Статья 781 ГК РФ. Оплата услуг
Гражданский кодекс Российской Федерации:
Статья 781 ГК РФ. Оплата услуг
1. Заказчик обязан оплатить оказанные ему услуги в сроки и в порядке, которые указаны в договоре возмездного оказания услуг.
2. В случае невозможности исполнения, возникшей по вине заказчика, услуги подлежат оплате в полном объеме, если иное не предусмотрено законом или договором возмездного оказания услуг.
3. В случае, когда невозможность исполнения возникла по обстоятельствам, за которые ни одна из сторон не отвечает, заказчик возмещает исполнителю фактически понесенные им расходы, если иное не предусмотрено законом или договором возмездного оказания услуг.
Вернуться к оглавлению документа: Гражданский кодекс РФ Часть 2 в действующей редакции
Комментарии к статье 781 ГК РФ, судебная практика применения
В п. 3.4 Постановления Конституционного Суда РФ от 23.01.2007 N 1-П содержится следующая правовая позиция:
Положения п 1 ст. 779, п. 1 ст. 781 ГК РФ не предполагают удовлетворение требования исполнителя о выплате вознаграждения по договору возмездного оказания услуг в зависимости от решения суда, которое будет принято в будущем
..Положения пункта 1 статьи 779 и пункта 1 статьи 781 ГК РФ, как не предполагающие в системе действующего правового регулирования отношений по возмездному оказанию правовых услуг удовлетворение требования исполнителя о выплате вознаграждения по договору возмездного оказания услуг, если данное требование обосновывается условием, ставящим размер оплаты услуг в зависимость от решения суда, которое будет принято в будущем, не могут рассматриваться как противоречащие Конституции Российской Федерации.
Аналогичная правовая позиция содержится в Постановлении Президиума ВАС РФ от 02.12.2003 N 11406/03 по делу N А40-46957/02-27-481:
Не может быть удовлетворено требование о выплате вознаграждения, размер которого обусловлен решением суда или государственного органа, которое будет принято в будущем
По смыслу статьи 779 Кодекса исполнитель может считаться надлежаще исполнившим свои обязательства при совершении перечисленных в договоре действий или осуществлении определенной деятельности.
В силу правовой природы отношений, возникающих из договора возмездного оказания услуг, не подлежат удовлетворению требования исполнителя о выплате вознаграждения, если данное требование обосновывается условием договора, ставящим размер, а равно и обязанность оплаты услуг в зависимость от решения суда или государственного органа, которое будет принято в будущем.
В Информационном письме Президиума ВАС РФ от 29.09.1999 N 48 «О некоторых вопросах судебной практики, возникающих при рассмотрении споров, связанных с договорами на оказание правовых услуг» содержатся аналогичные разъяснения:
..Не подлежит удовлетворению требование исполнителя о выплате вознаграждения, если данное требование истец обосновывает условием договора, ставящим размер оплаты услуг в зависимость от решения суда или государственного органа, которое будет принято в будущем.
В п. 5 Обзора судебной практики Верховного Суда РФ N 2 (2015), утвержденного Президиумом Верховного Суда РФ 26.06.2015 года, содержатся следующие разъяснения:
Дополнительное вознаграждение за услуги представителя в суде, обусловленное достижением положительного для заказчика процессуального результата, не может быть взыскано с другой стороны по делу в качестве судебных расходов.
..В соответствии с условиями договора возмездного оказания юридических услуг дополнительное вознаграждение выплачивается обществом его представителю за уже оказанные и оплаченные услуги, причем только в случае, если действия представителя привели к отказу в удовлетворении искового требования, то есть признается своего рода премированием представителя.
Сумма указанной премии зависит от воли сторон договора возмездного оказания юридических услуг. Дополнительное вознаграждение, установленное в результате соглашения заказчика и исполнителя юридических услуг, не может быть взыскано в качестве судебных расходов с процессуального оппонента заказчика, который стороной указанного соглашения не является.
могут ли меня привлечь к ответственности по ст.781 ГК РФ
Автор:
Татьяна , Город: Омск / обл Омская, 31.05.2020 17:11:45Интерторг предложил покупку через интернет на условиях оплаты при получении, на сегодняшний день данная покупка для меня не актуальна, я её не выкупаю, Интерторг прислал смс с сообщением о том, что если я не выкуплю продукт в течение 12 дней, они подадут на меня в суд по статье 781 ГК РФ. НА СКОЛЬКО ПРАВОМОЧНЫ ТАКИЕ ДЕЙСТВИЯ ПО ОТНОШЕНИЮ КО МНЕ? я никаких договоров не подписывала, все происходило на уровне телефонного разговора, в котором был предложен товар, который я НЕ ОБЕЩАЛА выкупить
Ваш ответ
Вы должны войти на сайт, чтобы оставлять ответы.
Другие вопросы:
#60972 07.10.2021 (13:54)
Авторские права. Прошу помощи
Могу ли я создать например телеграмм канал, где буду копировать новости туризма с других страниц с указанием на источника статьи? Будет ли это нарушением авторских прав? Могу ли я делать рекламу на таком канале? (Просто где — то слышал что можно так делать, но деньги нельзя зарабатывать на этом)
#60928 05.10.2021 (13:31)
ГПХ и Мат отвественность
Устроился на работу продавцом, по договору ГПХ. Магазин только открывался весь товар привезли сразу не кто его не успел проверить толком накладные прямо говоря заставили подписать, простых продавцов. При увольнении всем нам сказали что зарплату не выплатят пока не проведут инвентаризацию, назначили дату инвентаризации… При инвентаризации магазин открыт свободный доступ покупателей продолжается. Так вот как быть дальше, по итогу хотят присвоить недостачу на продавцов. И могут ли если не был подписан договор об мат ответственности?
#60917 04.10.2021 (14:51)
Взыскание судебных расходов
Здравствуйте! Мой иск удовлетворили частично. Как взыскать судебные расходы? Можно ли по почте отправить в суд заявление о взыскании? Договоры, чеки прикладывать в оригиналах или можно в копиях? Надо ли ответчику направлять копию заявления? Надо ли направлять копию в прокуратуру, если прокурор сидел на заседаниях? И что потом: суд пригласит на заседание или сам рассмотрит вопрос о компенсации расходов?
Оплата услуг после их оказания: срок, отсрочка, проценты
Оплата услуг после их оказания – это единовременная оплата всех услуг или части их цены через определенное время после завершения оказания услуг.
Согласно п. 1 ст. 781 ГК РФ заказчик обязан оплатить услуги в сроки и в порядке, которые указаны в договоре. Таким образом, сторонам рекомендуется согласовать соответствующие условия.
При оплате услуг после оказания заказчик может определенное время пользоваться причитающимися исполнителю денежными средствами. В этом случае сторонам необходимо решить, будут ли начисляться на данную сумму проценты.
Возможность согласовать начисление процентов на сумму денежного обязательства за период пользования денежными средствами предусмотрена п. 1 ст. 317.1 ГК РФ.
Кроме того, в договор может быть включено условие о коммерческом кредите (ст. 823 ГК РФ).
Срок оплаты услуг после их оказания
Статья 781 ГК РФ не предусматривает конкретного срока для исполнения обязанности по оплате оказанных услуг, поэтому сторонам рекомендуется согласовать этот срок в договоре. Стороны в соответствии со ст. ст. 190, 191 ГК РФ могут определить его:
- календарной датой;
- периодом времени, который может исчисляться с календарной даты или события.
Кроме того, если срок оплаты определяется периодом времени, стороны могут согласовать условие о том, что данный период исчисляется с момента исполнения обязанностей исполнителем или наступления иных обстоятельств, предусмотренных законом или договором (п. 1 ст. 314 ГК РФ).
Примеры формулировки условия:
“Заказчик обязан оплатить оказанные услуги не позднее “___”________ 20__ г.”.
“Заказчик обязан оплатить оказанные услуги в течение _____ рабочих дней с момента получения (принятия) услуг”.
Если срок оплаты услуг после их оказания не согласован
В этом случае условие об оплате услуг будет не согласовано и у заказчика возникнет обязанность их оплатить в соответствии с п. 2 ст. 314 ГК РФ в течение семи дней с момента предъявления исполнителем требования, если иной срок не установлен законом, иными правовыми актами или не вытекает из обычаев либо существа обязательств
Особенности договора на участие в выставке
Договор об организации выставки носит смешанный характер и Гражданским кодексом РФ не описан. На практике он заключается по правилам договора возмездного оказания услуг. При этом такое соглашение почти всегда содержит элементы договора аренды и может включать условия о выполнении подрядных работ.
Напомним, что правила о свободе договора, установленные ст. 421 Гражданского кодекса РФ (далее – Кодекс, ГК РФ), позволяют заключать сделки, в которых содержатся элементы различных договоров, предусмотренных законом или иными правовыми актами (смешанный договор). При этом к отношениям сторон по смешанному договору будут применяться в соответствующих частях правила о договорах, элементы которых содержатся в смешанном договоре.
К обязанностям организатора выставки, которые непосредственно связаны с оказанием услуг, относятся обязанности предоставлять заказчику всю необходимую информацию и документы о выставке, консультировать заказчика. Выставочный договор может также содержать условия о предоставлении рекламных услуг, услуг охраны, промоутеров, услуг по приему посетителей, организации фуршета и других.
К сопутствующим обязанностям организатора выставки относятся обеспечение доступа заказчика на выставку, а также доступа иных лиц, присутствие которых необходимо для работы на выставке. Отдельно прописывается возможность привлечения заказчиком третьих лиц для оборудования выставочной площади. Если организатор допускает использование заказчиком собственных материалов для установки стендов и оборудования, в договоре указываются технические требования и требования безопасности, которым они должны соответствовать. В связи с этим нужно быть готовым к тому, что если для оборудования выставочной площади заказчик будет привлекать стороннюю организацию, ему понадобятся дополнительные документы, как для работников, так и для материалов, которые будут привлекаться и использоваться заказчиком.
Разграничение в соглашении об организации выставки условий, которые непосредственно или опосредованно связаны с оказанием услуг, и условий, связанных с подрядными отношениями и арендой, необходимо для четкого определения норм, которыми будут регулироваться те или иные положения смешанного договора.
Порядок оказания перечисленного выше комплекса услуг будет подчиняться правилам гл. 39 ГК РФ – Возмездное оказание услуг.
Единственным существенным условием договора возмездного оказания услуг является его предмет – это совершение исполнителем определенных действий или осуществление им определенной деятельности (ст. 779 ГК РФ). Таким образом, в предмете выставочного договора должно быть прямое указание на услуги по организации и проведению выставки.
Специфика любого договора на оказание услуг в том, что результат его исполнения всегда носит нематериальный характер. В связи с этим заказчик несет риски при невозможности исполнения соглашения по обстоятельствам, за которые ни одна из сторон не отвечает (п. 3 ст. 781 ГК РФ). Это означает, что при невозможности исполнения заказчик обязан будет оплатить организатору выставки фактически понесенные им расходы, даже если выставка не состоится.
Так, по делу о взыскании неосновательного обогащения выставочный центр отказал заказчику в возврате предоплаты по договору, ссылаясь на то, что услуги не были оказаны в связи с обстоятельствами, которые от организатора выставки не зависели (постановление ФАС Московского округа от 17.06.2011 № КГ-А40/5421-11 по делу № А40-100045/10-53-832). Причина отказа судом была признана необоснованной (организатор выставки не получил разрешение на ее проведение). Однако правило о переводе рисков на заказчика в случае невозможности оказания услуги, установленное п. 3 ст. 781 ГК РФ, создает условия для возникновения подобных споров. Указанную норму можно нивелировать соглашением сторон.
Нематериальный характер результата оказания услуги определяет также и судьбу имущества, которое используется для ее оказания. В данном случае применяются правила ст. 211 ГК РФ: если иное не будет предусмотрено договором, риск случайной гибели или случайного повреждения имущества несет его собственник (то есть организатор выставки). Учитывая диспозитивность нормы, следует обращать внимание на условия договора, по которым указанные риски переложены на заказчика.
