781 гк рф: ГК РФ Статья 781. Оплата услуг / КонсультантПлюс

Содержание

Статья 781 ГК РФ. Оплата услуг

Гражданский кодекс Российской Федерации:

Статья 781 ГК РФ. Оплата услуг

1. Заказчик обязан оплатить оказанные ему услуги в сроки и в порядке, которые указаны в договоре возмездного оказания услуг.

2. В случае невозможности исполнения, возникшей по вине заказчика, услуги подлежат оплате в полном объеме, если иное не предусмотрено законом или договором возмездного оказания услуг.

3. В случае, когда невозможность исполнения возникла по обстоятельствам, за которые ни одна из сторон не отвечает, заказчик возмещает исполнителю фактически понесенные им расходы, если иное не предусмотрено законом или договором возмездного оказания услуг.


Вернуться к оглавлению документа: Гражданский кодекс РФ Часть 2 в действующей редакции

Комментарии к статье 781 ГК РФ, судебная практика применения

В п. 3.4 Постановления Конституционного Суда РФ от 23.01.2007 N 1-П содержится следующая правовая позиция:

Положения п 1 ст. 779, п. 1 ст. 781 ГК РФ не предполагают удовлетворение требования исполнителя о выплате вознаграждения по договору возмездного оказания услуг в зависимости от решения суда, которое будет принято в будущем

..Положения пункта 1 статьи 779 и пункта 1 статьи 781 ГК РФ, как не предполагающие в системе действующего правового регулирования отношений по возмездному оказанию правовых услуг удовлетворение требования исполнителя о выплате вознаграждения по договору возмездного оказания услуг, если данное требование обосновывается условием, ставящим размер оплаты услуг в зависимость от решения суда, которое будет принято в будущем, не могут рассматриваться как противоречащие Конституции Российской Федерации.


Аналогичная правовая позиция содержится в Постановлении Президиума ВАС РФ от 02.12.2003 N 11406/03 по делу N А40-46957/02-27-481:

Не может быть удовлетворено требование о выплате вознаграждения, размер которого обусловлен решением суда или государственного органа, которое будет принято в будущем

По смыслу статьи 779 Кодекса исполнитель может считаться надлежаще исполнившим свои обязательства при совершении перечисленных в договоре действий или осуществлении определенной деятельности.

В силу правовой природы отношений, возникающих из договора возмездного оказания услуг, не подлежат удовлетворению требования исполнителя о выплате вознаграждения, если данное требование обосновывается условием договора, ставящим размер, а равно и обязанность оплаты услуг в зависимость от решения суда или государственного органа, которое будет принято в будущем.


В Информационном письме Президиума ВАС РФ от 29.09.1999 N 48 «О некоторых вопросах судебной практики, возникающих при рассмотрении споров, связанных с договорами на оказание правовых услуг» содержатся аналогичные разъяснения:

..Не подлежит удовлетворению требование исполнителя о выплате вознаграждения, если данное требование истец обосновывает условием договора, ставящим размер оплаты услуг в зависимость от решения суда или государственного органа, которое будет принято в будущем.


В п. 5 Обзора судебной практики Верховного Суда РФ N 2 (2015), утвержденного Президиумом Верховного Суда РФ 26.06.2015 года, содержатся следующие разъяснения:

Дополнительное вознаграждение за услуги представителя в суде, обусловленное достижением положительного для заказчика процессуального результата, не может быть взыскано с другой стороны по делу в качестве судебных расходов.

..В соответствии с условиями договора возмездного оказания юридических услуг дополнительное вознаграждение выплачивается обществом его представителю за уже оказанные и оплаченные услуги, причем только в случае, если действия представителя привели к отказу в удовлетворении искового требования, то есть признается своего рода премированием представителя.

Сумма указанной премии зависит от воли сторон договора возмездного оказания юридических услуг. Дополнительное вознаграждение, установленное в результате соглашения заказчика и исполнителя юридических услуг, не может быть взыскано в качестве судебных расходов с процессуального оппонента заказчика, который стороной указанного соглашения не является.

могут ли меня привлечь к ответственности по ст.781 ГК РФ

Автор:

Татьяна , Город: Омск / обл Омская, 31.05.2020 17:11:45

Интерторг предложил покупку через интернет на условиях оплаты при получении, на сегодняшний день данная покупка для меня не актуальна, я её не выкупаю, Интерторг прислал смс с сообщением о том, что если я не выкуплю продукт в течение 12 дней, они подадут на меня в суд по статье 781 ГК РФ. НА СКОЛЬКО ПРАВОМОЧНЫ ТАКИЕ ДЕЙСТВИЯ ПО ОТНОШЕНИЮ КО МНЕ? я никаких договоров не подписывала, все происходило на уровне телефонного разговора, в котором был предложен товар, который я НЕ ОБЕЩАЛА выкупить

Ваш ответ

Вы должны войти на сайт, чтобы оставлять ответы.

Другие вопросы:

#60972 07.10.2021 (13:54)

Авторские права. Прошу помощи

Могу ли я создать например телеграмм канал, где буду копировать новости туризма с других страниц с указанием на источника статьи? Будет ли это нарушением авторских прав? Могу ли я делать рекламу на таком канале? (Просто где — то слышал что можно так делать, но деньги нельзя зарабатывать на этом)

#60928 05.10.2021 (13:31)

ГПХ и Мат отвественность

Устроился на работу продавцом, по договору ГПХ. Магазин только открывался весь товар привезли сразу не кто его не успел проверить толком накладные прямо говоря заставили подписать, простых продавцов. При увольнении всем нам сказали что зарплату не выплатят пока не проведут инвентаризацию, назначили дату инвентаризации… При инвентаризации магазин открыт свободный доступ покупателей продолжается. Так вот как быть дальше, по итогу хотят присвоить недостачу на продавцов. И могут ли если не был подписан договор об мат ответственности?

#60917 04.10.2021 (14:51)

Взыскание судебных расходов

Здравствуйте! Мой иск удовлетворили частично. Как взыскать судебные расходы? Можно ли по почте отправить в суд заявление о взыскании? Договоры, чеки прикладывать в оригиналах или можно в копиях? Надо ли ответчику направлять копию заявления? Надо ли направлять копию в прокуратуру, если прокурор сидел на заседаниях? И что потом: суд пригласит на заседание или сам рассмотрит вопрос о компенсации расходов?

Оплата услуг после их оказания: срок, отсрочка, проценты

Оплата услуг после их оказания – это единовременная оплата всех услуг или части их цены через определенное время после завершения оказания услуг.

Согласно п. 1 ст. 781 ГК РФ заказчик обязан оплатить услуги в сроки и в порядке, которые указаны в договоре. Таким образом, сторонам рекомендуется согласовать соответствующие условия.

При оплате услуг после оказания заказчик может определенное время пользоваться причитающимися исполнителю денежными средствами. В этом случае сторонам необходимо решить, будут ли начисляться на данную сумму проценты.

 

Возможность согласовать начисление процентов на сумму денежного обязательства за период пользования денежными средствами предусмотрена п. 1 ст. 317.1 ГК РФ. 

 

Кроме того, в договор может быть включено условие о коммерческом кредите (ст. 823 ГК РФ).

 

Срок оплаты услуг после их оказания

Статья 781 ГК РФ не предусматривает конкретного срока для исполнения обязанности по оплате оказанных услуг, поэтому сторонам рекомендуется согласовать этот срок в договоре. Стороны в соответствии со ст. ст. 190, 191 ГК РФ могут определить его:

  • календарной датой;
  • периодом времени, который может исчисляться с календарной даты или события.

 

Кроме того, если срок оплаты определяется периодом времени, стороны могут согласовать условие о том, что данный период исчисляется с момента исполнения обязанностей исполнителем или наступления иных обстоятельств, предусмотренных законом или договором (п. 1 ст. 314 ГК РФ).

Примеры формулировки условия:

“Заказчик обязан оплатить оказанные услуги не позднее “___”________ 20__ г.”.

“Заказчик обязан оплатить оказанные услуги в течение _____ рабочих дней с момента получения (принятия) услуг”.

 

Если срок оплаты услуг после их оказания не согласован

В этом случае условие об оплате услуг будет не согласовано и у заказчика возникнет обязанность их оплатить в соответствии с п. 2 ст. 314 ГК РФ в течение семи дней с момента предъявления исполнителем требования, если иной срок не установлен законом, иными правовыми актами или не вытекает из обычаев либо существа обязательств

Особенности договора на участие в выставке

Договор об организации выставки носит смешанный характер и Гражданским кодексом РФ не описан. На практике он заключается по правилам договора возмездного оказания услуг. При этом такое соглашение почти всегда содержит элементы договора аренды и может включать условия о выполнении подрядных работ.

Напомним, что правила о свободе договора, установленные ст. 421 Гражданского кодекса РФ (далее – Кодекс, ГК РФ), позволяют заключать сделки, в которых содержатся элементы различных договоров, предусмотренных законом или иными правовыми актами (смешанный договор). При этом к отношениям сторон по смешанному договору будут применяться в соответствующих частях правила о договорах, элементы которых содержатся в смешанном договоре.

К обязанностям организатора выставки, которые непосредственно связаны с

оказанием услуг, относятся обязанности предоставлять заказчику всю необходимую информацию и документы о выставке, консультировать заказчика. Выставочный договор может также содержать условия о предоставлении рекламных услуг, услуг охраны, промоутеров, услуг по приему посетителей, организации фуршета и других.

К сопутствующим обязанностям организатора выставки относятся обеспечение доступа заказчика на выставку, а также доступа иных лиц, присутствие которых необходимо для работы на выставке. Отдельно прописывается возможность привлечения заказчиком третьих лиц для оборудования выставочной площади. Если организатор допускает использование заказчиком собственных материалов для установки стендов и оборудования, в договоре указываются технические требования и требования безопасности, которым они должны соответствовать. В связи с этим нужно быть готовым к тому, что если для оборудования выставочной площади заказчик будет привлекать стороннюю организацию, ему понадобятся дополнительные документы, как для работников, так и для материалов, которые будут привлекаться и использоваться заказчиком.

Разграничение в соглашении об организации выставки условий, которые непосредственно или опосредованно связаны с оказанием услуг, и условий, связанных с подрядными отношениями и арендой, необходимо для четкого определения норм, которыми будут регулироваться те или иные положения смешанного договора.

 

Порядок оказания перечисленного выше комплекса услуг будет подчиняться правилам гл. 39 ГК РФ – Возмездное оказание услуг.

Единственным существенным условием договора возмездного оказания услуг является его предмет – это совершение исполнителем определенных действий или осуществление им определенной деятельности (ст. 779 ГК РФ). Таким образом, в предмете выставочного договора должно быть прямое указание на услуги по организации и проведению выставки.

Специфика любого договора на оказание услуг в том, что результат его исполнения всегда носит нематериальный характер. В связи с этим заказчик несет риски при невозможности исполнения соглашения по обстоятельствам, за которые ни одна из сторон не отвечает (п. 3 ст. 781 ГК РФ). Это означает, что при невозможности исполнения заказчик обязан будет оплатить организатору выставки фактически понесенные им расходы, даже если выставка не состоится.

Так, по делу о взыскании неосновательного обогащения выставочный центр отказал заказчику в возврате предоплаты по договору, ссылаясь на то, что услуги не были оказаны в связи с обстоятельствами, которые от организатора выставки не зависели (постановление ФАС Московского округа от 17.06.2011 № КГ-А40/5421-11 по делу № А40-100045/10-53-832). Причина отказа судом была признана необоснованной (организатор выставки не получил разрешение на ее проведение). Однако правило о переводе рисков на заказчика в случае невозможности оказания услуги, установленное п. 3 ст. 781 ГК РФ, создает условия для возникновения подобных споров. Указанную норму можно нивелировать соглашением сторон.

Нематериальный характер результата оказания услуги определяет также и судьбу имущества, которое используется для ее оказания. В данном случае применяются правила ст. 211 ГК РФ: если иное не будет предусмотрено договором, риск случайной гибели или случайного повреждения имущества несет его собственник (то есть организатор выставки). Учитывая диспозитивность нормы, следует обращать внимание на условия договора, по которым указанные риски переложены на заказчика.

