольнении — уполномоченный орган юридического лица, собственник имущества организации либо уполномоченное собственником лицо (орган).
В качестве основания издания приказа укажите реквизиты решения о прекращении полномочий руководителя.
Как внести в трудовую книжку (сведения о трудовой деятельности) запись об увольнении руководителя (генерального директора) по инициативе учредителей
Внесите в трудовую книжку (в случае ее ведения) запись об увольнении руководителя организации по п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ по тем же правилам, что и при увольнении рядового работника по инициативе работодателя. Формулировка записи будет отличаться в зависимости от того, кто принял решение об увольнении — уполномоченный орган юридического лица, собственник имущества организации либо уполномоченное собственником лицо (орган).
Пример формулировки записи об увольнении
Трудовой договор расторгнут в связи с принятием собственником имущества организации решения о прекращении трудового договора, пункт 2 части первой статьи 278 Трудового кодекса Российской Федерации.
Особенность заключается только в документе, на основании которого вносится запись, и в том, кто ее заверяет. Так, в графе 4 в качестве документа, на основании которого внесена запись, укажите реквизиты документа, содержащего решение о прекращении полномочий руководителя, например протокола (Письмо Роструда от 11.03.2009 N 1143-ТЗ).
Вместе с тем полагаем, что, если в этой графе привести реквизиты приказа (распоряжения) об увольнении, это не будет нарушением порядка заполнения трудовой книжки. Такой вывод следует из абз. 1 п. 5.1 Инструкции по заполнению трудовых книжек.
Заверить запись об увольнении может тот же, кто подписал приказ об увольнении или работник, ответственный за ведение трудовых книжек (абз. 1 п. 35 Правил ведения трудовых книжек, Письмо Роструда от 11.03.2009 N 1143-ТЗ).
Информацию об увольнении работника внесите в сведения о трудовой деятельности, заполнив форму СЗВ-ТД в Порядке, утвержденном Постановлением Правления ПФР от 25.12.2019 N 730п. Форму подайте в орган ПФР по месту вашей регистрации (ч. 1, 2 ст. 66.1 ТК РФ, п. п. 1, 2.4 — 2.6 ст. 11 Закона о персонифицированном учете).
Как произвести расчет при увольнении руководителя (генерального директора) по инициативе учредителей
При увольнении генерального директора по п. 2 ч. 1 ст. 278 ТК РФ выплатите ему зарплату, компенсацию за неиспользованный отпуск и иные причитающиеся суммы (ч. 1 ст. 127, ч. 1 ст. 140 ТК РФ).
Помимо стандартных выплат при увольнении руководителю полагается компенсация, если увольнение не связано с виновными действиями (бездействием) руководителя. Размер компенсации — не менее трехкратного среднего месячного заработка, а у руководителей организаций, перечисленных в ч. 1 ст. 349.3 ТК РФ (например, ООО, у которых больше 50 процентов долей в собственности государства) — в размере трехкратного среднего месячного заработка. Это следует из ст. 279, ч. 2 ст. 349.3 ТК РФ, абз. 2 п. 9 Постановления Пленума Верховного Суда РФ от 02.06.2015 N 21.
Готовое решение: Как досрочно прекратить трудовой договор с руководителем (генеральным директором) по инициативе учредителей (КонсультантПлюс, 2021) {КонсультантПлюс}
Ответ подготовил эксперт
Регионального информационного центра
сети КонсультантПлюс ООО «ТелекомПлюс»
Кожина Снежана Римовна
Ответ актуален на 13.01.2021 г.
Расторжение трудового договора с руководителем организации Текст научной статьи по специальности «Право»
РАСТОРЖЕНИЕ ТРУДОВОГО ДОГОВОРА С РУКОВОДИТЕЛЕМ ОРГАНИЗАЦИИ
ГЛУХОВ Александр Викторович
Аннотация: в статье анализируются некоторые специальные основания прекращения трудового договора с руководителем организации, закрепленные в Трудовом кодексе РФ. Автор критически оценивает возможность прекращения трудового договора с руководителем в связи с принятием работодателем решения о прекращении трудового договора, а также по основаниям, предусмотренным трудовым договором с руководителем, как не соответствующие основополагающим принципам международного трудового права и противоречащие Конституции РФ.
Annotation: the paper analyzes some special causes of Labour Contract termination that are specified by the RF Labour code. As for the Labour Contract termination, the author takes stock of the occasion of this termination because of Employer ’ decision and grounds are covered by the Labour Contract. It must be understood that the grounds can be fall short of basic concepts of the International Labour law and be contrary to the RF Constitution.
Ключевые слова: трудовой договор, Трудовой кодекс РФ, руководитель организации, дискриминация в сфере труда, принципы международного права, Конституция РФ.
Key words: labour Contract, RF Labour code, Head of an organization, labour discrimination, basic concepts of the International law, the RF Constitution.
Дифференциация труда руководителя организации основана на особой роли и значении его труда для успешной работы всей организации и особой ответственности руководителя за всю организацию труда и производства. Руководитель организации — физическое лицо, которое в соответствии с Трудовым кодексом, другими федеральными законами и иными нормативными правовыми актами РФ, законами и иными нормативными правовыми актами субъектов РФ, актами органов местного самоуправления, учредительными документами юридического лица и локальными нормативными актами осуществляет руководство этой организацией, в том числе выполняет функции ее единоличного исполнительного органа.
Наряду с общими основаниями прекращения трудового договора Трудовой кодекс РФ1 содержит семь специальных оснований расторжения трудового договора по инициативе работодателя с руководителем организации (пп. 4, 9, 10, 13 ч. 1 ст. 81; пп. 1, 2, 3 ст. 278).
Одним из наиболее дискуссионных специальных оснований является основание, закрепленное в п. 2 ст. 278 — расторжение трудового договора с руководителем в связи с принятием уполномоченным органом юридического лица, либо собственником имущества организации, либо уполномоченным собственником лицом
1 СЗ РФ. 2002. №° 1. Ст. 3.
(органом) решения о прекращении трудового договора.
Взаимосвязанные нормативные положения п. 2 ст. 278 и ст. 279 Трудового кодекса РФ, регулирующие расторжение трудового договора с руководителем организации, являлись и предметом рассмотрения в Конституционном Суде РФ2. Суд признал не противоречащим Конституции РФ положение ст. 278 Трудового кодекса РФ, допускающее расторжение трудового договора с руководителями организаций без указания конкретных мотивов увольнения.
Используя уже выработанные позиции, Конституционный Суд подчеркнул, что правовой статус руководителя организации значительно отличается от статуса иных работников, он в соответствии со ст. 53 Гражданского кодекса РФ3 и ст. 273 Трудового кодекса РФ выполняет функции единоличного исполнительного органа организации, совершает от имени организации юридически значимые действия.
2 Постановление Конституционного Суда Российской Федерации от 15 марта 2005 г. № 3-П «По делу о проверке конституционности положений пункта 2 статьи 278 и статьи 279 Трудового кодекса Российской Федерации и абзаца второго пункта 4 статьи 69 Федерального закона «Об акционерных обществах» в связи с запросами Волховского городского суда Ленинградской области, Октябрьского районного суда города Ставрополя и жалобами ряда граждан» // СЗ РФ. 2005. № 13. Ст. 1209.
3 Гражданский кодекс Российской Федерации (Часть первая) от 30 ноября 1994 г. № 51-ФЗ // СЗ РФ. 1994. № 32. Ст. 3301.
Кроме того, как отмечает А.Ф. Нуртдино-ва, руководитель «обладает весьма широкими возможностями злоупотребить своим должностным положением… Руководитель, который не согласен .с определенными собственником . направлениями . деятельности организации, вряд ли может быть надежным защитником его имущественных интересов» .
Однако позволим не согласиться с утверждением А.Ф. Нуртдиновой о том, что введение дополнительного основания расторжения трудового договора с руководителем организации по п. 2 ст. 278 Трудового кодекса РФ «обусловлено возможностью возникновения некоторых обстоятельств, которые. не подпадают под конкретные основания расторжения трудового договора по инициативе работодателя, предусмотренные законодательством… либо условиями заключенного с руководителем трудового договора. досрочное расторжение трудового договора с руководителем может потребоваться в связи с изменением положения собственника имущества организации как участника гражданских правоотношений по причинам, установить исчерпывающий перечень которых заранее невозможно, либо со сменой стратегии развития бизнеса, либо в целях повышения эффективности управления организацией и т.п.»5.