По общему правилу, условие о сроках оказания услуг не является существенным. В соответствии со ст. 783 ГК РФ к договору возмездного оказания услуг применяются общие положения о подряде, в том числе правила о сроках выполнения работ. Однако согласно позиции Президиума ВАС РФ, изложенной в Информационном письме 25.02.2014 № 165, отсутствие согласованного сторонами условия о сроках оказания услуг само по себе не влечет признания договора возмездного оказания услуг незаключенным.
Кроме того, в письме цитируется, что сроки оказания услуг не являются его невосполнимым условием: к соответствующим отношениям сторон могут быть применены общие положения ГК РФ о гражданско-правовых договорах и обязательствах (в частности, п. 2 ст. 314 ГК РФ). Описанные рекомендации суда следует учитывать в случае попытки контрагента признать договор незаключенным.
Однако, несмотря на необязательность в договоре об оказании услуг условия о сроке, считаем, что специфика выставочного договора требует его указания. Это защитит заказчика на случай переноса даты проведения выставки, позволит возместить убытки без споров о надлежащих сроках исполнения по договору. Это особенно важно в связи с новой редакцией, упомянутой ст. 314 ГК РФ, которой установлен семидневный срок исполнения обязательства, на случай, если в договоре сроки исполнения не определены. Очевидно, что при проведении выставки, например, в другом городе, сроки, установленные данной статьей, могут оказаться неприемлемыми для заказчика.
Выставочный договор может содержать элементы договора подряда, когда организатор выставки берет на себя обязательства по установке стендов, оборудованию выставочной площадки заказчика. Рекомендуем разграничить в договоре те отношения, которые регулируются правилами об оказании услуг и те, которые будут регулироваться нормами о подряде. Советуем в договоре делать ссылки на конкретные статьи Гражданского кодекса, регулирующие те или иные отношения, или оформлять несколько договоров.
Напомним, что подряд всегда предполагает получение материального результата, в отличие от услуги, результат которой нематериален и потребляется в момент ее предоставления. Важно, что существенными условиями договора подряда являются условия о предмете (содержание, объем и результат работы) и о сроке выполнения работы.
Таким образом, договор об организации выставки, в части обязанностей организатора по изготовлению и оборудованию стендов, всегда должен содержать условия о сроках их изготовления и установки.
Договор об организации выставки предполагает передачу помещения, части помещения в пользование, то есть содержит элементы договора аренды. Существенными условиями договора аренды являются условия о предмете и о размере арендной платы (п. 1 ст. 654 ГК РФ).
Пунктом 3 ст. 607 ГК РФ прямо установлено, что в договоре аренды должны быть указаны данные, позволяющие определенно установить имущество, подлежащее передаче арендатору в качестве объекта аренды. При отсутствии этих данных в договоре условие об объекте, подлежащем передаче в аренду, считается несогласованным сторонами, а соответствующий договор не считается заключенным.
Таким образом, в договоре об организации выставки должно быть четко прописано, какой именно павильон передается, его площадь и иные характеристики, позволяющие идентифицировать объект.
Правила ст. 654 ГК РФ об обязательном указании размера арендной платы за аренду здания или сооружения применяются к договорам об аренде помещений в силу сложившейся судебной практики, а также позиции, изложенной в Информационном письме Президиума ВАС РФ от 01.06.2000 № 53.
Отметим, что условие о цене не является существенным для договора возмездного оказания услуг. При отсутствии в договоре таких условий цена определяется по общим правилам ГК РФ – в соответствии с п. 3 ст. 424 Кодекса. Однако в связи со смешанным характером выставочного договора на арендные правоотношения указанное правило не распространяется. Если стороны не определят цену за аренду, соглашение в этой части будет признано незаключенным. Указание в выставочном договоре сроков и цены оказанных работ и услуг необходимо не для соблюдения императивных правил ГК РФ, а во избежание споров с налоговыми органами.
В этих же целях следует оформлять акты о расходах на участие в выставке, акты приемки оказанных работ (услуг). Что касается передачи помещения в аренду, то по правилам ст. 655 ГК РФ, оформление такого акта является обязательным.
Смешанный характер соглашения об организации выставки имеет правовое значение при разрешении споров о возможности заказчика отказаться от договора. Кодексом предусмотрена возможность одностороннего отказа заказчика от исполнения договора при условии оплаты исполнителю фактически понесенных им расходов (ст. 782 ГК РФ). При этом по правилам договора аренды односторонний отказ от исполнения обязательства не допускается, если только стороны не установят такую возможность своим соглашением (ст. 310 ГК РФ).
То есть если суд будет квалифицировать правоотношения сторон как соглашение об оказании услуг, отказавшись от участия в выставке, заказчик обязан будет возместить только реальный ущерб, который понес организатор на момент отказа. Если же судом будет признано, что нарушены арендные обязательства, организатор имеет право возместить убытки в полном объеме: реальный ущерб и упущенную выгоду.
В одном из судебных дел было удовлетворено требование заказчика о возврате денежных средств, оплаченных по заявке на участие в выставке (постановление ФАС Северо-Западного округа от 10.09.2010 по делу № А56-80726/2009). Суд пришел к выводу, что заявка-договор на участие в выставке не может считаться смешанным, содержащим элементы договора аренды, так как не предусматривает передачу во временное владение истцу индивидуально определенного объекта недвижимого имущества. В связи с этим был сделан вывод, что в данном случае не могут применяться нормы о нарушении обязательств по аренде, а установленный в заявке запрет ее аннулирования в одностороннем порядке противоречит Кодексу. Суд указал, что односторонний отказ истца от участия в выставке не является правонарушением, поскольку такое право предоставлено заказчику в силу п. 1 ст. 782 ГК РФ и единственным последствием отказа является обязанность заказчика оплатить исполнителю фактически понесенные расходы.
Таким образом, односторонний отказ заказчика от договора без дополнительных санкций возможен до момента, когда правоотношения не получили смешанный характер и стороны не оформили соглашение о передаче выставочного помещения.
Возврат билетов и путёвок из-за коронавируса. Как это сделать?
Заглянуть на сайт Ростуризма и изучить актуальную информация об имеющихся угрозах, закрытых границах, об ограничении въезда и выезда в другие страны.
Если есть рекомендации Ростуризма или других уполномоченных органов о непосещении той или иной страны, то можно вернуть деньги за путевку в полном объеме, если Вы еще не начали путешествие, и за оставшуюся часть отдыха, если начали (правовое основание – ст. 14 Закона «Об основах туристической деятельности в РФ».
Туроператор или турагент могут Вам предложить перенести отдых или изменить направление на разрешенное, но решать только Вам. Если Вас устроит – соглашайтесь, если нет – возвращайте деньги.
Если ограничений по направлению никаких нет, но Вы просто боитесь короновируса, то договор с турфирмой или туроператором можно расторгнуть и просить вернуть деньги за исключением фактически понесенных расходов (правовое оснований – ст. 10 Закона «Об основах туристической деятельности в РФ», ч. 3 ст. 781 ГК РФ).
Если не согласны с их расчетом расходов, можно оспорить его в суде. Расходы в любом случае должны быть подтверждены документально, а не выражены в виде штрафов.
Про билеты, приобретенные самостоятельно: если рейс отменен, то это вынужденный отказ, и даже по невозвратному билету вам должны вернуть деньги. Актуальную информацию по рейсам и полетам следует уточнять у Вашей авиакомпании и на сайте Ростуризма. Возврат можно оформить по телефону или через сайт. Авиакомпании могут предложить Вам перенести рейс, если Вам будет удобно.
Если же никаких ограничений на ваше направление не существует, рейсы не отменены, не задержаны, ограничений в принимающей стране нет, то возврат будет зависит от тарифа и от правил авиакомпании.
В свою очередь, считаем, что потребитель вправе требовать 100% возврат денежных средств, даже если в стране не введены ограничения и границы не закрыты, в силу существенно изменившихся обстоятельств с момента заключения договора (ч. 3 ст. 451 ГК РФ).
Обращайтесь в юридическую компанию «Альтернатива» — мы поможем вернуть вам деньги.
Консультация по записи: 322-22-14.
ООО ФПК «Альтернатива»
Бердск, ул. Ленина, 94, 3-й этаж, офис 2
тел. +7 (383) 322-22-14
Наш сайт fpk-alternativa.ru
Инстаграм https://www.instagram.com/alternativa.fpk
Инфоцентр – «ТЛС-ПРАВО»
Инфоцентр – «ТЛС-ПРАВО»27 мая 2013
Исходя из положений ст. ст. 779, 781 ГК РФ, ст. 37 Закона РФ от 07.02.1992 № 2300-1 «О защите прав потребителей» (далее — Закон о защите прав потребителей) оплате подлежат фактически оказанные заказчику услуги.Вместе с тем Закон о защите прав потребителей не регламентирует порядок расчетов сторон по договору возмездного оказания услуг, в случае, если услуги фактически не были оказаны, но при этом заказчик не отказался от дальнейшего исполнения договора в одностороннем порядке.
В данной ситуации необходимо применять общие положения ГК РФ, предписывающие определенный порядок расчетов сторон по договору возмездного оказания услуг.
В соответствии с п. 3 ст. 781 ГК РФ в случае невозможности исполнения услуг по обстоятельствам, за которые ни одна из сторон не отвечает, заказчик должен возместить исполнителю фактически понесенные им расходы, если иное не предусмотрено законом или договором.
При этом в ГК РФ не перечислены случаи, которые могут расцениваться как обстоятельства, за которые ни одна из сторон не отвечает.
Согласно судебной практике к таким случаям относятся болезнь заказчика либо лица, непосредственно потребляющего услугу (Постановление ФАС Уральского округа от 14.10.2009 № Ф09-7887/09-С1).
Вместе с тем в силу указанной нормы исполнитель вправе потребовать возмещения фактически понесенных им расходов.
В рассматриваемой ситуации такими документами могут быть: расчет плановой себестоимости места в детском саду, плановая смета и расчет затрат стоимости содержания места в детском саду в период отсутствия ребенка (расходы на выплату заработной платы работникам детского сада, налоги, оплата коммунальных услуг, хозяйственные расходы на санитарную обработку, обслуживание пожарной сигнализации, охрану и другие расходы).
При документальном подтверждении расчета понесенных расходов исполнитель услуги вправе удержать из уплаченной суммы аванса соответствующую сумму расходов, в ином случае, — сумма аванса подлежит возврату заказчику.
Таким образом, исполнитель не вправе удерживать сумму уплаченного аванса при условии, что услуги не были оказаны по обстоятельствам, за которые ни одна из сторон не отвечает (например, болезнь лица, непосредственно потребляющего услугу).
При этом исполнитель имеет право на возмещение фактически понесенных им расходов при условии их документального подтверждения.
Диспозитивный характер п. 3 ст. 781 ГК РФ, по общему правилу, позволяет сторонам договора оговаривать в договоре иные последствия невозможности исполнения договора при возникновении обстоятельств, за которые ни одна из сторон не отвечает.
Тем не менее при рассмотрении аналогичных споров, вытекающих из договоров возмездного оказания услуг потребителям, суды общей юрисдикции с учетом ст. 16 Закона о защите прав потребителей исходят из принципа защиты интересов более слабой стороны договора, т. е. потребителя.
При таких обстоятельствах условия договора, исключающие право на возврат уплаченного в счет исполнения услуги аванса или содержащие обязанность уплатить вознаграждение в случае, если услуга не оказана по объективным, не зависящим от сторон обстоятельствам, признаются неправомерными и противоречащими п. 3 ст. 781 ГК РФ.
Запрет на включение в договор таких условий не препятствует исполнителю требовать возмещения понесенных расходов (Обзор Красноярского краевого суда от 01.05.2008 «Обзор судебной практики рассмотрения судами дел о защите прав потребителей»).
Проблемы возмездного оказания услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений Текст научной статьи по специальности «Экономика и бизнес»
О. А. Кычина
ПРОБЛЕМЫ ВОЗМЕЗДНОГО ОКАЗАНИЯ УСЛУГ ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ ОБСЛУЖИВАНИЮ ЗДАНИЙ
И СООРУЖЕНИЙ
Оценивается законодательство, регулирующее отношения в сфере возмездного оказания услуг. Раскрывается содержание договора, рассматривается его правовая форма.