 

По общему правилу, условие о сроках оказания услуг не является существенным. В соответствии со ст. 783 ГК РФ к договору возмездного оказания услуг применяются общие положения о подряде, в том числе правила о сроках выполнения работ. Однако согласно позиции Президиума ВАС РФ, изложенной в Информационном письме 25.02.2014 № 165, отсутствие согласованного сторонами условия о сроках оказания услуг само по себе не влечет признания договора возмездного оказания услуг незаключенным.

Кроме того, в письме цитируется, что сроки оказания услуг не являются его невосполнимым условием: к соответствующим отношениям сторон могут быть применены общие положения ГК РФ о гражданско-правовых договорах и обязательствах (в частности, п. 2 ст. 314 ГК РФ). Описанные рекомендации суда следует учитывать в случае попытки контрагента признать договор незаключенным.

Однако, несмотря на необязательность в договоре об оказании услуг условия о сроке, считаем, что специфика выставочного договора требует его указания. Это защитит заказчика на случай переноса даты проведения выставки, позволит возместить убытки без споров о надлежащих сроках исполнения по договору. Это особенно важно в связи с новой редакцией, упомянутой ст. 314 ГК РФ, которой установлен семидневный срок исполнения обязательства, на случай, если в договоре сроки исполнения не определены. Очевидно, что при проведении выставки, например, в другом городе, сроки, установленные данной статьей, могут оказаться неприемлемыми для заказчика.

Выставочный договор может содержать элементы договора подряда, когда организатор выставки берет на себя обязательства по установке стендов, оборудованию выставочной площадки заказчика. Рекомендуем разграничить в договоре те отношения, которые регулируются правилами об оказании услуг и те, которые будут регулироваться нормами о подряде. Советуем в договоре делать ссылки на конкретные статьи Гражданского кодекса, регулирующие те или иные отношения, или оформлять несколько договоров.

 

Напомним, что подряд всегда предполагает получение материального результата, в отличие от услуги, результат которой нематериален и потребляется в момент ее предоставления. Важно, что существенными условиями договора подряда являются условия о предмете (содержание, объем и результат работы) и о сроке выполнения работы.

Таким образом, договор об организации выставки, в части обязанностей организатора по изготовлению и оборудованию стендов, всегда должен содержать условия о сроках их изготовления и установки.

Договор об организации выставки предполагает передачу помещения, части помещения в пользование, то есть содержит элементы договора аренды. Существенными условиями договора аренды являются условия о предмете и о размере арендной платы (п. 1 ст. 654 ГК РФ).

Пунктом 3 ст. 607 ГК РФ прямо установлено, что в договоре аренды должны быть указаны данные, позволяющие определенно установить имущество, подлежащее передаче арендатору в качестве объекта аренды. При отсутствии этих данных в договоре условие об объекте, подлежащем передаче в аренду, считается несогласованным сторонами, а соответствующий договор не считается заключенным.

Таким образом, в договоре об организации выставки должно быть четко прописано, какой именно павильон передается, его площадь и иные характеристики, позволяющие идентифицировать объект.

Правила ст. 654 ГК РФ об обязательном указании размера арендной платы за аренду здания или сооружения применяются к договорам об аренде помещений в силу сложившейся судебной практики, а также позиции, изложенной в Информационном письме Президиума ВАС РФ от 01.06.2000 № 53.

Отметим, что условие о цене не является существенным для договора возмездного оказания услуг. При отсутствии в договоре таких условий цена определяется по общим правилам ГК РФ – в соответствии с п. 3 ст. 424 Кодекса. Однако в связи со смешанным характером выставочного договора на арендные правоотношения указанное правило не распространяется. Если стороны не определят цену за аренду, соглашение в этой части будет признано незаключенным. Указание в выставочном договоре сроков и цены оказанных работ и услуг необходимо не для соблюдения императивных правил ГК РФ, а во избежание споров с налоговыми органами.

В этих же целях следует оформлять акты о расходах на участие в выставке, акты приемки оказанных работ (услуг). Что касается передачи помещения в аренду, то по правилам ст. 655 ГК РФ, оформление такого акта является обязательным.

Смешанный характер соглашения об организации выставки имеет правовое значение при разрешении споров о возможности заказчика отказаться от договора. Кодексом предусмотрена возможность одностороннего отказа заказчика от исполнения договора при условии оплаты исполнителю фактически понесенных им расходов (ст. 782 ГК РФ). При этом по правилам договора аренды односторонний отказ от исполнения обязательства не допускается, если только стороны не установят такую возможность своим соглашением (ст. 310 ГК РФ).

То есть если суд будет квалифицировать правоотношения сторон как соглашение об оказании услуг, отказавшись от участия в выставке, заказчик обязан будет возместить только реальный ущерб, который понес организатор на момент отказа. Если же судом будет признано, что нарушены арендные обязательства, организатор имеет право возместить убытки в полном объеме: реальный ущерб и упущенную выгоду.

 

В одном из судебных дел было удовлетворено требование заказчика о возврате денежных средств, оплаченных по заявке на участие в выставке (постановление ФАС Северо-Западного округа от 10.09.2010 по делу № А56-80726/2009). Суд пришел к выводу, что заявка-договор на участие в выставке не может считаться смешанным, содержащим элементы договора аренды, так как не предусматривает передачу во временное владение истцу индивидуально определенного объекта недвижимого имущества. В связи с этим был сделан вывод, что в данном случае не могут применяться нормы о нарушении обязательств по аренде, а установленный в заявке запрет ее аннулирования в одностороннем порядке противоречит Кодексу. Суд указал, что односторонний отказ истца от участия в выставке не является правонарушением, поскольку такое право предоставлено заказчику в силу п. 1 ст. 782 ГК РФ и единственным последствием отказа является обязанность заказчика оплатить исполнителю фактически понесенные расходы.

Таким образом, односторонний отказ заказчика от договора без дополнительных санкций возможен до момента, когда правоотношения не получили смешанный характер и стороны не оформили соглашение о передаче выставочного помещения.

Возврат билетов и путёвок из-за коронавируса. Как это сделать?

Заглянуть на сайт Ростуризма и изучить актуальную информация об имеющихся угрозах, закрытых границах, об ограничении въезда и выезда в другие страны.

Если есть рекомендации Ростуризма или других уполномоченных органов о непосещении той или иной страны, то можно вернуть деньги за путевку в полном объеме, если Вы еще не начали путешествие, и за оставшуюся часть отдыха, если начали (правовое основание – ст. 14 Закона «Об основах туристической деятельности в РФ».

Туроператор или турагент могут Вам предложить перенести отдых или изменить направление на разрешенное, но решать только Вам. Если Вас устроит – соглашайтесь, если нет – возвращайте деньги.

Если ограничений по направлению никаких нет, но Вы просто боитесь короновируса, то договор с турфирмой или туроператором можно расторгнуть и просить вернуть деньги за исключением фактически понесенных расходов (правовое оснований – ст. 10 Закона «Об основах туристической деятельности в РФ», ч. 3 ст. 781 ГК РФ).

Если не согласны с их расчетом расходов, можно оспорить его в суде. Расходы в любом случае должны быть подтверждены документально, а не выражены в виде штрафов.

Про билеты, приобретенные самостоятельно: если рейс отменен, то это вынужденный отказ, и даже по невозвратному билету вам должны вернуть деньги. Актуальную информацию по рейсам и полетам следует уточнять у Вашей авиакомпании и на сайте Ростуризма. Возврат можно оформить по телефону или через сайт. Авиакомпании могут предложить Вам перенести рейс, если Вам будет удобно.

Если же никаких ограничений на ваше направление не существует, рейсы не отменены, не задержаны, ограничений в принимающей стране нет, то возврат будет зависит от тарифа и от правил авиакомпании.

В свою очередь, считаем, что потребитель вправе требовать 100% возврат денежных средств, даже если в стране не введены ограничения и границы не закрыты, в силу существенно изменившихся обстоятельств с момента заключения договора (ч. 3 ст. 451 ГК РФ).

Обращайтесь в юридическую компанию «Альтернатива» — мы поможем вернуть вам деньги.

Консультация по записи: 322-22-14.

ООО ФПК «Альтернатива»

Бердск, ул. Ленина, 94, 3-й этаж, офис 2

тел. +7 (383) 322-22-14

Наш сайт fpk-alternativa.ru

Инстаграм https://www.instagram.com/alternativa.fpk

Инфоцентр – «ТЛС-ПРАВО»

Инфоцентр – «ТЛС-ПРАВО»

27 мая 2013

Исходя из положений ст. ст. 779, 781 ГК РФ, ст. 37 Закона РФ от 07.02.1992 № 2300-1 «О защите прав потребителей» (далее — Закон о защите прав потребителей) оплате подлежат фактически оказанные заказчику услуги.
Вместе с тем Закон о защите прав потребителей не регламентирует порядок расчетов сторон по договору возмездного оказания услуг, в случае, если услуги фактически не были оказаны, но при этом заказчик не отказался от дальнейшего исполнения договора в одностороннем порядке.
В данной ситуации необходимо применять общие положения ГК РФ, предписывающие определенный порядок расчетов сторон по договору возмездного оказания услуг.
В соответствии с п. 3 ст. 781 ГК РФ в случае невозможности исполнения услуг по обстоятельствам, за которые ни одна из сторон не отвечает, заказчик должен возместить исполнителю фактически понесенные им расходы, если иное не предусмотрено законом или договором.
При этом в ГК РФ не перечислены случаи, которые могут расцениваться как обстоятельства, за которые ни одна из сторон не отвечает.
Согласно судебной практике к таким случаям относятся болезнь заказчика либо лица, непосредственно потребляющего услугу (Постановление ФАС Уральского округа от 14.10.2009 № Ф09-7887/09-С1).
Вместе с тем в силу указанной нормы исполнитель вправе потребовать возмещения фактически понесенных им расходов.
В рассматриваемой ситуации такими документами могут быть: расчет плановой себестоимости места в детском саду, плановая смета и расчет затрат стоимости содержания места в детском саду в период отсутствия ребенка (расходы на выплату заработной платы работникам детского сада, налоги, оплата коммунальных услуг, хозяйственные расходы на санитарную обработку, обслуживание пожарной сигнализации, охрану и другие расходы).
При документальном подтверждении расчета понесенных расходов исполнитель услуги вправе удержать из уплаченной суммы аванса соответствующую сумму расходов, в ином случае, — сумма аванса подлежит возврату заказчику.
Таким образом, исполнитель не вправе удерживать сумму уплаченного аванса при условии, что услуги не были оказаны по обстоятельствам, за которые ни одна из сторон не отвечает (например, болезнь лица, непосредственно потребляющего услугу).
При этом исполнитель имеет право на возмещение фактически понесенных им расходов при условии их документального подтверждения.
Диспозитивный характер п. 3 ст. 781 ГК РФ, по общему правилу, позволяет сторонам договора оговаривать в договоре иные последствия невозможности исполнения договора при возникновении обстоятельств, за которые ни одна из сторон не отвечает.
Тем не менее при рассмотрении аналогичных споров, вытекающих из договоров возмездного оказания услуг потребителям, суды общей юрисдикции с учетом ст. 16 Закона о защите прав потребителей исходят из принципа защиты интересов более слабой стороны договора, т. е. потребителя.
При таких обстоятельствах условия договора, исключающие право на возврат уплаченного в счет исполнения услуги аванса или содержащие обязанность уплатить вознаграждение в случае, если услуга не оказана по объективным, не зависящим от сторон обстоятельствам, признаются неправомерными и противоречащими п. 3 ст. 781 ГК РФ.
Запрет на включение в договор таких условий не препятствует исполнителю требовать возмещения понесенных расходов (Обзор Красноярского краевого суда от 01.05.2008 «Обзор судебной практики рассмотрения судами дел о защите прав потребителей»).

Проблемы возмездного оказания услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений Текст научной статьи по специальности «Экономика и бизнес»

О. А. Кычина

ПРОБЛЕМЫ ВОЗМЕЗДНОГО ОКАЗАНИЯ УСЛУГ ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ ОБСЛУЖИВАНИЮ ЗДАНИЙ

И СООРУЖЕНИЙ

Оценивается законодательство, регулирующее отношения в сфере возмездного оказания услуг. Раскрывается содержание договора, рассматривается его правовая форма.