Трудовой кодекс РФ содержит достаточное количество как общих, так и специальных оснований расторжения трудового договора с руководителем, в том числе и такие сомнительные с позиции Конституции РФ, как п. 13 ч. 1 ст. 81 и п. 3 ст. 278 Трудового кодекса (по основаниям, предусмотренным трудовым договором). Например, в п. 6.3 «Примерного
трудового договора с руководителем феде-
6
рального унитарного предприятия» указаны такие основания расторжения договора, как: невыполнение по вине руководителя показателей экономической эффективности…; необес-печение проведения аудиторских проверок.; невыполнение решений Правительства Российской Федерации.; совершение сделок с имуществом предприятия с нарушением требований законодательства и определенной ус-
4 Нуртдинова А.Ф. Увольнение руководителя организации по пункту 2 статьи 278 ТК Российской Федерации: коммент. к постановлению Конституционного Суда // Трудовое право. 2005. № 6. С. 34—35.
5 Нуртдинова А.Ф. Указ. соч. С. 35.
6 Приказ Минэкономразвития Российской Федерации от
2 марта 2005 г. № 49 «Об утверждении примерного трудового договора с руководителем федерального государственного унитарного предприятия» // Бюл. нормативных актов федеральных органов исполнительной власти. 2005. № 23.
тавом предприятия специальной правоспособности.; наличие по вине Руководителя. более чем трехмесячной задолженности по заработной плате; нарушение по вине Руководителя требований по охране труда.; необеспече-ние использования имущества предприятия по целевому назначению.; нарушение требований законодательства Российской Федерации, а также Устава предприятия в части сообщения сведений о наличии заинтересованности в совершении сделок.; нарушение запрета на занятие отдельными видами деятельности; иные дополнительные основания увольнения. Как видно из приведенного открытого перечня, возможно предусмотреть в качестве оснований прекращения трудового договора и «изменение положения собственника имущества организации», и «смену стратегии развития бизнеса», и, тем более, «повышение эффективности управления организацией».
Конституционный Суд РФ сделал вывод, что закрепление в п. 2 ст. 278 Трудового кодекса РФ правомочия собственника расторгать трудовой договор с руководителем организации, не обосновывая при этом необходимость принятия такого решения, направлено на реализацию и защиту прав собственника владеть, пользоваться и распоряжаться своим имуществом, в том числе определять способы управления им.
В соответствии с Постановлением Суда увольнение по п. 2 ст. 278 Трудового кодекса не должно быть связано с виновным поведением руководителя. Суд также должен учитывать соответствие в данном случае меры дисциплинарной ответственности и совершенного руководителем организации действия (бездействия).
А.Ф. Нуртдинова, придерживаясь аналогичной позиции, подчеркивает — выводы Конституционного Суда основаны на том, что противоправное поведение любого работника, в том числе руководителя организации, может служить основанием для увольнения только при наличии условий дисциплинарной ответственности и соблюдения установленного по-
7
рядка увольнения .
Разумеется, достаточно трудно представить себе ситуацию, когда у работодателя возникнет совершенно безмотивное желание уволить руководителя. Наличие объективных причин, связанных с неправомерными действиями или бездействием руководителя, дает
7 Нуртдинова А.Ф. Указ. соч. С. 36.
возможность использовать другие сформулированные в Трудовом кодексе основания для увольнения руководителя 8.
Конституционный Суд установил, что расторжение трудового договора с руководителем по п. 2 ст. 278 требует предоставления ему повышенной компенсации. Статья 279 Трудового кодекса, предоставляя сторонам трудового договора право определять размер компенсации, не закрепляла ее минимальную величину, что истолковывалось в правоприменительной практике как легальная возможность устанавливать компенсацию в размере, не отвечающем цели данной выплаты, либо не устанавливать ее вообще. Это послужило основанием для признания ст. 279 Трудового кодекса не соответствующей Конституции РФ в данной части.
Комментируя Постановление Конституционного Суда, С.П. Маврин пишет, что «руководители коммерческой организации не являются простыми наемными работниками. фигура руководителя коммерческой организации оказывается весьма близка фигуре пред-принимателя»9. Однако представляется довольно спорным вывод С. П. Маврина о том, что «критическая масса особенностей правового регулирования отношений руководителей по управлению коммерческими организациями уже превысила тот предел, который позволял осуществлять это регулирование в рамках трудового права» 10. Применение к ним модели, характерной для гражданского и предпринимательского права будет противоречить юридической природе трудового правоотношения, прикрывать фактические трудовые отношения гражданскими, что недопустимо с позиций ч. 4 ст. 11 Трудового кодекса РФ, закрепляющей: «В тех случаях, когда судом установлено, что договором гражданско-правового характера фактически регулируются трудовые отношения, к таким отношениям применяются положения трудового законодательства».
Норма п. 2 ст. 278 Трудового кодекса РФ о прекращении трудового договора с руководителем организации в связи с принятием уполномоченным органом юридического лица,
8 Комментарий к Трудовому кодексу Российской Федерации (постатейный) / отв. ред. А.М. Куренной, С.П. Маврин, Е.Б. Хохлов. М. : Городец, 2007. С. 537.
9 Маврин С.П. Трудовое право в решениях Конституционного Суда Российской Федерации // Правоведение. 2006. № 4. С. 43 ; Он же. Коллизии интересов работодателя и работника // Эж-ЮРИСТ : Рос. правовая газ. 2006. № 9.
10 Маврин С.П. Трудовое право в решениях Конституционного
Суда Российской Федерации. С. 46.
либо собственником имущества организации, либо уполномоченным собственником лицом (органом) решения о прекращении трудового договора, по меньшей мере является дискуссионной. Неопределенность юридического содержания данной правовой нормы позволяет работодателю скрывать подлинные причины увольнения, освобождает от необходимости их обоснования. Данная норма не соответствует основополагающим конституционным принципам трудового права, носит дискриминационный характер. Она ограничивает права работника в зависимости от должностного положения, фактически лишает суды возможности защищать нарушенные трудовые права работника, о чем также свидетельствуют и последующие обращения граждан в Конституционный Суд с жалобами на нарушение их трудовых прав и свобод положениями п. 2 ст. 278 Трудового кодекса РФ 11. Общеправовой принцип недопустимости злоупотребления правом в полной мере распространяется на сферу трудовых отношений (чч. 1 и 2 ст. 17, ч. 2 ст. 19, ч. 3 ст. 55 Конституции РФ). Закрепление права прекратить трудовой договор с руководителем организации без указания мотивов увольнения не может означать, что уполномоченный орган юридического лица, либо собственник имущества организации, либо уполномоченное собственником лицо (орган) обладает неограниченной свободой усмотрения при принятии такого решения, вправе действовать произвольно, вопреки целям предоставления указанного правомочия, не принимая во внимание законные интересы организации, а руководитель организации лишается гарантий судебной защиты от возможного произвола и дискриминации.
11 Определение Конституционного Суда Российской Федерации от 14 июля 2011 г. № 1015-О-О «Об отказе в принятии к рассмотрению жалобы гражданки Рябцевой Татьяны Сергеевны на нарушение ее конституционных прав пунктом 2 статьи 278 Трудового кодекса Российской Федерации, статьей 54, частью четвертой статьи 112, частью второй статьи 376 и частью пятой статьи 378 Гражданского процессуального кодекса Российской Федерации. Документ опубликован не был. иИЬ: http://www.ksrf.ru/Decision/Pages/default.aspx ; Определение Конституционного Суда Российской Федерации от 21.04.2011 г. № 539-О-О «Об отказе в принятии к рассмотрению жалобы закрытого акционерного общества ”Сибсервисстройреконструк-ция” на нарушение конституционных прав и свобод пунктом 2 статьи 278 и статьей 279 Трудового кодекса Российской Федерации». Документ опубликован не был. иЯЬ: http://www.ksrf.ru/Decision/Pages/ default.aspx ; Определение Конституционного Суда Российской Федерации от 27.01.2011 г. № 16-О-О «Об отказе в принятии к рассмотрению жалобы гражданина Грищенко Владимира Ильича на нарушение его конституционных прав статьей 84.1 и пунктом 2 статьи 278 Трудового кодекса Российской Федерации». Документ опубликован не был. иИЬ: http://www.ksrf.ru/Decision/Pages/default.aspx
Весьма показательно, что в п. 1 Постановления Пленума Верховного Суда РФ «О применении судами общей юрисдикции общепризнанных принципов и норм международного права и международных договоров Российской Федерации»12 в ряду общепризнанных принципов международного права названы принцип всеобщего уважения прав человека и принцип добросовестного выполнения международных обязательств.
Считаю п. 2 ст. 278 Трудового кодекса РФ противоречит основополагающим принципам международного трудового права, закрепленным в международно-правовых актах о правах человека и запрещающих в сфере труда дискриминацию в любой форме, в том числе в зависимости от должностного положения, и устанавливающих гарантии для трудящихся при прекращении трудовых отношений по инициативе предпринимателя.