В настоящее время визитной карточкой крупнейших городов мира становятся мега-здания и сооружения. В России за последние десять лет введено в эксплуатацию несколько десятков тысяч такого рода строений — деловых, торговых и развлекательных центров. В Москве возведено множество мостов через реку Москву, представляющих собой сложнейшие инженерные коммуникации. Ждут своего воплощения еще более крупные проекты.
Создание мега-зданий и сооружений породило небывалый спрос на услуги по их техническому обслуживанию. Теперь, когда происходит укрупнение бизнеса, уже построенные здания и сооружения собственники недвижимости отдают в доверительное управление. Собственники недвижимости, управляющие компании и есть потенциальные потребители услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений. В таких сделках они выступают заказчиками. В круг потребителей услуги входят и товарищества собственников жилья, жилищно-строительные кооперативы.
Понятие «услуга» — не порождение новейшего времени. В классическом римском праве уже обнаруживаются детально разработанные договорные конструкции, опосредующие процесс оказания услуг. В праве Древнего Рима проводилось четкое разграничение между договором найма услуг и договором подряда. Основным отличием считалось наличие или отсутствие законченного результата деятельности исполнителя [7. С. 58].
После римских юристов услуги как правовой институт практически не рассматривались и не развивались вплоть до начала XIX в. В начале Х1Х в. услуги нашли свое кодифицированное выражение во Французском гражданском кодексе Наполеона 1804 г., а позднее — в Германском гражданском уложении 1900 г.
Первое законодательное закрепление услуг в России появляется в Своде законов гражданских, изданных в 1832 г., хотя разграничение между понятиями «услуга» и «работа» здесь отсутствует. Услуги не упоминались в законодательных актах России вплоть до 1993 г. Однако
понятие «услуга» активно обсуждалось в работах известных экономистов и правоведов.
В 1993 г. категория «услуга» впервые появилась в Конституции РФ: «В Российской Федерации гарантируются единство экономического пространства, свободное перемещение товаров, услуг и финансовых средств, поддержка конкуренции, свобода экономической деятельности» (п. 1 ст. 8). «На территории Российской Федерации не допускается установление таможенных границ, пошлин, сборов и каких-либо иных препятствий для свободного перемещения товаров, услуг и финансовых средств» (п. 1 ст. 74).
Таким образом, Конституция РФ ставит услугу в один ряд с товарами и финансовыми средствами. Приравнивание услуг к товарам и финансовым средствам позволяет говорить о том, что услуга становится объектом гражданского права. Позднее это находит свое подтверждение и в Гражданском Кодексе РФ (ст. 128 ГК РФ): «К объектам гражданских прав относятся вещи, включая деньги и ценные бумаги, иное имущество, в том числе имущественные права; работы и услуги…» Кроме того, в Гражданском кодексе 1995 г. появилась отдельная глава 39 «Возмездное оказание услуг», в которой содержится только пять статей. Статьи носят общий характер, не отражают специфику видов возмездных услуг и тем самым не обеспечивают в полной мере защиту прав участников обязательств по возмездному оказанию услуг. Поэтому практически необходимо каждый вид возмездного оказания услуг, в том числе и услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений, регулировать специальными нормативно-правовыми актами (федеральными законами).
Договор возмездного оказания услуг как правовая форма обязательств по техническому обслуживанию зданий и сооружений предусматривает, что исполнитель обязуется по заданию заказчика оказать услуги (совершить определенные действия или осуществить определенную деятельность), а заказчик обязуется оплатить услуги. Как видим, определение расплывчато, носит общий характер, что не позволяет участникам гражданского оборота в данной сфере общественных отношений отличить понятие «услуга» от понятия «работа». Разграничение услуг и работ важно для четкого регулирования прав в этой сфере отношений.
В гражданско-правовой доктрине общим признаком, объединяющим договоры по возмездному оказанию услуг и одновременно отличающим их от договоров подряда, называют «отсутствие в овеществленной форме результата выполненной работы» [8. С. 489; 2. С. 396]. Другим признаком следует считать «характер интереса». Интерес заказчика в договоре возмездного оказания услуг «сводится к соверше-
нию действий» [1. С. 215]. «Результату предшествует совершение действий, не имеющих материального воплощения, составляющих вместе с ним единое целое. Поэтому при оказании услуг продается не сам результат, а действие к нему» [11. С. 119]. Третий отличительный признак сформулирован непосредственно законодателем. Статья 780 ГК РФ определяет, что услуги должны быть оказаны лично, т. е. они тесно связаны с личностью услугодателя. Четвертый признак — «характер результата». Результат возмездного оказания услуг не имеет овеществленной формы, утверждает гражданское право [4]. Следовательно, деятельность услугодателя — по договору возмездного оказания услуг — не воплощается в овеществленном результате [5. С. 633-634.]. Пятый признак — «гарантированность результата». Услугодатель не гарантирует достижение предполагаемого результата [5. С. 633-634]. Достижение предполагаемого результата может присутствовать только при договоре подряда.
Рассмотренные доктринальные признаки не выражают, однако, специфику отдельных видов возмездного оказания услуг, в том числе услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений. В практике арбитражных судов выделяется «полезный эффект» как признак возмездного оказания услуг.
По нашему мнению, признаками, отражающими специфику всех услуг, являются, во-первых, передача и потребление профессиональных знаний и, во-вторых, полезный эффект нематериального характера от применения профессиональных знаний. Профессиональные знания — это совокупность познаний в определенной области [10. С. 201]. В области технического обслуживания зданий и сооружений это знание инженерных систем зданий и сооружений, способов их технического обслуживания и др. Полезный эффект нематериального характера — то или иное поведение заказчика в зависимости от содержания полученных от исполнителя сведений.
Таким образом, под услугой понимается реализация и потребление профессиональных знаний, направленных на получение полезного эффекта нематериального характера. Это определение целесообразно внести в пункт 2 статьи 779 ГК РФ. С его помощью появляется возможность унифицировать понятие «услуга». Исходя из него можно сформулировать видовое определение услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений.
Услуга по техническому обслуживанию зданий и сооружений — это основанные на законе и/или договоре передача и потребление профессиональных знаний в данной области с целью получения полезного эффекта нематериального характера у заказчика. Передача
и потребление означают проведение комплекса мероприятий по техническому обслуживанию зданий и сооружений.
Комплексные мероприятия по договору возмездного оказания услуг по техническому обслуживанию зданий с сооружений включают:
— фактические действия — проведение технического визуального осмотра специалистом здания, сооружения, оборудования, а также проведение технического осмотра с использованием технических средств;
— юридические действия — составление акта о проведении технического осмотра здания, сооружения; письменное уведомление заказчика о целесообразности проведения ремонта, об аварийном состоянии здания и сооружения, заключение сделок и т. д., выдача доверенности исполнителю на выполнение юридических действий; контроль исполнителя за проведением ремонтных и иных работ и т. д.
Условия по техническому обслуживанию зданий и сооружений определяются сторонами в договоре. Договор заключается путем составления единого документа и его подписания сторонами. Спор, связанный с заключением договора, по взаимному согласию сторон, передается на рассмотрение в суд. Сторонами договора возмездного оказания услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений являются заказчик и исполнитель.
ГК РФ не устанавливает каких-либо ограничений в отношении субъектов обязательства (заказчика и исполнителя), в связи с чем исполнителем и заказчиком могут быть любые физические и юридические лица. Исполнителем по договору возмездного оказания услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений является лицо, осуществляющее предпринимательскую деятельность на основании специального разрешения (лицензии) [п. 1 ст. 49 ГК РФ]. В штате исполнителя должно быть не менее 50% специалистов в области технического обслуживания с высшим образованием и опытом работы более 5 лет. Каких-либо ограничений в отношении заказчика гражданское законодательство не устанавливает.
Содержание договора составляет совокупность условий, по которым сторонами достигнуто соглашение [6. С. 431]. Одно из самых существенных — условие о предмете договора. Под предметом договора понимаются профессиональные знания по техническому обслуживанию зданий и сооружений, используемые при проведении комплекса мероприятий и направленные на достижение полезного эффекта нематериального характера. Полезный эффект нематериального характера в этом случае проявляется в выборе поведения заказчика в зависимости от содержания сведений, полученных от исполнителя. Например, заказчик может согласиться на рекомендованный исполнителем ремонт зданий и сооружений или отказаться от него и т. п. От этого зависят условия, при
которых здания и сооружения будут находиться в надлежащем состоянии, обеспечивающем их функциональное назначение (эксплуатацию).
В соответствии с пунктом 1 статьи 781 ГК РФ оплата услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений производится в порядке и в сроки, предусмотренные договором. За нарушение условий договора виновная сторона уплачивает другой стороне штраф в размере, определяемом в договоре.
Гражданским законодательством установлен порядок оплаты услуг при невозможности исполнения обязательств как по вине заказчика, так и при возникновении обстоятельств, за которые ни одна из сторон не отвечает. В случае невозможности исполнения, возникшем по вине заказчика, услуги — в соответствии с пунктом 2 статьи 781 ГК РФ -подлежат оплате в полном объеме, если иное не предусмотрено законом или договором возмездного оказания услуг. Когда невозможность исполнения возникла по обстоятельствам, за которые ни одна из сторон не отвечает, заказчик — согласно пункту 3 статьи 781 ГК РФ — возмещает исполнителю фактически понесенные им расходы, если иное не предусмотрено законом или договором.
Сроки исполнения договора возмездного оказания услуг определяются по соглашению сторон. Несмотря на то, что ГК РФ не содержит специальных правил о сроке действия договора, его определение имеет большое значение.
Заказчик имеет право:
— требовать от исполнителя надлежащего оказания услуг по техническому обслуживанию;
— осуществлять контроль за деятельностью исполнителя;
— расторгнуть договор.
Заказчик обязан:
— своевременно и в полном объеме оплатить услуги исполнителю;
— обеспечить допуск исполнителя в здание и сооружение;
— предоставлять исполнителю техническую документацию о здании и сооружении;
— выделить исполнителю помещение для технических целей.
Исполнитель имеет право:
— требовать своевременной и полной оплаты за оказанные услуги;
— требовать предоставления технической документации о здании и сооружении; допуска в здание и сооружение;
— расторгнуть договор.
Исполнитель обязан:
— надлежащим образом исполнять условия договора возмездного оказания услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений;
— предоставлять заказчику отчетность о техническом состоянии зданий и сооружений; по поручению заказчика осуществлять контроль за проведением ремонтных работ в здании, сооружении.
Гражданское законодательство закрепило порядок изменения и расторжения договора возмездного оказания услуг. В соответствии с пунктом 1 статьи 782 ГК РФ заказчик вправе отказаться от исполнения договора при условии оплаты исполнителю фактически понесенных им расходов. Руководствуясь пунктом 2 статьи 782 ГК РФ, исполнитель вправе отказаться от исполнения обязательств по договору возмездного оказания услуг лишь при условии полного возмещения заказчику убытков.
Проведенные исследования и современная практика подтверждают, что для повышения эффективности в данной сфере гражданско-правовых отношений необходимо принять федеральный закон «О возмездном оказании услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений», в котором должна быть отражена специфика договора и его исполнения.
Список литературы
1. Брагинский М. И., Витрянский В. В. Договорное право. Книга третья: Договоры о выполнении работ и оказании услуг. М.: Статут, 2002.
2. Гражданский кодекс РФ. Часть II. Текст, комментарий, алфа-витно-предметный указатель / Под ред. О. М. Козырь, А. Л. Маковского, С. А. Хохлова / МЦФЭР. М., 1996.
3. Гражданский кодекс Российской Федерации. Части первая, вторая и третья. М.: Омега-Л, 2003.
4. Гражданское право: Учебник: В 2 т. Т. II. Полутом 2 / Отв. ред. проф. Е. А. Суханов. 2-е изд., перераб. и доп. М.: БЕК, 2003.
5. Гражданское право: Учебник. 4-е изд., перераб. и доп. / Под ред. А. П. Сергеева, Ю. К. Толстого. Т. 2. М.: ООО «ТК Велби», 2003.
6. Гражданское право: Учебник. Ч. 1 / Под ред. А. Г. Калпина, А. И. Масляева. 2-е изд., перераб. и доп. М: Юристъ, 2002.
7. Измайлов Е. В. Место договора на выполнение маркетинговых исследований в системе гражданско-правовых договоров // Юрист. 1999. № 8.