В настоящее время визитной карточкой крупнейших городов мира становятся мега-здания и сооружения. В России за последние десять лет введено в эксплуатацию несколько десятков тысяч такого рода строений — деловых, торговых и развлекательных центров. В Москве возведено множество мостов через реку Москву, представляющих собой сложнейшие инженерные коммуникации. Ждут своего воплощения еще более крупные проекты.

Создание мега-зданий и сооружений породило небывалый спрос на услуги по их техническому обслуживанию. Теперь, когда происходит укрупнение бизнеса, уже построенные здания и сооружения собственники недвижимости отдают в доверительное управление. Собственники недвижимости, управляющие компании и есть потенциальные потребители услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений. В таких сделках они выступают заказчиками. В круг потребителей услуги входят и товарищества собственников жилья, жилищно-строительные кооперативы.

Понятие «услуга» — не порождение новейшего времени. В классическом римском праве уже обнаруживаются детально разработанные договорные конструкции, опосредующие процесс оказания услуг. В праве Древнего Рима проводилось четкое разграничение между договором найма услуг и договором подряда. Основным отличием считалось наличие или отсутствие законченного результата деятельности исполнителя [7. С. 58].

После римских юристов услуги как правовой институт практически не рассматривались и не развивались вплоть до начала XIX в. В начале Х1Х в. услуги нашли свое кодифицированное выражение во Французском гражданском кодексе Наполеона 1804 г., а позднее — в Германском гражданском уложении 1900 г.

Первое законодательное закрепление услуг в России появляется в Своде законов гражданских, изданных в 1832 г., хотя разграничение между понятиями «услуга» и «работа» здесь отсутствует. Услуги не упоминались в законодательных актах России вплоть до 1993 г. Однако

понятие «услуга» активно обсуждалось в работах известных экономистов и правоведов.

В 1993 г. категория «услуга» впервые появилась в Конституции РФ: «В Российской Федерации гарантируются единство экономического пространства, свободное перемещение товаров, услуг и финансовых средств, поддержка конкуренции, свобода экономической деятельности» (п. 1 ст. 8). «На территории Российской Федерации не допускается установление таможенных границ, пошлин, сборов и каких-либо иных препятствий для свободного перемещения товаров, услуг и финансовых средств» (п. 1 ст. 74).

Таким образом, Конституция РФ ставит услугу в один ряд с товарами и финансовыми средствами. Приравнивание услуг к товарам и финансовым средствам позволяет говорить о том, что услуга становится объектом гражданского права. Позднее это находит свое подтверждение и в Гражданском Кодексе РФ (ст. 128 ГК РФ): «К объектам гражданских прав относятся вещи, включая деньги и ценные бумаги, иное имущество, в том числе имущественные права; работы и услуги…» Кроме того, в Гражданском кодексе 1995 г. появилась отдельная глава 39 «Возмездное оказание услуг», в которой содержится только пять статей. Статьи носят общий характер, не отражают специфику видов возмездных услуг и тем самым не обеспечивают в полной мере защиту прав участников обязательств по возмездному оказанию услуг. Поэтому практически необходимо каждый вид возмездного оказания услуг, в том числе и услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений, регулировать специальными нормативно-правовыми актами (федеральными законами).

Договор возмездного оказания услуг как правовая форма обязательств по техническому обслуживанию зданий и сооружений предусматривает, что исполнитель обязуется по заданию заказчика оказать услуги (совершить определенные действия или осуществить определенную деятельность), а заказчик обязуется оплатить услуги. Как видим, определение расплывчато, носит общий характер, что не позволяет участникам гражданского оборота в данной сфере общественных отношений отличить понятие «услуга» от понятия «работа». Разграничение услуг и работ важно для четкого регулирования прав в этой сфере отношений.

В гражданско-правовой доктрине общим признаком, объединяющим договоры по возмездному оказанию услуг и одновременно отличающим их от договоров подряда, называют «отсутствие в овеществленной форме результата выполненной работы» [8. С. 489; 2. С. 396]. Другим признаком следует считать «характер интереса». Интерес заказчика в договоре возмездного оказания услуг «сводится к соверше-

нию действий» [1. С. 215]. «Результату предшествует совершение действий, не имеющих материального воплощения, составляющих вместе с ним единое целое. Поэтому при оказании услуг продается не сам результат, а действие к нему» [11. С. 119]. Третий отличительный признак сформулирован непосредственно законодателем. Статья 780 ГК РФ определяет, что услуги должны быть оказаны лично, т. е. они тесно связаны с личностью услугодателя. Четвертый признак — «характер результата». Результат возмездного оказания услуг не имеет овеществленной формы, утверждает гражданское право [4]. Следовательно, деятельность услугодателя — по договору возмездного оказания услуг — не воплощается в овеществленном результате [5. С. 633-634.]. Пятый признак — «гарантированность результата». Услугодатель не гарантирует достижение предполагаемого результата [5. С. 633-634]. Достижение предполагаемого результата может присутствовать только при договоре подряда.

Рассмотренные доктринальные признаки не выражают, однако, специфику отдельных видов возмездного оказания услуг, в том числе услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений. В практике арбитражных судов выделяется «полезный эффект» как признак возмездного оказания услуг.

По нашему мнению, признаками, отражающими специфику всех услуг, являются, во-первых, передача и потребление профессиональных знаний и, во-вторых, полезный эффект нематериального характера от применения профессиональных знаний. Профессиональные знания — это совокупность познаний в определенной области [10. С. 201]. В области технического обслуживания зданий и сооружений это знание инженерных систем зданий и сооружений, способов их технического обслуживания и др. Полезный эффект нематериального характера — то или иное поведение заказчика в зависимости от содержания полученных от исполнителя сведений.

Таким образом, под услугой понимается реализация и потребление профессиональных знаний, направленных на получение полезного эффекта нематериального характера. Это определение целесообразно внести в пункт 2 статьи 779 ГК РФ. С его помощью появляется возможность унифицировать понятие «услуга». Исходя из него можно сформулировать видовое определение услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений.

Услуга по техническому обслуживанию зданий и сооружений — это основанные на законе и/или договоре передача и потребление профессиональных знаний в данной области с целью получения полезного эффекта нематериального характера у заказчика. Передача

и потребление означают проведение комплекса мероприятий по техническому обслуживанию зданий и сооружений.

Комплексные мероприятия по договору возмездного оказания услуг по техническому обслуживанию зданий с сооружений включают:

— фактические действия — проведение технического визуального осмотра специалистом здания, сооружения, оборудования, а также проведение технического осмотра с использованием технических средств;

— юридические действия — составление акта о проведении технического осмотра здания, сооружения; письменное уведомление заказчика о целесообразности проведения ремонта, об аварийном состоянии здания и сооружения, заключение сделок и т. д., выдача доверенности исполнителю на выполнение юридических действий; контроль исполнителя за проведением ремонтных и иных работ и т. д.

Условия по техническому обслуживанию зданий и сооружений определяются сторонами в договоре. Договор заключается путем составления единого документа и его подписания сторонами. Спор, связанный с заключением договора, по взаимному согласию сторон, передается на рассмотрение в суд. Сторонами договора возмездного оказания услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений являются заказчик и исполнитель.

ГК РФ не устанавливает каких-либо ограничений в отношении субъектов обязательства (заказчика и исполнителя), в связи с чем исполнителем и заказчиком могут быть любые физические и юридические лица. Исполнителем по договору возмездного оказания услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений является лицо, осуществляющее предпринимательскую деятельность на основании специального разрешения (лицензии) [п. 1 ст. 49 ГК РФ]. В штате исполнителя должно быть не менее 50% специалистов в области технического обслуживания с высшим образованием и опытом работы более 5 лет. Каких-либо ограничений в отношении заказчика гражданское законодательство не устанавливает.

Содержание договора составляет совокупность условий, по которым сторонами достигнуто соглашение [6. С. 431]. Одно из самых существенных — условие о предмете договора. Под предметом договора понимаются профессиональные знания по техническому обслуживанию зданий и сооружений, используемые при проведении комплекса мероприятий и направленные на достижение полезного эффекта нематериального характера. Полезный эффект нематериального характера в этом случае проявляется в выборе поведения заказчика в зависимости от содержания сведений, полученных от исполнителя. Например, заказчик может согласиться на рекомендованный исполнителем ремонт зданий и сооружений или отказаться от него и т. п. От этого зависят условия, при

которых здания и сооружения будут находиться в надлежащем состоянии, обеспечивающем их функциональное назначение (эксплуатацию).

В соответствии с пунктом 1 статьи 781 ГК РФ оплата услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений производится в порядке и в сроки, предусмотренные договором. За нарушение условий договора виновная сторона уплачивает другой стороне штраф в размере, определяемом в договоре.

Гражданским законодательством установлен порядок оплаты услуг при невозможности исполнения обязательств как по вине заказчика, так и при возникновении обстоятельств, за которые ни одна из сторон не отвечает. В случае невозможности исполнения, возникшем по вине заказчика, услуги — в соответствии с пунктом 2 статьи 781 ГК РФ -подлежат оплате в полном объеме, если иное не предусмотрено законом или договором возмездного оказания услуг. Когда невозможность исполнения возникла по обстоятельствам, за которые ни одна из сторон не отвечает, заказчик — согласно пункту 3 статьи 781 ГК РФ — возмещает исполнителю фактически понесенные им расходы, если иное не предусмотрено законом или договором.

Сроки исполнения договора возмездного оказания услуг определяются по соглашению сторон. Несмотря на то, что ГК РФ не содержит специальных правил о сроке действия договора, его определение имеет большое значение.

Заказчик имеет право:

— требовать от исполнителя надлежащего оказания услуг по техническому обслуживанию;

— осуществлять контроль за деятельностью исполнителя;

— расторгнуть договор.

Заказчик обязан:

— своевременно и в полном объеме оплатить услуги исполнителю;

— обеспечить допуск исполнителя в здание и сооружение;

— предоставлять исполнителю техническую документацию о здании и сооружении;

— выделить исполнителю помещение для технических целей.

Исполнитель имеет право:

— требовать своевременной и полной оплаты за оказанные услуги;

— требовать предоставления технической документации о здании и сооружении; допуска в здание и сооружение;

— расторгнуть договор.

Исполнитель обязан:

— надлежащим образом исполнять условия договора возмездного оказания услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений;

— предоставлять заказчику отчетность о техническом состоянии зданий и сооружений; по поручению заказчика осуществлять контроль за проведением ремонтных работ в здании, сооружении.

Гражданское законодательство закрепило порядок изменения и расторжения договора возмездного оказания услуг. В соответствии с пунктом 1 статьи 782 ГК РФ заказчик вправе отказаться от исполнения договора при условии оплаты исполнителю фактически понесенных им расходов. Руководствуясь пунктом 2 статьи 782 ГК РФ, исполнитель вправе отказаться от исполнения обязательств по договору возмездного оказания услуг лишь при условии полного возмещения заказчику убытков.

Проведенные исследования и современная практика подтверждают, что для повышения эффективности в данной сфере гражданско-правовых отношений необходимо принять федеральный закон «О возмездном оказании услуг по техническому обслуживанию зданий и сооружений», в котором должна быть отражена специфика договора и его исполнения.

Список литературы

1. Брагинский М. И., Витрянский В. В. Договорное право. Книга третья: Договоры о выполнении работ и оказании услуг. М.: Статут, 2002.

2. Гражданский кодекс РФ. Часть II. Текст, комментарий, алфа-витно-предметный указатель / Под ред. О. М. Козырь, А. Л. Маковского, С. А. Хохлова / МЦФЭР. М., 1996.

3. Гражданский кодекс Российской Федерации. Части первая, вторая и третья. М.: Омега-Л, 2003.

4. Гражданское право: Учебник: В 2 т. Т. II. Полутом 2 / Отв. ред. проф. Е. А. Суханов. 2-е изд., перераб. и доп. М.: БЕК, 2003.

5. Гражданское право: Учебник. 4-е изд., перераб. и доп. / Под ред. А. П. Сергеева, Ю. К. Толстого. Т. 2. М.: ООО «ТК Велби», 2003.

6. Гражданское право: Учебник. Ч. 1 / Под ред. А. Г. Калпина, А. И. Масляева. 2-е изд., перераб. и доп. М: Юристъ, 2002.