В статье 7 Всеобщей декларации прав человека 1948 г. провозглашается — все люди равны перед законом и имеют право, без всякого различия, на равную защиту от какой бы то ни было дискриминации13. Пункт 2 ст. 2 Международного пакта об экономических, социальных и культурных правах 1966 г. закрепляет — государство обязано гарантировать осуществление прав без какой бы то ни было дискриминации14. Статья 2 Конвенции Международной организации труда (МОТ) № 111 1958 г. «Относительно дискриминации в области труда и занятий» устанавливает, что государства обязались проводить национальную политику, направленную на поощрение равенства возможностей в отношении труда и занятий с целью искоренения всякой дискриминации в этой области15. В статье 4 Конвенции МОТ № 158 1982 г. «О прекращении трудовых отношений по инициативе предпринимателя» зафиксировано — трудовые отношения с трудящимися не прекращаются, если только не
12 Постановление Пленума Верховного Суда Российской Федерации от 10 октября 2003 г. № 5 «О применении судами общей юрисдикции общепризнанных принципов и норм международного права и международных договоров Российской Федерации» // Бюл. Верховного Суда Российской Федерации. 2003. № 12.
13 Всеобщая декларация прав человека : принята и провозглашена Генеральной Ассамблеей ООН 10 декабря 1948 г. // Междунар. акты о правах человека : сб. док. М. : НОРМА — ИНФРА, 1998.
14 Международный пакт об экономических, социальных и культурных правах (Нью-Йорк, 19 декабря 1966 г.) // Ведомости Верховного Совета СССР. 1976. № 17. Ст. 1831.
15 Конвенция Международной организации труда № 111
«О дискриминации в области труда и занятий» (Женева, 25 июня
1958 г.) // Конвенции и рекомендации, принятые Междунар. конф. труда. 1957-1990. Женева : Междунар. бюро труда, 1991. Т. II. С. 1262-1265.
имеется законных оснований для такого прекращения, связанного со способностями или поведением трудящегося16.
Наконец, 18 июня 1998 года Международная организация труда приняла декларацию об основополагающих принципах и правах в сфере труда 17. В Декларации указывается, что эти принципы и права получили свое выражение и развитие в форме конкретных прав и обязательств в Конвенциях, признанных в качестве основополагающих как в самой Организации, так и за ее пределами. В пункте 2 Декларации говорится о том, что все государства — члены МОТ, даже если они не ратифицировали соответствующие конвенции МОТ, имеют обязательства, вытекающие из самого факта их членства в МОТ, соблюдать, содействовать применению и претворять в жизнь принципы, касающиеся основополагающих прав, которые являются предметом этих конвенций. К числу таких принципов Декларация относит: свободу объединения и действенное признание права на ведение коллективных переговоров; упразднение всех форм принудительного или обязательного труда; действенное запрещение детского труда; недопущение дискриминации в области труда и занятий.
Из Декларации МОТ об основополагающих принципах и правах в сфере труда вытекают следующие юридически значимые обстоятельства. Во-первых, таким обстоятельством является наличие конвенции МОТ, имеющей в своем содержании определенное правило поведения. Во-вторых, к числу этих обстоятельств относится наличие непосредственной связи имеющегося в конвенции правила поведения с реализацией перечисленных принципов. В-третьих, таким обстоятельством следует назвать нарушение перечисленных принципов при регулировании труда в связи с невыполнением правил поведения, имеющихся в содержании нератифицированной конвенции МОТ, в связи с чем В.И. Миронов сделал вывод о том, что на территории Российской Федерации должны применяться не только ратифицированные конвенции МОТ, но и нератифици-
16 Конвенция Международной организации труда № 158 «О прекращении трудовых отношений по инициативе предпринимателя» (Женева, 22 июня 1982 г.). Конвенция не ратифицирована в Российской Федерации // Конвенции и рекомендации, принятые Междунар. конф. труда. 1957-1990. Женева : Междунар. бюро труда, 1991. Т. II. С. 1983-1989.
17 Декларация Международной организации труда «Об основополагающих принципах и правах в сфере труда» (вместе с «Механизмом реализации декларации») : принята в г. Женеве 18.06.1998 г. на 86-й сессии Генеральной конференции МОТ // Рос. газ. 1998. 16 дек.
рованные конвенции МОТ, в которых имеются нормы, обеспечивающие реализацию указанных в Декларации принципов 18.
Практически в каждой конвенции МОТ имеются положения, которые направлены на обеспечение принципа о недопустимости дискриминации в сфере труда, поэтому они могут быть применены при регулировании трудовых отношений. Это подтверждается и практикой Конституционного Суда РФ, который в некоторых своих постановлениях и определениях, применяя нормы Конституции РФ, для подтверждения своей позиции ссылается и на международные акты в области труда и занятий, в том числе и нератифицированные конвенции МОТ и ее рекомендации. В этой связи представляется, что подлежит применению и Конвенция МОТ № 158 о прекращении трудовых отношений по инициативе предпринимателя, которая возлагает на работодателя бремя доказывания наличия законного основания для увольнения работников (в том числе и руководителя организации), связанного со способностями или поведением трудящегося. Очевидно, что правила названной Конвенции призваны не допустить дискриминации при проведении увольнения работников, в том числе по такому признаку, как должностное положение. В связи с несоответствием нормы п. 2 ст. 278 Трудового кодекса РФ основополагающим принципам международного трудового права предлагаю признать ее утратившей силу.
Толкование трудоправовых норм, данное Конституционным Судом Российской Федерации в Постановлении от 15 марта 2005 г. № 3-П, законодатель учел при внесении изменений в Трудовой кодекс Российской Федерации19. Однако ст. 279, тем не менее, устанавливает, что компенсация не ниже трехкратного среднего месячного заработка выплачивается руководителю в случае отсутствия его виновных действий (бездействия). В связи с тем, что при увольнении по п. 2 ст. 278 собственник освобожден от обязанности мотивировать свое решение и, следовательно, не может ссылаться на нарушение руководителем своих трудовых обязанностей, подменяя, таким образом, подлинное основание увольнения, представляется
18 Миронов В.И. Трудовое право России. М. : ООО «Журнал «Управление персоналом», 2005. С. 63, 1121-1122.
19 Федеральный закон от 30.июня 2006 г. № 90-ФЗ «О внесении изменений в Трудовой кодекс Российской Федерации, признании не действующими на территории Российской Федерации некоторых нормативных правовых актов СССР и утратившими силу некоторых законодательных актов (положений законодательных актов) Российской Федерации» // СЗ РФ. 2006. № 27. Ст. 2878.
сомнительным включение слов «при отсутствии виновных действий (бездействия) руководителя» в ст. 279 Трудового кодекса РФ, так как наличие противоправного действия и вины должно быть доказано. Предлагаю изложить ст. 279 в следующей редакции: «В случае прекращения трудового договора с руководителем организации в соответствии с пунктами 2 статьи 278 настоящего Кодекса ему выплачивается компенсация в размере, определяемом трудовым договором, но не ниже трехкратного среднего месячного заработка».
Трудовой кодекс РФ в отношении руководителя организации, члена коллегиального исполнительного органа организации (п. 13 ч. 1 ст. 81, п. 3 ст. 278) допускает включение в трудовые договоры дополнительных оснований их прекращения, не предусмотренных Кодексом и иным федеральным законом. Пункт 13 ч. 1 ст. 81 (аналогично п. 3 ст. 278) Трудового кодекса представляется весьма спорным с позиции международного права, как противоречащий п. 2 ст. 29 Всеобщей декларации прав человека, в соответствии с которым человек должен подвергаться только таким ограничениям, какие установлены законом исключительно с целью обеспечения должного признания и уважения общественного порядка и общего благосостояния в демократическом обществе.
В соответствии с ч. 3 ст. 55 Конституции РФ права и свободы человека и гражданина могут быть ограничены только федеральным законом в конституционно значимых целях, на что неоднократно указывает Конституционный Суд РФ в своих постановлениях и определениях по вопросам прекращения трудового договора. В этой связи, считаю, что защитой «основ конституционного строя, нравственности, здоровья, прав и законных интересов других лиц, обеспечением «обороны страны и безопасности государства» сложно обосновать необходимость ограничения трудовых прав руководителей организаций, членов коллегиального исполнительного органа организации.
Поэтому предлагаю признать утратившими силу: п. 13 ч. 1 ст. 81, п. 3 ст. 278 Трудового кодекса РФ, содержащие нормы о прекращении трудового договора с руководителем организации помимо оснований, предусмотренных Трудовым кодексом РФ или иным федеральным законом, по основаниям, предусмотренным трудовым договором, как противоречащие Конституции РФ, ее ст. 55, ч. 3.
Таким образом, исходя из приведенных аргументов, можно сделать следующие выводы и предложения. Норма п. 2 ст. 278 Трудового кодекса РФ о прекращении трудового договора с руководителем организации в связи с принятием уполномоченным органом юридического лица, либо собственником имущества организации, либо уполномоченным собственником лицом (органом) решения о прекращении трудового договора, носит дискриминационный характер, как ограничивающая права работника в зависимости от должностного положения, фактически лишающая суды возможности защитить нарушенные трудовые права работника. Общеправовой принцип недопустимости зло-
употребления правом в полной мере распространяется на сферу трудовых отношений. Норма п. 2 ст. 278 Трудового кодекса РФ не соответствует основополагающим принципам международного трудового права, поэтому предлагаю признать ее утратившей силу.
В связи с тем, что права и свободы человека и гражданина могут быть ограничены только федеральным законом в конституционно значимых целях (ч. 3 ст. 55 Конституции РФ), предлагаю признать утратившими силу п. 13 ч. 1 ст. 81, п. 3 ст. 278 Трудового кодекса РФ о прекращении трудового договора с руководителями организаций по основаниям, предусмотренным трудовым договором.
Государственная инспекция труда в Омской области
Канунников А.Б. — кандидат
юридических наук, эксперт
журнала «Трудовое право»,
доцент ОмГАУ
Копьева Т.В. — государственный
инспектор труда Госинспекции
труда в Омской области.
Организация труда и управление трудом наёмного работника в условиях рыночных отношений требует строгого соблюдения трудового законодательства особенно при расторжении трудового договора по инициативе работодателя.
Основные случаи, которые позволяют работодателю расторгнуть трудовой договор по своей властной инициативе указаны в ст. 81 Трудового кодекса Российской Федерации (далее ТК РФ). Вместе с тем, учитывая, что трудовые функции наемных работников объективно имеют значительную дифференциацию, различаясь по содержанию и объему трудовых обязанностей, законодатель устанавливает дополнительные основания прекращения трудового договора по инициативе работодателя (ст.81, 278, 288, 307 ТК РФ). При этом предусмотрены разные процедуры прекращения трудового договора.
Трудовое законодательство выделяет руководителей организаций, которые как известно, по своему правовому статусу занимают особое место как в деятельности, так и в управлении любой организацией и предприятием.
В Постановлении Конституционного Суда Российской Федерации от 15 марта 205 № 3-П «По делу о проверке конституционности положений пункта 2 статьи 278 и статьи 279 Трудового кодекса Российской Федерации и абзаца второго пункта 4 статьи 69 Федерального Закона «Об акционерных обществах» в связи с запросом Волховского городского суда Ленинградской области, Октябрьского районного суда города Ставрополя и жалобами ряда граждан» записано, что федеральный законодатель вправе, исходя из объективно существующих особенностей характера и содержания труда руководителя организации, выполняемой им трудовой функции, предусматривать особые правила расторжения с ним трудового договора, что не может расцениваться как нарушение права каждого свободно распоряжаться своими способнос¬тями к труду, выбирать род деятельности и профессию (части 1 ст. 37 Конституции РФ), либо как нарушение гарантированного ст. 19 Конституции РФ равенства всех перед законом и судом и равенства прав человека и гражданина. Вводимые при этом ограничения трудовых прав руководителя организации в силу части 3 ст. 55 Конституции РФ должны быть необходимыми и сообразными конституционно значимым целям.
При этом при расторжении трудового договора с руководителем организации по решению уполномоченного органа юридического лица не требуется указывать те или иные конкретные обстоятельства, подтверждающие необходимость прекращения трудового трудового договора. В соответствии с указанным Постановлением Конституционного Суда РФ работодатель также не обязан указывать мотивы увольнения руководителя организации по основанию, предусмотренному п.2 ч.1 ст.278 ТК РФ, поскольку такое увольнение не связано с виной руководителя и не является мерой юридической ответственности за какие-либо трудовые правонарушения. Следует иметь ввиду, что п.3 ч.1 ст. 278 ТК РФ указана возможность прекращения трудового договора с руководителем организации по иным основаниям, предусмотренным трудовым договором с руководителем. Однако, главное отличие этого основания от подобного основании, указанного в ч. 1 п. 2 ст. 278 ТК РК, заключается в наличии вины руководителя. Именно это обстоятельство, т.е. отсутствие вины руководителя, определяет позицию законодателя относительно компенсации при расторжении трудового договора в размере, определяемом трудовым договором, но не ниже трехкратного среднего месячного заработка, как это сформулировано в ст. 279 ТК РФ о гарантиях руководителям организации в этих случаях.
В отличии от прекращения трудового договора с руководителем организации по указанным выше основаниям п. 13 ч.1 ст. 81 ТК РФ основанием расторжения трудового договора названы случаи, предусмотренные трудовым договором, заключенным с руководителем организации. Прежде всего, необходимо чтобы работник выполнял трудовую функцию именно руководителя организации, т.е. возглавлял юридическое лицо- учреждение, предприятие, фонд, некоммерческое партнерство и т.д. В трудовом договоре, заключенном с указанными лицами, могут быть сформулированы именно дополнительные по сравнению с действующим законодательством основания или случаи увольнения. Эти основания и случаи должны иметь конкретный характер, но не повторять или совпадать с имеющимися в законодательстве. Например, такими основаниями могут стать неисполнение руководителем решения высшего коллегиального органа управления акционерного общества, общего собрания учредителей, невыполнение в установленные сроки конкретного объема работ и т.д.
Чтобы применить такое, указанное в трудовом договоре основание или случаи увольнения руководителя необходимо, во-первых, доказать наличие вины руководителя в том, что он не выполнил указанные в трудовом договоре требования, обязательства, не достиг оговорённого результата, а во-вторых, проверить отсутствие предусмотренных законодательством припятствий для прекращения трудового договора. К таким припятствиям относится нахождение в отпуске или на больничном.
Следует отметить , что основания прекращения трудового договора с руководителем организации относятся к частным основаниям увольнения, т.е. к тем, которое неприменимо ко всем работникам.
К дополнительному частному основанию прекращения трудового договора по инициативе работодателя относится, также предусмотренное в ст. 288 ТК РФ основание прекращения трудового договора с лицом, работающим по совместительству. Юридическое значение здесь имеют как процедуры, так и вид трудового договора, на основании которого работает работник, а также дополнительное фактическое обстоятельство, связанное с приемом на работу постоянного работника. Исходя из этого трудовой договор с совместителем по инициативе работодателя может быть прекращен по упрощённой процедуре только если трудовой договор был заключен на неопределенный срок, в случае приема на работу работника, для которого эта работа будет являться основной, о чем работодатель должен предупредить совместителя не менее чем за две недели до прекращения трудового договора. Следует обратить внимание, что если с совместителем заключён срочный трудовой договор, то такая процедура прекращения не является законной. Работодателю в этом случае предстоит ждать окончания срока трудового договора или искать иные основания для его прекращения.
Дополнительные основания и случаи прекращения трудового договора по инициативе работодателя, помимо предусмотренных ТК РФ, могут быть предусмотрены в трудовом договоре с работником, работающим у работодателя-физического лица (ст.307 ТК РФ). Такими работодателями выступают работодатели — физические лица, которые являются индивидуальными предпринимателями, и работодатели — физические лица, которые нанимают работников для удовлетворения личных нужд и потребностей. Однако и тот и другой работодатель могут формулировать в трудовом договоре дополнительные основания его прекращения, поскольку трудовые отношения, которые здесь складываются, носят зачастую достаточно доверительный, а иногда даже личностный характер. Кроме того, закон этим работодателям позволяет устанавливать в трудовом договоре особые сроки предупреждения об увольнении, а также случаи и размеры выплачиваемых при прекращении трудового договора выходного пособия и других компенсационных выплат.
К процедурам, связанным с особенностями прекращения работодателем-физическим лицом, не являющимся индивидуальным предпринимателем, трудового договора с работником относится обязанность такого работодателя зарегистрировать в уведомительном порядке факт прекращения указанного договора в органе местного самоуправления, в котором был зарегистрирован этот трудовой договор.
Возможность формулировать в трудовом договоре дополнительные основания его прекращения, предоставленная работодателю, определяется ролью работодателя в экономике и даёт возможность обеспечить эффективность организации труда и управления трудом наёмных работников.
Верховный суд счел неправомерным увольнение Кондрашова по ст. 278 ТК РФ :: Н.Новгород :: РБК
Отмечается, что президиум Верховного суда принял решение отозвать из обзора законодательства и судебной практики ответ на вопрос о правомерности прекращения полномочий главы местной администрации по ст. 278 ТК РФ
Фото: supcourt.ru
Верховный суд РФ признал неправомерным увольнение Олега Кондрашова с поста главы администрации Нижнего Новгорода на основании ст. 278 ТК РФ, говорится в письме заместителя председателя высшего судебного органа РФ Василия Нечаева, направленном в Нижегородский областной суд.
Отмечается, что на заседании президиума Верховного суда РФ, которое состоялось 29 июля, было принято решение «отозвать из обзора законодательства и судебной практики Верховного суда РФ за четвертый квартал 2009 года ответ на вопрос №5 о правомерности прекращения полномочий главы местной администрации, замещающего должность по контракту, по инициативе представителя нанимателя по дополнительным основаниям для прекращения трудового договора с руководителем организации, установленным статьей 278 Трудового кодекса РФ».
На минувшей неделе в письме нижегородским властям председатель комитета по федеральному устройству и вопросам местного самоуправления Госдумы РФ Виктор Кидяев назвал увольнение главы администрации Нижнего Новгорода противоречащим федеральному законодательству.
«Досрочное расторжение трудового контракта с главой администрации Нижнего Новгорода на основании ч.2 ст. 278 Трудового кодекса Российской Федерации является не соответствующим Федеральному закону № 131-ФЗ и Федеральному закону №23-ФЗ», — говорится в письме.
Городская дума Нижнего Новгорода досрочно прекратила полномочия главы администрации города Олега Кондрашова 22 июля в соответствии с п.2 ст. 278 ТК РФ. Решение было принято тайным голосованием большинства депутатов: из присутствовавших 32 членов думы 28 поддержали отставку, 3 высказались против, 1 воздержался.
Во время больничного уволили по ст. 278п.2, возможно восстановление?, Тула | вопрос №2440219 от 21.07.2021
Ира.
В соответствии с п. 2 ст.и 278 ТК РФ руководитель организации может быть уволен по особому основанию — в связи с в связи с принятием уполномоченным органом юридического лица, либо собственником имущества организации, либо уполномоченным собственником лицом (органом) решения о прекращении трудового договора. При увольнении руководителя по данному основанию важно иметь ввиду следующее. Статьей 279 Трудового Кодекса РФ для руководителя организации предусматривается СПЕЦИАЛЬНАЯ ГАРАНТИЯ в связи с увольнением по данному основанию.
В случае прекращения трудового договора с руководителем в соответствии с п. 2 ст. 278 ТК РФ при отсутствии виновных действий (бездействия) руководителя ему должна быть выплачена компенсация. Размер ее определяется трудовым договором, но не ниже трехкратного среднего месячного заработка.
В соответствии с п. 2 ст. 278 ТК РФ если ваши учредители Общества вовремя не уволил руководителя, а лишь прекратили его полномочия как единоличного исполнительного органа, то такие действия автоматически НЕ ВЛЕКУТ увольнение руководителя по п. 2 ст. 278 ТК РФ. Соответственно, он может быть уволен по соглашению сторон, по сокращению и т.п., и в каждом из этих случаев размер компенсации при увольнении будет иным.
Типичные ошибки при увольнении руководителя по п. 2 ст. 278 Трудового Кодекса РФ
На практике при увольнении руководителя по п. 2 ст. 278 Трудового Кодекса РФ как правило, совершаются следующие ошибки: а) учредители принимают решение о прекращении полномочий руководителя как единоличного исполнительного органа юридического лица, не прекращая при этом трудовые отношения; б) виновные действия руководителя сводятся к тому, что руководитель не достиг тех или иных показателей, согласованных с ним при приеме на работу, а при этом виновные действия в правовом смысле со стороны руководителя отсутствуют; в) прекращая полномочия руководителя, учредители не избирают иное лицо в качестве единоличного исполнительного органа, что приводит к тому, что суды не признают факта прекращения трудовых отношений и считают, что они продолжаются; г) учредители, прекратив полномочия руководителя и трудовые отношения с ним, не оформляют увольнение надлежащим образом, что дает уволенному руководителю все основания для ВОССТАНОВЛЕНИЯ на работе либо взыскании с организации среднего заработка за задержку трудовой книжки; — возложение обязанностей по оформлению расторжения трудовых отношений на самого увольняемого руководителя.
Всего вам хорошего.
Вам помог ответ?ДаНет
Правомерно ли увольнение генерального директора — матери-одиночки, воспитывающей ребенка в возрасте до четырнадцати лет,
Правомерно ли увольнение генерального директора — матери-одиночки, воспитывающей ребенка в возрасте до четырнадцати лет, по п. 2 ст. 278 ТК РФ?
Вопрос: В организации принято решение об увольнении генерального директора — матери-одиночки, воспитывающей ребенка в возрасте до четырнадцати лет, по п. 2 ст. 278 ТК РФ. Правомерно ли данное увольнение?
Ответ: Расторжение трудового договора по инициативе работодателя с одинокой матерью, имеющей ребенка в возрасте до четырнадцати лет, не допускается. Соответственно, уволить генерального директора — одинокую мать, воспитывающую ребенка в возрасте до четырнадцати лет, по п. 2 ст. 278 Трудового кодекса РФ нельзя. Данная позиция поддерживается и в судебной практике.
Обоснование: Согласно п. 2 ст. 278 ТК РФ, помимо оснований, предусмотренных ТК РФ и иными федеральными законами, трудовой договор с руководителем организации прекращается в связи с принятием уполномоченным органом юридического лица, либо собственником имущества организации, либо уполномоченным собственником лицом (органом) решения о прекращении трудового договора.
Частью 4 ст. 261 ТК РФ установлен запрет на увольнение по инициативе работодателя одинокой матери, воспитывающей малолетнего ребенка — ребенка в возрасте до четырнадцати лет (за исключением увольнения по основаниям, предусмотренным п. п. 1, 5 — 8, 10 или 11 ч. 1 ст. 81 или п. 2 ст. 336 ТК РФ).
Данная статья относится к числу специальных норм, предоставляющих определенным категориям работников повышенные гарантии.
Глава 43 ТК РФ, регулирующая особенности труда руководителя организации, не содержит норм, исключающих предоставление этим лицам гарантии, установленной ч. 4 ст. 261 ТК РФ в виде запрета на увольнение по инициативе работодателя одиноких матерей, воспитывающих ребенка в возрасте до четырнадцати лет, за исключением увольнения по основаниям, перечисленным в указанной части. Следовательно, трудовой договор с руководителем организации (учреждения) не может быть расторгнут по п. 2 ст. 278 ТК РФ, если руководителем является женщина — одинокая мать, воспитывающая ребенка в возрасте до четырнадцати лет (Определение Верховного Суда РФ от 21.03.2014 N 66-КГпр14-2).
Р.К.Петросов
ООО «М-СТАЙЛ»
Региональный информационный центр
Сети КонсультантПлюс
20.08.2014
местоположений, направлений и парковок — Wakefield Campus
Montefiore Wakefield Campus
600 East 233rd Street
Bronx, NY 10466
Телефон: 718-920-9000
Найти на Google Maps
на метро
# 2 Поезд
# 2 поезд (7th Avenue Express) до East 233rd Street и White Plains Road.
Идите на запад по 233-й восточной улице к кампусу Уэйкфилд медицинского центра Монтефиоре.
На метро Северный
Гарлем Линия от Центрального вокзала до станции Вудлон, расположенной на Восточной 233-й улице.
Автобусом (в пределах Бронкса)
- Bx41 автобус останавливается на White Plains Road и East 233rd Street.
- Bx31, (от станции Throgs Neck) Автобусы останавливаются прямо напротив кампуса Уэйкфилд в Монтефиоре.
на машине
Чтобы получить более подробные инструкции по проезду, посетите Google Maps.
из округа ВестчестерBronx River Parkway до выхода № 10 , который находится на 233-й восточной улице. У знака остановки съезда поверните налево на Webster Avenue. На светофоре поверните налево на East 233rd Street. Переходите эстакаду, справа больница.
Из МанхэттенаFDR Двигайтесь на север к мосту Уиллис-авеню к майору Дигану (I-87) с севера на восток, съезд с 233-й улицы. Двигайтесь по East 233rd Street East примерно на милю.Больница будет справа.
из БруклинаBrooklyn-Queens Expressway (BQE) / 278 до моста Triboro до автомагистрали Bruckner Expressway / 278 до Bronx River Parkway North. Сверните на выезд № 10 на 233-й улице и поверните направо на бульвар Бронкс. Пройдите 2 квартала до больницы.
из КвинсаДвигайтесь по мосту Триборо на север к съезду Major Deegan (I-87) до съезда с 233rd Street. Двигайтесь на восток по 233rd Street East примерно одну милю.Больница будет справа.
Альтернатива от QueensДвигайтесь по мосту Триборо на север до скоростной автомагистрали Брукнера. Медвежонок налево (НЕ езжайте по скоростной автомагистрали Шеридан) и продолжайте движение по Северному бульвару реки Бронкс. Сверните на выезд № 10 на 233-й улице и поверните направо на бульвар Бронкс. Пройдите 2 квартала до больницы.
С Лонг-АйлендаДвигайтесь либо по мосту Throgs Neck Bridge, либо по мосту Whitestone на север к автомагистрали Новой Англии (I-95). Сверните на Бейчестер-авеню и двигайтесь на запад до 233-й улицы. Поверните налево на 233-ю улицу и пройдите 2 мили до больницы.
из Нью-ДжерсиМост Джорджа Вашингтона до перекрестка Восточного шоссе Бронкса, сверните на съезд Major Deegan (I-87) с севера на 233-ю восточную улицу. Двигайтесь по East 233rd Street East примерно на милю. Больница будет справа.
Из аэропорта Ла-ГуардияGrand Central Parkway West до I-278 East / Triboro Bridge до I-87 North / Deegan Expressway до съезда с 13 / 233rd Street.Двигайтесь на восток по 233rd Street East примерно одну милю. Больница будет справа.
Из аэропорта JFKСкоростная автомагистраль Ван Вик / 678 до моста Уайтстоун до скоростной автомагистрали Кросс Бронкс / 95 до Северного бульвара реки Бронкс. Сверните на выезд № 10 на 233-й улице и поверните направо на бульвар Бронкс. Пройдите 2 квартала до больницы.
Парковка
На улице:
В районе кампуса Уэйкфилда есть парковка на улице.Проверяйте уличные указатели на правила и доступность.
Общественные гаражи:
Уэйкфилд Кампус : круглосуточный гараж, расположенный по адресу 613 East 233rd Street;
Тел .: 718-920-9901.
| Общее примечание | Гены Mx определяют устойчивость к летальным эффектам различных миксовирусов, включая нейротропный вирус птичьего гриппа А, вводимый интрацеребрально, пневмотропные штаммы, вводимые интраназально, и гепатотропные штаммы 5645, J: 13136).Устойчивость не зависит от наличия тимуса и не устраняется иммуносупрессией или ингибиторами функции макрофагов (J: 5735, J: 5478, J: 5645). Устойчивость специфична для ортомиксовирусов (J: 6265). Это зависит от присутствия интерферона-альфа и -бета, но не от -гамма (J: 7365). Аллель устойчивости в локусе Mx1 при индукции альфа / бета-интерфероном продуцирует 75 кДа белок MX-1, который придает устойчивость к вирусу гриппа в ядрах клеток, несущих аллель.Аллели восприимчивости не продуцируют белок (J: 8273). Белок расположен в ядре (J: 7703) и оказывает противовирусное действие, предотвращая синтез вирусной мРНК в ядре (J: 7992). Ядерная локализация необходима для активности против вируса гриппа (J: 1417), но мутации, индуцированные в Mx1, показали, что ядерное положение было недостаточным для эффекта; мутации в нескольких доменах могут вызвать его потерю (J: 11840). Белок MX-1 представляет собой GTPase, содержащую GTP-связывающий домен (J: 1417), и это связывающее ядро также необходимо (J: 21243). Устойчивость выражается макрофагами и другими клетками in vitro (J: 6649, J: 5940), но не может быть передана чувствительным животным путем переноса макрофагов от устойчивых мышей (J: 6149). Устойчивость к заражению двумя клещевыми вирусами, вирусом Тогото (J: 8273) и вирусом Дори (J: 27760), также обеспечивается Mx1 r . Аллель Mx1 r встречается только в штаммах A2G, SL / NiA и T9, последний является штаммом, полученным из устойчивых к гриппу диких животных, и CAST / Ei, полученным из Mus musculus castaneus.Большинство инбредных штаммов, включая C57BL / 6J, C3H / HeJ и BALB / cJ, несут чувствительный к гриппу аллель Mx1 s1 , который продуцирует мРНК без экзонов 9, 10 и 11 аллеля Mx1 r . Эта большая делеция, по-видимому, делает белок неспособным обеспечивать устойчивость к гриппу. Штаммы CBA / J, CE / J, I / LnJ и PERA / Ei, также чувствительные к вирусу, имеют другую форму аллеля Mx1 s2 , в которой имеется нонсенс-мутация (J: 9452). Интерферон индуцируется вирусной инфекцией и, в свою очередь, индуцирует белок Mx (J: 7703).Хотя некоторые гены, индуцированные интерфероном, отвечают непосредственно на вирусную инвазию, а также косвенно через индукцию индуцированным вирусом интерфероном, этот первичный ответ очень слаб для белка MX-1 в ответ на вирусы гриппа или болезни Ньюкасла (J: 1892). | Молекулярное примечание | Многие инбредные линии мышей имеют делецию экзона 9-11, что приводит к нулевому аллелю и чувствительности к миксовирусам, включая: A / J, ABP / Le, AKR / J, AU / SsJ, BALB / cJ , BDP / J, BUB / BnJ, C3H / HeJ, C57BL / 6J, C57BL / 10J, C57BL / KsJ, C57L / J, C58 / J, DA / HuSn, DBA / 2J, FSB / GnEi, FVB / NJ, LIS / A, LP / J, MA / MyJ, MAS / A, NZB / BINJ, P / J, PL / J, RIIIS / J, RF / J, SEA / GnJ, SEC1 / ReJ, SJL / J, ST / bJ , TS1 / A, TW1 / A.YBR / Ei, 020 / A, 129 / J, SF / CamEi и SK / CamEi. |
|---|
Основы физиологической регуляции, болезненных состояний и фармакологических вмешательств
% PDF-1.4 % 1 0 объект > эндобдж 5 0 obj > поток doi: 10.1124 / pr.117.014647application / pdf
v & b ՛ 0 / pI & b * G%, & JjDgM ٶ Hj0Zn2E; t7 ݴ dySdZ ڼ vb3o ±: [r & ‘} eCziT, \ X_l31JTuS # «n? \ pEd4? 1 [/ WEҦ) д! @ / ҲLfSyA & Z & ڕ aXo [coi zvRX4͐ # QR ȵ | Tcz2 «: 2oM ښ # l lz @ ͛ = Y, `ۗ R ¤ǯL0g u6Ecċ, D ~ E ‘R3H q2O5 [((c, y38sOHg & w # I% myq
Войдач, Т.К. и Хансен, Л.Л. Обращение смещения ПЦР для повышения чувствительности анализа кривой плавления метилирования ДНК. Биотехники 41, 274, 276, 278
274 ı BioTechniques ı www.biotechniques.com Vol. 41 № 3 № 2006
Контрольные показатели
В диапазоне
методологий, используемых в настоящее время в исследованиях метилирования
(см. Ссылку 1), секвенирование
обработанной бисульфитом ДНК (2) можно рассматривать как
. золотой стандарт, так как
раскрывает статус метилирования каждого
динуклеотида CpG.Тем не менее, этот метод
относительно дорог,
, поэтому он редко использовался в крупномасштабных экспериментах
. Напротив,
, простота конструкции и легкость выполнения
—
ПЦР, специфичная для метилирования
(MSP) (3) сделала его наиболее широко используемым методом
в исследовании
статуса метилирования гены.
Однако MSP склонен к ложноположительным результатам
и может привести к завышению количества метилированных
образцов (4).
Метилирование, чувствительное к плавлению
Анализы кривой(MS-MCA) (5) — это альтернатива
, которая позволяет быстро и просто проводить скрининг маркеров метилирования
. Основным преимуществом метода
является то, что
, когда получается однозначный профиль плавления
, нет необходимости подтверждать
результат вторым методом, который
должен выполняться для всех положительных результатов MSP-
. полученные результаты.
Следуя стандартному протоколу для профилирования метилирования ДНК
путем плавления
анализов кривой, опубликованных ранее
(6), мы столкнулись с двумя основными проблемами
, которые значительно усложнили наши эксперименты.Во-первых, положение
о том, что праймеры для MS-MCA
не должны различать метилированный
и неметилированный аллель, ограничивает сайты связывания праймеров
областями матрицы
без динуклеотидов CpG.
Найти подходящие сайты связывания праймеров,
, особенно в последовательностях с высоким содержанием CpG
, очень сложно, а достичь
может быть невозможно.Вторая проблема
— это смещение PCR. Для
большинство наших анализов, которые были
разработаны для определения качественного статуса метилирования
(все или ничего) интересующего гена
, катион PCR-амплифи
—
показал значительный сдвиг в сторону
.— неметилированный аллель из-за разницы в содержании CG
после обработки бисульфитом
(7). Мы протестировали каждый анализ
на смещение ПЦР с использованием различных соотношений
метилированной и неметилированной ДНК
[CpGenome ™ Universal Methylated
ДНК (Chemicon, Temecula, CA,
USA) и ДНК периферической крови как
,метилированной и неметилированной. control,
соответственно].Большинство анализов
показало положительный сигнал, специфичный для метилирования
, только в образцах, содержащих
> 50%
метилированную матрицу. Типичные результаты
показаны на рисунке 1A, на котором
мишень является частью предполагаемого гена-супрессора опухоли
PPP3CC
.
Мы ввели два изменения в
, пытаясь устранить эти ограничения.
Во-первых, мы изменили дизайн праймеров так, чтобы
содержали ограниченное количество сайтов CpG
, тем самым отжигая с более высокой эффективностью
с метилированной матрицей, чем с неметилированной матрицей
.На рисунке 2 показаны
исходных и переработанных праймеров
для экспериментов по скринингу метилирования
PPP3CC. Новый набор праймеров
эффективно амплифицировал как метилированные
, так и неметилированные аллели (рис. 1B).
Кроме того, в зависимости от температуры отжига праймера
(T
a
) во время ПЦР,
мы смогли контролировать смещение при амплификации ПЦР
. При относительно низком уровне
T
a
, как метилированные, так и немет-
-илилированные шаблоны были усилены с сопоставимой эффективностью
(рис. 1B),
, тогда как повышение T
a
привело к
. значительно более эффективная амплификация
—
метилированного шаблона
(рис. 1C).Таким образом, путем корректировки
T
и
амплификации ПЦР мы
смогли улучшить чувствительность
нашего анализа.
Подтверждение нашего подхода было
, выполненным с использованием четырех анализов, ранее разработанных
согласно ссылке 6.
Анализы были разработаны для скрининга
на метилирование предполагаемой опухоли
супрессорных генов при раке простаты
образцов и два из них показали метилирование
в <15% образцов в
нашей панели.Модернизированные праймеры
были протестированы с использованием матриц, содержащих
определенных смесей метилированной и
неметилированной ДНК в экспериментах
, аналогичных показанным на рисунке
1. Во всех случаях анализы следовали шаблону
, показанному здесь для PPP3CC. ген
(то есть, в зависимости от T
a
, тот же набор праймеров
был способен амплифицировать метилированный аллель
интересующего гена с более высокой эффективностью на
; см. Дополнительный
Рисунок S1, доступный онлайн на www.
BioTechniques.com). Для двух анализов
, которые ранее использовались для обнаружения метилирования
в клинических образцах, модифицированная процедура
позволила выявить
из 40% –50% большего количества метилированных образцов
из той же панели образцов (unpub
—
данных). Наша интерпретация состоит в том, что
наблюдаемые различия в уровнях обнаружения метилирования
были связаны с повышенной чувствительностью
переработанных анализов.
Наш анализ последовательностей праймеров
, использованных в этих экспериментах, показал
, что более двух сайтов CpG в последовательности
одного праймера привели к
без амплификации неметилированной матрицы
(данные не показаны) и что
сайтов праймера CpG должны быть
как можно ближе к 5
‘концу последовательности праймера
.
Новый подход к конструированию праймеров —
, позволяющий включать нуклеотиды CpG в последовательности праймеров
— значительно увеличивает гибкость выбора
мишеней амплификации, подходящих для
анализов, что имеет решающее значение для эксперимента
в качестве последовательностей подвергнутый
MS-MCA, в идеале
должен содержать только один домен плавления для обеспечения однозначных результатов
в анализе плавления после ПЦР
(8).Кроме того,
использование одного набора праймеров, который способен
амплифицировать как метилированные, так и неметилированные
матрицы, преодолевает проблему
гетерогенного метилирования
сайтов связывания праймеров, поскольку праймеры
всегда амплифицируют последовательность интерес,
независимо от статуса метилирования сайтов CpG
, включенных в сайты связывания праймеров.
Обращение смещения ПЦР для повышения чувствительности
Анализ кривой плавления метилирования ДНК
Tomasz K.Войдач и Лиз Лотте Хансен
Орхусский университет, Орхус, Дания
BioTechniques 41: 274-278 (сентябрь 2006 г.)
doi 10.2144 / 000112240
Метаболические особенности и регуляция цикла заживления — новая модель патогенеза хронических заболеваний и лечение
Основные моменты для митохондрий
- •
Четыре стадии цикла заживления определены с точки зрения биоэнергетики и метаболизма.
- •
Продолжение цикла заживления контролируется метабокинами и митохондриями.
- •
Описаны три состояния дифференцировки поляризованных митохондрий; противовоспалительный M2, провоспалительный M1 и незафиксированный M0.
- •
Патофизиология хронического заболевания изменилась в результате нарушений в передаче сигналов метабокина и митохондрий.
- •
Когда нормальные стадии реакции клеточной опасности (CDR) сохраняются ненормально, цикл заживления блокируется и возникает хроническое заболевание.
Abstract
Без исцеления многоклеточная жизнь на Земле не существовала бы. Без исцеления одна травма предрасполагает к другой, приводя к инвалидности, хроническим заболеваниям, ускоренному старению и смерти. Более 60% взрослых и 30% детей и подростков в Соединенных Штатах сейчас живут с хроническими заболеваниями. Достижения в области масс-спектрометрии и метаболомики дали ученым новые возможности для изучения здоровья и болезней. Это исследование определяет цикл исцеления в терминах метаболизма и переосмысливает патофизиологию хронического заболевания как результат нарушений метаболической сигнализации, которые блокируют заживление и вызывают аномальное сохранение нормальных стадий реакции клетки на опасность (CDR).После травмы активное прохождение стадий заживления обусловлено последовательными изменениями в клеточной биоэнергетике и расположением кислородного и углеродного скелетов, используемых для топлива, передачи сигналов, защиты, ремонта и восстановления. > 100 хронических заболеваний можно разделить на три устойчивых стадии CDR. Представлены сто два нацеленных хемосенсорных связанных с G-белком и ионотропных рецептора, которые регулируют CDR и заживление. Метабокины — это сигнальные молекулы, полученные в результате метаболизма, которые регулируют эти рецепторы.Переосмысление патогенеза хронического заболевания таким образом, как системная проблема, которая поддерживает болезнь, вместо того, чтобы сосредоточиться на удаленных триггерах, которые причинили первоначальное повреждение, позволяет новым исследованиям сосредоточиться на новых сигнальных методах лечения, чтобы разблокировать цикл исцеления и восстановить здоровье, когда другие подходы потерпели неудачу.
Ключевые слова
Реакция клетки на опасность
Цикл исцеления
Митохондриальный нексус
Метаболическая зависимость
Метаболическая память
Пуринергическая передача сигналов
Метабокины
00030002000300030003 Митохондриальная терапия
Митохондриальная терапияАллостаз
Аллостатическая нагрузка
Интегрированная реакция на стресс
Сокращения
TOGLEsтранспортеры Опсины G белковые рецепторы лиганды и эффекторы
ASDрасстройство аутистического спектра
CFSсиндром хронической усталости
000 DAMPs молекулярные паттерны
000 DAMPs реактивные метаболиты, связанные с повреждением
PTSDпосттравматическое стрессовое расстройство
M2противовоспалительная митохондриальная поляризация
Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)
© 2018 Автор.Опубликовано Elsevier BV
Рекомендуемые статьи
Цитирующие статьи
Значение богатой пролином тирозинкиназы 2 (Pyk2) на прогрессирование и рецидив гепатоцеллюлярной карциномы
Пациенты
С декабря 2000 по октябрь 2001 года, 49 пациентов (возраст старше 18 лет) ) с диагнозом ГЦК, которые считались резектабельными на основании интраоперационной ультрасонографии без предоперационной адъювантной терапии, были включены в настоящее исследование. Новая стадия TNM и стадия Эдмонсона этих пациентов были основаны на клиническом и патологическом диагнозе (Ng et al, 2006).Протокол исследования был одобрен институциональным наблюдательным советом Университета Гонконга. Информированное согласие было получено от каждого пациента перед операцией.
Экспрессия белка Pyk2 и FAK в опухоли и прилегающих неопухолевых тканях печени с помощью иммуноокрашивания и вестерн-блоттинга
Парафиновые срезы образцов ткани были иммунохимически окрашены на Pyk2 и FAK с использованием системы Dako EnVision ™ (Дако, Глоструп, Дания) . Вкратце, после депарафинизации активность эндогенной пероксидазы гасили путем погружения срезов на 30 мин в абсолютный метанол, содержащий 0.3% H 2 O 2 . Срезы обрабатывали для демаскировки антигенов обычным нагреванием в микроволновой печи в 10 мМ буфере лимонной кислоты (pH 6,0) в течение 12 мин. Затем срезы обрабатывали 10% нормальной козьей сывороткой в течение 30 минут для уменьшения фонового окрашивания с последующей обработкой соответствующими первичными антителами (Pyk2: окрашивание цитоплазмы — H-109, Santa Cruz Biotechnology Inc., 2145 Delaware Avenue, Santa Cruz, Калифорния, США; ядерное окрашивание — Upstate Biotechnology, Charlottesville, VA, USA; FAK: Upstate Biotechnology) при 4 ° C в течение ночи.После промывки срезы инкубировали с вторичным антителом EnVision ™ в течение 30 минут при комнатной температуре, а затем визуализировали с раствором хромогенного субстрата в течение 2 минут. Предметные стекла были исследованы под световым микроскопом двумя независимыми исследователями, имеющими опыт патологии печени. В соответствии с интенсивностью и площадью передачи сигналов окрашивания, внутриклеточная экспрессия белка Pyk2 и FAK была классифицирована на группы с более высокой экспрессией (более 50% среза опухоли) и более низкой экспрессией (менее 50% среза опухоли) соответственно с помощью интегрированного система визуализации (система MetaMorph Imaging версии 3.0; Universal Imaging Corp, Вест Честер, Пенсильвания, США).
Вестерн-блоттинг был модифицирован по сравнению с методом, описанным ранее (Liang et al, 2003). Белки из тканей печени получали с использованием буфера мочевины (8 М мочевина, pH 8,0). Белковые экстракты разделяли с помощью 12% SDS-PAGE и переносили на мембрану PDMF (Millipore, Billerica, MA, USA) согласно стандартному протоколу. После блокирования 5% обезжиренным молоком в течение 1 часа антитела в надлежащем разведении гибридизовали с мембраной при 4 ° C в течение ночи.Мембрану трижды промывали трис-забуференным физиологическим раствором с твин 20 (TBS / T) каждый раз по 10 мин и инкубировали со вторичным антителом в течение 1 ч при комнатной температуре. Белковый сигнал детектировали с помощью системы ECL Plus (Amersham Biosciences, Пискатауэй, Нью-Джерси, США). Сигналы количественно оценивали с помощью сканирующей денситометрии (Syngene, Кембридж, Великобритания).
Экспрессия генов Pyk2, FAK, эзрина и фибронектина в опухолевых тканях с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени
Образцы тканей хранили при -80 ° C до полной экстракции РНК.Суммарную РНК экстрагировали с помощью набора Rneasy Midi Kit (Qiagen, GmbH, Hilden, Германия). Около 0,5 мкг общей РНК из каждого образца использовали для проведения реакции обратной транскрипции (RT) с использованием реагентов обратной транскрипции TaqMan (Man et al, 2003) (Applied Biosystems Limited, Foster City, CA, USA). Продукт ОТ (1 мкл, мкл) использовали для проведения количественной ОТ-ПЦР в реальном времени с использованием набора реагентов TaqMan Core (Applied Biosystems) с помощью системы обнаружения последовательностей ABI PRISM 7700 (Applied Biosystems) (Man et al, 2003).Зонды и праймеры Pyk2, FAK, эзрина и фибронектина были коммерчески доступны от Applied Biosystems limited. Реагент TaqMan Ribosomal RNA Control (зонд 18S РНК и пара праймеров; Applied Biosystems) использовали для внутреннего контроля в той же лунке планшета для ПЦР для нормализации копий амплификации целевого гена. Все образцы были выполнены в трех экземплярах. Относительные уровни экспрессии генов рассчитывали как отношение экспрессии опухолевых или неопухолевых тканей к нормальной печени от здоровых живых доноров.
Функциональные исследования
Реагенты и плазмиды
Плазмиды PCDNA3-Pyk2 и PCDNA3-PRNK (C-конец Pyk2) были подарками д-ра Джозефа Лофтуса, клиника Mayo в Скоттсдейле, Скоттсдейл, США). Вектор PCDNA 3.1 (+) был приобретен у Invitrogen. Моноклональное антитело против Pyk2 (клон 11) было приобретено в BD Transduction Laboratories. Поликлональные антитела против Phospho-Pyk2 (Tyr402) были приобретены в Cell Signaling (Беверли, Массачусетс, США). Клетки PLC были приобретены в ATCC и выращены в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), содержащей 10% FBS, 2 мМ L-глутамин, 100 ед. Мл -1 стрептомицина (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США).Метастатические клетки HCC MHCC97L были подарком доктора Танга из Шанхайского университета Фудань (Lee et al, 2005).
Культура клеток, трансфекция и стабильные линии клеток
Клетки высевали в шестилуночные планшеты до 80% слияния. Клетки трансфицировали 1 мкл г лунка -1 плазмидами PCDNA 3.1, PCDNA-Pyk2, PCDNA-PRNK с использованием Fugene 6 (Roche, Базель, Швейцария). После трансфекции в течение ночи клетки заменяли на нормальную среду и давали возможность восстановиться в течение ночи. Клетки обрабатывали трипсином, высевали в новую 10-сантиметровую чашку для культивирования и оставляли для восстановления в течение 2 дней.Затем клетки выращивали в среде DMEM, содержащей G418 в количестве 0,6 мг / мл -1 , до тех пор, пока все нетрансфицированные клетки не погибли (21 день). Устойчивые клоны распределяли в 24-луночных планшетах с использованием цилиндров для клонирования и поддерживали в 0,3 мг мл -1 G 418 для дальнейшего исследования.
Анализ пролиферации
Клетки обрабатывали трипсином и подсчитывали с помощью гемоцитометра с 0,2% трипановым синим (Life Technologies). Около 5000 клеток высевали на 96-луночные планшеты со средой DMEM с добавлением 10% FBS, 2 мМ L-глутамина, 100 ед. Мл -1 стрептомицина (Life Technologies).3- (4,5-Диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолийбромид (МТТ) добавляли через 24-часовой интервал времени, и сигналы измеряли с помощью планшет-ридера (BioRad Hercules, Калифорния, США).
Анализ клеточной инвазии
Клетки обрабатывали трипсином и подсчитывали в 0,2% трипановом синем (Life Technologies). Подсчитывали около 10 000 клеток и ресуспендировали в 100 мкл л бессывороточной среды DMEM. Клетки высевали в верхнюю часть камеры инвазии (BD Biosciences, Сан-Диего, Калифорния, США). Нижняя часть камеры была заполнена DMEM с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки и оставлена на инкубацию при 37 ° C в течение 36 часов.Проникшие через камеру клетки окрашивали 0,1% кристаллическим фиолетовым и подсчитывали.
Экстракция ядерного и цитозольного белка
Ядерные и цитозольные белки экстрагировали с помощью набора для экстракции субклеточного протеома ProteoExtract ® (Calbiochem, EMD Biosciences Inc., Merck KGaA, Дармштадт, Германия) в соответствии с протоколом производителя.
Иммуноблоттинг
Для иммуноблоттинга фракции денатурировали в буфере для образцов и растворяли в 8–15% SDS-полиакриламидном геле.Белки были перенесены на мембрану PVDF (Millipore, Billerica, MA, USA), и иммуноблот-анализ был выполнен с использованием антител, указанных в подписях к рисункам. Иммунные комплексы на PVDF детектировали с помощью ферментно-связанной хемилюминесценции (Amersham Biosciences Corp., Пискатауэй, Нью-Джерси, США).
Исследования на животных
Была создана модель ортотопической опухоли печени у голых мышей с более высоким потенциалом местных (внутрипеченочных) и отдаленных (легкие) метастазов (Lee et al, 2005). Вкратце, приблизительно 1 × 10 7 клеток MHCC97H в 0.П / к вводили 2 мл питательной среды. в правый бок мышей, за которыми затем ежедневно наблюдали на предмет признаков развития опухоли. Когда подкожная опухоль достигала 1–1,5 см в диаметре, ее удаляли и разрезали на кубики размером примерно 1–2 мм, которые имплантировали в левую долю печени другой группы голых мышей. Опухоль печени и ткани легких собирали для иммуноокрашивания Pyk2 через 5 недель после имплантации опухоли. Опухоль печени и метастазы в легкие были подтверждены окрашиванием H&E.Протокол исследования in vivo на животных был одобрен Комитетом по использованию живых животных в обучении и исследованиях (CULATR) Университета Гонконга и соответствует стандартам, требуемым руководящими принципами UKCCCR. Номер проекта — CULATR-1133-05.
Статистический анализ
Тест χ 2 использовался для сравнения дискретных переменных. Для статистического сравнения непрерывных переменных использовался критерий Манна – Уитни U . Для анализа выживаемости использовался метод Каплана-Мейера с лог-ранговым тестом. P <0,05 считали статистически значимым. Расчет производился с использованием компьютерной программы SPSS версии 12 (SPSS, Чикаго, Иллинойс, США).
Справочное руководство по написанию сценариев Quartus II
% PDF-1.3 % 1 0 объект > эндобдж 2 0 obj >>> эндобдж 3 0 obj > поток application / pdf