8. Иоффе О. С. Обязательственное право. М.: Юридическая литература, 1975.
9. Новицкий И. Б. Римское право. М.: ТЕИС, 1997.
10. Ожегов С. И. Словарь русского языка. М.: Русский язык, 1986.
11. Романец Ю. Договоры возмездного оказания услуг // Закон. 1999. № 10.
Повышенное внимание к риску ожирения
Связь между ожирением и несколькими основными причинами смерти, такими как сердечно-сосудистые заболевания, диабет и рак, хорошо известна. Однако исследователи обнаружили доказательства того, что ожирение также является значительным фактором риска по крайней мере для 13 различных видов рака 1 — основной причины смерти застрахованного населения, включая многие из наиболее распространенных видов рака, повышающих риск смертности, таких как рак поджелудочной железы, колоректальный рак и рак груди. 2
Признавая эту ключевую ассоциацию, Munich Re установило партнерство с Американским онкологическим обществом для финансирования ключевых исследований, посвященных воспалительному компоненту ожирения, а также влиянию диеты и упражнений на снижение риска рака.
По словам доктора Нила Айенгара, онколога онкологического центра Memorial Sloan Kettering, по крайней мере 1 из 6 смертей от рака среди мужчин и 1 из 7 случаев смерти от рака среди женщин связаны с ожирением. 1
Наш опыт с COVID-19 также вызывает новые опасения.Анализы показали, что у людей с индексом массы тела (ИМТ) 35 и более дела обстоят значительно хуже, и одно исследование пришло к выводу, что «ожирение играет огромную роль в риске смерти от COVID-19, особенно у пациентов мужского пола и более молодого населения. ” 3 Это говорит о том, что в будущих пандемиях, связанных с респираторными заболеваниями, риск для людей с ожирением также может возрасти. Это особенно важно, учитывая, что более трети американцев и более четверти канадцев в настоящее время страдают ожирением.
Краткосрочные исследования смертности не отражают истинный риск, связанный с увеличением распространенности ожирения в Северной Америке, особенно для молодых кандидатов и более тяжелых кандидатов
Поскольку как распространенность ожирения, особенно среди молодежи, так и частота эпидемий, вызванных глобализацией и изменением климата, продолжают расти, мы ожидаем, что риск, связанный с ожирением, также будет расти. Это делает более важным, чем когда-либо, использование соответствующих инструментов для выявления «здорового ожирения» и точного определения цены для лиц с повышенным риском.
IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Воспаление, вызванное макрофагами, вызывает преобразование транскриптома в мезенхимальных стромальных клетках, увеличивая их потенциал для восстановления тканей
1. Введение
Трансплантация клеток — это терапевтическое решение для поврежденных тканей с низкой регенеративной способностью и воспалительных заболеваний [1,2,3,4, 5,6]. Трансплантаты мезенхимальных стромальных клеток (МСК) поддерживают восстановление тканей на животных моделях при различных состояниях за счет паракринного запуска механизмов эндогенного восстановления, включая модуляцию местного воспалительного ответа и реваскуляризацию [7,8,9,10,11].В свою очередь, МСК реагируют на сигналы в среде поврежденной ткани и организуют события восстановления с помощью локальных клеток [12,13,14]. Потенциал и преимущества МСК для восстановления тканей послужили поводом для проведения текущих клинических испытаний по лечению, среди прочего, повреждения сердца [4,15], повреждения спинного мозга [2], восстановления опорно-двигательного аппарата [16,17] и воспалительных заболеваний [18,19]. ]. Как правило, влияние трансплантатов МСК на восстановление тканей и восстановление функций ограничено [20,21,22]. Поиск средств усиления воздействия трансплантатов МСК на восстановление тканей продолжается.Относительно неизученный метод повышения паракринной активности трансплантатов МСК — кондиционирование клеток перед использованием. Естественно, циркулирующие сигнальные молекулы, специфичные для поврежденной ткани, стимулируют МСК возвращаться в рану и участвовать в восстановлении [23,24,25,26]. Стратегии трансплантации обычно используют нестимулированные, наивные МСК, имплантируемые непосредственно в поврежденную ткань-мишень [1,2]. Кондиционирование может применяться к МСК перед трансплантацией (т.е. предварительное кондиционирование или праймирование) с целью облегчения их введения и усиления их репарационных взаимодействий в месте повреждения [27].Предыдущие данные показали, что МСК, подвергнутые гипоксии [28], липополисахаридам (ЛПС) [28,29] или цитокинам [27,30], изменяют свой секретом в поддержку восстановления. Мы рассуждали, что воздействие воспаления, вызванного макрофагами, может вызвать у МСК увеличивают их ремонтный потенциал. Воспаление — это фундаментальное событие, которое подготавливает поврежденную ткань к необходимым восстановительным процессам [31]. Провоспалительные макрофаги играют преобладающую роль на ранних и патологически хронических стадиях воспаления [32,33].МСК и макрофаги взаимно взаимодействуют во время регенеративного заживления ран [13,14,34,35]. Здесь мы исследовали вызванное макрофагами воспаление как средство для кондиционирования МСК посредством анализа их транскриптома и секретома и оценили потенциальную терапевтическую ценность его использования в качестве полезного метода предварительного кондиционирования перед трансплантацией.Мы обнаружили, что МСК, обусловленные воспалением, происходящим из макрофагов, активируют гены и увеличивают секрецию факторов роста, широко связанных с стимулированием образования кровеносных сосудов, иммуномодуляции и восстановления тканей.Мы также показываем, что этот метод кондиционирования вызывает подавление генов про-выживания для МСК и активирует гены проапоптоза. Значение этих более поздних результатов и механизм действия, опосредующего общий кондиционирующий эффект, исследуются в последующих исследованиях.
3. Обсуждение
Доклинические исследования и текущие клинические испытания выявили терапевтический потенциал трансплантатов МСК для восстановления различных тканей. Здесь мы исследовали, может ли кондиционирование МСК с воспалением, происходящим из макрофагов, повысить их способность поддерживать восстановление тканей.Мы показали, что воспаление, вызванное макрофагами, запускает МСК для активации генов, связанных с заживлением ран, и усиливает секрецию молекул, необходимых для репаративных событий. Мы также показали, что вызванные воспалением изменения транскриптома МСК подвергают сомнению их жизнеспособность и подвижность. Дальнейшие исследования продолжаются, чтобы определить оптимальный баланс между положительным и потенциально вредным воздействием воспаления на трансплантат. Наши данные подтверждают идею о том, что воспаление, вызванное макрофагами, можно использовать для кондиционирования МСК перед трансплантацией, чтобы усилить их паракринные репаративные эффекты, что может повысить терапевтическую эффективность трансплантатов МСК.
Кондиционирование МСК с вызванным макрофагами воспалением привело к повышенной экспрессии генов, связанных, среди прочего, с ответом на воспаление, отрицательной регуляцией высвобождения цитокинов, защитным ответом и ответом на стресс (например, ido1, nos2, il13r, ptgs2, hif1α, nfkbiz ), предполагая, что кондиционирование усиливает иммуномодулирующую способность МСК. Клеточный стресс считается молекулярной адаптацией либо для восстановления гомеостаза, либо для индукции гибели клеток в ответ на внешние или внутренние угрозы [36,37].Гены, связанные со стрессом, являются конститутивными генами, которые поддерживают клеточный гомеостаз в нормальных условиях, но активируются при возникновении событий, таких как воспаление, токсины, температура или гипоксия, среди прочего [36,38,39]. При нормоксических воспалительных состояниях, таких как в наших культурах, обогащение сигнального пути HIF1α активированным DEG предполагает адаптацию к физиологическому стрессу, который может быть защитным для клетки и окружающей ткани. Наши условия культивирования включают присутствие воспалительных цитокинов и ЛПС, бактериального эндотоксина, которые интерпретируются МСК как предупреждения о нарушении работы системы и запускают повышенную регуляцию hif1α HIF1 и nfkb NFKB, обоих основных факторов транскрипции, связанных с иммунитетом, стрессом и путями восстановления. [40,41,42].Доказательства показали, что воздействие стимулов, запускающих клеточный стресс, активирует репарацию и иммунный регуляторный ответ МСК [10,14,43], что приводит к более сильной паракринной модуляции фенотипа близлежащих макрофагов [44,45,46]. Регулирование фенотипа макрофагов важно, потому что оно координирует эффективное заживление ран [47,48,49] и способствует восстановлению после повреждений в различных тканях, включая сердечную [27,50,51], нервную [52,53], кожную [ 54] и мышечные ткани [55]. Местная иммуномодуляция может изменять молекулярную среду и другие иммунные клетки, которые также имеют прямое или косвенное влияние на фенотип макрофагов, например регуляторные Т-клетки [56,57].Правильная координация взаимодействий иммунных и стромальных клеток также может привести к усилению ангиогенеза [58,59]. Повышение иммуномодулирующей способности МСК до трансплантации может сделать трансплантат более эффективным, особенно для восстановления тканей, отмеченных хроническим воспалением. Воспалительное кондиционирование МСК вызвало увеличение экспрессии генов, участвующих в ангиогенезе (например, vegf, ang-1, hgf, egf) и секреции проангиогенных факторов, VEGF и HGF по сравнению с некондиционными МСК.Кроме того, сигнальный путь VEGF и сигнальный путь HIF-1 были обогащены усиленными генами. Эти результаты предполагают, что кондиционирование с помощью воспаления, происходящего от макрофагов, увеличивает ангиогенную способность МСК. VEGF является основным фактором роста, который инициирует ангиогенез, индуцируя пролиферацию эндотелиальных клеток сосудов и дифференцировку концевых эндотелиальных клеток, которые необходимы для образования сосудистой трубки [60, 61, 62]. Предыдущие исследования показали, что лечение рекомбинантным VEGF способствует реваскуляризации, что коррелирует со снижением распространения повреждения в поврежденном спинном мозге [63] и увеличением регенерации кости [64].Ангиопоэтины играют ключевую роль в увеличении созревания и снижении проницаемости новообразованных кровеносных сосудов [65,66]. HGF, первоначально митоген гепатоцитов, связан с усиленным ангиогенезом и защитой кровеносных сосудов [67]. Aoki и его коллеги продемонстрировали, что HGF поддерживает ангиогенез, тем самым способствуя восстановлению нервных и сердечных тканей [68,69]. Усиление ангиогенных эффектов МСК перед трансплантацией в поврежденные ткани может обеспечить лучшую реваскуляризацию, опосредованную трансплантатом, что важно для оптимизации восстановления тканей.Возникающее из макрофагов воспалительное кондиционирование аннотаций, связанных с репарацией, обогащенных МСК, таких как развитие ткани, ответ на ранение и передача сигналов нейротрофина, указывало на более сильную активацию поддерживающих общую репарацию механизмов в кондиционированных МСК по сравнению с некондиционными МСК. Нейротрофины, такие как NGF и GDNF, а также инсулиноподобные факторы роста (семейство IGF), факторы роста фибробластов (FGF) и HGF запускают процессы выживания клеток и роста аксонов, а также вызывают заживление во многих типах тканей [70,71, 72,73,74,75,76,77].Улучшение локальной выживаемости клеток обычно связано с лучшим восстановлением и восстановлением [9,68,76]. Интересно, что термин «пути развития рака» был обогащен генами, активируемыми после воспалительного кондиционирования МСК. Учитывая совпадение молекулярных механизмов между раком и регенеративной биологией (например, путь mTOR, путь передачи сигналов Wnt) [78,79,80,81,82,83], возможно, что гены, участвующие в этих перекрывающихся путях и регулируемые в нашем наборе данных , такие как vegf, hif-α, hgf, fgf, bmp, wnt и frizzled, также способствуют восстановлению.В совокупности наши данные показывают, что обусловленное воспалением макрофагами кондиционирование МСК запускает более сильные паракринные механизмы выживания по сравнению с безусловными МСК. Повышение способности МСК поддерживать выживаемость клеток до трансплантации может привести к улучшенному восстановлению тканей, опосредованному трансплантатом. Наши результаты показали, что воспаление макрофагов влияет на МСК, поддерживая иммуномодуляцию, ангиогенез и выживаемость клеток. Эти три аспекта заживления ран тесно и взаимно координируются, объединяясь в триаду восстановления, необходимую для достижения успешных результатов [48,84].Различные фенотипы макрофагов необходимы во время разных фаз ангиогенеза [85,86,87,88,89] и по-разному влияют на выживаемость местных клеток. Ангиогенез необходим для ограничения часто прогрессирующей потери клеток и тканей в месте повреждения. В свою очередь, защита клеток поддерживает поддержание кровеносных сосудов, а правильная васкуляризация влияет на фенотип макрофагов. Таким образом, перекрестное взаимодействие между МСК и макрофагами важно для успешной репарации [12,13,14], а повышенная иммуномодулирующая, ангиогенная и защитная способность МСК после воспалительного кондиционирования может ускорить общие терапевтические эффекты трансплантатов МСК.Воспалительное кондиционирование МСК, происходящее из макрофагов, также вызывает снижение экспрессии генов, участвующих в активности цитоскелета, динамике актина и способности клеточной адгезии, что может нарушить жизнеспособность и подвижность МСК. Возможное снижение жизнеспособности согласуется с выводом о том, что воздействие на МСК воспалительных молекул, IFNγ и TNFα вызывает апоптоз [22,90]. Общее влияние возможного ослабления жизнеспособности и подвижности МСК после кондиционирования с воспалением, вызванным макрофагами, неизвестно.В общем, жизнеспособность трансплантированных клеток при повреждении низкая из-за различных факторов, включая иммунную несовместимость, вызывающую отторжение, недостаток субстрата, приводящий к аноикису [91,92], или цитотоксические молекулы, вызывающие апоптоз и некроз. Повышение выживаемости трансплантированных клеток может привести к улучшенному восстановлению и восстановлению [35,93,94]. Таким образом, снижение жизнеспособности из-за воспалительного кондиционирования может ограничивать продолжительность репарационных эффектов трансплантированных МСК. С другой стороны, Dazzi и его коллеги сообщили, что макрофаги при повреждении фагоцитируют апоптотические МСК, что приводит к продукции PGE2 и IDO1 и более эффективной иммуномодуляции, чем фагоцитоз живых, здоровых МСК [95,96].Это привело к мнению, что жертвенная смерть МСК потенциально может увеличить их вклад в иммуномодуляцию. Другое возможное преимущество ослабленной жизнеспособности МСК состоит в том, что можно предотвратить спонтанное развитие опухоли трансплантированными клетками. Последствия для ослабленной адгезии и подвижности МСК после кондиционирования с вызванным макрофагами воспалением неизвестны. Возможно, что при прямой инъекции в травму уменьшенная миграционная способность будет полезна, потому что МСК останутся там, где они необходимы.С другой стороны, при системном введении МСК снижение адгезии и подвижности клеток может поставить под угрозу их способность достигать намеченного целевого сайта [24,25,26,34]. Необходимы дальнейшие исследования для более полного понимания in vivo последствий обусловленного макрофагами воспалительного кондиционирования и других типов кондиционирования МСК. Текущие последующие исследования в нашей лаборатории направлены на то, чтобы ответить на эти вопросы и раскрыть молекулярные механизмы, с помощью которых макрофаги изменяют поведение МСК.Лучшее понимание молекулярной взаимосвязи между стрессом, воспалением и восстановлением необходимо для разработки более эффективного целевого подхода к кондиционированию. Возможно, потребуется использовать различные методы кондиционирования в зависимости от пути введения и терапевтического применения. В заключение мы показали, что кондиционирование МСК с воспалением, происходящим из макрофагов, увеличивает экспрессию генов, участвующих в иммуномодуляции, реваскуляризации и выживаемости клеток. , которые жизненно важны для восстановления тканей (рис. 7).Эти обнадеживающие результаты показали, что воспалительное кондиционирование МСК может повысить терапевтическую силу трансплантатов МСК для различных поврежденных тканей, что имеет широкое клиническое значение. Преимущество использования воспаления, вызванного макрофагами, в качестве кондиционирующего подхода состоит в том, что МСК будут ориентированы на среду, в которую они будут введены. Здесь мы использовали МСК крысы с целью заложить основу для доклинических исследований аллотрансплантата in vivo. Наши интерпретации относятся к потенциальным клиническим применениям, поскольку было показано, что МСК крысы, мыши и человека ведут себя одинаково при воздействии стимулов, активирующих вышеупомянутые пути [27,28], и мы считаем это трансформируемым эффектом.Сравнительный анализ стратегии кондиционирования воспаления на клетках крысы, мыши и человека поможет понять, сохраняется ли повышенная паракринная активность. Мы также показали, что воспалительное кондиционирование может нарушить жизнеспособность и подвижность МСК. Влияние этих возможных эффектов воспалительного кондиционирования на прорегенеративный потенциал МСК in vivo в настоящее время неизвестно. Дополнительные доклинические исследования необходимы для дальнейшего изучения физиологического эффекта предварительно кондиционированных МСК и оптимизации метода воспалительного кондиционирования, чтобы наиболее эффективно использовать методы кондиционирования, которые повышают терапевтический потенциал МСК.4. Материалы и методы
4.1. Животные
В данном исследовании использовались взрослые самки крыс Sprague – Dawley (n = 6, 225–250 г, Charles Rivers Laboratory, Wilmington, MA, USA). Мы следовали рекомендациям Национального института здравоохранения и Министерства сельского хозяйства США для всех процедур с животными. Комитет по институциональному уходу и использованию животных Университета Майами утвердил процедуры (Протокол № 15-231, утвержденный 7 декабря 2015 г.). При оценке и аккредитации ухода за лабораторными животными животноводческий комплекс был аккредитован.Крыс содержали парами при 12-часовом цикле свет / темнота с доступом к пище и воде ad libitum.
4.2. Сбор и культивирование костного мозга
Крыс умерщвляли в камере CO 2 , а их задние конечности немедленно брили и промывали раствором антисептического мыла, а затем этанолом. Бедренные и большеберцовые кости иссекали, промывали и хранили в ледяной среде Лейбовица L-15 (ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). От костей были отрезаны эпифизы, и с помощью шприца и иглы костномозговая полость диафиза промывалась средой D10, которая состоит из среды Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM; ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), с добавлением глутамин, 10% фетальная бычья сыворотка (FBS) и гентамицин 1: 1000.Промытый костный мозг суспендировали в D10 с помощью стеклянной пипетки и дважды промывали в D10 центрифугированием при 1500 оборотах в минуту (об / мин) в течение 5 минут при 4 ° C. Супернатанты удаляли после промывок, а конечный осадок суспендировали в D10 и процеживали через сетчатый фильтр для клеток Falcon ™ 100 мкм (BD Life Sciences, Ист-Резерфорд, Нью-Джерси, США) для удаления остатков. Конечную суспензию клеток добавляли в 100-миллиметровую пластиковую чашку для культивирования FalconTM без покрытия (BD Life Sciences, Ист-Резерфорд, Нью-Джерси, США) и культивировали при 37 ° C и 6% CO 2 в течение 16-24 часов.В культуральной чашке моноциты были суспендированы в культуральной среде, и МСК прилипли ко дну. Культуральный супернатант собирали через 20-24 ч и подвергали клеточной сортировке, активируемой флуоресценцией (FACS), для отделения моноцитов. Свежий D10 добавляли к МСК, которые прилипали к пластиковой чашке в течение первых 10-20 часов культивирования. С помощью этого протокола мы получили культуры МСК и макрофагов из одних и тех же исходных костей.
4.3. Мезенхимальные стромальные клетки
МСК костного мозга культивировали на пластике в течение 72 часов.После удаления среды прикрепленные клетки дважды промывали сбалансированным солевым раствором Хэнкса (HBSS; ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), а затем отделяли трипсин-EDTA в HBSS в течение 3 мин. Стеклянную пипетку использовали для суспендирования МСК, которые затем собирали в коническую пробирку объемом 50 мл с D10 и центрифугировали при 1500 об / мин в течение 5 минут при 4 ° C. Каждая коническая пробирка содержала суспензию МСК от одной крысы. Осадок ресуспендировали и один раз промывали в D10 для удаления и нейтрализации оставшегося трипсина.Затем клетки высевали на чашки, покрытые поли-D-лизином (PDL), с D10 и пометили пассаж 0 (P0). Среду обновляли каждые 72 часа, и почти слившиеся культуры разделяли на следующий пассаж. На P2 FACS использовался для сортировки МСК и удаления зрелых макрофагов, которые присутствуют в костном мозге и прикрепляются к пластику в течение первых 8 часов культивирования. Отсортированные МСК культивировали в D10 на чашках, покрытых PDL, до P4. Мезенхимальный фенотип МСК P4 был подтвержден с помощью проточной цитометрии (раздел I дополнительных данных; рисунок S2A – D).В экспериментах использовали МСК P4.4.4. Макрофаги
Моноциты, полученные из костного мозга, культивировали после сортировки в среде R10-50 (среда Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640; ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA) с глутамином, 10% фетальной бычьей сыворотки, 1 : 1000 гентамицина и 50 нг / мл колониестимулирующего фактора макрофагов (M-CSF; Peprotech Inc., Роки-Хилл, штат Нью-Джерси, США) в пластиковых чашках для культивирования FalconTM без покрытия (BD Life Sciences, Ист-Резерфорд, штат Нью-Джерси, США) в течение 7 дней до вызывают дифференцировку в макрофаги.На 3 день обновили R10-50. На 7 день некоторые культуры макрофагов получали свежий R10 для сохранения макрофагов как неполяризованных макрофагов (M0). Остальные культуры получали R10-50 с добавлением 100 нг / мл бактериального липополисахарида (LPS; Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) и 25 нг / мл крысиного рекомбинантного гамма-интерферона (IFNγ; Peprotech Inc., Rocky Hill , Штат Нью-Джерси, США) и инкубировали в течение 24 часов для поляризации макрофагов до классического провоспалительного фенотипа (M1). Культуральные среды поляризованных макрофагов M0 и M1 собирали и центрифугировали при 1500 об / мин в течение 5 минут при 4 ° C для удаления клеточного мусора.Они предоставили кондиционированные среды M0 (M0CM) и M1 (M1CM), используемые в наших экспериментах для кондиционирования МСК. Поляризованный фенотип макрофагов M0 и M1 был подтвержден с помощью иммуноцитохимии и флуоресцентной визуализации (раздел I дополнительных данных; рисунок S2E – J).4,5. Проточная цитометрия Сортировка клеток.
МСК, полученных из конфлюэнтных культур P2, трипсинизировали и количественно оценивали с использованием автоматического счетчика клеток CountessTM II FL (ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). МСК окрашивали CD45-AF647 (# 202212, BioLegend, Сан-Диего, Калифорния, США), CD29-PE (# 12-0291-81, ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и красителем мертвых клеток SYTOX Green (# S34862, ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), а затем отсортировали с помощью сортировщика клеток Beckman Coulter MoFlo Astrios EQ (Beckman Coulter Inc., Пасадена, Калифорния, США) работал с соплом 100 мкм, давлением 25 фунтов на квадратный дюйм и частотой событий примерно 10 000 событий в секунду. Отсортированные МСК были дополнительно культивированы до P4.
Моноциты, подлежащие сортировке из суспензии неприлипающих клеток костного мозга, промывали центрифугированием и подсчитывали с помощью автоматического счетчика клеток CountessTM II FL. Суспензию клеток инкубировали с CD45-AF647 (№202212, BioLegend, Сан-Диего, Калифорния, США) и CD11b / c-PE (№12-0110-82, eBioscience Inc., Сан-Диего, Калифорния, США) и краситель мертвых клеток SYTOX Green (# S34862, ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США).
Все клетки (107 клеток / мл) окрашивали антителами и красителями в течение 25 минут на льду, дважды промывали и ресуспендировали в специальном проточном буфере, содержащем HBSS (не феноловый красный), 25 мМ HEPES, 0,1% гентамицин и 5 мМ. % фетальная бычья сыворотка. Антитела использовали в концентрациях, предоставленных производителями для проточной цитометрии.
4.6. Кондиционирование МСК
МСК кондиционировали, когда культуры сливались примерно на 80% в точке P4. Кондиционированные среды, полученные из макрофагов (M0CM и M1CM), размораживали на водяной бане при 37 ° C и осторожно перемешивали.Среда D10 (D10) и среда поляризации макрофагов (Pol1) были свежеприготовлены и нагреты до 37 ° C. Культуры МСК промывали D10 перед кондиционированием M0CM, M1CM, Pol1 или D10 в течение 24 ч при 37 ° C и 6% CO 2 . После кондиционирования культуральные среды собирали, центрифугировали при 1500 об / мин в течение 15 минут для удаления клеточного дебриса, разделяли на аликвоты и хранили при -80 ° C.
4.7. Иммуноанализы
Уровень фактора роста нервов (NGF), фактора роста человека (HGF), нейротрофического фактора глиального происхождения (GDNF) и фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в среде кондиционированных МСК и в кондиционирующей среде (M0CM , M1CM, Pol1, D10) определяли с помощью сэндвич-ELISA на основе поглощения в соответствии с протоколами производителей.Образцы размораживали при комнатной температуре, встряхивали, центрифугировали при 1000 G в течение 20 мин при 4 ° C и анализировали с использованием набора ELISA для крыс с NGF-бета (#ERNGF, ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), набора для ELISA Rat HGF (# MBS825055, MyBiosource Inc., Сан-Диего, Калифорния, США), Rat GDNF PicoKineTM ELISA Kit (# EK0363, Boster Bio, Pleasanton, CA, USA) и Rat VEGF Quantikine ELISA Kit (# RRV00, R&D Systems, Bio-techne, Миннеаполис, Миннесота, США). Измерения абсорбции проводили на микропланшетном ридере FLUOStar Omega (BMG Labtech, Ортенберг, Германия).
4.8. Экстракция РНК, подготовка библиотеки и секвенирование РНК
экстрагировали из МСК после трипсинизации в соответствии с протоколом производителя для набора RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Германия) (подробности протокола см. В разделе II дополнительных данных). Образцы, разбавленные до желаемой концентрации водой, свободной от РНКаз, были отправлены в Novogen USA (Novogen Co., Пекин, Китай) для секвенирования РНК и анализа данных. Компания Novogen контролировала качество пробы с помощью NanoDropTM, биоанализатора Agilent 2100 (Agilent Technologies Inc., Санта-Клара, Калифорния, США) и электрофорез в агарозном геле для измерения числа целостности РНК (RIN) и чистоты образца. Библиотеки кДНКбыли построены из небольшого количества РНК с использованием наборов Illumina (Illumina Inc., Сан-Диего, Калифорния, США) и контроля качества (QC) для концентрации (флуорометр Qubit 2.0; Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США) и вставка размер (Биоанализатор). Количество РНК было подтверждено в Novogen USA с помощью количественной полимеразной цепной реакции (КПЦР). Секвенирование выполняли с помощью Illumina Platform PE150 (Q30 ≥ 80%), получая в среднем 30 M считываний на образец.Полученные файлы FASTQ подвергались контролю качества на предмет базовой ошибки вызова, распределения контента A / T / G / C и чистоты.
4.9. Аннотация последовательности и дифференциальная экспрессия гена
Чистые чтения были сопоставлены с эталонным геномом крысы (Rnor 6.0) с использованием алгоритма TopHat (v2.0.12; mismatch = 2). Мы определили отображаемые области, а также общее, множественное и распределение отображенных считываний на хромосому, чтобы оценить качество набора данных. После подтверждения хорошего качества картированных считываний экспрессию генов количественно оценивали по транскриптам, картированным в экзоны, с использованием алгоритма HTSeq (v0.6.1; -м союз). Уровни экспрессии генов выражали в количестве фрагментов на килобазу последовательности транскрипта на миллион секвенированных пар оснований (FPKM), что составляет глубину секвенирования и длину гена [97]. Построение среднего FPKM реплик на графике скрипки позволило сравнить и проверить распределение экспрессии генов по условиям. Корреляции использовались для проверки надежности биологических реплик в условиях и в разных условиях. Мы применили нормализованные количественные данные к статистической модели (пакет DESeq, v1.10.1) для расчета дифференциальной экспрессии (ДЭ) генов и р-значения. Значение коэффициента ложного обнаружения (FDR), скорректированное для множественного тестирования, для настройки значения p (padj). Гены с padj https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?&acc = GSE161798, дата обращения: 20 ноября 2020 г.).4.10. Онтология генов и анализ пути KEGG
Биологическое значение DEG было определено с использованием онтологии генов (GO) и баз данных KEGG. Выполнение гипергеометрического теста с помощью инструмента GOseq (v2.12) использовался для определения обогащения по члену GO. Обогащение члена GO — это соотношение между количеством DEG, аннотированных для определенного термина GO в нашем наборе данных, и количеством эталонных генов для этого термина GO в базе данных. Гипергеометрический тест также определил вероятность того, что ассоциация с термином GO была случайной [98]. Термины GO используются для описания биологических процессов, клеточных компонентов и аннотаций молекулярных функций.Инструмент KOBAS (v3.0) был использован для определения биологических путей, аннотированных для DEG в нашем наборе данных, и рассчитал уровень обогащения и значимости каждого пути с помощью гипергеометрического теста.Уровень обогащения биологического пути был представлен здесь богатым фактором (RF), который представляет собой соотношение между DEG, аннотированным для пути, и количеством эталонных генов для этого пути KEGG. Порог значимости для обоих обогащений был установлен на padj <0,05.
4.11. Статистический анализ
Данные секретома были проанализированы статистически с использованием пакета SPSS Statistics 26 (IBM, Армонк, Нью-Йорк, США). Перед проведением статистических тестов данные были проверены на нормальность.Односторонний дисперсионный анализ ANOVA использовался для сравнения данных между группами при нормальном распределении данных. Краскала – Уоллиса использовали для сравнения данных между группами, когда данные не были распределены нормально. Порог значимости p <0,05. Поправка Бонферрони использовалась для апостериорного тестирования. GraphPad PRISM 8 (GraphPad Software Inc., Сан-Диего, Калифорния, США) использовался для визуализации данных.
1887-1895 Резюме налогового инспектора округа Худ, Vol. 2 Фамилия Номер страницы Адамс / Аддамс, Х.М. 648 Адамс, В. Б. 707 708 Аддисон, Северная Каролина 680 Админес, W. T. 819 Эйкен, Эд 681 Аллен, Дж. А. Т. 779 Аллен, Дж. А. Т., миссис 779 Эллисон, Дж. Х. 730 781 Эллисон, В. Р. 819 Андерсон, А. Б. 656 664 672 728 747 748 754 759 762 828, Андерсон, А. Б. (продолжение) 844 Андерсон, К. Э. 825 Андерсон, Дж. М. 762 Арчер, Дж. К. 704 829 Армстронг, Джеймс 675 677 Армстронг, Джас. 766 Армстронг, W. S. 648 Арнольд, В. Б. 657748 Аткинс, Дж. Д. 717 Аткинс, Т. М. 717 Этвуд, Том. Б. 802 Этвуд, В. М. 831 Багвелл, Дж. И. 756 Бейли, В.С. 833. Бейкер, Э. Дж. 679 Бейкер, Дж. Х. 792 Бейлс, J. W. 781 Бэнкерн, С. Э. 781 Барби, E. 644 Барбер, Х. К. 702 815 Баркли, Т. Х. 654 800 Бассон, Д. К. 742 Бейтс, Б. Ф. 643 651 Бейтс, Ф. М. 651 Бейтс, Дж. Л. 651 Бейлор, Байерс 705 BBB & C RR Co. 754 Belden, N. S. 797 Белл, Г. С. 681 Белл, М. Л. 732 Берри, К. Л. 763 Берри, Э. Дж. 836 Берри, Х.А., миссис 764 Берри, Х. Т. 669 Берри, Дж. У. 856 Берри, Джас. С. 766 Берри, Р. Б. 765 Берд, W.H. 738,797 Блэквелл, А. Б. 679 680 Блюм, Хайман 826 Блюм, Л. и Х.Лэнд Ко 825 826 Boon, Geo. H. 710 Боорк, Лев 826 Боссон, Д. Л. 841 Босуэлл, Дж. Л. 681 Бойд, Дж. Л. 679 Бойе, канун 804 Брэдли, Г. А. 732 Брэдли, С. А. 709 Филиал, Е. 645 Брюингтон, Дж. Х. 737 Брайт, Дэвид 770,773 Бринли, Р. М. 745 Брокман, У. О. 704 Брукс, Дж. Т. 846 Браун, E. 642 Браун, G. W. 641 Браун, С. Т. 690 Браун, Т. С. 690 Браун, Т. Ф. 690 Браун, W. J. 792 Слиток, G. W. 644 Bullion, H. P. 803 Беркли / Беркли, Б. Ф. 834 Батлер, Дж. Дж. 651 Байрам, Р. Дж. 711 Кандер, Р. У. 655 Кантс, Дж. Р.748 753 Caraway, A.E. 804 806 Карлайл, Л. Э. 737 Кэш, W. H.648 Чендлер, В. К. 784 Кларк, М. А. Э. 835 Кларк, р. 738 Когделл, Д. К. 657 748 753 Коллинз, Джесси Л. 755 Коллинз, В. Т. 767 Кук, С. Д. 679 680 Купер, Н. Л. 658 824 Corbin Banking Co. 702 Cornelious, Wm. 777 Корвин (?), Исак. Ф. 823 Коссл, Дж. Б. 693 Кутс, Дж. Р. 797 Коуэн, Исаак 674 Крид, Дж. Х. 756 Кретсингер, Дж. Дж. 772 Критики, Д. С. 651 Crites, J. E. 785 Крокетт, Б. А. 646 Cruce, W. J. 847 Каммингс, Дж. Х. 835 Дэвидсон, Э. Б. 802 Дэвидсон, Х.Б. 786 Дэвидсон, Дж. Л. 786 Дэвис, Р. Х. 682 Доусон, Дж. У. 805 Деннис, Дж. Г. 756 Деннис, С. В. 646 Деннис, W. 646 Dent, Jno. 705 779 Дикард, Дж. Дж. 773 Дикунд, Дж. Дж. 770 Досс, Э. М. 835 Дотсон и Миддлтон, Д. Л. 697 Дойл, Дж. Н. 830 Дайн, Дж. Ф. 679 Эрнест, А. М. Ф. 713 Эдвардс, Дж. В. 683 Эллиотт, Дж. Ф. 680 Эллиотт, У. А. 648 684 Эллиотт, Вм. 647 Эллис, Дж. А. 787 Эллис, С. Ф. 787 Компания Erath Cattle Co. 676 749 782 Эстес, Б. М. 821 824 Эстес, Купер 824 Эстес, Ева, миссис 821 Эстес, Дж. П. 832 Этеридж, В.С. 644 Этридж и Джексон 778 Evans, B.C. &. Ко 756 Фенли, Дж. Б. 717 719 Скрипач, Ф. М. 708 Финли, Дж. Б. 717 Флаке, М. В. 677 Флетчер, Ф. М. 684 788 Флетчер, Дж. А. 684 Флетчер, М. А. Л. 684 Флойд, Дж. С. 779 Фогг, Джон У. 648 Фостер и Риджуэй 660 Фостер, Дж. Д. 660 Франклин, Д. Э. 837 Freeland, G. W. 835 Фриланд, М. Б. 856 Фриланд, Н. Б. 839 856 Фрай, А. Дж. 696 698 Ft. Worth & Rio Grande RR Co. 643 646 655 664 672 681 697 724 738 759, Ft. Worth & Rio Grande RR Co. (продолжение) 818 Фуллер (?), Н.Л. 655 Фундерберк, Т. Дж. 773 Гантрелл, Х. С. 792 Джи, К. А. 811 Ну и дела, Час. С. 715. Gee, S. N 670,715,811 Джи, С. Н., миссис 670 715 811 Gee, T. E. 670 715 811 Геупель, Дж. А., мл. 679 680 Глазурь, W. N. 686 Гленн, Д. К. 772 Гофорт, Д. Х. 807 Гуд, У. Х. 685 Гудлетт, У. Дж. 725 Гордон, А. С. 773 Гордон, Дж. Ф. 835 Госс, Г. К. 806 Грэм и Уолш 781 Грин и Льюис 746 Гриффит, Вм. 800 Gruippell (?), К., мисс 820 Guiles, Geo. С. 724 736 Guiles, Джордж С. 647 664 Гайлз, Дж. Б. 709 Гайлз, Дж. Х. 824 Гюнтер, Вм.649 714 Хейл, М. Л. 709 Хейли, Дж. Х. 696 697 Хэлфорд, Г. У. 720 Halford, W. G. 691 692 Холл, Дж. Т. 821 Халсель, В. Х. 679 Гамак, Elizah 650 Хейни и МакКинни 678 702 746 Хейни, Дж. Н. 746 Haney, J. W. 794 799 846 Ханнафорд, Э. А. 795 813 814 Харкроу, Т. С. 789 Хардин, Дж. С. 797 Харди, В. А. 789 Харис / Хорис, Мэри Джейн 810 Харрис, Дж. Х. 769 Харрис, Дж. К. П. 660 661 713 740 769 Харрис, В. К. 829 830 Харви, У. Х. 741 Hastings, W. N. 654 800 Хэткокс, Дж. Х. 681 Хэвенс, Т. Дж. 722 Хейнс, Дж. У. 848 Хеленс, Г.W. 776 820 Хелмс, У. Дж. 693 Херрон, С. М. 687 688 690 Хикок, Дж. Ф. 781 Hicks / Hix, Wm. 803 Хайтауэр, E. C. 717 Хайтауэр, м. М. 652 Хилл, Дж. Р. 653 Хилл, Джефф 809 Холфорд / Хоффорд, W. G. 808 Холт, Ф. Б. 721 Холт, Джас. 721 Холт, Л. Л. 721 Холт, Л. Л., миссис 721 Холт, Р. Т. 655 Холт, З. Б. 721 Хоппер, Л. В. 654 Хорис / Харис, Мэри Джейн 810 Хьюстон, К. М. 758 Ховард, А. Дж. 789 Ховард, Г. 777 Ховард, Дж. 716 717 718 719 Хаджинс, В. А. 781 Hudspeth, B. F. 651 Huffstuttler, J.H.739,773 Хаггинс, М.Э.848 Халл, W. L. 745 Хантер, Г. В. 744 Хатчисон, О. П. 768 Ивинн, стр. 702 Джакари, Дж. М. 820 Джексон и Этридж 778 Джексон, А. Дж. 790 Джеймс, Питер Х. 687 Джейнс, M. F. 727 Джонс, Б. Дж. 679 Джонс, Г. С. 679 Джонс, Дж. Б. 644 Джонс, Дж. Ф. 644,796 Джонс, Дж. Р. 795 813 Джонс, Р. Дж. 679 Иордания, А.727 Кейт, А. Э. 685 689 Келл, Х. К. 649 693 Келл, С. М. 649 693 Келли, W. G. 804 Келли, W. S. 694 Керр, Дж. Ф. 724 747 759 Кинг, А. Дж. 849 Кинг, Карл 723 Киркланд, Дж. 829 Киркланд, Джейкоб 738 Киззиа, Дж. У.791 Рыцарь, С. Л. 681 Катч, С. Б. 716 Лейн, Дж. __ (?) 656 Lanham, A. 673,716,747,759 Lawreence, Wm. 679 680 Леффель, А. М. 822 Леффель, К. Э. 700 773 Леффель, Дж. П. 772 Леффель, С. Э., миссис 757 Льюис и Грин 746 Льюис, Джон М. 657 Льюис, В. С. 657 Лайнберри, Б. 679 Лофлин, Дж. Дж. 823 Лофтин, С. 655 Лофтин, Е. С. 771 Ломакс, Мэтти 785 Лонг, А. Б. 716 Любовь, П. С. 779. Лоу, У. К. 737 Мэлоун, Т. Б. 725 726 727 728 729 730 731 Мэлони и Мердок 690,732,733 Мэлони, А. А. 794 Мэнли, Дж. Ф. 695 Манн, Вм.780 Марчбанк, Т. А. 811 Марлин Р. С. 659 Маррс, Дж. Ф. 838 Мэсси, Дж. Н. 758 Massey, W. A. T. 683 695 Мэтьюз, Томас 679 Макклинток, Дж. С. 658 Макклинток, М. М., миссис 658 Макклиш, Дж. Л. 727 Маккой, Б. Ф. 757 Маккой, Вм. W. 851 Маккуан М.А., миссис 648 McCuan / McCuin, I. R. 648 Маккуан / Маккуин, Дж. У. 648 МакГлотери, А. Л. 643 Макилрой, Вм. 737 Маккинни и Хейни 678 702 746 Маклерой, В. Дж. 809 Мик, К. С. 644 Мик, К. Дж. 644 Кроткий, Джно. 711 Кроткая, Мэри 793 Меггерт, Э. 796 Мередит, В. С. 758 Меридет, Дж.№ 792 Миддлтон, Д. Л. 732 Миддлтон Д. Л. и Дотсон 697 Миддлтон, Дж. У. 733,856 Миллер, Д. С. 759 Миллион, P. W. 772 Миллс, Ван 789 Мур, Г. Х. 800 Мур, С. 850 Мосс, Г. Л. 763 764 765 Мердок и Мэлони 690,732,733 Мерфи, W. W. 652 Мюррей, У. Дж. 846 Нидхэм, М. К., миссис 795 Needham, W. L. 813 Нил, Дж. М. 679 680 Нельсон, А. М. 839 840 Норрис, Джон 671 Нортон, Дж. Э. 781 Натт, Дж. Ф & Дж. 682 749 Оуэнсби, Дж. У. 814 Паркинсон, А.С., миссис 700 Паркинсон, Дж. М. 699 Паркинсон, Томас 699 700 Паркс, Р.М. 819 Паттон, Час. Б. 734 735 736 Пэйтон, Алонзо 661 Пикок, Дж. Н. 696 697 698 Пеннингтон, Б. Ф. 662 663 Перкинс, Б. Ф. 815 Peters, J. B. 686 847 Питерс, Ньют 737 Peters, W. F. 712 Филлипс, А. Д. 717 Филлипс, Уиллис 796 Пинсон, Харви 645 Plemens, W. L. 660 Полмер, Мартин 824 Проффит, Дж. Дж., Миссис 701 Проффит, Р. С. 701 Пакетт, Джексон 644 Райфснайдер, Фред 756 Райфснайдер, Г. В. 816 Рэндал, Джесси Ф. 856 Рэндл, Дж. П. 696 Randle, J. R. 741 768 Раш, С. А. 731 Роулинз, М. П. 738 Роулинз, М. П., Миссис 738 Рис, Дж. К. 664 Рис, Л. Дж. 672 Рейнольдс, В. Х. 748 Родс, Л. Э. 669 761 Родос, М. Х. 817 Райс, И. Б. 544 Ричардс, П. Х. 827 Риджуэй и Фостер 660 Кольцо, W. A. 760 Робинсон, Г. Н. 704 Робинсон, M.E., миссис 679680 Роквелл, Т. Х. 844 Роджерс, А. 786 Роу, Е. 718 Ракер, Г. А. 687 689 696 698 703 716 717 723 726, Ракер, Г.А. (продолжение) 727,728,729,734,735,736,747,750,751,752 Рассел, Джеймс 651 Рюил, Соломон 825 Рыбурн, Ф. М. 707 708 Рыбурн, С. Э., миссис 674 677 766 Сэдлер, W. S. 652 Sams, Algeron 740 Сарджент, Б.Т. 650 Ранцы, Wm. 705 Скотт, Элла 754 Шарп, Минерва 738 Шелтон / Шеттон, Стив 821 824 Ширли, Дж. Т. 647 664 665 692 808 Ширли, Дж. Т. 720,724,736,744 Сайкс, Дж. Р. 676 677 741 780 Скиннер, Э. 797 Слокум, Ферд 850 Смарт, J. W. 717 Смит, Д. 748 Смит, Ф. Т. 665 Смит, Вм. 717 Смит, Вм. 669 670 р. Сото, Vencento 781 Стэнфорд, р. 804 Ставенхаген, Л. 739 Стелл / Сталь, И. М. 652 Стюарт, Дж. К. 780 Стюарт, Дж. Э. 774 Стюарт, Вм. 845 Стокс, W. W. 706 Стронг, К. Х. 689 690 732 742 841 Сильная, Сара 732,742 Сильная, Сара, миссис690 Тэнди, Джо А. 799 Танкерсли, А. В. 743 Танкерсли, C.G.744 Тейт, Дж. Л. 648 Тейлор, Вм. 851 Тиг, Джас. 842 Техасское кредитное агентство 678 Thompkins, Geo. 775 Торп, Дж. Х. 666 Тидуэлл, А. Г. 791 Тидуэлл, Р. Ф. 791 Тидуэлл, W. C. 791 Тилли, Н. А. 798 Томс, W. E. 745 Трейлор, Дж. Х. 782 Трейлор, Джон Х. 674 675 676 677 678 Такер, Х. М. 787 Туннет (?), W. M. 657 Тернер, Дж. С. 803 Андервуд, Дж. А. 751 843 Андервуд, Джно. А. 843 Андервуд, С. А.841 ВанРозенберг В. 810 Уолден, К. 746 Уокер, К. Э. 781 Уолли, И.М. 795 Уолш и Грэм 781 Уолш, Э. К. 783 Уолш, Т. Б. 781 Уолтерс, Джулия, миссис 800 Уолтон, Аннетти 781 Уорд, Д. Ф. 848 Уоррен, Дуглас 836 Уоррен, Дж. М. 673 754 Уоткинс, Дж. Б. 827 Уоткинс, Дж. Б. Лэнд Ко. 827 Уоттс, В. Дж. 773 Уэллс, Дж. У. 828 West, B. F. 792 Вест, Б. Т. 813 Уайт, Е. М. 776 Виггинс, М. М. 648 Wiggins, Wm. 648 Уильямс, Дж. М. 737 Уильямс, П. Дж. 668,669,670 Уильямс, Wm. 667 674 675 676 677 678 Уиллис, С. Э. 643 Холка, W. P. 819 Виттен, П. Л. 678 Вулфорд, Баллард 723 812 818 Вуд, Д.М. 806 Вуд, G. W. 706 Вуд, H. W. 833 Вуд, Дж. А. 717 832 Вуд, Т. А. 771 Вудберн, Э. Т. 815 Wyatt, E. D. 672 Йетс, Генри 679 Ибарбо, Хосе Ма 747,748,749,750,751,752,753,801,829
Аксессуары — Eupen Cable USA
Доступные опции:
- AA-U — Угловой адаптер — Универсальный — Нержавеющая сталь
- AA-US — Угловой адаптер с отверстиями 3/4 ″ — нержавеющая сталь
- AA-SL — Угловой адаптер с резьбовыми отверстиями 3/8 ″ — нержавеющая сталь
Посмотреть спецификации продукта здесь
Доступные опции:
- BH-158 — Комплект подвески «бабочка» для кабеля 1-5 / 8 ″ — оборудование в комплекте
- BH-114 — Комплект подвески «бабочка» для кабеля 1-1 / 4 ″ — оборудование в комплекте
- BH-78 — Комплект подвески «бабочка» для кабеля 7/8 ″ — оборудование в комплекте
- BH-58 — Комплект подвески «бабочка» для кабеля 5/8 ″ — оборудование в комплекте
- BH-12 — Комплект подвески «бабочка» для стандартного кабеля 1/2 ″ — оборудование в комплекте
Посмотреть спецификации продукта здесь
Доступные опции:
- CB-158 — Опорный блок мини-коаксиального кабеля для кабеля 1-5 / 8 ″
- CB-114 — Опорный блок мини-коаксиального кабеля для кабеля 1-1 / 4 ″
- CB-78 — Опорный блок мини-коаксиального кабеля для кабеля 7/8 ″
- CB-58 — Опорный блок мини-коаксиального кабеля для кабеля 5/8 ″
- CB-12 — Опорный блок мини-коаксиального кабеля для кабеля 1/2 ″
Доступные опции:
- HK-DCSB158 — Комплект оборудования, 3/8 ″, оцинкованный, для (2) опорных блоков коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 7 ″
- HK-DCSB158SS — Комплект оборудования, 3/8 ″, нержавеющая сталь, для (2) опорных блоков коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 7 ″
- HK-SSCB158 — Комплект оборудования, 3/8 ″, оцинкованный, для (1) опорного блока коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 4.25 ″
- HK-SSCB158SS — Комплект оборудования, 3/8 ″, нержавеющая сталь, для (1) опорных блоков коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 4,25 ″
- HK-TSCB158 — Комплект оборудования, 3/8 ″, оцинкованный, для (3) опорных блоков коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 9,5 ″
- HK-TSCB158SS-12 — Комплект крепежа, 3/8 ″, нержавеющая сталь, для (3) опорных блоков коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 12 ″
Доступные опции:
- HG-158 — Захват для подъема на шнуровке для кабелей 1-5 / 8 ″
- HG-114 — Захват для подъема на шнуровке для кабелей 1-1 / 4 ″
- HG-78 — Захват для подъема на шнуровке для кабелей 7/8 ″
- HG-58 — Захват для подъема на шнуровке для кабелей 5/8 ″
- HG-12 — Захват для подъема на шнуровке для стандартных кабелей 1/2 ″
Посмотреть спецификации продукта здесь
Доступные опции:
- HG-158L — Подъемная рукоятка с предварительной зашнуровкой для кабелей 1-5 / 8 ″
- HG-114L — Подъемная рукоятка с предварительной зашнуровкой для кабелей 1-1 / 4 ″
- HG-78L — Подъемная рукоятка с предварительно зашнуровкой для кабелей 7/8 ″
- HG-58L — Подъемная рукоятка с предварительной зашнуровкой для кабелей 5/8 ″
- HG-12L — Подъемная рукоятка с предварительно зашнуровкой для стандартных кабелей 1/2 ″
Посмотреть спецификации продукта здесь
Варианты штабелируемых защелкивающихся подвесок:
- SH-S158 — Стекируемая защелкивающаяся подвеска для кабеля 1-5 / 8 ″
- SH-S114 — Стекируемая защелкивающаяся подвеска для кабеля 1-1 / 4 ″
- SH-S78 — Стекируемая защелкивающаяся подвеска для кабеля 7/8 ″
- SH-S12 — Штабелируемая защелкивающаяся подвеска для стандартного кабеля 1/2 ″
Посмотреть технические характеристики стекируемых оснасток можно здесь
______________________________________________________________________________
Варианты универсальных подвесок с защелками:
- SH-U158 — Универсальная защелкивающаяся подвеска для кабеля 1-5 / 8 ″
- SH-U114 — Универсальная защелкивающаяся подвеска для кабеля 1-1 / 4 ″
- SH-U78 — Универсальная защелка для кабеля 7/8 ″
- SH-U58 — Универсальная защелка для стандартного кабеля 5/8 ″
- SH-U12 — Универсальная защелкивающаяся подвеска для стандартного кабеля 1/2 ″
Посмотреть технические характеристики универсальных оснасток можно здесь
Доступные опции:
- SA-38S200 — Адаптер стойки с резьбовым отверстием 3/8 дюйма — Элементы с внешним диаметром 2–3 дюйма — Нержавеющая сталь — Бабочки
- SA-38S300 — Адаптер стойки с резьбовым отверстием 3/8 дюйма — Элементы с внешним диаметром 3–4 дюйма — Нержавеющая сталь — Бабочки
- SA-SS200 — Адаптер стойки с резьбовым отверстием 3/4 дюйма — Элементы с внешним диаметром 2–3 дюйма — Нержавеющая сталь — Отверстие для защелкивания
- SA-SS300 — Адаптер стойки с резьбовым отверстием 3/4 дюйма — Элементы с внешним диаметром 3–4 дюйма — Нержавеющая сталь — Отверстие для защелкивания
Посмотреть Технические характеристики адаптера стойки (Snap-In) здесь | Посмотреть технические характеристики адаптера стойки (бабочки)
угловое распределение электронов, упруго рассеянных на поверхности меди, отполированной и текстурированной потоком аргона | Библиотека онлайн-материалов MRS (OPL)
Имя хоста: page-component-c86845478-6bs5k Общее время загрузки: 0.183 Дата рендеринга: 2021-10-08T20: 06: 48.983Z Имеется проблема с данными: верно Флаги функций: { «shouldUseShareProductTool»: true, «shouldUseHypothesis»: true, «isUnsiloEnabled»: правда, «metricsAbstractViews»: false, «цифры»: правда, «newCiteModal»: false, «newCitedByModal»: правда, «newEcommerce»: правда, «newUsageEvents»: true }
Опубликовано в Интернете издательством Cambridge University Press: 25 февраля 2011 г.
- Isay L. Krainsky *
- Принадлежность:
Исследовательский центр NASA Lewis, 21000 Brookpark Road, Cleveland, OH 44135
Аннотация
Угловые распределения упруго рассеянных вторичных электронов от двух типов поверхностей Cu, полированных и текстурированных 2 кэВ Ar +, были изучены в диапазоне энергий от 50 эВ до 2 кэВ.Результаты показывают, что для полированной поверхности Cu в процессе упругого рассеяния доминирует атомное рассеяние на отдельных атомах (хотя вклад других процессов также важен). Однако при исследовании текстурированной поверхности на угловых распределениях появились новые множественные пики. Положения этих пиков для различных углов падения и первичных энергий указывают на то, что их происхождение лежит в дифракции первичных электронов на какой-то поликристаллической структуре.Эта структура, вероятно, создается процессом рекристаллизации, вызванной ионным распылением, подобным процессу индуцированной распылением кристаллизации, уже известному для некоторых оксидов и неметаллических соединений.
- Тип
- Исследовательская статья
- авторское право
- Авторское право © Общество исследования материалов 1993
Параметры доступа
Получите доступ к полной версии этого содержимого, используя один из вариантов доступа ниже.(Параметры входа будут проверять наличие институционального или личного доступа. Для содержимого может потребоваться покупка, если у вас нет доступа.)Ссылки
1
1. Куррен А. Н., Дженсен К. А. и Роман Р. Ф., NASA TP-2967 (1990) .Google Scholar2
2. Картер Г., Навиншек Б. и Уиттон Дж. Л., 52, 231, Topics in Applied Physics, (1981) и ссылки в нем. CrossRefGoogle Scholar3
3. Бронштейн И.М., Пронин В.П. // Физ. Мезомех. Тверь. Tela 17, 2431 (1975).Google Scholar4
4. Бронштейн И. М., Стожаров В. М. // Изв. Акад. АН СССР, Сер. Физ. 43, 500 (1979) .Google Scholar. 7
7. Бец Г. и Венер Г. К., Topics in Applied Physics, 52, 11, (1981) и ссылки в них. CrossRefGoogle ScholarSindhu K Srinivas
Избранные публикации
Mehta A, Srinivas SK : Четвертый триместр: 12 недель недостаточно. Obstet Gynecol 137 (5): 779-781, май 2021 г. Примечания: 33831929. Burris HH, Passarella M, Handley SC, Srinivas SK, Lorch SA : Различия между чернокожими и белыми в материнской внутрибольничной смертности в зависимости от преподавания и статуса чернокожих в больницах. Am J Obstet Gynecol. Онлайн перед печатью, январь 2021 г. Примечания: 34531833. Hamm RF, Perelman S, Wang EY, Levine LD, Srinivas SK. : Переливание одной единицы в сравнении с несколькими при гемодинамически стабильной послеродовой анемии: прагматичное рандомизированное контролируемое исследование. Am J Obstet Gynecol S0002-9378 (20) 30724-9, июл 2020 Примечания: 32652065. Handley SC, Srinivas SK, Lorch SA : Регионализация помощи и разрыв диады между матерью и младенцем. JAMA Online перед печатью, июль 2019 г. Примечания: 31282951. Hirshberg A, Srinivas SK : Удаленный мониторинг с помощью текстовых сообщений сократил расовые различия в оценке послеродового артериального давления. AJOG 221 (3): 282-285, 2019 Примечания: 31121137. Cahill AG, Srinivas SK, Tita ATN, Caughey AB, Richter HE, Gregory W.T., Liu J, Woolfolk C, Weinstein DL, Mathur AM, Macones GA, Tuuli MG : Влияние немедленного и отсроченного толчков на частоту спонтанных вагинальных Роды среди нерожавших женщин, получающих нейроаксиальную анальгезию: рандомизированное клиническое испытание. JAMA 320 (14): 1444-1454, 2018 Примечания: 30304425. Hirshberg A, Downes K, Srinivas SK : Сравнение стандартного последующего наблюдения в офисе с удаленным мониторингом на основе текста при ведении послеродовой гипертензии: рандомизированное клиническое испытание. BMJ 27 (11): 871-877, 2018 Примечания: 29703800 Grobman WA, Rice MM, Reddy UM, Tita ATN, Silver RM, Mallett G, Hill K, Thom EA, El-Sayed YY, Perez-Delboy A, Rouse DJ, Saade GR, Boggess KA, Chauhan SP, Iams JD, Чиен Е.К., Кейси Б.М., Гиббс Р.С., Сринивас С.К., Свами Г.К., Симхан Х.Н., Маконес, Джорджия; Юнис Кеннеди Шрайвер Сеть отделений материнско-фетальной медицины Национального института детского здоровья и развития человека : Индукция родов и выжидательная тактика у нерожавших женщин с низким уровнем риска. N Engl J Med 379 (6): 513-523, 2018 Примечания: 30089070. Srinivas SK, Shocksnider J, Caldwell D, Lorch S : Лабиринтская модель ухода: кто ее использует? J Matern Fetal Neonatal Med 25 (3): 257-60, 2012 Примечания: 21506656. Такер Эдмондс Б., Фейджер С., Сринивас С.К., Лорч С. : Расовые и этнические различия в использовании интубации для периваподобных новорожденных. Педиатрия 127 (5): e1120-7, 2011 Примечания: 21502221. наверхПоследнее обновление: 04.06.2021
Попечители Пенсильванского университета
gkdevelopers.com Модные цепочки, ожерелья и подвески, мужская веревка, Фигаро, мореплаватель, кубинская звено, цепочка со снайперской бандой, подвеска SG
gkdevelopers.com Модные цепочки, ожерелья и подвески для мужчин веревка Фигаро Моряк кубинская цепочка с подвеской Sniper Gang SGЦЕПЬ FIGARO 4 мм, цепочка Mariner Gucci. Эта потрясающая цепочка, покрытая 14-каратным золотом. ROPE CHAN 3,5 мм, мужская веревочная цепочка Figaro Mariner Cuban Link с подвеской Sniper Gang SG. ЭТО САМЫЙ ГОРЯЧИЙ ТРЕНД ВЫСОКОГО КАЧЕСТВА: подвеска Sniper Gang «SG» с веревкой.Фигаро и неношеные предметы (включая предметы ручной работы) в оригинальной упаковке (например, в оригинальной коробке или сумке) и / или с прикрепленными оригинальными бирками. Просмотреть все определения условий : Измененный элемент: : Нет , Цвет: : Золото : Стиль: : Цепочка и подвеска , Металл: : Цепочка (латунь), MARINER GUCCI CHAIN 4 мм .. Состояние: Новое с бирками: Совершенно новое. Вогнутая кубинская, неиспользованная, подвеска (сплав) : Тип: : Цепочка ,。, КУБИНСКАЯ ЦЕПЬ 4 мм.
Информация[email protected]
+91 7888093332
Мужская веревочная цепочка Figaro Mariner Cuban Link с подвеской SG Sniper Gang
Мужская веревочная цепочка Figaro Mariner Cuban Link с подвеской Sniper Gang SG
Кубинская цепочка с подвеской Sniper Gang SG Мужская веревка Figaro Mariner, ЭТО ВЫСОКОЕ КАЧЕСТВО ГОРЯЧИЕ ТЕНДЕНЦИИ: подвеска Sniper Gang «SG» с веревкой, вогнутый кубинец, Фигаро, цепочка Mariner Gucci, Эта потрясающая позолоченная цепочка 14k, ROPE CHAN 3, 5 мм, CUBAN CHAIN 4 мм, FIGARO CHAIN 4 мм, MARINER GUCCI CHAIN 4 мм, Style of Your Life, Outlet Shopping, самые низкие цены со скидкой.