7. Измайлов Е. В. Место договора на выполнение маркетинговых исследований в системе гражданско-правовых договоров // Юрист. 1999. № 8.

8. Иоффе О. С. Обязательственное право. М.: Юридическая литература, 1975.

9. Новицкий И. Б. Римское право. М.: ТЕИС, 1997.

10. Ожегов С. И. Словарь русского языка. М.: Русский язык, 1986.

11. Романец Ю. Договоры возмездного оказания услуг // Закон. 1999. № 10.

Повышенное внимание к риску ожирения

Связь между ожирением и несколькими основными причинами смерти, такими как сердечно-сосудистые заболевания, диабет и рак, хорошо известна. Однако исследователи обнаружили доказательства того, что ожирение также является значительным фактором риска по крайней мере для 13 различных видов рака 1 — основной причины смерти застрахованного населения, включая многие из наиболее распространенных видов рака, повышающих риск смертности, таких как рак поджелудочной железы, колоректальный рак и рак груди. 2

Признавая эту ключевую ассоциацию, Munich Re установило партнерство с Американским онкологическим обществом для финансирования ключевых исследований, посвященных воспалительному компоненту ожирения, а также влиянию диеты и упражнений на снижение риска рака.

По словам доктора Нила Айенгара, онколога онкологического центра Memorial Sloan Kettering, по крайней мере 1 из 6 смертей от рака среди мужчин и 1 из 7 случаев смерти от рака среди женщин связаны с ожирением. 1

Наш опыт с COVID-19 также вызывает новые опасения.Анализы показали, что у людей с индексом массы тела (ИМТ) 35 и более дела обстоят значительно хуже, и одно исследование пришло к выводу, что «ожирение играет огромную роль в риске смерти от COVID-19, особенно у пациентов мужского пола и более молодого населения. ” 3 Это говорит о том, что в будущих пандемиях, связанных с респираторными заболеваниями, риск для людей с ожирением также может возрасти. Это особенно важно, учитывая, что более трети американцев и более четверти канадцев в настоящее время страдают ожирением.

Краткосрочные исследования смертности не отражают истинный риск, связанный с увеличением распространенности ожирения в Северной Америке, особенно для молодых кандидатов и более тяжелых кандидатов

Поскольку как распространенность ожирения, особенно среди молодежи, так и частота эпидемий, вызванных глобализацией и изменением климата, продолжают расти, мы ожидаем, что риск, связанный с ожирением, также будет расти. Это делает более важным, чем когда-либо, использование соответствующих инструментов для выявления «здорового ожирения» и точного определения цены для лиц с повышенным риском.

IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Воспаление, вызванное макрофагами, вызывает преобразование транскриптома в мезенхимальных стромальных клетках, увеличивая их потенциал для восстановления тканей

1. Введение

Трансплантация клеток — это терапевтическое решение для поврежденных тканей с низкой регенеративной способностью и воспалительных заболеваний [1,2,3,4, 5,6]. Трансплантаты мезенхимальных стромальных клеток (МСК) поддерживают восстановление тканей на животных моделях при различных состояниях за счет паракринного запуска механизмов эндогенного восстановления, включая модуляцию местного воспалительного ответа и реваскуляризацию [7,8,9,10,11].В свою очередь, МСК реагируют на сигналы в среде поврежденной ткани и организуют события восстановления с помощью локальных клеток [12,13,14]. Потенциал и преимущества МСК для восстановления тканей послужили поводом для проведения текущих клинических испытаний по лечению, среди прочего, повреждения сердца [4,15], повреждения спинного мозга [2], восстановления опорно-двигательного аппарата [16,17] и воспалительных заболеваний [18,19]. ]. Как правило, влияние трансплантатов МСК на восстановление тканей и восстановление функций ограничено [20,21,22]. Поиск средств усиления воздействия трансплантатов МСК на восстановление тканей продолжается.Относительно неизученный метод повышения паракринной активности трансплантатов МСК — кондиционирование клеток перед использованием. Естественно, циркулирующие сигнальные молекулы, специфичные для поврежденной ткани, стимулируют МСК возвращаться в рану и участвовать в восстановлении [23,24,25,26]. Стратегии трансплантации обычно используют нестимулированные, наивные МСК, имплантируемые непосредственно в поврежденную ткань-мишень [1,2]. Кондиционирование может применяться к МСК перед трансплантацией (т.е. предварительное кондиционирование или праймирование) с целью облегчения их введения и усиления их репарационных взаимодействий в месте повреждения [27].Предыдущие данные показали, что МСК, подвергнутые гипоксии [28], липополисахаридам (ЛПС) [28,29] или цитокинам [27,30], изменяют свой секретом в поддержку восстановления. Мы рассуждали, что воздействие воспаления, вызванного макрофагами, может вызвать у МСК увеличивают их ремонтный потенциал. Воспаление — это фундаментальное событие, которое подготавливает поврежденную ткань к необходимым восстановительным процессам [31]. Провоспалительные макрофаги играют преобладающую роль на ранних и патологически хронических стадиях воспаления [32,33].МСК и макрофаги взаимно взаимодействуют во время регенеративного заживления ран [13,14,34,35]. Здесь мы исследовали вызванное макрофагами воспаление как средство для кондиционирования МСК посредством анализа их транскриптома и секретома и оценили потенциальную терапевтическую ценность его использования в качестве полезного метода предварительного кондиционирования перед трансплантацией.

Мы обнаружили, что МСК, обусловленные воспалением, происходящим из макрофагов, активируют гены и увеличивают секрецию факторов роста, широко связанных с стимулированием образования кровеносных сосудов, иммуномодуляции и восстановления тканей.Мы также показываем, что этот метод кондиционирования вызывает подавление генов про-выживания для МСК и активирует гены проапоптоза. Значение этих более поздних результатов и механизм действия, опосредующего общий кондиционирующий эффект, исследуются в последующих исследованиях.

3. Обсуждение

Доклинические исследования и текущие клинические испытания выявили терапевтический потенциал трансплантатов МСК для восстановления различных тканей. Здесь мы исследовали, может ли кондиционирование МСК с воспалением, происходящим из макрофагов, повысить их способность поддерживать восстановление тканей.Мы показали, что воспаление, вызванное макрофагами, запускает МСК для активации генов, связанных с заживлением ран, и усиливает секрецию молекул, необходимых для репаративных событий. Мы также показали, что вызванные воспалением изменения транскриптома МСК подвергают сомнению их жизнеспособность и подвижность. Дальнейшие исследования продолжаются, чтобы определить оптимальный баланс между положительным и потенциально вредным воздействием воспаления на трансплантат. Наши данные подтверждают идею о том, что воспаление, вызванное макрофагами, можно использовать для кондиционирования МСК перед трансплантацией, чтобы усилить их паракринные репаративные эффекты, что может повысить терапевтическую эффективность трансплантатов МСК.

Кондиционирование МСК с вызванным макрофагами воспалением привело к повышенной экспрессии генов, связанных, среди прочего, с ответом на воспаление, отрицательной регуляцией высвобождения цитокинов, защитным ответом и ответом на стресс (например, ido1, nos2, il13r, ptgs2, hif1α, nfkbiz ), предполагая, что кондиционирование усиливает иммуномодулирующую способность МСК. Клеточный стресс считается молекулярной адаптацией либо для восстановления гомеостаза, либо для индукции гибели клеток в ответ на внешние или внутренние угрозы [36,37].Гены, связанные со стрессом, являются конститутивными генами, которые поддерживают клеточный гомеостаз в нормальных условиях, но активируются при возникновении событий, таких как воспаление, токсины, температура или гипоксия, среди прочего [36,38,39]. При нормоксических воспалительных состояниях, таких как в наших культурах, обогащение сигнального пути HIF1α активированным DEG предполагает адаптацию к физиологическому стрессу, который может быть защитным для клетки и окружающей ткани. Наши условия культивирования включают присутствие воспалительных цитокинов и ЛПС, бактериального эндотоксина, которые интерпретируются МСК как предупреждения о нарушении работы системы и запускают повышенную регуляцию hif1α HIF1 и nfkb NFKB, обоих основных факторов транскрипции, связанных с иммунитетом, стрессом и путями восстановления. [40,41,42].Доказательства показали, что воздействие стимулов, запускающих клеточный стресс, активирует репарацию и иммунный регуляторный ответ МСК [10,14,43], что приводит к более сильной паракринной модуляции фенотипа близлежащих макрофагов [44,45,46]. Регулирование фенотипа макрофагов важно, потому что оно координирует эффективное заживление ран [47,48,49] и способствует восстановлению после повреждений в различных тканях, включая сердечную [27,50,51], нервную [52,53], кожную [ 54] и мышечные ткани [55]. Местная иммуномодуляция может изменять молекулярную среду и другие иммунные клетки, которые также имеют прямое или косвенное влияние на фенотип макрофагов, например регуляторные Т-клетки [56,57].Правильная координация взаимодействий иммунных и стромальных клеток также может привести к усилению ангиогенеза [58,59]. Повышение иммуномодулирующей способности МСК до трансплантации может сделать трансплантат более эффективным, особенно для восстановления тканей, отмеченных хроническим воспалением. Воспалительное кондиционирование МСК вызвало увеличение экспрессии генов, участвующих в ангиогенезе (например, vegf, ang-1, hgf, egf) и секреции проангиогенных факторов, VEGF и HGF по сравнению с некондиционными МСК.Кроме того, сигнальный путь VEGF и сигнальный путь HIF-1 были обогащены усиленными генами. Эти результаты предполагают, что кондиционирование с помощью воспаления, происходящего от макрофагов, увеличивает ангиогенную способность МСК. VEGF является основным фактором роста, который инициирует ангиогенез, индуцируя пролиферацию эндотелиальных клеток сосудов и дифференцировку концевых эндотелиальных клеток, которые необходимы для образования сосудистой трубки [60, 61, 62]. Предыдущие исследования показали, что лечение рекомбинантным VEGF способствует реваскуляризации, что коррелирует со снижением распространения повреждения в поврежденном спинном мозге [63] и увеличением регенерации кости [64].Ангиопоэтины играют ключевую роль в увеличении созревания и снижении проницаемости новообразованных кровеносных сосудов [65,66]. HGF, первоначально митоген гепатоцитов, связан с усиленным ангиогенезом и защитой кровеносных сосудов [67]. Aoki и его коллеги продемонстрировали, что HGF поддерживает ангиогенез, тем самым способствуя восстановлению нервных и сердечных тканей [68,69]. Усиление ангиогенных эффектов МСК перед трансплантацией в поврежденные ткани может обеспечить лучшую реваскуляризацию, опосредованную трансплантатом, что важно для оптимизации восстановления тканей.Возникающее из макрофагов воспалительное кондиционирование аннотаций, связанных с репарацией, обогащенных МСК, таких как развитие ткани, ответ на ранение и передача сигналов нейротрофина, указывало на более сильную активацию поддерживающих общую репарацию механизмов в кондиционированных МСК по сравнению с некондиционными МСК. Нейротрофины, такие как NGF и GDNF, а также инсулиноподобные факторы роста (семейство IGF), факторы роста фибробластов (FGF) и HGF запускают процессы выживания клеток и роста аксонов, а также вызывают заживление во многих типах тканей [70,71, 72,73,74,75,76,77].Улучшение локальной выживаемости клеток обычно связано с лучшим восстановлением и восстановлением [9,68,76]. Интересно, что термин «пути развития рака» был обогащен генами, активируемыми после воспалительного кондиционирования МСК. Учитывая совпадение молекулярных механизмов между раком и регенеративной биологией (например, путь mTOR, путь передачи сигналов Wnt) [78,79,80,81,82,83], возможно, что гены, участвующие в этих перекрывающихся путях и регулируемые в нашем наборе данных , такие как vegf, hif-α, hgf, fgf, bmp, wnt и frizzled, также способствуют восстановлению.В совокупности наши данные показывают, что обусловленное воспалением макрофагами кондиционирование МСК запускает более сильные паракринные механизмы выживания по сравнению с безусловными МСК. Повышение способности МСК поддерживать выживаемость клеток до трансплантации может привести к улучшенному восстановлению тканей, опосредованному трансплантатом. Наши результаты показали, что воспаление макрофагов влияет на МСК, поддерживая иммуномодуляцию, ангиогенез и выживаемость клеток. Эти три аспекта заживления ран тесно и взаимно координируются, объединяясь в триаду восстановления, необходимую для достижения успешных результатов [48,84].Различные фенотипы макрофагов необходимы во время разных фаз ангиогенеза [85,86,87,88,89] и по-разному влияют на выживаемость местных клеток. Ангиогенез необходим для ограничения часто прогрессирующей потери клеток и тканей в месте повреждения. В свою очередь, защита клеток поддерживает поддержание кровеносных сосудов, а правильная васкуляризация влияет на фенотип макрофагов. Таким образом, перекрестное взаимодействие между МСК и макрофагами важно для успешной репарации [12,13,14], а повышенная иммуномодулирующая, ангиогенная и защитная способность МСК после воспалительного кондиционирования может ускорить общие терапевтические эффекты трансплантатов МСК.Воспалительное кондиционирование МСК, происходящее из макрофагов, также вызывает снижение экспрессии генов, участвующих в активности цитоскелета, динамике актина и способности клеточной адгезии, что может нарушить жизнеспособность и подвижность МСК. Возможное снижение жизнеспособности согласуется с выводом о том, что воздействие на МСК воспалительных молекул, IFNγ и TNFα вызывает апоптоз [22,90]. Общее влияние возможного ослабления жизнеспособности и подвижности МСК после кондиционирования с воспалением, вызванным макрофагами, неизвестно.В общем, жизнеспособность трансплантированных клеток при повреждении низкая из-за различных факторов, включая иммунную несовместимость, вызывающую отторжение, недостаток субстрата, приводящий к аноикису [91,92], или цитотоксические молекулы, вызывающие апоптоз и некроз. Повышение выживаемости трансплантированных клеток может привести к улучшенному восстановлению и восстановлению [35,93,94]. Таким образом, снижение жизнеспособности из-за воспалительного кондиционирования может ограничивать продолжительность репарационных эффектов трансплантированных МСК. С другой стороны, Dazzi и его коллеги сообщили, что макрофаги при повреждении фагоцитируют апоптотические МСК, что приводит к продукции PGE2 и IDO1 и более эффективной иммуномодуляции, чем фагоцитоз живых, здоровых МСК [95,96].Это привело к мнению, что жертвенная смерть МСК потенциально может увеличить их вклад в иммуномодуляцию. Другое возможное преимущество ослабленной жизнеспособности МСК состоит в том, что можно предотвратить спонтанное развитие опухоли трансплантированными клетками. Последствия для ослабленной адгезии и подвижности МСК после кондиционирования с вызванным макрофагами воспалением неизвестны. Возможно, что при прямой инъекции в травму уменьшенная миграционная способность будет полезна, потому что МСК останутся там, где они необходимы.С другой стороны, при системном введении МСК снижение адгезии и подвижности клеток может поставить под угрозу их способность достигать намеченного целевого сайта [24,25,26,34]. Необходимы дальнейшие исследования для более полного понимания in vivo последствий обусловленного макрофагами воспалительного кондиционирования и других типов кондиционирования МСК. Текущие последующие исследования в нашей лаборатории направлены на то, чтобы ответить на эти вопросы и раскрыть молекулярные механизмы, с помощью которых макрофаги изменяют поведение МСК.Лучшее понимание молекулярной взаимосвязи между стрессом, воспалением и восстановлением необходимо для разработки более эффективного целевого подхода к кондиционированию. Возможно, потребуется использовать различные методы кондиционирования в зависимости от пути введения и терапевтического применения. В заключение мы показали, что кондиционирование МСК с воспалением, происходящим из макрофагов, увеличивает экспрессию генов, участвующих в иммуномодуляции, реваскуляризации и выживаемости клеток. , которые жизненно важны для восстановления тканей (рис. 7).Эти обнадеживающие результаты показали, что воспалительное кондиционирование МСК может повысить терапевтическую силу трансплантатов МСК для различных поврежденных тканей, что имеет широкое клиническое значение. Преимущество использования воспаления, вызванного макрофагами, в качестве кондиционирующего подхода состоит в том, что МСК будут ориентированы на среду, в которую они будут введены. Здесь мы использовали МСК крысы с целью заложить основу для доклинических исследований аллотрансплантата in vivo. Наши интерпретации относятся к потенциальным клиническим применениям, поскольку было показано, что МСК крысы, мыши и человека ведут себя одинаково при воздействии стимулов, активирующих вышеупомянутые пути [27,28], и мы считаем это трансформируемым эффектом.Сравнительный анализ стратегии кондиционирования воспаления на клетках крысы, мыши и человека поможет понять, сохраняется ли повышенная паракринная активность. Мы также показали, что воспалительное кондиционирование может нарушить жизнеспособность и подвижность МСК. Влияние этих возможных эффектов воспалительного кондиционирования на прорегенеративный потенциал МСК in vivo в настоящее время неизвестно. Дополнительные доклинические исследования необходимы для дальнейшего изучения физиологического эффекта предварительно кондиционированных МСК и оптимизации метода воспалительного кондиционирования, чтобы наиболее эффективно использовать методы кондиционирования, которые повышают терапевтический потенциал МСК.

4. Материалы и методы

4.1. Животные

В данном исследовании использовались взрослые самки крыс Sprague – Dawley (n = 6, 225–250 г, Charles Rivers Laboratory, Wilmington, MA, USA). Мы следовали рекомендациям Национального института здравоохранения и Министерства сельского хозяйства США для всех процедур с животными. Комитет по институциональному уходу и использованию животных Университета Майами утвердил процедуры (Протокол № 15-231, утвержденный 7 декабря 2015 г.). При оценке и аккредитации ухода за лабораторными животными животноводческий комплекс был аккредитован.Крыс содержали парами при 12-часовом цикле свет / темнота с доступом к пище и воде ad libitum.

4.2. Сбор и культивирование костного мозга

Крыс умерщвляли в камере CO 2 , а их задние конечности немедленно брили и промывали раствором антисептического мыла, а затем этанолом. Бедренные и большеберцовые кости иссекали, промывали и хранили в ледяной среде Лейбовица L-15 (ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). От костей были отрезаны эпифизы, и с помощью шприца и иглы костномозговая полость диафиза промывалась средой D10, которая состоит из среды Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM; ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), с добавлением глутамин, 10% фетальная бычья сыворотка (FBS) и гентамицин 1: 1000.Промытый костный мозг суспендировали в D10 с помощью стеклянной пипетки и дважды промывали в D10 центрифугированием при 1500 оборотах в минуту (об / мин) в течение 5 минут при 4 ° C. Супернатанты удаляли после промывок, а конечный осадок суспендировали в D10 и процеживали через сетчатый фильтр для клеток Falcon ™ 100 мкм (BD Life Sciences, Ист-Резерфорд, Нью-Джерси, США) для удаления остатков. Конечную суспензию клеток добавляли в 100-миллиметровую пластиковую чашку для культивирования FalconTM без покрытия (BD Life Sciences, Ист-Резерфорд, Нью-Джерси, США) и культивировали при 37 ° C и 6% CO 2 в течение 16-24 часов.В культуральной чашке моноциты были суспендированы в культуральной среде, и МСК прилипли ко дну. Культуральный супернатант собирали через 20-24 ч и подвергали клеточной сортировке, активируемой флуоресценцией (FACS), для отделения моноцитов. Свежий D10 добавляли к МСК, которые прилипали к пластиковой чашке в течение первых 10-20 часов культивирования. С помощью этого протокола мы получили культуры МСК и макрофагов из одних и тех же исходных костей.

4.3. Мезенхимальные стромальные клетки
МСК костного мозга культивировали на пластике в течение 72 часов.После удаления среды прикрепленные клетки дважды промывали сбалансированным солевым раствором Хэнкса (HBSS; ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), а затем отделяли трипсин-EDTA в HBSS в течение 3 мин. Стеклянную пипетку использовали для суспендирования МСК, которые затем собирали в коническую пробирку объемом 50 мл с D10 и центрифугировали при 1500 об / мин в течение 5 минут при 4 ° C. Каждая коническая пробирка содержала суспензию МСК от одной крысы. Осадок ресуспендировали и один раз промывали в D10 для удаления и нейтрализации оставшегося трипсина.Затем клетки высевали на чашки, покрытые поли-D-лизином (PDL), с D10 и пометили пассаж 0 (P0). Среду обновляли каждые 72 часа, и почти слившиеся культуры разделяли на следующий пассаж. На P2 FACS использовался для сортировки МСК и удаления зрелых макрофагов, которые присутствуют в костном мозге и прикрепляются к пластику в течение первых 8 часов культивирования. Отсортированные МСК культивировали в D10 на чашках, покрытых PDL, до P4. Мезенхимальный фенотип МСК P4 был подтвержден с помощью проточной цитометрии (раздел I дополнительных данных; рисунок S2A – D).В экспериментах использовали МСК P4.
4.4. Макрофаги
Моноциты, полученные из костного мозга, культивировали после сортировки в среде R10-50 (среда Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640; ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA) с глутамином, 10% фетальной бычьей сыворотки, 1 : 1000 гентамицина и 50 нг / мл колониестимулирующего фактора макрофагов (M-CSF; Peprotech Inc., Роки-Хилл, штат Нью-Джерси, США) в пластиковых чашках для культивирования FalconTM без покрытия (BD Life Sciences, Ист-Резерфорд, штат Нью-Джерси, США) в течение 7 дней до вызывают дифференцировку в макрофаги.На 3 день обновили R10-50. На 7 день некоторые культуры макрофагов получали свежий R10 для сохранения макрофагов как неполяризованных макрофагов (M0). Остальные культуры получали R10-50 с добавлением 100 нг / мл бактериального липополисахарида (LPS; Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) и 25 нг / мл крысиного рекомбинантного гамма-интерферона (IFNγ; Peprotech Inc., Rocky Hill , Штат Нью-Джерси, США) и инкубировали в течение 24 часов для поляризации макрофагов до классического провоспалительного фенотипа (M1). Культуральные среды поляризованных макрофагов M0 и M1 собирали и центрифугировали при 1500 об / мин в течение 5 минут при 4 ° C для удаления клеточного мусора.Они предоставили кондиционированные среды M0 (M0CM) и M1 (M1CM), используемые в наших экспериментах для кондиционирования МСК. Поляризованный фенотип макрофагов M0 и M1 был подтвержден с помощью иммуноцитохимии и флуоресцентной визуализации (раздел I дополнительных данных; рисунок S2E – J).
4,5. Проточная цитометрия Сортировка клеток.

МСК, полученных из конфлюэнтных культур P2, трипсинизировали и количественно оценивали с использованием автоматического счетчика клеток CountessTM II FL (ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). МСК окрашивали CD45-AF647 (# 202212, BioLegend, Сан-Диего, Калифорния, США), CD29-PE (# 12-0291-81, ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и красителем мертвых клеток SYTOX Green (# S34862, ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), а затем отсортировали с помощью сортировщика клеток Beckman Coulter MoFlo Astrios EQ (Beckman Coulter Inc., Пасадена, Калифорния, США) работал с соплом 100 мкм, давлением 25 фунтов на квадратный дюйм и частотой событий примерно 10 000 событий в секунду. Отсортированные МСК были дополнительно культивированы до P4.

Моноциты, подлежащие сортировке из суспензии неприлипающих клеток костного мозга, промывали центрифугированием и подсчитывали с помощью автоматического счетчика клеток CountessTM II FL. Суспензию клеток инкубировали с CD45-AF647 (№202212, BioLegend, Сан-Диего, Калифорния, США) и CD11b / c-PE (№12-0110-82, eBioscience Inc., Сан-Диего, Калифорния, США) и краситель мертвых клеток SYTOX Green (# S34862, ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США).

Все клетки (107 клеток / мл) окрашивали антителами и красителями в течение 25 минут на льду, дважды промывали и ресуспендировали в специальном проточном буфере, содержащем HBSS (не феноловый красный), 25 мМ HEPES, 0,1% гентамицин и 5 мМ. % фетальная бычья сыворотка. Антитела использовали в концентрациях, предоставленных производителями для проточной цитометрии.

4.6. Кондиционирование МСК

МСК кондиционировали, когда культуры сливались примерно на 80% в точке P4. Кондиционированные среды, полученные из макрофагов (M0CM и M1CM), размораживали на водяной бане при 37 ° C и осторожно перемешивали.Среда D10 (D10) и среда поляризации макрофагов (Pol1) были свежеприготовлены и нагреты до 37 ° C. Культуры МСК промывали D10 перед кондиционированием M0CM, M1CM, Pol1 или D10 в течение 24 ч при 37 ° C и 6% CO 2 . После кондиционирования культуральные среды собирали, центрифугировали при 1500 об / мин в течение 15 минут для удаления клеточного дебриса, разделяли на аликвоты и хранили при -80 ° C.

4.7. Иммуноанализы

Уровень фактора роста нервов (NGF), фактора роста человека (HGF), нейротрофического фактора глиального происхождения (GDNF) и фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в среде кондиционированных МСК и в кондиционирующей среде (M0CM , M1CM, Pol1, D10) определяли с помощью сэндвич-ELISA на основе поглощения в соответствии с протоколами производителей.Образцы размораживали при комнатной температуре, встряхивали, центрифугировали при 1000 G в течение 20 мин при 4 ° C и анализировали с использованием набора ELISA для крыс с NGF-бета (#ERNGF, ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), набора для ELISA Rat HGF (# MBS825055, MyBiosource Inc., Сан-Диего, Калифорния, США), Rat GDNF PicoKineTM ELISA Kit (# EK0363, Boster Bio, Pleasanton, CA, USA) и Rat VEGF Quantikine ELISA Kit (# RRV00, R&D Systems, Bio-techne, Миннеаполис, Миннесота, США). Измерения абсорбции проводили на микропланшетном ридере FLUOStar Omega (BMG Labtech, Ортенберг, Германия).

4.8. Экстракция РНК, подготовка библиотеки и секвенирование РНК
экстрагировали из МСК после трипсинизации в соответствии с протоколом производителя для набора RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Германия) (подробности протокола см. В разделе II дополнительных данных). Образцы, разбавленные до желаемой концентрации водой, свободной от РНКаз, были отправлены в Novogen USA (Novogen Co., Пекин, Китай) для секвенирования РНК и анализа данных. Компания Novogen контролировала качество пробы с помощью NanoDropTM, биоанализатора Agilent 2100 (Agilent Technologies Inc., Санта-Клара, Калифорния, США) и электрофорез в агарозном геле для измерения числа целостности РНК (RIN) и чистоты образца. Библиотеки кДНК

были построены из небольшого количества РНК с использованием наборов Illumina (Illumina Inc., Сан-Диего, Калифорния, США) и контроля качества (QC) для концентрации (флуорометр Qubit 2.0; Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США) и вставка размер (Биоанализатор). Количество РНК было подтверждено в Novogen USA с помощью количественной полимеразной цепной реакции (КПЦР). Секвенирование выполняли с помощью Illumina Platform PE150 (Q30 ≥ 80%), получая в среднем 30 M считываний на образец.Полученные файлы FASTQ подвергались контролю качества на предмет базовой ошибки вызова, распределения контента A / T / G / C и чистоты.

4.9. Аннотация последовательности и дифференциальная экспрессия гена
Чистые чтения были сопоставлены с эталонным геномом крысы (Rnor 6.0) с использованием алгоритма TopHat (v2.0.12; mismatch = 2). Мы определили отображаемые области, а также общее, множественное и распределение отображенных считываний на хромосому, чтобы оценить качество набора данных. После подтверждения хорошего качества картированных считываний экспрессию генов количественно оценивали по транскриптам, картированным в экзоны, с использованием алгоритма HTSeq (v0.6.1; -м союз). Уровни экспрессии генов выражали в количестве фрагментов на килобазу последовательности транскрипта на миллион секвенированных пар оснований (FPKM), что составляет глубину секвенирования и длину гена [97]. Построение среднего FPKM реплик на графике скрипки позволило сравнить и проверить распределение экспрессии генов по условиям. Корреляции использовались для проверки надежности биологических реплик в условиях и в разных условиях. Мы применили нормализованные количественные данные к статистической модели (пакет DESeq, v1.10.1) для расчета дифференциальной экспрессии (ДЭ) генов и р-значения. Значение коэффициента ложного обнаружения (FDR), скорректированное для множественного тестирования, для настройки значения p (padj). Гены с padj https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?&acc = GSE161798, дата обращения: 20 ноября 2020 г.).
4.10. Онтология генов и анализ пути KEGG
Биологическое значение DEG было определено с использованием онтологии генов (GO) и баз данных KEGG. Выполнение гипергеометрического теста с помощью инструмента GOseq (v2.12) использовался для определения обогащения по члену GO. Обогащение члена GO — это соотношение между количеством DEG, аннотированных для определенного термина GO в нашем наборе данных, и количеством эталонных генов для этого термина GO в базе данных. Гипергеометрический тест также определил вероятность того, что ассоциация с термином GO была случайной [98]. Термины GO используются для описания биологических процессов, клеточных компонентов и аннотаций молекулярных функций.

Инструмент KOBAS (v3.0) был использован для определения биологических путей, аннотированных для DEG в нашем наборе данных, и рассчитал уровень обогащения и значимости каждого пути с помощью гипергеометрического теста.Уровень обогащения биологического пути был представлен здесь богатым фактором (RF), который представляет собой соотношение между DEG, аннотированным для пути, и количеством эталонных генов для этого пути KEGG. Порог значимости для обоих обогащений был установлен на padj <0,05.

4.11. Статистический анализ

Данные секретома были проанализированы статистически с использованием пакета SPSS Statistics 26 (IBM, Армонк, Нью-Йорк, США). Перед проведением статистических тестов данные были проверены на нормальность.Односторонний дисперсионный анализ ANOVA использовался для сравнения данных между группами при нормальном распределении данных. Краскала – Уоллиса использовали для сравнения данных между группами, когда данные не были распределены нормально. Порог значимости p <0,05. Поправка Бонферрони использовалась для апостериорного тестирования. GraphPad PRISM 8 (GraphPad Software Inc., Сан-Диего, Калифорния, США) использовался для визуализации данных.

1887-1895 Резюме налогового инспектора округа Худ, Vol. 2

Фамилия Номер страницы
Адамс / Аддамс, Х.М. 648
Адамс, В. Б. 707 708
Аддисон, Северная Каролина 680
Админес, W. T. 819
Эйкен, Эд 681
Аллен, Дж. А. Т. 779
Аллен, Дж. А. Т., миссис 779
Эллисон, Дж. Х. 730 781
Эллисон, В. Р. 819
Андерсон, А. Б. 656 664 672 728 747 748 754 759 762 828,
Андерсон, А. Б. (продолжение) 844
Андерсон, К. Э. 825
Андерсон, Дж. М. 762
Арчер, Дж. К. 704 829
Армстронг, Джеймс 675 677
Армстронг, Джас. 766
Армстронг, W. S. 648
Арнольд, В. Б. 657748
Аткинс, Дж. Д. 717
Аткинс, Т. М. 717
Этвуд, Том. Б. 802
Этвуд, В. М. 831
Багвелл, Дж. И. 756
Бейли, В.С. 833.
Бейкер, Э. Дж. 679
Бейкер, Дж. Х. 792
Бейлс, J. W. 781
Бэнкерн, С. Э. 781
Барби, E. 644
Барбер, Х. К. 702 815
Баркли, Т. Х. 654 800
Бассон, Д. К. 742
Бейтс, Б. Ф. 643 651
Бейтс, Ф. М. 651
Бейтс, Дж. Л. 651
Бейлор, Байерс 705
BBB & C RR Co. 754
Belden, N. S. 797
Белл, Г. С. 681
Белл, М. Л. 732
Берри, К. Л. 763
Берри, Э. Дж. 836
Берри, Х.А., миссис 764
Берри, Х. Т. 669
Берри, Дж. У. 856
Берри, Джас. С. 766
Берри, Р. Б. 765
Берд, W.H. 738,797
Блэквелл, А. Б. 679 680
Блюм, Хайман 826
Блюм, Л. и Х.Лэнд Ко 825 826
Boon, Geo. H. 710
Боорк, Лев 826
Боссон, Д. Л. 841
Босуэлл, Дж. Л. 681
Бойд, Дж. Л. 679
Бойе, канун 804
Брэдли, Г. А. 732
Брэдли, С. А. 709
Филиал, Е. 645
Брюингтон, Дж. Х. 737
Брайт, Дэвид 770,773
Бринли, Р. М. 745
Брокман, У. О. 704
Брукс, Дж. Т. 846
Браун, E. 642
Браун, G. W. 641
Браун, С. Т. 690
Браун, Т. С. 690
Браун, Т. Ф. 690
Браун, W. J. 792
Слиток, G. W. 644
Bullion, H. P. 803
Беркли / Беркли, Б. Ф. 834
Батлер, Дж. Дж. 651
Байрам, Р. Дж. 711
Кандер, Р. У. 655
Кантс, Дж. Р.748 753
Caraway, A.E. 804 806
Карлайл, Л. Э. 737
Кэш, W. H.648
Чендлер, В. К. 784
Кларк, М. А. Э. 835
Кларк, р. 738
Когделл, Д. К. 657 748 753
Коллинз, Джесси Л. 755
Коллинз, В. Т. 767
Кук, С. Д. 679 680
Купер, Н. Л. 658 824
Corbin Banking Co. 702
Cornelious, Wm. 777
Корвин (?), Исак. Ф. 823
Коссл, Дж. Б. 693
Кутс, Дж. Р. 797
Коуэн, Исаак 674
Крид, Дж. Х. 756
Кретсингер, Дж. Дж. 772
Критики, Д. С. 651
Crites, J. E. 785
Крокетт, Б. А. 646
Cruce, W. J. 847
Каммингс, Дж. Х. 835
Дэвидсон, Э. Б. 802
Дэвидсон, Х.Б. 786
Дэвидсон, Дж. Л. 786
Дэвис, Р. Х. 682
Доусон, Дж. У. 805
Деннис, Дж. Г. 756
Деннис, С. В. 646
Деннис, W. 646
Dent, Jno. 705 779
Дикард, Дж. Дж. 773
Дикунд, Дж. Дж. 770
Досс, Э. М. 835
Дотсон и Миддлтон, Д. Л. 697
Дойл, Дж. Н. 830
Дайн, Дж. Ф. 679
Эрнест, А. М. Ф. 713
Эдвардс, Дж. В. 683
Эллиотт, Дж. Ф. 680
Эллиотт, У. А. 648 684
Эллиотт, Вм. 647
Эллис, Дж. А. 787
Эллис, С. Ф. 787
Компания Erath Cattle Co. 676 749 782
Эстес, Б. М. 821 824
Эстес, Купер 824
Эстес, Ева, миссис 821
Эстес, Дж. П. 832
Этеридж, В.С. 644
Этридж и Джексон 778
Evans, B.C. &. Ко 756
Фенли, Дж. Б. 717 719
Скрипач, Ф. М. 708
Финли, Дж. Б. 717
Флаке, М. В. 677
Флетчер, Ф. М. 684 788
Флетчер, Дж. А. 684
Флетчер, М. А. Л. 684
Флойд, Дж. С. 779
Фогг, Джон У. 648
Фостер и Риджуэй 660
Фостер, Дж. Д. 660
Франклин, Д. Э. 837
Freeland, G. W. 835
Фриланд, М. Б. 856
Фриланд, Н. Б. 839 856
Фрай, А. Дж. 696 698
Ft. Worth & Rio Grande RR Co. 643 646 655 664 672 681 697 724 738 759,
Ft. Worth & Rio Grande RR Co. (продолжение) 818
Фуллер (?), Н.Л. 655
Фундерберк, Т. Дж. 773
Гантрелл, Х. С. 792
Джи, К. А. 811
Ну и дела, Час. С. 715.
Gee, S. N 670,715,811
Джи, С. Н., миссис 670 715 811
Gee, T. E. 670 715 811
Геупель, Дж. А., мл. 679 680
Глазурь, W. N. 686
Гленн, Д. К. 772
Гофорт, Д. Х. 807
Гуд, У. Х. 685
Гудлетт, У. Дж. 725
Гордон, А. С. 773
Гордон, Дж. Ф. 835
Госс, Г. К. 806
Грэм и Уолш 781
Грин и Льюис 746
Гриффит, Вм. 800
Gruippell (?), К., мисс 820
Guiles, Geo. С. 724 736
Guiles, Джордж С. 647 664
Гайлз, Дж. Б. 709
Гайлз, Дж. Х. 824
Гюнтер, Вм.649 714
Хейл, М. Л. 709
Хейли, Дж. Х. 696 697
Хэлфорд, Г. У. 720
Halford, W. G. 691 692
Холл, Дж. Т. 821
Халсель, В. Х. 679
Гамак, Elizah 650
Хейни и МакКинни 678 702 746
Хейни, Дж. Н. 746
Haney, J. W. 794 799 846
Ханнафорд, Э. А. 795 813 814
Харкроу, Т. С. 789
Хардин, Дж. С. 797
Харди, В. А. 789
Харис / Хорис, Мэри Джейн 810
Харрис, Дж. Х. 769
Харрис, Дж. К. П. 660 661 713 740 769
Харрис, В. К. 829 830
Харви, У. Х. 741
Hastings, W. N. 654 800
Хэткокс, Дж. Х. 681
Хэвенс, Т. Дж. 722
Хейнс, Дж. У. 848
Хеленс, Г.W. 776 820
Хелмс, У. Дж. 693
Херрон, С. М. 687 688 690
Хикок, Дж. Ф. 781
Hicks / Hix, Wm. 803
Хайтауэр, E. C. 717
Хайтауэр, м. М. 652
Хилл, Дж. Р. 653
Хилл, Джефф 809
Холфорд / Хоффорд, W. G. 808
Холт, Ф. Б. 721
Холт, Джас. 721
Холт, Л. Л. 721
Холт, Л. Л., миссис 721
Холт, Р. Т. 655
Холт, З. Б. 721
Хоппер, Л. В. 654
Хорис / Харис, Мэри Джейн 810
Хьюстон, К. М. 758
Ховард, А. Дж. 789
Ховард, Г. 777
Ховард, Дж. 716 717 718 719
Хаджинс, В. А. 781
Hudspeth, B. F. 651
Huffstuttler, J.H.739,773
Хаггинс, М.Э.848
Халл, W. L. 745
Хантер, Г. В. 744
Хатчисон, О. П. 768
Ивинн, стр. 702
Джакари, Дж. М. 820
Джексон и Этридж 778
Джексон, А. Дж. 790
Джеймс, Питер Х. 687
Джейнс, M. F. 727
Джонс, Б. Дж. 679
Джонс, Г. С. 679
Джонс, Дж. Б. 644
Джонс, Дж. Ф. 644,796
Джонс, Дж. Р. 795 813
Джонс, Р. Дж. 679
Иордания, А.727
Кейт, А. Э. 685 689
Келл, Х. К. 649 693
Келл, С. М. 649 693
Келли, W. G. 804
Келли, W. S. 694
Керр, Дж. Ф. 724 747 759
Кинг, А. Дж. 849
Кинг, Карл 723
Киркланд, Дж. 829
Киркланд, Джейкоб 738
Киззиа, Дж. У.791
Рыцарь, С. Л. 681
Катч, С. Б. 716
Лейн, Дж. __ (?) 656
Lanham, A. 673,716,747,759
Lawreence, Wm. 679 680
Леффель, А. М. 822
Леффель, К. Э. 700 773
Леффель, Дж. П. 772
Леффель, С. Э., миссис 757
Льюис и Грин 746
Льюис, Джон М. 657
Льюис, В. С. 657
Лайнберри, Б. 679
Лофлин, Дж. Дж. 823
Лофтин, С. 655
Лофтин, Е. С. 771
Ломакс, Мэтти 785
Лонг, А. Б. 716
Любовь, П. С. 779.
Лоу, У. К. 737
Мэлоун, Т. Б. 725 726 727 728 729 730 731
Мэлони и Мердок 690,732,733
Мэлони, А. А. 794
Мэнли, Дж. Ф. 695
Манн, Вм.780
Марчбанк, Т. А. 811
Марлин Р. С. 659
Маррс, Дж. Ф. 838
Мэсси, Дж. Н. 758
Massey, W. A. ​​T. 683 695
Мэтьюз, Томас 679
Макклинток, Дж. С. 658
Макклинток, М. М., миссис 658
Макклиш, Дж. Л. 727
Маккой, Б. Ф. 757
Маккой, Вм. W. 851
Маккуан М.А., миссис 648
McCuan / McCuin, I. R. 648
Маккуан / Маккуин, Дж. У. 648
МакГлотери, А. Л. 643
Макилрой, Вм. 737
Маккинни и Хейни 678 702 746
Маклерой, В. Дж. 809
Мик, К. С. 644
Мик, К. Дж. 644
Кроткий, Джно. 711
Кроткая, Мэри 793
Меггерт, Э. 796
Мередит, В. С. 758
Меридет, Дж.№ 792
Миддлтон, Д. Л. 732
Миддлтон Д. Л. и Дотсон 697
Миддлтон, Дж. У. 733,856
Миллер, Д. С. 759
Миллион, P. W. 772
Миллс, Ван 789
Мур, Г. Х. 800
Мур, С. 850
Мосс, Г. Л. 763 764 765
Мердок и Мэлони 690,732,733
Мерфи, W. W. 652
Мюррей, У. Дж. 846
Нидхэм, М. К., миссис 795
Needham, W. L. 813
Нил, Дж. М. 679 680
Нельсон, А. М. 839 840
Норрис, Джон 671
Нортон, Дж. Э. 781
Натт, Дж. Ф & Дж. 682 749
Оуэнсби, Дж. У. 814
Паркинсон, А.С., миссис 700
Паркинсон, Дж. М. 699
Паркинсон, Томас 699 700
Паркс, Р.М. 819
Паттон, Час. Б. 734 735 736
Пэйтон, Алонзо 661
Пикок, Дж. Н. 696 697 698
Пеннингтон, Б. Ф. 662 663
Перкинс, Б. Ф. 815
Peters, J. B. 686 847
Питерс, Ньют 737
Peters, W. F. 712
Филлипс, А. Д. 717
Филлипс, Уиллис 796
Пинсон, Харви 645
Plemens, W. L. 660
Полмер, Мартин 824
Проффит, Дж. Дж., Миссис 701
Проффит, Р. С. 701
Пакетт, Джексон 644
Райфснайдер, Фред 756
Райфснайдер, Г. В. 816
Рэндал, Джесси Ф. 856
Рэндл, Дж. П. 696
Randle, J. R. 741 768
Раш, С. А. 731
Роулинз, М. П. 738
Роулинз, М. П., Миссис 738
Рис, Дж. К. 664
Рис, Л. Дж. 672
Рейнольдс, В. Х. 748
Родс, Л. Э. 669 761
Родос, М. Х. 817
Райс, И. Б. 544
Ричардс, П. Х. 827
Риджуэй и Фостер 660
Кольцо, W. A. ​​760
Робинсон, Г. Н. 704
Робинсон, M.E., миссис 679680
Роквелл, Т. Х. 844
Роджерс, А. 786
Роу, Е. 718
Ракер, Г. А. 687 689 696 698 703 716 717 723 726,
Ракер, Г.А. (продолжение) 727,728,729,734,735,736,747,750,751,752
Рассел, Джеймс 651
Рюил, Соломон 825
Рыбурн, Ф. М. 707 708
Рыбурн, С. Э., миссис 674 677 766
Сэдлер, W. S. 652
Sams, Algeron 740
Сарджент, Б.Т. 650
Ранцы, Wm. 705
Скотт, Элла 754
Шарп, Минерва 738
Шелтон / Шеттон, Стив 821 824
Ширли, Дж. Т. 647 664 665 692 808
Ширли, Дж. Т. 720,724,736,744
Сайкс, Дж. Р. 676 677 741 780
Скиннер, Э. 797
Слокум, Ферд 850
Смарт, J. W. 717
Смит, Д. 748
Смит, Ф. Т. 665
Смит, Вм. 717
Смит, Вм. 669 670 р.
Сото, Vencento 781
Стэнфорд, р. 804
Ставенхаген, Л. 739
Стелл / Сталь, И. М. 652
Стюарт, Дж. К. 780
Стюарт, Дж. Э. 774
Стюарт, Вм. 845
Стокс, W. W. 706
Стронг, К. Х. 689 690 732 742 841
Сильная, Сара 732,742
Сильная, Сара, миссис690
Тэнди, Джо А. 799
Танкерсли, А. В. 743
Танкерсли, C.G.744
Тейт, Дж. Л. 648
Тейлор, Вм. 851
Тиг, Джас. 842
Техасское кредитное агентство 678
Thompkins, Geo. 775
Торп, Дж. Х. 666
Тидуэлл, А. Г. 791
Тидуэлл, Р. Ф. 791
Тидуэлл, W. C. 791
Тилли, Н. А. 798
Томс, W. E. 745
Трейлор, Дж. Х. 782
Трейлор, Джон Х. 674 675 676 677 678
Такер, Х. М. 787
Туннет (?), W. M. 657
Тернер, Дж. С. 803
Андервуд, Дж. А. 751 843
Андервуд, Джно. А. 843
Андервуд, С. А.841
ВанРозенберг В. 810
Уолден, К. 746
Уокер, К. Э. 781
Уолли, И.М. 795
Уолш и Грэм 781
Уолш, Э. К. 783
Уолш, Т. Б. 781
Уолтерс, Джулия, миссис 800
Уолтон, Аннетти 781
Уорд, Д. Ф. 848
Уоррен, Дуглас 836
Уоррен, Дж. М. 673 754
Уоткинс, Дж. Б. 827
Уоткинс, Дж. Б. Лэнд Ко. 827
Уоттс, В. Дж. 773
Уэллс, Дж. У. 828
West, B. F. 792
Вест, Б. Т. 813
Уайт, Е. М. 776
Виггинс, М. М. 648
Wiggins, Wm. 648
Уильямс, Дж. М. 737
Уильямс, П. Дж. 668,669,670
Уильямс, Wm. 667 674 675 676 677 678
Уиллис, С. Э. 643
Холка, W. P. 819
Виттен, П. Л. 678
Вулфорд, Баллард 723 812 818
Вуд, Д.М. 806
Вуд, G. W. 706
Вуд, H. W. 833
Вуд, Дж. А. 717 832
Вуд, Т. А. 771
Вудберн, Э. Т. 815
Wyatt, E. D. 672
Йетс, Генри 679
Ибарбо, Хосе Ма 747,748,749,750,751,752,753,801,829



 

Аксессуары — Eupen Cable USA

Доступные опции:

  • AA-U — Угловой адаптер — Универсальный — Нержавеющая сталь
  • AA-US — Угловой адаптер с отверстиями 3/4 ″ — нержавеющая сталь
  • AA-SL — Угловой адаптер с резьбовыми отверстиями 3/8 ″ — нержавеющая сталь

Посмотреть спецификации продукта здесь

Доступные опции:

  • BH-158 — Комплект подвески «бабочка» для кабеля 1-5 / 8 ″ — оборудование в комплекте
  • BH-114 — Комплект подвески «бабочка» для кабеля 1-1 / 4 ″ — оборудование в комплекте
  • BH-78 — Комплект подвески «бабочка» для кабеля 7/8 ″ — оборудование в комплекте
  • BH-58 — Комплект подвески «бабочка» для кабеля 5/8 ″ — оборудование в комплекте
  • BH-12 — Комплект подвески «бабочка» для стандартного кабеля 1/2 ″ — оборудование в комплекте

Посмотреть спецификации продукта здесь

Доступные опции:

  • CB-158 — Опорный блок мини-коаксиального кабеля для кабеля 1-5 / 8 ″
  • CB-114 — Опорный блок мини-коаксиального кабеля для кабеля 1-1 / 4 ″
  • CB-78 — Опорный блок мини-коаксиального кабеля для кабеля 7/8 ″
  • CB-58 — Опорный блок мини-коаксиального кабеля для кабеля 5/8 ″
  • CB-12 — Опорный блок мини-коаксиального кабеля для кабеля 1/2 ″

Доступные опции:

  • HK-DCSB158 — Комплект оборудования, 3/8 ″, оцинкованный, для (2) опорных блоков коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 7 ″
  • HK-DCSB158SS — Комплект оборудования, 3/8 ″, нержавеющая сталь, для (2) опорных блоков коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 7 ″
  • HK-SSCB158 — Комплект оборудования, 3/8 ″, оцинкованный, для (1) опорного блока коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 4.25 ″
  • HK-SSCB158SS — Комплект оборудования, 3/8 ″, нержавеющая сталь, для (1) опорных блоков коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 4,25 ″
  • HK-TSCB158 — Комплект оборудования, 3/8 ″, оцинкованный, для (3) опорных блоков коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 9,5 ″
  • HK-TSCB158SS-12 — Комплект крепежа, 3/8 ″, нержавеющая сталь, для (3) опорных блоков коаксиального кабеля 1-5 / 8 ″, 12 ″

Доступные опции:

  • HG-158 — Захват для подъема на шнуровке для кабелей 1-5 / 8 ″
  • HG-114 — Захват для подъема на шнуровке для кабелей 1-1 / 4 ″
  • HG-78 — Захват для подъема на шнуровке для кабелей 7/8 ″
  • HG-58 — Захват для подъема на шнуровке для кабелей 5/8 ″
  • HG-12 — Захват для подъема на шнуровке для стандартных кабелей 1/2 ″

Посмотреть спецификации продукта здесь

Доступные опции:

  • HG-158L — Подъемная рукоятка с предварительной зашнуровкой для кабелей 1-5 / 8 ″
  • HG-114L — Подъемная рукоятка с предварительной зашнуровкой для кабелей 1-1 / 4 ″
  • HG-78L — Подъемная рукоятка с предварительно зашнуровкой для кабелей 7/8 ″
  • HG-58L — Подъемная рукоятка с предварительной зашнуровкой для кабелей 5/8 ″
  • HG-12L — Подъемная рукоятка с предварительно зашнуровкой для стандартных кабелей 1/2 ″

Посмотреть спецификации продукта здесь

Варианты штабелируемых защелкивающихся подвесок:

  • SH-S158 — Стекируемая защелкивающаяся подвеска для кабеля 1-5 / 8 ″
  • SH-S114 — Стекируемая защелкивающаяся подвеска для кабеля 1-1 / 4 ″
  • SH-S78 — Стекируемая защелкивающаяся подвеска для кабеля 7/8 ″
  • SH-S12 — Штабелируемая защелкивающаяся подвеска для стандартного кабеля 1/2 ″

Посмотреть технические характеристики стекируемых оснасток можно здесь

______________________________________________________________________________

Варианты универсальных подвесок с защелками:

  • SH-U158 — Универсальная защелкивающаяся подвеска для кабеля 1-5 / 8 ″
  • SH-U114 — Универсальная защелкивающаяся подвеска для кабеля 1-1 / 4 ″
  • SH-U78 — Универсальная защелка для кабеля 7/8 ″
  • SH-U58 — Универсальная защелка для стандартного кабеля 5/8 ″
  • SH-U12 — Универсальная защелкивающаяся подвеска для стандартного кабеля 1/2 ″

Посмотреть технические характеристики универсальных оснасток можно здесь

Доступные опции:

  • SA-38S200 — Адаптер стойки с резьбовым отверстием 3/8 дюйма — Элементы с внешним диаметром 2–3 дюйма — Нержавеющая сталь — Бабочки
  • SA-38S300 — Адаптер стойки с резьбовым отверстием 3/8 дюйма — Элементы с внешним диаметром 3–4 дюйма — Нержавеющая сталь — Бабочки
  • SA-SS200 — Адаптер стойки с резьбовым отверстием 3/4 дюйма — Элементы с внешним диаметром 2–3 дюйма — Нержавеющая сталь — Отверстие для защелкивания
  • SA-SS300 — Адаптер стойки с резьбовым отверстием 3/4 дюйма — Элементы с внешним диаметром 3–4 дюйма — Нержавеющая сталь — Отверстие для защелкивания

Посмотреть Технические характеристики адаптера стойки (Snap-In) здесь | Посмотреть технические характеристики адаптера стойки (бабочки)

угловое распределение электронов, упруго рассеянных на поверхности меди, отполированной и текстурированной потоком аргона | Библиотека онлайн-материалов MRS (OPL)

Имя хоста: page-component-c86845478-6bs5k Общее время загрузки: 0.183 Дата рендеринга: 2021-10-08T20: 06: 48.983Z Имеется проблема с данными: верно Флаги функций: { «shouldUseShareProductTool»: true, «shouldUseHypothesis»: true, «isUnsiloEnabled»: правда, «metricsAbstractViews»: false, «цифры»: правда, «newCiteModal»: false, «newCitedByModal»: правда, «newEcommerce»: правда, «newUsageEvents»: true }

Опубликовано в Интернете издательством Cambridge University Press: 25 февраля 2011 г.

Isay L. Krainsky *
Принадлежность:

Исследовательский центр NASA Lewis, 21000 Brookpark Road, Cleveland, OH 44135

Аннотация

Угловые распределения упруго рассеянных вторичных электронов от двух типов поверхностей Cu, полированных и текстурированных 2 кэВ Ar +, были изучены в диапазоне энергий от 50 эВ до 2 кэВ.Результаты показывают, что для полированной поверхности Cu в процессе упругого рассеяния доминирует атомное рассеяние на отдельных атомах (хотя вклад других процессов также важен). Однако при исследовании текстурированной поверхности на угловых распределениях появились новые множественные пики. Положения этих пиков для различных углов падения и первичных энергий указывают на то, что их происхождение лежит в дифракции первичных электронов на какой-то поликристаллической структуре.Эта структура, вероятно, создается процессом рекристаллизации, вызванной ионным распылением, подобным процессу индуцированной распылением кристаллизации, уже известному для некоторых оксидов и неметаллических соединений.

Тип
Исследовательская статья

авторское право
Авторское право © Общество исследования материалов 1993

Параметры доступа

Получите доступ к полной версии этого содержимого, используя один из вариантов доступа ниже.(Параметры входа будут проверять наличие институционального или личного доступа. Для содержимого может потребоваться покупка, если у вас нет доступа.)

Ссылки

1

1. Куррен А. Н., Дженсен К. А. и Роман Р. Ф., NASA TP-2967 (1990) .Google Scholar

2

2. Картер Г., Навиншек Б. и Уиттон Дж. Л., 52, 231, Topics in Applied Physics, (1981) и ссылки в нем. CrossRefGoogle Scholar

3

3. Бронштейн И.М., Пронин В.П. // Физ. Мезомех. Тверь. Tela 17, 2431 (1975).Google Scholar

4

4. Бронштейн И. М., Стожаров В. М. // Изв. Акад. АН СССР, Сер. Физ. 43, 500 (1979) .Google Scholar

. 7

7. Бец Г. и Венер Г. К., Topics in Applied Physics, 52, 11, (1981) и ссылки в них. CrossRefGoogle Scholar

Sindhu K Srinivas

Избранные публикации

Mehta A, Srinivas SK : Четвертый триместр: 12 недель недостаточно. Obstet Gynecol 137 (5): 779-781, май 2021 г. Примечания: 33831929. Burris HH, Passarella M, Handley SC, Srinivas SK, Lorch SA : Различия между чернокожими и белыми в материнской внутрибольничной смертности в зависимости от преподавания и статуса чернокожих в больницах. Am J Obstet Gynecol. Онлайн перед печатью, январь 2021 г. Примечания: 34531833. Hamm RF, Perelman S, Wang EY, Levine LD, Srinivas SK. : Переливание одной единицы в сравнении с несколькими при гемодинамически стабильной послеродовой анемии: прагматичное рандомизированное контролируемое исследование. Am J Obstet Gynecol S0002-9378 (20) 30724-9, июл 2020 Примечания: 32652065. Handley SC, Srinivas SK, Lorch SA : Регионализация помощи и разрыв диады между матерью и младенцем. JAMA Online перед печатью, июль 2019 г. Примечания: 31282951. Hirshberg A, Srinivas SK : Удаленный мониторинг с помощью текстовых сообщений сократил расовые различия в оценке послеродового артериального давления. AJOG 221 (3): 282-285, 2019 Примечания: 31121137. Cahill AG, Srinivas SK, Tita ATN, Caughey AB, Richter HE, Gregory W.T., Liu J, Woolfolk C, Weinstein DL, Mathur AM, Macones GA, Tuuli MG : Влияние немедленного и отсроченного толчков на частоту спонтанных вагинальных Роды среди нерожавших женщин, получающих нейроаксиальную анальгезию: рандомизированное клиническое испытание. JAMA 320 (14): 1444-1454, 2018 Примечания: 30304425. Hirshberg A, Downes K, Srinivas SK : Сравнение стандартного последующего наблюдения в офисе с удаленным мониторингом на основе текста при ведении послеродовой гипертензии: рандомизированное клиническое испытание. BMJ 27 (11): 871-877, 2018 Примечания: 29703800 Grobman WA, Rice MM, Reddy UM, Tita ATN, Silver RM, Mallett G, Hill K, Thom EA, El-Sayed YY, Perez-Delboy A, Rouse DJ, Saade GR, Boggess KA, Chauhan SP, Iams JD, Чиен Е.К., Кейси Б.М., Гиббс Р.С., Сринивас С.К., Свами Г.К., Симхан Х.Н., Маконес, Джорджия; Юнис Кеннеди Шрайвер Сеть отделений материнско-фетальной медицины Национального института детского здоровья и развития человека : Индукция родов и выжидательная тактика у нерожавших женщин с низким уровнем риска. N Engl J Med 379 (6): 513-523, 2018 Примечания: 30089070. Srinivas SK, Shocksnider J, Caldwell D, Lorch S : Лабиринтская модель ухода: кто ее использует? J Matern Fetal Neonatal Med 25 (3): 257-60, 2012 Примечания: 21506656. Такер Эдмондс Б., Фейджер С., Сринивас С.К., Лорч С. : Расовые и этнические различия в использовании интубации для периваподобных новорожденных. Педиатрия 127 (5): e1120-7, 2011 Примечания: 21502221. наверх
Последнее обновление: 04.06.2021
Попечители Пенсильванского университета

gkdevelopers.com Модные цепочки, ожерелья и подвески, мужская веревка, Фигаро, мореплаватель, кубинская звено, цепочка со снайперской бандой, подвеска SG

gkdevelopers.com Модные цепочки, ожерелья и подвески для мужчин веревка Фигаро Моряк кубинская цепочка с подвеской Sniper Gang SG

ЦЕПЬ FIGARO 4 мм, цепочка Mariner Gucci. Эта потрясающая цепочка, покрытая 14-каратным золотом. ROPE CHAN 3,5 мм, мужская веревочная цепочка Figaro Mariner Cuban Link с подвеской Sniper Gang SG. ЭТО САМЫЙ ГОРЯЧИЙ ТРЕНД ВЫСОКОГО КАЧЕСТВА: подвеска Sniper Gang «SG» с веревкой.Фигаро и неношеные предметы (включая предметы ручной работы) в оригинальной упаковке (например, в оригинальной коробке или сумке) и / или с прикрепленными оригинальными бирками. Просмотреть все определения условий : Измененный элемент: : Нет , Цвет: : Золото : Стиль: : Цепочка и подвеска , Металл: : Цепочка (латунь), MARINER GUCCI CHAIN ​​4 мм .. Состояние: Новое с бирками: Совершенно новое. Вогнутая кубинская, неиспользованная, подвеска (сплав) : Тип: : Цепочка ,。, КУБИНСКАЯ ЦЕПЬ 4 мм.








Информация[email protected]

+91 7888093332

Мужская веревочная цепочка Figaro Mariner Cuban Link с подвеской SG Sniper Gang

Мужская веревочная цепочка Figaro Mariner Cuban Link с подвеской Sniper Gang SG

Кубинская цепочка с подвеской Sniper Gang SG Мужская веревка Figaro Mariner, ЭТО ВЫСОКОЕ КАЧЕСТВО ГОРЯЧИЕ ТЕНДЕНЦИИ: подвеска Sniper Gang «SG» с веревкой, вогнутый кубинец, Фигаро, цепочка Mariner Gucci, Эта потрясающая позолоченная цепочка 14k, ROPE CHAN 3, 5 мм, CUBAN CHAIN ​​4 мм, FIGARO CHAIN ​​4 мм, MARINER GUCCI CHAIN ​​4 мм, Style of Your Life, Outlet Shopping, самые низкие цены со скидкой.

Оставить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *