365 ст гк рф: Статья 365 ГК РФ. Права поручителя, исполнившего обязательство

Содержание

Ст. 365 ГК РФ. Права поручителя, исполнившего обязательство

1. К поручителю, исполнившему обязательство, переходят права кредитора по этому обязательству и права, принадлежавшие кредитору как залогодержателю, в том объеме, в котором поручитель удовлетворил требование кредитора. Поручитель также вправе требовать от должника уплаты процентов на сумму, выплаченную кредитору, и возмещения иных убытков, понесенных в связи с ответственностью за должника.

2. По исполнении поручителем обязательства кредитор обязан вручить поручителю документы, удостоверяющие требование к должнику, и передать права, обеспечивающие это требование.

3. Правила, установленные настоящей статьей, применяются, если иное не предусмотрено законом, иными правовыми актами или договором поручителя с должником и не вытекает из отношений между ними.

См. все связанные документы >>>

1. Согласно пункту 1 комментируемой статьи поручитель, исполнивший свое собственное обязательство перед кредитором, приобретает право в отношении должника, но не при помощи конструкции регресса, а вследствие перехода к нему того требования, которое имелось у кредитора в отношении должника. Поручитель становится новым кредитором в основном обязательстве. Иными словами, обязательство между должником и поручителем, исполнившим свое обязательство перед кредитором, не относится к регрессным. Положения Кодекса о регрессных требованиях (например, пункт 3 статьи 200, подпункт 1 пункта 2 статьи 325 ГК РФ) не подлежат применению к подобным отношениям (п. 13 Постановления Пленума ВАС РФ от 12 июля 2012 г. N 42).

При переходе требования от кредитора к поручителю последний приобретает не только право требования к должнику, но и право залога, а также права по иным обеспечительным сделкам (неустойке, независимой гарантии и т.п.), ведь при переходе требования, которое было обеспечено поручительством, от кредитора к поручителю сохраняются все дополнительные права, имевшиеся у прежнего кредитора. Они теперь принадлежат новому кредитору — поручителю, но только в том объеме, в котором он сам удовлетворил требование кредитора. Так, если требование кредитора исполнено частично, то поручитель приобретает право требования к должнику только в этой части.

Помимо прав требования, принадлежащих кредитору по основному обязательству, поручитель приобретает и самостоятельные права требования. В частности, он вправе требовать от должника уплаты процентов на сумму, выплаченную кредитору, и возмещения иных убытков, понесенных в связи с ответственностью за должника, возместив тем самым свои имущественные потери от неисполнения должником обеспеченного обязательства.

Под процентами, очевидно, имеется в виду уплата процентов за пользование чужими денежными средствами, предусмотренных ст. 395 ГК РФ (см. комментарий к ст. 395 ГК РФ).

2. Согласно п. 2 ст. 365 ГК РФ после исполнения поручителем обязательства кредитор обязан вручить поручителю документы, удостоверяющие требование к должнику. Их получение позволит поручителю реализовать требования, которые имелись у кредитора в отношении должника. При этом кредитор-залогодержатель обязан заключить с поручителем соответствующие договоры об уступке прав требования с соблюдением положений ст. ст. 382 — 390 ГК. Если же залоговые отношения оформлены с использованием закладной, то кредитор-залогодержатель должен передать поручителю закладную, предварительно совершив на ней передаточную надпись в его пользу.

3. Согласно п. 3 ст. 365 ГК РФ все правила относительно объема прав поручителя, установленные пунктами 1 и 2 этой статьи, применяются, «если иное не предусмотрено законом, иными правовыми актами или договором поручителя с должником и не вытекает из отношений между ними». Так, в качестве предусмотренного законом случая отсутствия у поручителя, исполнившего обязательство, права требования к должнику в силу особых отношений между ними можно назвать поручительство государственного заказчика по обязательству об оплате покупателем товаров по договору поставки товаров для государственных нужд (ст. 532 ГК РФ). Государственный заказчик, ответивший в качестве поручителя за покупателя, не оплатившего товар ввиду отсутствия бюджетного финансирования, не получает право на предъявление требований к должнику. Данный вывод обусловлен тем обстоятельством, что причиной невыполнения должником (покупателем) обязательства по оплате является отсутствие финансирования из бюджета, обеспечить получение которого должен был сам государственный заказчик (ст. 526 ГК РФ).

Статья 365 ГК РФ с комментариями — Права поручителя, исполнившего обязательство

Комментарий к статье 365 Гражданского Кодекса РФ

1. Согласно п. 1 комментируемой статьи удовлетворение поручителем требований кредитора по обеспеченному обязательству влечет за собой суброгацию, т.е. переход к поручителю прав кредитора по этому обязательству. Основанием суброгации выступают: а) надлежащее исполнение поручителем обеспеченного обязательства, которое он вправе произвести, предотвращая неисправность должника и собственную обязанность к платежу; б) исполнение поручителем своего обязательства. Поскольку обязанность поручителя совпадает по содержанию с ответственностью должника, он в этом смысле считается исполнившим обязательство должника в соответствующей части.

От требования, приобретаемого поручителем против должника в порядке суброгации, необходимо отличать вытекающее из отношений между ними право поручителя требовать от должника возмещения понесенных им затрат (например, требование из абз. 1 ст. 1001 ГК, если поручитель и должник связаны договором комиссии, или из ст. 984 ГК, если поручитель действовал в интересе должника без поручения с его стороны). Поручитель может выбрать, каким из этих требований он воспользуется для возмещения своих расходов.

2. Пункт 1 комментируемой статьи содержит специальные предписания по отношению к тем, которые закреплены в ст. 384 ГК. Различия этих предписаний проявляются в следующем:
а) переход прав кредитора происходит лишь в объеме удовлетворения поручителем требования кредитора. В таком же объеме к поручителю переходит право залога, обеспечивающее это требование. Аналогичным образом поручитель приобретает права к другим поручителям;

б) поручителю не причитается требование об уплате процентов по ставке, установленной для основного обязательства (п. 18 Постановления ВС и ВАС N 13/14). Однако он может требовать от должника уплаты процентов на выплаченную кредитору сумму в соответствии со ст. 395 ГК и возмещения иных убытков, понесенных в связи с исполнением им своей обязанности.

3. В комментируемой статье, как и в других предписаниях Кодекса о суброгации, не отражается известный ряду зарубежных правопорядков принцип nemo subrogat contra se, согласно которому суброгация не осуществляется в ущерб кредитору (ср., например, с абз. 1 § 774 ГГУ). При частичном удовлетворении поручителем притязаний кредитора действие этого принципа проявляется в том, что права, остающиеся за кредитором, пользуются преимуществом перед правами поручителя, приобретенными в порядке суброгации.

4. Предписание п. 2 комментируемой статьи в части обязывания кредитора вручить поручителю документы, удостоверяющие требование к должнику, совпадает с более широким и подлежащим применению по аналогии предписанием п. 2 ст. 385 ГК.

Упомянутая в п. 2 комментируемой статьи обязанность кредитора передать права, обеспечивающие перешедшее к поручителю требование, распространяется лишь на те права, которые не переходят ipso jure к поручителю в силу ст. 384 ГК (например, на права, фидуциарно переданные кредитору в обеспечение, или право собственности на вещь, сохраняющееся за продавцом до уплаты покупной цены, — ст. 491 ГК).

5. В п. 3 комментируемой статьи подчеркивается, что законом и иными правовыми актами могут устанавливаться предписания, исключающие или изменяющие действие положений п. п. 1 — 2 ст. 365. Исключение или изменение действия этих положений возможно по соглашению поручителя и должника. Исключение суброгации может вытекать также из существа отношений поручителя и должника. Она не наступает, если поручителю не причитается против должника самостоятельное требование о возмещении понесенных затрат. Например, если поручитель действовал в интересе должника без его поручения и на последнего в соответствии с п. 1 ст. 983 ГК не возлагается обязанность возместить понесенные поручителем убытки, то поручитель не приобретает против него требование и в порядке суброгации.

Кроме того, иное регулирование по сравнению с закрепленным в комментируемой статье может устанавливаться договором между поручителем и кредитором (например, в части определения судьбы обеспечительных прав).

Статья 365 ГК РФ. Права поручителя, исполнившего обязательство

Гражданский кодекс Российской Федерации:

Статья 365 ГК РФ. Права поручителя, исполнившего обязательство

Вернуться к оглавлению документа: Гражданский кодекс РФ Часть 1 в действующей редакции

Комментарии к статье 365 ГК РФ, судебная практика применения

Некоторые комментарии к положениям статей о поручительстве, в том числе, о праве поручителя, исполнившего обязательство, см. в статье «Поручительство — это .. Понятие, суть, форма договора. Ответственность поручителя».

В п. 18 Постановления Пленума Верховного Суда РФ от 24.12.2020 N 45 «О некоторых вопросах разрешения споров о поручительстве» содержатся следующие разъяснения:

Права кредитора переходят к исполнившему обязательство поручителю

К исполнившему обязательство поручителю в соответствующей части переходят принадлежащие кредитору права, в том числе право требовать уплаты договорных процентов, например процентов за пользование займом, неустойки за нарушение денежного обязательства по день уплаты денежных средств должником, а если такая неустойка не предусмотрена законом или договором, то процентов на основании статьи 395 ГК РФ (первое предложение пункта 1 статьи 365, пункт 1 статьи 384, пункт 4 статьи 395 ГК РФ).

Вместо суммы, определенной в указанном выше порядке, поручитель вправе потребовать от должника сумму фактически уплаченного кредитору, а также проценты на основании статьи 395 ГК РФ, начисленные на эту сумму (второе предложение пункта 1 статьи 365 ГК РФ).

Как в первом, так и во втором случае переход прав кредитора к поручителю, исполнившему обязательство перед кредитором, не влияет на течение срока исковой давности по требованиям к должнику (статья 201 ГК РФ).

Если договором поручительства была предусмотрена дополнительная ответственность самого поручителя, например неустойка за неисполнение или ненадлежащее исполнение обязательства поручителя, поручитель не вправе требовать суммы таких дополнительных санкций от должника (пункт 3 статьи 308 ГК РФ). Равным образом исполнительский сбор, уплаченный поручителем в связи с исполнением решения суда, также не подлежит взысканию с должника (часть 1 статьи 112 Федерального закона от 2 октября 2007 года N 229-ФЗ «Об исполнительном производстве»).

Подробнее см. п. п. 19 — 22 Постановления Пленума Верховного Суда РФ от 24.12.2020 N 45

Разъяснения ВАС РФ:

Информационное письмо Президиума ВАС РФ от 20.01.1998 N 28 «Обзор практики разрешения споров, связанных с применением арбитражными судами норм Гражданского кодекса Российской Федерации о поручительстве»

Статья 365 ГК РФ с комментариями

Полный текст ст. 365 ГК РФ с комментариями. Новая действующая редакция с дополнениями на 2021 год. Консультации юристов по статье 365 ГК РФ.

Комментарий к статье 365 ГК РФ

1. В соответствии с п.1 комментируемой статьи и абз.4 ст. 387 ГК РФ к поручителю, исполнившему свое обязательство перед кредитором (в том числе в ходе исполнительного производства), переходят права, принадлежащие кредитору по обеспеченному обязательству. Те же последствия наступают в случае предоставления поручителем кредитору отступного или прекращения встречных требований поручителя и кредитора посредством зачета. Положения ГК РФ о регрессных требованиях (например, п.3 ст. 200, подп.1 п.2 ст. 325 ГК РФ) не подлежат применению к отношениям между поручителем, исполнившим свое обязательство перед кредитором, и должником.

2. К поручителю переходят принадлежащие кредитору права залогодержателя как при залоге, установленном третьим лицом в обеспечение исполнения обязательств должника, так и при залоге, установленном должником по собственным обязательствам. Иные последствия исполнения поручителем обязательств перед кредитором могут быть предусмотрены соглашением кредитора и поручителя (в частности, переход требования без одновременного перехода прав по обеспечительным сделкам).

Если поручитель произвел исполнение обязательства за должника лишь в части, то кредитор и поручитель становятся созалогодержателями, имеющими равные права на удовлетворение своих требований из стоимости заложенного имущества.

Поручитель не может осуществить перешедшее к нему право во вред кредитору, получившему лишь частичное исполнение (например, препятствовать обращению взыскания на предмет залога и т.п.). Кредитор, наоборот, может самостоятельно осуществлять свои права в отношении остальной части своего требования преимущественно перед поручителем.

2. В силу статьи 385 ГК РФ кредитор, уступивший требование другому лицу, обязан передать ему документы, удостоверяющие право требования, и сообщить сведения, имеющие значение для осуществления требования.

3. Согласно п.3 комментируемой статьи законом и иными правовыми актами, а также договором или соглашением между поручителем и должником могут устанавливаться предписания, исключающие или изменяющие действия комментируемой статьи.

4. Судебная практика:
— постановление Пленума ВАС РФ от 12.07.2012 N 42.

— информационное письмо Президиума ВАС РФ от 20.01.98 N 28.

Консультации и комментарии юристов по ст 365 ГК РФ

Если у вас остались вопросы по статье 365 ГК РФ и вы хотите быть уверены в актуальности представленной информации, вы можете проконсультироваться у юристов нашего сайта.

Задать вопрос можно по телефону или на сайте. Первичные консультации проводятся бесплатно с 9:00 до 21:00 ежедневно по Московскому времени. Вопросы, полученные с 21:00 до 9:00, будут обработаны на следующий день.

Статья 34 СК РФ против статьи 365 ГК РФ: банкротные коллизии

Который раз убеждаюсь в том, что режим совместной собственности супругов – это неиссякаемый источник коллизий и правовых неопределенностей, лакун и пробелов на стыке отраслей права. Особенно в этом плане показателен недавний «банкротный» кейс.

Фабула дела следующая. Гражданин А. заключил с банком кредитный договор, по которому его супруга Б. выступила поручителем. Впоследствии А. прекратил исполнять свои обязанности по договору, вместо него кредит начала выплачивать его супруга Б. Спустя три месяца брак между супругами был расторгнут, Б. продолжила выплачивать банку кредит. Совестный А. перевел своей бывшей супруге определенную сумму денег, при этом имея обязательства перед другими кредиторами и обладая признаками неплатежеспособности.

Через год А. был признан банкротом, а еще через год его финансовый управляющий обратился в суд заявлением о признании сделок должника по перечислению своей бывшей супруге денежных средств недействительной и попросил взыскать с Б. сумму перечисленных ей денежный средств (по общим основаниям, так как сделка совершена до 01.10.2015)

В суде А. заявил, что перечисленные Б. денежные средства носили характер исполнения основным должником обязанностей перед поручителем, исполнившим его обязательство (ст. 365 ГК РФ). Суд согласился с этим доводом и признал сделку законной, что подтвердили апелляция и кассация.

С одной стороны логика суда понятна – супруга действовала как поручитель, приобрела к должнику право требования сумм, уплаченных ею за него по кредиту, получила частичное исполнение данного требования. Сделка законна.

Но есть одно «но» и это «но» — режим совместной собственности супругов на любой доход, полученный каждым из них. В соответствии со ст. 34 СК РФ, к имуществу, нажитому супругами во время брака (общему имуществу супругов), относятся доходы каждого из супругов от трудовой деятельности, предпринимательской деятельности и результатов интеллектуальной деятельности, полученные ими пенсии, пособия, а также иные денежные выплаты.

То есть те суммы, которые вносила супруга Б. за должника А. по кредиту до момента расторжения брака являлись совместным имуществом супругов, а не ее личным доходом. Следовательно, оснований для возникновения права требования данных денег с банкрота у Б. как поручителя не возникло.

На то, что требования к должнику возникают у поручителя только при исполнении им своих обязанностей за счет своего личного имущества, указал еще Верховный суд в своем Определении от 04.06.2013 №18-КГ13-27, однако апелляцию и кассацию все указанные доводы не смутили. Не повлиял на их решение и тот факт, что сумма перечисленной А. «компенсации за поручительство» не совпадала с уплаченными Б. деньгами по кредиту до расторжения брака.

Как думаете, правильна ли логика судов или же все-таки ст. 34 СК РФ бьет ст. 365 ГК РФ?

Статья 365 ГК РФ 2016-2019. Права поручителя, исполнившего обязательство . ЮрИнспекция

Статья 361. Договор поручительства По договору поручительства поручитель обязывается перед кредитором другого лица отвечать за исполнение последним его обязательства полностью или в части. Договор поручительства может быть заключен также для обеспечения обязательства, которое возникнет в будущем. Статья 362. Форма договора поручительства Договор поручительства должен быть совершен в письменной форме. Несоблюдение письменной формы влечет недействительность договора поручительства. Статья 363. Ответственность поручителя 1. При неисполнении или ненадлежащем исполнении должником обеспеченного поручительством обязательства поручитель и должник отвечают перед кредитором солидарно, если законом или договором поручительства не предусмотрена субсидиарная ответственность поручителя. 2. Поручитель отвечает перед кредитором в том же объеме, как и должник, включая уплату процентов, возмещение судебных издержек по взысканию долга и других убытков кредитора, вызванных неисполнением или ненадлежащим исполнением обязательства должником, если иное не предусмотрено договором поручительства. 3. Лица, совместно давшие поручительство, отвечают перед кредитором солидарно, если иное не предусмотрено договором поручительства. Статья 364. Право поручителя на возражения против требования кредитора Поручитель вправе выдвигать против требования кредитора возражения, которые мог бы представить должник, если иное не вытекает из договора поручительства. Поручитель не теряет право на эти возражения даже в том случае, если должник от них отказался или признал свой долг. Статья 365. Права поручителя, исполнившего обязательство 1. К поручителю, исполнившему обязательство, переходят права кредитора по этому обязательству и права, принадлежавшие кредитору как залогодержателю, в том объеме, в котором поручитель удовлетворил требование кредитора. Поручитель также вправе требовать от должника уплаты процентов на сумму, выплаченную кредитору, и возмещения иных убытков, понесенных в связи с ответственностью за должника. 2. По исполнении поручителем обязательства кредитор обязан вручить поручителю документы, удостоверяющие требование к должнику, и передать права, обеспечивающие это требование. 3. Правила, установленные настоящей статьей, применяются, если иное не предусмотрено законом, иными правовыми актами или договором поручителя с должником и не вытекает из отношений между ними. Статья 366. Извещение поручителя об исполнении обязательства должником олжник, исполнивший обязательство, обеспеченное поручительством, обязан немедленно известить об этом поручителя. В противном случае поручитель, в свою очередь исполнивший обязательство, вправе взыскать с кредитора неосновательно полученное либо предъявить регрессное требование к должнику. В последнем случае должник вправе взыскать с кредитора лишь неосновательно полученное. Статья 367. Прекращение поручительства 1. Поручительство прекращается с прекращением обеспеченного им обязательства, а также в случае изменения этого обязательства, влекущего увеличение ответственности или иные неблагоприятные последствия для поручителя, без согласия последнего. 2. Поручительство прекращается с переводом на другое лицо долга по обеспеченному поручительством обязательству, если поручитель не дал кредитору согласия отвечать за нового должника. 3. Поручительство прекращается, если кредитор отказался принять надлежащее исполнение, предложенное должником или поручителем. 4. Поручительство прекращается по истечении указанного в договоре поручительства срока, на который оно дано. Если такой срок не установлен, оно прекращается, если кредитор в течение года со дня наступления срока исполнения обеспеченного поручительством обязательства не предъявит иска к поручителю. Когда срок исполнения основного обязательства не указан и не может быть определен или определен моментом востребования, поручительство прекращается, если кредитор не предъявит иска к поручителю в течение двух лет со дня заключения договора поручительства.

Как взыскать неустойку — Эльба

Предприниматели заключают договоры и ждут оплату в срок. За просрочку полагается неустойка.

Рассказываем, как взыскивают неустойку с покупателя, заказчика и поставщика и какой шанс заплатить меньше, если деньги за просрочку требуют с вас.

Мы прочитали:

§ 2 Неустойка ГК РФ — про неустойку по умолчанию и повышенную по договору с контрагентом.

Главу 25 ГК РФ — когда должник не виноват в просрочке и требовать неустойку бессмысленно.

Раздел Неустойка Постановления Пленума ВС РФ от 24.03.2016 № 7 — как в суде снижают сумму неустойки.

Что такое неустойка

Неустойка — это деньги, которые платит должник за просрочку исполнения обязанности по договору. Примерно это сказано в ст. 330 ГК РФ.

Того, кто требует неустойку, называют кредитор, кто обязан заплатить — должник.

Чаще всего неустойку насчитывают за просрочку уплаты денег: покупатель затянул с оплатой за торты, заказчик заплатил разработчикам только после строгого письма по электронке. Но деньги полагаются и за нарушение так называемого обязательства в натуре: просрочку поставки товара или передачи ключей к арендованному помещению.

Неустойкой покрываются предполагаемые убытки кредитора. Дело в том, что убытки не надо подтверждать документами. Заказчик долго не платил разработчикам — возможно, из-за этого они заплатили по аренде позже срока и сами влетели на проценты. Не важно, было ли это на самом деле.

Неустойка бывает законная и договорная

Законную неустойку насчитывают на любой долг по ст. 332, 395 ГК РФ. Она действует без всяких соглашений. Например, даже если в договоре на разработку программы нет пункта о процентах за гонорар позже срока, неустойку всё равно можно предъявить.

Законную неустойку считают в процентах по ключевой ставке ЦБ РФ. Как именно — расскажем в следующем разделе.

Договорную неустойку платят за нарушение конкретного договора. Это может быть процент от суммы долга — пени, или твёрдая сумма за нарушение — штраф. К примеру, в договоре может значиться, что за каждый день просрочки сдачи программы разработчики платят по 500 ₽.

Обычно договорная неустойка больше процента по ключевой ставке. Кредитору она выгоднее, а должнику — тяжелее.

Требовать с должника законную неустойку и плюсом договорную нельзя.

Если убытки больше суммы неустойки

Бывает, из-за просрочки у предпринимателя возникли реальные убытки. Поставщик не привёз предпринимателю торты к сроку. Торты были на свадьбу клиентов предпринимателя. Из-за опоздания с тортом церемония перекосилась, невеста расстроилась и пришлось снизить цену за свои услуги. Это реальные убытки.

Когда неустойка не покрывает убытки полностью, должник доплачивает разницу по ст. 394 ГК РФ. Такая неустойка называется зачётной и работает по умолчанию.

Но в договоре может быть один из таких вариантов и все они законны:

— За нарушение платят только неустойку без доплаты по убыткам — исключительная неустойка.

— Платят неустойку плюс полную сумму убытков — штрафная неустойка.

— Платят или неустойку, или убытки, как захочет кредитор — альтернативная неустойка.

Убытки сверх неустойки надо доказать. В нашем примере про свадебный торт убытки подтвердили бы договор и платежка на возврат денег.

Когда предприниматель не платит неустойку

Должник не платит неустойку, когда не виноват в просрочке. Так сказано в ст. 330, 401 ГК РФ.

Принято считать, что предприниматели всегда виноваты в нарушении договоров с клиентами и контрагентами. От неустойки освобождает только форс-мажор. Например, торты не привезли, потому что кондитерский цех залили соседи сверху. Рядовые обстоятельства наподобие ошибки работника или задержки продуктов поставщиком не избавят от ответственности.

Ещё неустойку не платят, когда прошёл срок исковой давности по долгу — ст. 207 ГК РФ.

Общий срок составляет три года по ст. 196 ГК РФ. Позже идти в суд бесполезно. Положительный результат возможен, только если должник не заявит о пропуске срока. Но должник заявит: они такие вещи хорошо знают.

Как посчитать неустойку

Чтобы предъявить неустойку должнику, надо посчитать её сумму.

Неустойка по ключевой ставке ЦБ РФ

Неустойку по ключевой ставке считают по такой формуле:

Сумма неустойки = (сумма долга х ключевая ставка в %, действующая в период просрочки) / количество дней в году х количество дней просрочки.

Если ставка менялась в период просрочки, расчётов делают несколько.

Например, есть долг 50 000 ₽ за период с 01 ноября 2019 года по 20 декабря 2019 года. 16 декабря 2019 года ключевая ставка снизилась с 6,50 до 6,25. Поэтому расчётов будет два:

За период с 01.11.2019 по 15.12.2019: 50 000 x 6,50 %: 365 x 45 = 400 ₽.

За период с 16.12.2019 по 20.12.2019: 50 000 x 6,25 %: 365 x 5 = 42 ₽.

Проценты по ключевой ставке можно считать на специальном калькуляторе на сайтах арбитражных судов.

Договорная неустойка

Здесь сумму процентов и штрафов считают в зависимости от условий договора.

Например, в договоре читаем такой пункт:

При нарушении сроков оплаты программы заказчик выплачивает исполнителю пени в размере 0,1 % от суммы просроченного платежа за каждый день просрочки.

Вользем наш долг 50 000 ₽ и период просрочки с 01 ноября 2019 года по 20 декабря 2019 года.

Формула будет такая: 50 000 х 0,1% х 50 дней = 2 500 ₽.

Неустойку насчитывают по день уплаты долга или исполнения обязанности в натуре. В договоре бывает условие, что неустойка замораживается, достигнув суммы основного долга. Это законно.

Если судитесь за неустойку, в иске надо просить сумму на дату вынесения решения и взыскание до момента фактического возврата долга. Тогда приставы или специалисты банка досчитают её до дня списания денег по исполнительному листу. Об этом сказано в п. 65 Постановления Пленума ВС РФ от 24.03.2016 № 7.

Как получить неустойку с должника

Должник платит неустойку добровольно или через суд.

Но в любом случае предприниматели обязаны попробовать договориться мирно. Для этого должнику направляют претензию об уплате неустойки. Пойти в суд можно через 30 дней после отправки претензии, если в договоре нет срока короче — ст. 4 АПК РФ.

Пример претензии об уплате неустойки по договору на разработку ПО

Претензию посылают по почте письмом с описью вложения. Квитанцию и опись сохраняют для суда. Претензию можно продублировать на электронную почту должника — так он быстрее узнает о вашем требовании.

Если миром договориться не получилось, кредитор обращается в суд.

Для суда кредитор платит госпошлину, пишет исковое с расчётом неустойки и направляет экземпляр должнику. Затем сдаёт исковое заявление в арбитражный суд с копиями претензии, квитанций и договора. В назначенные даты ходит на заседания, потом получает решение суда с исполнительным листом. Деньги получает через приставов или банк должника.

На судебное дело о взыскании неустойки можно нанять юриста. Он подготовит иск и пакет документов, сходит в суд по доверенности и принесёт исполнительный лист. Оплату юридических услуг и госпошлину суд взыщет с должника.

Статья: мифы о юристах

В судебном споре надо морально приготовиться к снижению слишком большой неустойки. Если совсем грубо, кредитор может рассчитывать на сумму не больше основного долга.

Сдавайте отчётность в 3 клика

Эльба рассчитает налог и подготовит отчётность для бизнеса на УСН, ЕНВД и патенте. А ещё поможет cформировать счета, акты и накладные.

Снижение неустойки судом

Часто сумма неустойки набегает большая или вообще заоблачная. Это бывает при многомесячных просрочках или высоком проценте по договору.

Большую неустойку называют чрезмерной.

Кредитору запрещено зарабатывать на проблемах должника: неустойку придумали для компенсации потерь. Поэтому суд уменьшает чрезмерную сумму по правилам из ст. 333 и 395 ГК РФ.

Возможность снизить неустойку — железное правило. Его нельзя отменить договором. Так прописано в п. 69 Постановления Пленума ВС РФ от 24.03.2016 № 7.

Чтобы неустойку снизили, должник обязан попросить об этом суд.

Договорные проценты и штрафы в спорах между предпринимателями уменьшают, когда есть доказательства отсутствия убытков кредитора. Доказательства приносит должник.

Как правило, высокий процент по договору снижают до ключевой ставки. А общую сумму по ключевой ставке вряд ли присудят выше основного долга.

Однако кредитор вправе отстоять даже очень высокую неустойку. Для этого он приносит доказательства убытков. Например, кредитный договор для платежей контрагентам, который оформил из-за задержки оплаты.

Чрезмерная неустойка — оценочное понятие. Это значит, суды в каждом деле решают, не слишком ли много получит кредитор. Никаких критериев в законах нет.

На этом примере видно, как суды понимают чрезмерность неустойки:

Компания взяла в аренду офис за 62 000 ₽ в месяц. В договоре установили, что платят авансом до 25 числа месяца. За просрочку прописали пени 0,5 % от долга за каждый день.

Видимо, дела у арендатора шли не очень хорошо. В течение года компания нарушала сроки платежей. И платить получалось не полную сумму, а по 10 000 или 30 000 ₽.

В итоге за просрочки арендодатель предъявил договорную неустойку 142 000 ₽. Дело дошло до суда.

В суде компания попросила снизить неустойку, и это получилось. Сумму уменьшили в три раза до 43 000 ₽. Вот где суд увидел чрезмерность:

— Договорная пени 0,5 % — это 182,5 % годовых, что в 22 раза больше ключевой ставки и в 12 раз ставки по кредитам для предпринимателей. Многовато для компенсации возможных убытков.

— С платежами арендодатель опаздывал на несколько дней. Это незначительно.

— Доказательств, что арендодатель понёс убытки на такую большую сумму неустойки нет.

Дело № А33-16457/2016

Стандартные службы документации | Microsoft Docs

Предварительное уведомление о доставке	AxdASN	ИнвентАСНСервис	4,0	Отправляется клиенту при обновлении отборочной накладной заказа на продажу.	Р
Курсы валют	AxdExchangeRates AxdSendExchangeRates	LedgerExchangeRatesService	4.0	Позволяет отправлять курсы обмена в другую дочернюю компанию.	CR
Счет-фактура с произвольным текстом	AxdFreeText Счет-фактура	CustFreeTextInvoiceService	4,0	Создает заказ на продажу в приложении. В этом документе значительно меньше ограничений на ввод данных, чем в документе «Заказ на продажу».	К
Документ журнала инвентаризации	AxdCountingJournal	Служба инвентарного учета	4.0	Обновляет суммы запасов и остатки с помощью информации о запасах из сторонней складской системы.	К
Товарно-материальные запасы	AxdInventoryOnHand	InventoryOnHandService	4,0	Позволяет внешним пользователям получать актуальную информацию о суммах запасов в наличии.	Р
Журнал учета прибылей и убытков	AxdProfitLossJournal	InventProfitLossJournalService	4.0	Создает запись о прибылях и убытках по запасам, основанную на информации из сторонней системы управления складом.	К
Инвентарные операции	AxdInventoryОперации	ИнвентарьИнвентарьОперацииСлужба	4,0	Описывает документ складских операций.	Р
Журнал перемещения запасов	AxdTransferJournal	InventTransferJournalService	4.0	Обновляет данные складских запасов из сторонней системы управления складом.	К
Отборочная накладная	AxdSalesPackingSlip	ПродажиПродажаУпаковкаСлипСервис	4,0	Создает запись отборочной накладной. Запись отборочной накладной основана на данных из сторонней системы управления складом.	К
Комплектация	AxdPickingList	Служба InventPickingListService	4.0	Отправляет список комплектации в стороннюю систему управления складом.	Р
Журнал договоров о скидках	AxdPriceDiscountJournal	ЦенаЦенаDiscJournalService	4,0	Описывает документ соглашения о скидке.	К
Прейскурант	Axd Прайс-лист	Прайс-листСервис	4.0	Отправляет заказчику составленный прайс-лист. Прейскурант основан на торговых соглашениях и скидках для конкретного покупателя.	Р
Счет-фактура закупки	AxdPurchaseInvoice	LedgerPurchaseInvoiceService	4,0	Создает счет-фактуру покупки на основе связанного заказа на покупку.	К
Заявка	AxdPurchaseRequisition	PurchPurchReqService	4.0	Отправляет заявку на покупку поставщику.	Р
Счет-фактура	AxdSales Счет-фактура	ПродажиСчет-фактураСервис	4,0	Отправляет счет клиенту. Счет-фактура основывается на данных заказа клиента.	Р
Заказ на продажу	AxdSalesЗаказ	ПродажиПродажаЗаказСервис	4.0	Создает новую запись заказа на продажу.	CRUD
Адрес	Axd Адрес	DirAddressService	4.0 SP2	Позволяет внешним системам читать, обновлять, создавать и удалять альтернативные адреса.	CRUD
Контактное лицо	Axd Контакты	DirContactPersonsService	4.0 SP2	Позволяет внешней системе читать, создавать, обновлять и удалять контактных лиц.	CRUD
Заказчик	Axd Клиент	CustCustomerService	4.0 SP2	Позволяет внешним системам читать, создавать, обновлять и удалять клиентов.	CRUD
Группа клиентов	AxdCustomerGroups	CustCustomerGroupsService	4.0 SP2	Позволяет внешним системам читать, создавать, обновлять и удалять группы клиентов.	Р
Товар	AxdItem	InventItemService	4.0 SP2	Разрешает двустороннее сотрудничество основных записей позиций для синхронизации в отношениях dgusiness-to-business.	CR
Комбинация размеров позиции	AxdInventDimCombination	InventInventDimCombinationService	4.0 SP2	Позволяет внешним системам считывать информацию о комбинациях размеров элемента, например, цвета и размера.	Р
Условия оплаты	AxdУсловия оплаты	PaymPaymentTermsService	4.0 SP2	Предоставляет список условий оплаты.	Р
Группы товаров	AxdInventItemGroup	InventInventItemGroupService	4.0 SP2	Позволяет внешним системам считывать информацию о группах продуктов.	Р
Способы доставки	AxdDeliveryModes	InventDeliveryModesService	4.0 SP2	Позволяет внешним системам считывать информацию о способах доставки.	Р
Склад	AxdInvent Местоположение	InventInventLocationService	4.0 SP2	Позволяет внешним системам получать информацию о складе.	Р
Спецификация	AxdBillsOfMaterials	BomBillsOfMaterialsService	5,0	Позволяет синхронизировать ведомость материалов с внешними системами, например, когда производство передано субподрядчику.	CR
Скидка при оплате наличными	AxdCashDisc	LedgerCashDiscService	5.0	Предоставляет список скидок при оплате, доступных конкретному пользователю.	Р
Кредитная карта	AxdTrvPBS Основные данные	TrvTrvPBSMaindataService	5,0	Разрешает импорт транзакций по корпоративным кредитным картам.	К
Журнал платежей клиентов	AxdCustPaymJournal	LedgerCustPaymJournalService	5.0	Позволяет создавать записи о платежах клиентов на основе счета-фактуры клиента.	К
Отчет о расходах	AxdExpense	TrvExpenseService	5,0	Позволяет вводить и отправлять отчеты о расходах.	CR
Основные средства	AxdFixedAsset	AssetFixedAssetService	5.0	Предоставляет список активов и позволяет создавать новые записи основных средств.	CRU
Состояние основных средств	AxdAssetCondition	AssetAssetConditionService	5,0	Предоставляет список условий актива. Условия основных средств описывают физическое состояние основных средств, например хорошее, новое, отремонтированное, улучшенное или бывшее в употреблении.	Р
Группа основных средств	AxdAssetGroup	AssetAssetGroupService	5,0	Предоставляет список групп активов.	Р
Местоположение основных средств	AxdAssetLocation	AssetAssetLocationService	5.0	Предоставляет список местоположений активов. Местоположение описывает, где находится основное средство, и может включать адрес.	Р
Основной вид основных средств	AxdAssetMajorType	AssetAssetMajorTypeService	5,0	Предоставляет список основных типов активов. Основные типы основных средств — это группы активов высокого уровня, используемые только для целей отчетности.	Р
Главная книга	AxdLedgerGeneralJournal	LedgerGeneralJournalService	5,0	Предоставляет список общих журналов и позволяет создавать новые общие журналы с типами счетов главной книги, поддерживающими мультивалютные и внутрихолдинговые счета.	CR
Список комплектации	AxdProdPickingList	ProdProdPickingListService	5.0	Создает журнал производственной отборочной ведомости. Позволяет субподрядчику сообщать о потреблении товаров.	К
Журнал рабочего времени проекта	AxdProjectHourJournal	ProjProjectHourJournalService	5,0	Позволяет внешним системам создавать журналы рабочего времени проекта.	К
Счет-фактура проекта	AxdProjInvoice	ProdProjEInvoiceService	5.0	Счет-фактура проекта для датского электронного счета. Создает электронный счет для датских налоговых органов.	Р
Заказ на возврат	AxdReturnOrderIn	ВозвратЗаказ в обслуживании	5,0	Позволяет вводить заказы клиента на возврат.	CUD
Подтверждение возврата заказа	AxdReturnOrderOut	ReturnReturnOrderOutService	5.0	Разрешает отправку клиенту подтверждения заказа на возврат.	Р
Маршрутная карта	AxdRouteCard	ProdRouteCardService	5,0	Создает журнал карт производственного маршрута. Позволяет субподрядчику сообщать о ходе выполнения (затраченные часы, хорошее количество, количество ошибок, процент выполнения).	К
Электронный счет-фактура продажи	AxdSalesInvoice_Einvoice	Продажи	5.0	Счет-фактура продажи для датского электронного счета. Создает электронный счет для датских налоговых органов.	Р
Договор на оказание услуг	AxdService Соглашение	SMAServiceAgreementService	5,0	Позволяет обмениваться электронными соглашениями об услугах, включая заголовок и строки соглашения об услугах.	Р
Сервисный заказ	AxdServiceЗаказ	SMAServiceOrderService	5.0	Разрешить обмен электронными заказами на обслуживание, включая заголовок и строки заказа на обслуживание.	CRUD
Поставщик	AxdVendor	VendVendTableService	5,0	Позволяет синхронизировать данные поставщика с внешними системами.	CRUD
Группа поставщиков	AxdVendorGroup	VendVendGroupService	5.0	Разрешает синхронизацию групп поставщиков с внешними системами.	CRUD
Платеж поставщику	AxdVendorPayment	LedgerVendorPaymentService	5,0	Предоставляет платежную информацию для определенного поставщика.	Р
Бюджетная операция	AxdBudgetTransaction	BudgetTransactionService	AX 2012	Позволяет конечному пользователю создавать, читать, обновлять и удалять записи бюджетного регистра	CRUDF, FK, GCK, GK
Каталог импорт	AxdCatImp	CatImpService	AX 2012	Разрешает конечному пользователю (поставщику, агенту по закупкам.Или менеджер по закупкам) для ведения импортированного каталога поставщика в Microsoft Dynamics AX	C, GCK, GK
Электронный платеж клиента	AxdCustPayments	CustPaymentsService	AX 2012	Служба электронных платежей клиентов	FR
Работа с документами	Служба обработки документов Примечание Соответствующий запрос называется DocumentHandling .	Служба обработки документов	AX 2012	Позволяет пользователям отправлять неприложенные документы и отправлять их в рабочий процесс для связи с записями.	К
Значения основных аналитик продукта	AxdEcoResProductMasterDimValue	EcoResProductMasterDimValueService	AX 2012	Позволяет читать и записывать значения аналитики продукта для основной записи продукта.	CRF, FK, GCK, GK
Сервисное обслуживание	AxdEcoResProduct	EcoResProductService	AX 2012	Позволяет внешним системам читать или записывать продукты в общий репозиторий продуктов.	CRF, FK, GCK, GK
Служба считывания показаний счетчиков	AxdEMSMeterReadingFlow	EMSMeterReadingFlowService	AX 2012	Позволяет внешним системам записывать показания счетчиков на панели мониторинга экологической устойчивости.	C, GCK, GK
Поток вещества	AxdEMS SubstanceFlow	EMSSubstanceFlowService	AX 2012	Позволяет внешним системам записывать транзакции потоков веществ на панели мониторинга экологической устойчивости.
Отчетность по списку продаж ЕС	AxdEUSLотчетность	EUSLReportingService	AX 2012	Позволяет создавать файлы списков продаж ЕС, которые используются для отчетности в государственные органы.	R, F, GCK, GK
Складская единица	AxdInventItem Местоположение	InventInventItemLocationService	AX 2012	Позволяет внешним системам создавать и извлекать складские товары.	CRF, FK, GCK, GK
Служба штрих-кодов	AxdInventItemBarcode	InventItemBarcodeService	AX 2012	Позволяет внешним системам получать информацию о штрих-кодах для выпущенного продукта.	РФ, ФК, ГСК, ГК
Создать заказ на перемещение запасов	AxdTransferOrderCreate	InventTransferOrderCreateService	AX 2012	Позволяет внешним системам создавать заказы на перемещение запасов.	C, GCK, GK
Проводка заказа на перемещение запасов	AxdTransferOrderPosting	Служба InventTransferOrderPostingService	AX 2012	Позволяет внешним системам разносить заказы на перемещение запасов.	C, GCK, GK
Прочитать заказ на перемещение запасов	AxdTransferOrder	InventTransferOrderService	AX 2012	Позволяет внешним системам считывать заказы на перемещение запасов.	РФ, ФК, ГСК, ГК
Ответ на запрос цитаты	AxdRFQReply	PurchPurchRFQReplyService	AX 2012	Позволяет клиенту получать предложения поставщика в ответ на запрос предложения.	УФ, ГКК, ГК
Запрос цены отправить	AxdRFQSend	PurchPurchRFQSendService	AX 2012	Позволяет клиенту отправлять запросы предложений поставщикам.	РФ, ФК, ГСК, ГК
Заявка на закупку	AxdPurchaseRequisition	PurchReqImportService	AX 2012	Позволяет создавать, извлекать и отменять заявки на закупку.	Отмена, CRDF, FK, GCK, GK
Запрос котировок сайтов	AxdPurchRFQSites	PurchRFQSitesService	AX 2012	Позволяет клиенту управлять документами запроса предложений.	CRUF, FK, GCK, GK
Журнал коммерческих предложений	AxdCustomerQuotation	ПродажиКлиентОбслуживание цен	AX 2012	Позволяет внешним системам читать журналы предложений по продажам.	РФ, ФК, ГСК, ГК
Линейный список скидок	AxdLineDiscount	SalesLineDiscountService	AX 2012	Позволяет внешним системам получать списки скидок по строкам.	Найти, GCK, GK
Многострочный список скидок	AxdSalesMultilineDiscount	Продажи	AX 2012	Позволяет внешним системам получать многострочные списки скидок.	F, GCK, GK
Подтверждение продажи	AxdSales Подтверждение	ПродажиПодтверждение продажУслуга	AX 2012	Позволяет внешним системам считывать подтверждения заказов на продажу.	РФ, ФК, ГСК, ГК
Коммерческое предложение	AxdSalesQuotation	Продажи	AX 2012	Позволяет внешним системам читать, создавать, обновлять и удалять предложения по продажам.	CRUDF, FK, GCK, GK
Итого скидка	AxdSalesTotalDiscount	SalesTotalDiscountService	AX 2012	Позволяет внешним системам получать общие списки скидок.	F, GCK, GK
Нарушение расходной политики	TrvExpensePolicyViolation	TrvExpensePolicyViolationService	AX 2012	Предоставляет список нарушений расходов для данного отчета о расходах.	Операция специальной службы TrvExpensePolicyViolationService.getPolicyViolations
Служба погрузки на складе	WMSLocationLocationLoadService	WMSLocationLocationLoadService	AX 2012	Позволяет внешним системам просматривать информацию о загрузке (объем, вес) для складских мест.	Р
Импорт заработной платы	AxdPayrollEarningsImport	Заработная платаEarningsImportService	AX 2012 R2	Разрешает импорт отчетов о прибылях и убытках из внешних систем.	К
Рабочий импорт	AxdHcmWorkerImport	HcmWorkerImportService	AX 2012 R2	Позволяет внешним системам читать, создавать и обновлять информацию о сотрудниках.	C, R, U
Бюджетный план	AxdBudgetPlan	BudgetPlanService	AX 2012 R2	Позволяет внешним системам читать, создавать, обновлять и удалять бюджетные планы.	C, R, U, D
Выписка из банка	AxdBankStmt	BankStmtService	AX 2012 R2	Разрешает импорт банковских выписок. Примечание Для импорта выписок по счету необходимо выбрать опцию Расширенная выверка банковского счета в форме Банковский счет .	C, R, D, F, GK, GCK
Прогноз использования складских площадей	WMSSpaceUtilService	WMSSpaceUtilService	AX 2012 R2	Создает данные прогноза для отчета об использовании складских площадей.	Построение таможенной службы Прогноз
Прогноз загрузки склада	WMSWorkLoadService	WMSWorkLoadService	AX 2012 R2	Создает данные прогноза для отчета о загруженности склада.	Построение таможенной службы Прогноз
Advanced Ledger Entry	AxdAdvancedLedgerEntry	AdvancedLedgerEntryService	AX 2012 R2	Импортирует различные типы транзакций, например, платежные операции, и использует определения разноски для обработки балансирующих проводок.	C, R, U, D, F, FK
Письмо клиента о получении для Норвегии	AxdCustECollectionLetter_NO	CustCollectionLetterService_NO	AX 2012 R2	Отправляет инвойс в электронном формате клиентам, у которых включено электронное выставление счетов. Относится только к Норвегии.	Р
Обслуживание клиентов	AxdCustomerTransaction	CustomerTransactionService	AX 2012 R2	Получает список открытых и закрытых транзакций клиента.	F, FK, R
Маршрутная служба	AxdRoutes	RoutesService	AX 2012 R2	Поддерживает синхронизацию маршрута с внешними системами.	C, R, F, FK
Счет-фактура поставщика	AxdVendInvoice	VendInvoiceService	AX 2012 R2	Создает новую накладную поставщика. Примечание Вы должны указать значение InventTransId для нужной строки заказа на покупку в VendInvoiceInfoLine при получении по заказу на покупку.	C, R, D, F, FK, GK, GCK
Норма амортизации активов для Японии	AxdAssetDepRateExpImp_JP	AssetDepRateExpImp_JPService	AX 2012 R3	Поддерживает импорт и экспорт ставок амортизации в Японии для методов амортизации основных средств, включая старую прямую линию, новую прямую линию, старый убывающий баланс и новый убывающий баланс с помощью Excel.	C, R, D, U
Изменение метода начисления амортизации для Японии	AxdAssetUndepBalanceExpImp_JP	AssetUndepBalanceExpImp_JPService	AX 2012 R3	Поддерживает импорт и экспорт изменения метода амортизации для Японии.	C, R, D, U
Служба отчетности о вакансиях	JmgShopFloorService	JmgShopFloorServiceClass	AX 2012 R3	Создает, обновляет и считывает данные для вспомогательного приложения цеха, которое позволяет операторам цеха составлять отчеты о производственных заданиях.	C, U, R
Конфигурация видимости полей расходов	TrvAdminCustomFieldsService	TrvAdminCustomFieldsService	AX 2012 R3	Возвращает список всех полей отчета о расходах и строк, а также информацию о том, как настроена их видимость: только для чтения, видимая или скрытая.	Р
Категории расходов	TrvExpenseCategoryService	TrvExpenseCategoryService	AX 2012 R3	Возвращает список категорий расходов, включая их подкатегории и информацию о категории.	Р
Настройки конфигурации модуля расходов	TrvExpenseConfigurationService	TrvExpenseConfigurationService	AX 2012 R3	Возвращает данные конфигурации для модуля расходов пользователя, включая компанию по умолчанию, валюту и табельный номер.	Р
Строки расходов	TrvExpenseLineCustomService	TrvExpenseLineCustomService	AX 2012 R3	Создает, считывает, обновляет и удаляет строку расходов, которая принадлежит отчету о расходах.	C, R, U, D
Справочные данные модуля расходов	TrvExpenseReferenceDataService	TrvExpenseReferenceDataService	AX 2012 R3	Возвращает справочные данные, необходимые модулю отчета о расходах, такие как местоположения, назначение расходов и т. Д.	Р
Отчет о расходах	TrvExpenseReportCustomService	TrvExpenseReportCustomService	AX 2012 R3	Создает, читает, обновляет, удаляет, отправляет и отзывает отчет о расходах.	C, R, U, D, представить, отозвать
Строка гостевых расходов	TrvExpGuestService	TrvExpGuestService	AX 2012 R3	Создает, считывает, обновляет и удаляет гостевые записи в строке расходов.	C, R, U, D
Квитанции отчета о расходах	TrvReceiptService	TrvReceiptService	AX 2012 R3	Создает, обновляет, считывает, удаляет, присоединяет и отключает квитанции из отчета о расходах или строки расходов.	C, R, U, D и другие
Изменение иерархии складских позиций	WHSChangeItemHierarchyService	WHSChangeItemHierarchyService	AX 2012 R3	Операция службы без сохранения состояния, которая изменяет резервирование элемента, для которого уже есть транзакции и запасы.	Изменение операции специальной услугиItemHierarchy
Сервис мобильных устройств на складе	WHSMobileDevicesServiceFacade	WHSMobileDevicesService	AX 2012 R3	Операции пользовательских служб, которые обеспечивают связь между порталом мобильных устройств хранилища (WMDP) и сервером AX 2012 (AOS).	Пользовательские операции службы: getNextFormHandHeld, getServiceUserLanguage, SessionLogFindTransacation, SessionLogUserList, WorkUserDisplaySettings
Служба очистки журнала сеансов хранилища	WHSSessionLogCleanupService	WHSSessionLogCleanupService	AX 2012 R3	Операции службы без сохранения состояния для очистки журналов сеансов пользователей Warehouse worker.	Таможенная служба doCleanup
Складские перевозки ASN Service	WHSShipmentASNService	WHSShipmentASNService	AX 2012 R3	Служба документации для импорта, создания, удаления или обновления данных предварительного уведомления об отгрузке (ASN).	C, D, F, FK, GCK, GK, R, U

Спортивный купальник GK Elite UNDER ARMOR FUSE AMBITION Купальник SZ для взрослых, малый AS 6323 PINK NWT NEW Одежда

GK Elite UNDER FUSE AMBITION Купальник SZ для взрослых, маленький AS 6323 PINK NWT NEW

ER GKION Elite, для взрослых 6323 РОЗОВЫЙ NWT NEW.СТИЛЬ: Тренировочный купальник для гимнастики Under Armour® ArmourFuse® с овальным вырезом на спине. Включает подходящую резину для волос. Взрослый маленький .. Состояние: Новое с бирками: Совершенно новый, неиспользованный и неношеный предмет (включая изделия ручной работы) в оригинальной упаковке (например, в оригинальной коробке или сумке) и / или с прикрепленными оригинальными бирками. Просмотреть все определения состояний ： Основной цвет: ： Розовый ， Пол: ： Девочки ： Бренд: ： GK Elite ， Спорт: ： Гимнастика ： Рекомендуемые уточнения: ： Купальник GK для взрослых, маленький ， Размер: ： S (4-6) ： Тип: ： Купальники и комбинезоны ，

GK Elite UNDER ARMOR FUSE AMBITION Купальник SZ Adult Small AS 6323 PINK NWT NEW

; Прекрасный зимний подарок для себя.Хлопковые однотонные леггинсы Indistar Big Girls до щиколотки (набор из 8) — разные цвета — 7-8 лет: одежда, наш широкий выбор элегантен для бесплатной доставки и бесплатного возврата, BOURNS JW MILLER 8230-56-RC RF CHOKE, чувствительность к влаге Уровень (MSL): 1 (неограниченно), измерение включает застежку-лобстер, Купить женские серьги Amyannie Girl, серьги из стерлингового серебра 925 пробы, купальник GK Elite UNDER ARMOR FUSE AMBITION Купальник SZ для взрослых, маленький AS 6323 PINK NWT NEW , свернуть толстый над канавкой на прожилках доска.Номер модели позиции: 55CATMULDESN-4. и у меня нет выбора, кроме как воспринимать вас всерьез. Он не будет прикреплен к корсету, белые пятна аппликации следуют с каждой стороны вместе с двойным рядом металлической серебряной окантовки. Wedding Save the Dates / Elegant Greenery Wedding Invitation /, Юбка на подкладке с внутренней стороны и застегивается на молнию с одной стороны. GK Elite UNDER ARMOR FUSE AMBITION Купальник SZ Adult Small AS 6323 PINK NWT NEW , Over The Boardwalk — ваш источник высококачественных модных товаров на заказ по отличным ценам, на трибуне, чтобы посмотреть игру, *** ПОЖАЛУЙСТА, ПРОЧИТАЙТЕ ВЕСЬ ОПИСАНИЕ ПЕРЕД ПОКУПКОЙ *** * Наши наволочки наволочки сделаны вручную с любовью.instagram. Вешалка для сумочек Крючки для сумочек и другие вешалки для сумочек на вечеринках, подружках невесты или выпускных для любой женщины. ПОДДЕРЖКА: Chicago Rink Skate имеет регулируемый высокий верх для оптимальной безопасности, а также высококачественные шнурки для максимальной защиты. GK Elite UNDER ARMOR FUSE AMBITION Купальник SZ Adult Small AS 6323 PINK NWT NEW , шесть уникальных сторон удовлетворят все ваши потребности, очень удобны и экономят ваше время. 150 см
— Очень мягкий
— Доступен в 3 цветах на выбор. Подпружиненный шариковый фиксатор надежно удерживает гнезда на месте; Рифленая ручка для удобного поворота ослабленных застежек вручную.Арахисовое масло и стаканы для желе; Плюс молочные стаканы и молоко: Кэрол Марковски. Создайте уют с этим сверхмягким одеялом с 3D-принтом, купальником GK Elite UNDER ARMOR FUSE AMBITION SZ Adult Small AS 6323 PINK NWT NEW .

GK Elite UNDER ARMOR FUSE AMBITION Купальник SZ Adult Small AS 6323 PINK NWT NEW

Кобура Kydex OWB для Glock 43 и 43x с регулируемым фиксатором TLR-6. 75см черный ABUS складной замок с ключом Bordo 6000. Набор из 4 аэрохоккейных настольных вратарских лопастей Молоток Толкатель Войлочные колодки Бесплатная доставка, Велоспорт Регулируемый велосипед MTB Relax Rest Руль подлокотника из алюминиевого сплава.Набор досок Cornhole по индивидуальному заказу. CSC 23 мм Ширина 38 мм Клинчер SAT карбоновые дорожные колеса только 1380 г, водонепроницаемые носки Hanz, GOLD HEAD PRINCE NYMPHS Top Nymph Fly Fishing Trout Grayling Arctic Char 4 St. Конный спорт Hy5 Детские повседневные двухцветные перчатки для верховой езды. Распродажа Ima Skunk E Soft Plastic Floating Lure 008 6780, GLOBE Mahalo Oatmeal / Black Black / Tobacco Rust / Табачные вулканизированные коньки унисекс, Team Catfish Red EZ Load Dip Tube TC97Q Dead Red Size4 тройной крючок-RARE-SHIP N24, New Champion Set of 8 Футбол Футбол All Sport 9 «Блюдце конусы красные.Коврик для йоги Piloga 24 «X 72» X 6 мм, нетоксичный бирюзовый цвет. 2X Мужчины Женщины Мотоциклетная трубка Маска Моющаяся крышка лица Шея Гайтер Шарф-бандана, Паракорд Латунь Медь 9 мм Браслет-манжета с потраченным корпусом ~ Сделано ветераном ~.

Дронедарон при постоянной фибрилляции предсердий высокого риска

Задний план: Дронедарон восстанавливает синусовый ритм и снижает количество госпитализаций или летальных исходов при перемежающейся фибрилляции предсердий.Он также снижает частоту сердечных сокращений и артериальное давление и оказывает антиадренергическое и потенциальное желудочковое антиаритмическое действие. Мы предположили, что дронедарон уменьшит количество серьезных сосудистых событий при постоянной фибрилляции предсердий с высоким риском.

Методы: Мы назначили пациентов в возрасте не менее 65 лет с не менее 6-месячной историей постоянной фибрилляции предсердий и факторами риска серьезных сосудистых событий для приема дронедарона или плацебо.Первым вторичным исходом был инсульт, инфаркт миокарда, системная эмболия или смерть от сердечно-сосудистых причин. Вторым сопутствующим исходом была незапланированная госпитализация по поводу сердечно-сосудистой причины или смерти.

Полученные результаты: После включения 3236 пациентов исследование было остановлено по соображениям безопасности. Первый совместный исход произошел у 43 пациентов, получавших дронедарон, и 19 пациентов, получавших плацебо (отношение рисков 2.29; 95% доверительный интервал [ДИ] от 1,34 до 3,94; P = 0,002). В группе дронедарона был зарегистрирован 21 смерть от сердечно-сосудистых причин и 10 в группе плацебо (отношение рисков 2,11; 95% ДИ от 1,00 до 4,49; P = 0,046), включая смерть от аритмии у 13 пациентов и 4 пациентов, соответственно (опасность соотношение 3,26; 95% ДИ от 1,06 до 10,00; P = 0,03). Инсульт произошел у 23 пациентов в группе дронедарона и у 10 в группе плацебо (отношение рисков 2,32; 95% ДИ 1,11–4,88; P = 0,02). Госпитализация по поводу сердечной недостаточности произошла у 43 пациентов в группе дронедарона и 24 в группе плацебо (отношение рисков 1.81; 95% ДИ, от 1,10 до 2,99; P = 0,02).

Выводы: Дронедарон увеличивал частоту сердечной недостаточности, инсульта и смерти от сердечно-сосудистых причин у пациентов с постоянной фибрилляцией предсердий, которые были подвержены риску серьезных сосудистых событий. Наши данные показывают, что этот препарат не следует применять таким пациентам. (При финансовой поддержке Sanofi-Aventis; номер PALLAS ClinicalTrials.gov, NCT01151137.).

Проведенный сообществом сравнительный геномный и фенотипический анализ патогена аквакультуры Pseudomonas baetica a390T, секвенированный с помощью технологий Ion Semiconductor и Nanopore | Письма о микробиологии FEMS

Аннотация

Штамм a390T Pseudomonas baetica является типовым штаммом этого недавно описанного вида, и здесь мы представляем его черновой вариант генома с высокой степенью смежности. В ознаменование 16-й Международной конференции по Pseudomonas геном P.baetica штамм a390T был секвенирован с использованием уникальной комбинации методов Ion Torrent Semiconductor и Oxford Nanopore в рамках совместного проекта под руководством сообщества. Использование высококачественных последовательностей ионного торрента с длинными считываниями нанопор дало быструю, высокопримыкающую и качественную последовательность генома из 16 контигов. Филогенетический анализ всего генома помещает P. baetica в кладу P. koreensis группы P. fluorescens . Сравнение основных геномных признаков P.baetica с множеством других Pseudomonas spp . предполагает, что это очень адаптируемый организм, типичный для этого рода. Этот штамм был первоначально выделен из печени больной клиновидной рыбы, и генотипический и фенотипический анализ показали, что он устойчив к осмотическому стрессу и окситетрациклину.

ВВЕДЕНИЕ

В сентябре 2017 года в Ливерпуле, Великобритания, проводилась проводимая раз в два года конференция по биологии Pseudomonas .На встрече были представлены все аспекты биологии Pseudomonas , от клинической микробиологии до микробиологии окружающей среды. Подавляющее большинство литературы по Pseudomonas сосредоточено только на нескольких организмах, в первую очередь на Pseudomonas aeruginosa , P. fluorescens , P. putida и P. syringae , хотя род гораздо более разнообразен, чем этот. . Чтобы способствовать устранению этого дисбаланса, геном P. baetica , недавно описанного представителя этого рода, был секвенирован для форума по геномике Pseudomonas 2017.Полученная последовательность генома была проанализирована членами сообщества Pseudomonas 2017 со всего мира с использованием Slack в качестве инструмента для совместной работы (Perkel, 2016).

Штамм a390 Pseudomonas baetica является одним из пяти грамотрицательных организмов, которые были изолированы во время вспышки болезни рыб в аквакультурном хозяйстве в Уэльве, Испания, в 2006 г. (López et al. 2012). Зараженной рыбой была клиновидная рыба ( Dicologlossa cuneata ), плоская рыба, широко потребляемая в Андалусии и некоторых частях Франции, где наблюдается растущий интерес к устойчивой аквакультуре этого вида.Аквакультура не только обеспечивает устойчивый источник белка, но и является экономически важной отраслью во всем мире. Данные Европейской комиссии показывают, что аквакультура в ЕС производит 1,25 миллиона тонн продуктов питания ежегодно и что более 85 000 человек непосредственно заняты в этой отрасли. Недостатком систем аквакультуры является то, что необычно высокая плотность выращиваемой рыбы приводит к повышенному риску вспышек инфекционных заболеваний. По этой причине антибиотики, такие как окситетрациклин (ОТ), обычно используются в качестве стимуляторов роста в кормовых гранулах для рыб для аквакультуры (Leal et al. 2017). Хорошо известно, что другие представители Pseudomonadaceae вызывают заболевания в аквакультуре, в первую очередь P. anguilliseptica является патогеном как выращиваемых, так и диких угрей (Joh et al. 2013).

Pseudomonas baetica была официально описана в 2012 году с использованием комбинации секвенирования 16S рРНК и фенотипического анализа, что позволило создать биохимический профиль (López et al. 2012).

Этот анализ показал, что P.baetica является членом группы P. fluorescens и особенно близок к P. koreensis . Хотя инфицированная клиновидная подошва не показала очевидных визуальных признаков инфекции P. baetica , анализы инфицирования внутрибрюшинной инъекцией и иммерсией дали 100% и 10% уровень смертности, соответственно (López et al. 2012). Последующие анализы на заражение множеством других видов рыб показали, что P. baetica вызывает более высокую смертность у клиновой подошвы, чем другие виды, включая морского окуня и морского леща, и что существует температурный эффект на вирулентность (López et al. 2017). Чтобы быстро идентифицировать заражение P. baetica в условиях аквакультуры, López et al. (2017) разработали иммунологические и молекулярные методы обнаружения.

Хотя P. baetica был первоначально описан на основе сценария заражения аквакультуры, ряд недавних исследований идентифицировал этот вид и его близких родственников, таких как недавно описанные P. helmanticensis и P. granadensis в различных средах в ризосфера, включая корни бобов в Иране, и лесные почвы в Испании (Ramírez-Bahena et al. 2014; Паскуаль и др. 2015; Keshavarz-Tohid et al. 2017). Это говорит о том, что P. baetica , скорее всего, будет условно-патогенным микроорганизмом рыб, а не настоящим морским патогеном. Мы предположили, что черновая последовательность генома P. baetica может выявить генетическую основу признаков, необходимых для возникновения заболевания клиновидной подошвы. Цель этого исследования — дать представление о геноме биологии P. baetica и использовать этот геном как отражение разнообразных интересов сообщества Pseudomonas .

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Штаммы бактерий и образцы последовательностей генома

Pseudomonas baetica a390T, первоначально выделенный из печени клиновидной рыбы D. cuneate и описанный Lopez et al . (2012), был получен из DSMZ (DSM № 26532) и считается типовым штаммом. Если не указано иное, все фенотипические сравнения были выполнены с P. fluorescens PF01, P.putida KT2440 и P. aeruginosa PA14. Этот проект «Whole Genome Shotgun» был депонирован в DDBJ / ENA / GenBank под регистрационным номером PKLC00000000. В этом документе описывается версия PKLC01000000. Необработанные чтения секвенирования также были депонированы и могут быть найдены под номерами доступа SRR67 и SRR67

для чтения Nanopore и Ion Torrent, соответственно.

Экстракция ДНК, подготовка библиотеки и секвенирование PGM с помощью ионного торрента

Экстракцию ДНК

проводили с использованием набора геномной ДНК ISOLATE II (BIOLINE) по стандартному протоколу для бактериальных клеток.Фрагментацию проводили с использованием стандартного протокола из NEBNext Fast DNA Fragmentation & Library Prep Set для Ion Torrent, и лигированная адаптером ДНК была подготовлена с использованием набора штрих-кодов 6. Выбор размера осуществлялся с использованием E-gel ibase (Invitrogen) и анализировался с использованием Биоанализатор 2100 (Agilent Genomics). Был перенесен фрагмент размером 424 п.н. Амплификацию и обогащение шаблона проводили с использованием стандартного протокола Ion Torrent с использованием системы Ion OneTouch 2 (Thermo-Fischer).Использовался стандартный протокол секвенирования для Ion Torrent, и библиотека ДНК была загружена на чип Ion316 v2 с процентом загрузки ISP 87%.

Секвенирование нанопор

Длинные чтения с помощью секвенирования Nanopore были получены с использованием секвенатора MinION от Oxford Nanopore Technology (ONT) с целью улучшения сборки генома P. baetica. Штамм выращивали в среде LB и выращивали при 30 ° C до OD ₆₀₀ 0,850, и его геномную ДНК выделяли с использованием набора Mo Bio DNAeasy UltraClean Microbial.Качество гДНК проверяли на целостность с помощью NanoDrop и агарозного геля. ГДНК механически разрезали до среднего размера фрагмента 10 т.п.н. с использованием Covaris gTube. Библиотеку секвенирования получали с использованием протокола лигирования 1D от ONT с нативным штрих-кодированием образца. Результат был секвенирован на проточной кювете R9.4 в течение 8 часов.

Комбинированная сборка генома ионов PGM и считывания нанопор

Показания ионных PGM были проверены на качество с помощью FastQC и обработаны с помощью BBDuk для удаления потенциального загрязнения адаптера, исключения размера (50> длина считывания <250) и обрезки (оценка phred <28) (Andrews 2014 ).Базовый вызов считываний нанопор был выполнен с помощью программного обеспечения Albacore v2.1.3 от ONT, а штрих-коды были удалены с помощью Porechop . Распределение длин считываний и качество считываний Nanopore оценивалось с помощью NanoPlot .

Геном сначала был собран с помощью SPAdes , версия 3.11.1 с использованием параметров по умолчанию (Bankevich и др. 2012) с использованием только чтения Ion PGM, затем с помощью Unicycler , версия v0.4.3 (Wick et al. 2017), также используя параметры по умолчанию для чтения Ion PGM и Nanopore. Для последнего геном был отполирован с помощью Racon (Vaser et al. 2017) и Pilon (Walker et al. 2014). Качество обеих сборок оценивалось с помощью QUAST (Гуревич и др. 2013).

Прогнозирование геномного острова и визуализация генома

Ионный PGM и гибридные сборки были аннотированы с помощью Prokka (Seemann 2014) с использованием пользовательской базы данных белков, созданной из рода Pseudomonas .Затем в аннотациях был проведен поиск профагов с использованием PHASTER (Arndt et al. 2016) и геномных островков с использованием IslandViewer и antiSMASH (Bertelli et al. 2017; Blin et al. 2017). Для последнего эталонным геномом, использованным для выравнивания, был геном P. koreensis штамма D26, поскольку он был признан филогенетически близким к P. baetica. Карты CCT были созданы с использованием CCT версии 1.0 с использованием настроек по умолчанию, за исключением следующих команд; -t –cct –custom scale_blast = F _cct_blast_thickness = 60 backboneThickness = 10 tickThickness = 15 rulerFontSize = 100 featureThickness = 150 tickLength = 30 legend = F details = F.Файл функций использовался для «бежевых блоков», а файл «labels_to_show» был использован для обозначения карты CCT (Grant, Arantes and Stothard 2012).

Филогенетический анализ

деревьев были собраны с использованием Mash v1.1.1 (Ondov et al. 2016) быстрой оценки генома и метагеномного расстояния с использованием алгоритма MinHash и визуализированы в FigTree v1.4.3 (Rambaut 2012, также доступно через GitHub). Контрольные геномы были получены от NCBI. Среднюю идентичность нуклеотидов (ANI) определяли с использованием PyANI (Gupta et al. 2016). Данные обрабатывались с помощью CLIMB (Connor et al. 2016).

Анализ азоказеина

Ночные культуры P. aeruginosa UCBPP-PA14, P. baetica a390T, P. fluorescens Pf0-1 и P. putida KT2440 центрифугировали при 12000 × g в течение 5 мин и 100 мкл. супернатанта пипеткой переносили в центрифужные пробирки, содержащие 400 мкл реакционной смеси; 200 мкл 2% азоказеина в 0,5% бикарбонатно-натриевом буфере и 200 мкл 0.5% буфер бикарбоната натрия. Затем реакционную смесь инкубировали при 30 ° C в течение 10, 70 и 140 минут.

После инкубации добавляли 0,5 мл 10% трихлоруксусной кислоты для прекращения реакции. Затем пробирки встряхивали в течение 5 минут с последующим центрифугированием в течение 5 минут при 4 ° C и 10 000 × g. Пятьсот микролитров супернатанта затем добавляли в кюветы, содержащие 500 мкл 0,5 М NaOH, и оптическую плотность измеряли при 440 нм на спектрофотометре Ultrospec 3100pro. Все образцы были проанализированы в трех экземплярах.

Анализ обезжиренного молока

Пять микролитров ночных культур P. aeruginosa UCBPP-PA14, P. baetica a390T, P. fluorescens Pf0-1 и P. putida KT2440 высевали на чашки с агаром с минимальной средой MOPS, дополненные обезвоженное обезжиренное молоко и инкубируют 72 ч при 30 ° C. Фотографии делались с интервалом в 24 часа. Добавка железа, FeCl ₂, не включалась в 10-кратный запас, и добавляли 5 г / л агара и обезжиренного молока, чтобы наблюдать образование четкого ореола.

Анализ устойчивости к ОТ

Pseudomonas baetica был протестирован на чувствительность к антибиотикам путем разведения в агаре в соответствии с руководящими принципами Европейского комитета по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам (Европейский комитет по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам (EUCAST) Европейского общества клинической микробиологии и инфекционных заболеваний (ESCMID) 2000). Устойчивость к ОТ была протестирована из-за его частого использования в качестве стимулятора роста в аквакультуре (Leal et al. 2017). Планшеты с агаром Мюллера-Хинтона с конечными концентрациями в диапазоне от 0,125 до 128 мкг / мл ^-1 инокулировали суспензиями P. baetica a390T, разведенными в 0,85% NaCl до уровня мутности, эквивалентного 0,5 стандарта МакФарланда. Планшеты инкубировали в течение ночи при 30ºC. Pseudomonas aeruginosa PAO1 использовали в качестве положительного контроля.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Результаты секвенирования и сборка

Первоначальное секвенирование ионного торрента произвело более 3.5 миллионов считываний со штрих-кодом со средней длиной считывания 299 пар оснований. Сборка SPAdes привела к конечному числу контигов, равному 338. Цикл секвенирования Nanopore дал около 22 000 считываний, из которых 7771 прошли контроль качества в процессе базового вызова. Средняя оценка качества чтения по методу phred составляет 11, а их распределение по длине составляет около 9 кбит / с (см. Рисунок S1, Дополнительная информация). С размером генома около 6,6 Мбит / с, оцененным из начальной сборки Ion PGM, мы делаем вывод о покрытии генома примерно 9x для данных секвенирования Nanopore (60 Mbp) и 80x для данных Ion PGM (540 Mbp после QC).

Гибридный подход, который сочетает в себе набор данных коротких считываний ионных PGM и длинных считываний нанопор, значительно улучшил сборку генома по сравнению с использованием только считываний ионных PGM, давая 16 контигов длиной более 1000 п.н. Кваст-анализ комбинированной сборки дает значение N50

9, что превышает 96% всех черновых геномов в базе данных Pseudomonas Genome.

Таблица 1.

Оценка качества сборки генома для обоих подходов показывает значительное улучшение сборки, несмотря на низкий охват нанопор секвенированием (9X).

Метрическая система .	Только ионные PGM .	Гибрид .
Монтажная длина	6602 908	6773 804
Кол-во контигов (> 1000 п.н.)	338	16
N50
N75	19 947	745 006
Самый длинный контиг	122046	1654 292

Метрическая система .	Только ионные PGM .	Гибрид .
Монтажная длина	6602 908	6773 804
Кол-во контигов (> 1000 б.п.)	338	16
N50
N75	19 947	745 006
Самый длинный контиг	122046	1654 292

Таблица 1.

Метрическая система .	Только ионные PGM .	Гибрид .
Монтажная длина	6602 908	6773 804
Кол-во контигов (> 1000 п.н.)	338	16
N50
N75	19 947	745 006
Самый длинный контиг	122046	1654 292

Метрическая система .	Только ионные PGM .	Гибрид .
Монтажная длина	6602 908	6773 804
Кол-во контигов (> 1000 б.п.)	338	16
N50
N75	19 947	745 006
Самый длинный контиг	122046	1654 292

Графики Ion PGM-only и гибридной сборки также были проверены визуально с использованием Band . et al. 2015), чтобы оценить фрагментацию геномных сборок и геномную организацию, включая присутствие потенциальных плазмид (см. Рисунки S2 и S3, вспомогательная информация). После аннотации гена с помощью Prokka проводился поиск связанных с плазмид генов, таких как рекомбиназы, транспозазы и интегразы, и они не присутствовали или не указывали на то, что они ассоциированы с плазмидой. Высокая непрерывность сборки, обеспечиваемая комбинаторным подходом технологий Ion Torrent и Nanopore, позволила провести всесторонний анализ генома.

Филогенетическое размещение и ANI

P. baetica a390T
Мы создали филогению, чтобы сопоставить секвенированный геном P. baetica a390T с эталонными геномами из клад 19 видов, включающих весь род Pseudomonas (рис. 1B) (Gomila et al. 2015). Это было сделано с помощью Mash, конвейера, преобразующего геном в эскиз (или группы k-мер). Затем эскизы сравниваются для получения индекса Жаккара, который генерируется на основе общих k-мер в геномах (Ondov et al. 2016). Наша филогения помещает P. baetica среди субклада P. koreensis , как ранее было показано в филогении, построенном с использованием частичных последовательностей гена 23S рРНК P. koreensis . Филогения P. koreensis , построенная таким же образом, помещает P. baetica ближе всего к Pseudomonas sp. Irchel 3E19, штамм, выделенный из пруда в Цюрихе, Швейцария, что позволяет предположить, что этот изолят на самом деле является штаммом P. baetica (Butaitė et al. 2017). Следующим наиболее близким организмом является штамм P. koreensis CI12, который недавно был совместно изолирован с Bacillus cereus из ризосферы растений сои (Bravo, Lozano and Handelsman 2017). ANI был использован для сравнения последовательности полного генома P. baetica с шестью доступными эталонными геномами для P. koreensis , а также штамма Irchel 3E19, и подтвердил, что он наиболее близок к Irchel 3E19 и CI12, с АНИ из 98.Сходство составляет 02% и 89,6% соответственно (рис. 1A) (Arahal 2014). Мы также использовали JSpeciesWS в качестве независимого метода ANI, и этот анализ соответствовал описанному выше (см. Дополнительные таблицы ANI) (Richter et al. 2016). Наконец, BLAST был использован для сравнения последовательностей генов gyrB и rpoD P. baetica a390T и CI12 с доступными частичными последовательностями rpoD и gyrB , доступными для P. baetica (López et al. 2012). Это показало сходство 93,6% в rpoD и 95,0% сходство в gyrB между CI12 и секвенированным целым геномом P. baetica a390T.
Рисунок 1.
Размещение нового генома baetica в роду Pseudomonas на основе ANI и общих k-мер A) Тепловая карта ANI сгенерировала модуль pyani Python3. Секвенированный геном baetica, Pseudomonas_sp._Irchel_3E19 и эталонные геномы из близкородственного субклада koreensis были подвергнуты анализу ANI.B) Основанное на Mash дерево, полученное из эталонных геномов (= 86) из клад 19 видов, включая весь род Pseudomonas . Это дерево было сгенерировано на основе индекса Жаккара, рассчитанного на основе общих k-мер. Cellvibrio japonicum Ueda107 использовалась как внешняя группа.
Рисунок 1.
Размещение нового генома baetica в роду Pseudomonas на основе ANI и общих k-мер A) Тепловая карта ANI сгенерировала модуль pyani Python3. Секвенированный геном baetica, Pseudomonas_sp._Irchel_3E19 и эталонные геномы из близкородственного субклада koreensis были подвергнуты анализу ANI. B) Основанное на Mash дерево, полученное из эталонных геномов (= 86) из клад 19 видов, включая весь род Pseudomonas . Это дерево было сгенерировано на основе индекса Жаккара, рассчитанного на основе общих k-мер. Cellvibrio japonicum Ueda107 использовалась как внешняя группа.
Геномные островки, кластеры биосинтетических генов и профаги, обнаруженные у
P.baetica геном
Геномные островки могут быть легко обнаружены, когда собраны длинные смежные области. Таким образом, поиск профагов в сильно фрагментированной сборке, содержащей только ионный PGM, не дал никаких результатов, тогда как проверка гибридной сборки показала четыре интактных профага в геноме P. baetica , а также пять неполных (Таблица 2а). Также были обнаружены два интегративных сопряженных элемента. Комбинация IslandViewer и antiSMASH также использовалась для прогнозирования геномных островков и биосинтетического потенциала вторичных метаболитов P.baetica (Бертелли и др. 2017; Блин и др. 2017) . Эти результаты суммированы на карте CG View Comparison Tool на рис. 2, а более подробное резюме результатов antiSMASH представлено в таблице 2b (Grant, Arantes and Stothard 2012). Многие из локусов, упомянутых в этой рукописи, помечены вокруг карты CCT на рис. 2, а также результатов IslandViewer. Анализ CCT BLAST подтверждает тесную филогенетическую связь между P.baetica a390 и Irchel 3E19 (рис.2). Из девяти кластеров биосинтетических генов (BGC), предсказанных antiSMASH, четыре являются кластерами биосинтетических генов Nrps (нерибосомные пептидные синтетазы). Кластеры 3 и 8 имели относительно низкое сходство с ближайшими известными кластерами; однако кластер 6 имеет большое сходство с орфамидным BGC, причем 80% генов в этом кластере имеют гомологию с биосурфактантом путизолвина BGC. Путисолвин вовлечен в моторику (Cárcamo-Oyarce et al. 2015), а наши предварительные эксперименты показали, что P. baetica может как плавать, так и роиться (см. Рисунок S4, Дополнительная информация). Поскольку известно, что биосинтез путизолвина в определенных штаммах P. putida является фенотипом, регулируемым кворум-зондированием (QS), мы провели поиск гомологов известных систем QS в геноме P. baetica (Dubern et al. 2008 ). Нет убедительных гомологов регулируемых систем LasR или RhlR из P.aeruginosa или системы PpuI, PpuR, PpuA, RsaL из P. putida .
Рисунок 2.
Обзор геномной архитектуры P. baetica a390T. CGView Comparison Tool использовался для построения процентной идентичности последовательностей близкородственных штаммов. Внешние метки и бежевые блоки относятся к локусам, которые упоминаются на протяжении всей статьи. Геном P. baetica a390T разделен на прямую и обратную цепи, а кодирующие последовательности представлены синими стрелками.Следующие 6 колец представляют собой процентную идентичность BLAST геномов следующих близкородственных штаммов; от внешнего кольца внутрь отряда P. sp Irchel 3E19 , P. koreensis CI12 , P. koreensis D26 , P. fluorescens SBW25 , P. putida KT2440 , P. aeruginosa UCBPP -PA14 . Процентная идентичность обозначена цветом 6 колец BLAST, как указано клавишей в нижней левой части рисунка.Двигаясь внутрь, следующие два кольца показывают изменения в% содержания GC и перекоса GC соответственно. Наконец, на центральной диаграмме показаны геномные острова, предсказанные пакетом IslandViewer, где красный = предсказано несколькими методами, синий = IslandPath-DIMOB, оранжевый = SIGI-HMM и зеленый = IslandPick.
Рисунок 2.
Обзор геномной архитектуры P. baetica a390T. CGView Comparison Tool использовался для построения процентной идентичности последовательностей близкородственных штаммов.Внешние метки и бежевые блоки относятся к локусам, которые упоминаются на протяжении всей статьи. Геном P. baetica a390T разделен на прямую и обратную цепи, а кодирующие последовательности представлены синими стрелками. Следующие 6 колец представляют собой процентную идентичность BLAST геномов следующих близкородственных штаммов; от внешнего кольца внутрь отряда P. sp Irchel 3E19 , P. koreensis CI12 , P. koreensis D26 , P.fluorescens SBW25 , P. putida KT2440 , P. aeruginosa UCBPP-PA14 . Процентная идентичность обозначена цветом 6 колец BLAST, как указано клавишей в нижней левой части рисунка. Двигаясь внутрь, следующие два кольца показывают изменения в% содержания GC и перекоса GC соответственно. Наконец, на центральной диаграмме показаны геномные острова, предсказанные пакетом IslandViewer, где красный = предсказано несколькими методами, синий = IslandPath-DIMOB, оранжевый = SIGI-HMM и зеленый = IslandPick.
Таблица 2а.
Список профаговых областей, обнаруженных в гибридной сборке.
_phi_phiC63%000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 000 (12)0003AGE_4AGE_4 (10)000
Контиг. . Длина . Полнота . Оценка . Кол-во белков . Положение в регионе . Самый распространенный фаг . GC% .
1 6.7 Kbp Под вопросом 70 6 681 684–688 458 PHAGE_Stx2_c_1717_NC_011357 (3) 53,77%
2 –518 615 PHAGE_Entero_phi92_NC_023693 (2) 60,11%
2 10,2 Кбит / с Незавершенное 30 8 742
2 5,5 кбит / с Незавершенное 60 6 925 750–931 322 PHAGE_Stx2_c_1717_NC_011357 (3) 28_NC_011357 (3) 000 000 150 48 383 269-424 017 PHAGE_Vibrio_VP882_NC_009016 (12) 58.74%
3 57,2 т.п.н. неповрежденными 150 49 430 072-487 323 PHAGE_Vibrio_vB_VpaM_MAR_NC_019722 (8) 58.69%
4 35,1 кбит / с Неповрежденный 150 42 357 957–393 153 PHAGE_Pseudo_phiCTX_NC_003278 (18) 000 57% в 150 70 564 492-614 686 PHAGE_Entero_Arya_NC_031048 (10) 56.98%
5 21,3 т.п.н. Неполное 40 11 26 364-47 679 PHAGE_Pseudo_vB_PsyM_KIL1_NC_030934 (6) 49.79%
5 8,7 Kbp Незавершенное 50 13 540 790–549 505 PHAGE_Bacill_BMBtpLA %_NC_0287489
000
000
000
000
000
000
000
000 . Длина . Полнота . Оценка . Кол-во белков . Положение в регионе . Самый распространенный фаг . GC% .
1 6,7 Kbp Под вопросом 70 6 681 684–688 458 PHAGE_Stx2_c_1717 %_NC_011357 40 10 512 098–518 615 PHAGE_Entero_phi92_NC_023693 (2) 60.11%
2 10,2 Kbp Незавершенное 30 8 742 363–752 628 PHAGE_Clostr_phiCT453A_NC_028991 60 6 925 750–931 322 PHAGE_Stx2_c_1717_NC_011357 (3) 54,15%
3 40,7 Kbp
58.74%
3 57,2 тыс. Баррелей Неповрежденные 150 49 430 072–487 323 PHAGE_Vibrio_vB_VpaM_MAR_NC_019722 9.65000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 150 42 357 957–393 153 PHAGE_Pseudo_phiCTX_NC_003278 (18) 57,32%
4 50,1 Kbp 0002 56.98%
5 21,3 Kbp Незавершенное 40 11 26 364–47 679 PHAGE_Pseudo_vB_PsyM_KIL1% 800070007000 50 13 540 790–549 505 PHAGE_Bacill_BMBtpLA_NC_028748 (1) 57,37%
Таблица 2a.
Список профаговых областей, обнаруженных в гибридной сборке.
000000000000 30000 9.7000000 9.7000000000 9.7000000000000000000000000000000000000000000000 40
Контиг. . Длина . Полнота . Оценка . Кол-во белков . Положение в регионе . Самый распространенный фаг . GC% .
1 6,7 Kbp Под вопросом 70 6 681 684–688 458 PHAGE_Stx2_c_1717_NC_011357 (3) 530007.77%
2 6,5 кбит / с Незавершенное 40 10 512 098–518 615 PHAGE_Entero_phi92_NC_023693 (2) 000 000 8 742 363-752 628 PHAGE_Clostr_phiCT453A_NC_028991 (3) 56.63%
2 5,5 т.п.н. Неполные 60 6 925 750-931 322 PHAGE_Stx2_c_1717_NC_011357 (3) 54.15%
3 40,7 тыс. Баррелей Неповрежденные 150 48 383269–424 017 PHAGE_Vibrio_VP882_NC_009016 (12) 000 9.7000 150 49 430 072-487 323 PHAGE_Vibrio_vB_VpaM_MAR_NC_019722 (8) 58.69%
4 35,1 т.п.н. неповрежденными 150 42 357 957-393 153 PHAGE_Pseudo_phiCTX_NC_003278 (18) 57.32%
4 50,1 тыс. Баррелей Неповрежденные 150 70 564 492–614 686 PHAGE_Entero_Arya_NC_031048 (10) 11 26 364-47 679 PHAGE_Pseudo_vB_PsyM_KIL1_NC_030934 (6) 49.79%
5 8.7 т.п.н. Неполное 50 13 540 790-549 505 PHAGE_Bacill_BMBtpLA_NC_028748 (1) 57.37%
000000000000 30000 9.7000000 9.7000000000 9.7000000000000000000000000000000000000000000000 40
Контиг. . Длина . Полнота . Оценка . Кол-во белков . Положение в регионе . Самый распространенный фаг . GC% .
1 6,7 Kbp Под вопросом 70 6 681 684–688 458 PHAGE_Stx2_c_1717_NC_011357 (3) 530007.77%
2 6,5 кбит / с Незавершенное 40 10 512 098–518 615 PHAGE_Entero_phi92_NC_023693 (2) 000 000 8 742 363-752 628 PHAGE_Clostr_phiCT453A_NC_028991 (3) 56.63%
2 5,5 т.п.н. Неполные 60 6 925 750-931 322 PHAGE_Stx2_c_1717_NC_011357 (3) 54.15%
3 40,7 тыс. Баррелей Неповрежденные 150 48 383269–424 017 PHAGE_Vibrio_VP882_NC_009016 (12) 000 9.7000 150 49 430 072-487 323 PHAGE_Vibrio_vB_VpaM_MAR_NC_019722 (8) 58.69%
4 35,1 т.п.н. неповрежденными 150 42 357 957-393 153 PHAGE_Pseudo_phiCTX_NC_003278 (18) 57.32%
4 50,1 тыс. Баррелей Неповрежденные 150 70 564 492–614 686 PHAGE_Entero_Arya_NC_031048 (10) 11 26 364-47 679 PHAGE_Pseudo_vB_PsyM_KIL1_NC_030934 (6) 49.79%
5 8.7 т.п.н. Неполное 50 13 540 790-549 505 PHAGE_Bacill_BMBtpLA_NC_028748 (1) 57.37%
Таблица 2b.
Кластеры биосинтеза вторичных метаболитов, предсказанные antiSMASH.
f0003000000000000000000000000000000000000 6 9004 9004 Пиовердин
Кластер . Тип . Размер кластера (п.н.) . Наиболее похожий известный кластер биосинтетических генов . Сходство в процентах .
1 Неизвестно 43395 Манготоксин 71
2 Арилполиен 43 613 Натаксазол 11
4 Бактериоцин / Рипп 10 887 — —
5 Трансатпкс Nrps 77 485 Орфамид / Путисолвин 70
7 Terpene-Nrps 73119 Пиовердин 16 22
9 Бактериоцин / Ripp 10 845 — —
f0003000000000000000000000000000000000000 6 9004 9004 Пиовердин
Кластер . Тип . Размер кластера (п.н.) . Наиболее похожий известный кластер биосинтетических генов . Сходство в процентах .
1 Неизвестно 43395 Манготоксин 71
2 Арилполиен 43 613 Натаксазол 11
4 Бактериоцин / Рипп 10 887 — —
5 Трансатпкс Nrps 77 485 Орфамид / Путисолвин 70
7 Terpene-Nrps 73119 Пиовердин 16 22
9 Бактериоцин / Ripp 10 845 — —
Таблица 2b.
Кластеры биосинтеза вторичных метаболитов, предсказанные antiSMASH.
f0003000000000000000000000000000000000000 6 9004 9004 Пиовердин
Кластер . Тип . Размер кластера (п.н.) . Наиболее похожий известный кластер биосинтетических генов . Сходство в процентах .
1 Неизвестно 43395 Манготоксин 71
2 Арилполиен 43 613 Натаксазол 11
4 Бактериоцин / Рипп 10 887 — —
5 Трансатпкс Nrps 77 485 Орфамид / Путисолвин 70
7 Terpene-Nrps 73119 Пиовердин 16 22
9 Бактериоцин / Ripp 10 845 — —
f0003000000000000000000000000000000000000 6 9004 9004 Пиовердин
Кластер . Тип . Размер кластера (п.н.) . Наиболее похожий известный кластер биосинтетических генов . Сходство в процентах .
1 Неизвестно 43395 Манготоксин 71
2 Арилполиен 43 613 Натаксазол 11
4 Бактериоцин / Рипп 10 887 — —
5 Трансатпкс Nrps 77 485 Орфамид / Путисолвин 70
7 Terpene-Nrps 73119 Пиовердин 16 22
9 Бактериоцин / Ripp 10 845 — —
Бактериоцины, таилоцины и модульные бактериоцины
P.baetica
Псевдомонады способны продуцировать различные опосредующие антагонизм пептиды и белки. Подмножеством этих молекул являются бактериоцины, которые способствуют устранению филогенетически родственных конкурентов (Ghequire and de Mot 2014). Исторически эти соединения в основном изучались у P. aeruginosa , называемых там пиоцинами (Michel-Briand and Baysse, 2002), но они также были обнаружены и охарактеризованы у ряда других видов Pseudomonas .Эволюционно связанные с хвостами бактериофагов, таилоцины представляют собой автономные функциональные единицы, а не дефектные профаги, лишенные сопутствующей фаговой головы (Ghequire and de Mot 2015). бактериоцинов фагового хвоста Pseudomonas обычно рекрутируются в межгенные области trpE-trpG и mutS-cinA (Ghequire and de Mot 2015). Изучение соответствующих областей в P. baetica обнаруживает присутствие двух соседних кластеров генов R-типа в локусе mutS-cinA .Филогенетическая оценка и синтения генов указывают на организацию Rp3-Rp4, и аналогичная конфигурация tailocin была недавно описана у P. chlororaphis 30-84 (Dorosky et al. 2017). Интересным наблюдением является то, что четыре предполагаемых хвостовых волокна, вероятно, присутствуют в кассете Rp4 P. baetica , тогда как обычно только одно или два из них могут быть обнаружены в tailocins.
Обозначенные как пиоцины S-типа в P. aeruginosa , модульные бактериоцины представляют собой гетерогенную группу полиморфных токсинов (Zhang et al. 2012; Jamet and Nassif 2015), включающий рецептор-связывающий домен, сегмент, обеспечивающий перенос через мембрану, и токсиновый домен на карбокси-конце (Ghequire and de Mot 2014). Для защиты от самоингибирования штаммы-продуценты бактериоцина коэкспрессируют ген иммунитета, обычно кодируемый рядом с геном-киллером бактериоцина. Бактериоцины нуклеазы Pseudomonas (ДНКаза, тРНКаза, рРНКаза) постоянно снабжены центральным доменом pyocin_S (Pfam06958) и предположительно играют ключевую роль в транслокации токсина в цитоплазму (Ghequire and de Mot 2014; Sharp et al. . 2017). Поиск этого домена выявил ряд предполагаемых модульных бактериоцинов в P. baetica , семь из которых содержат HNH-ДНКазу, а три — домен рРНКазы. В одном бактериоцине была идентифицирована предполагаемая (не HNH-типа) ДНКаза, гомологичная киллерному домену, обнаруженному в кароцине D, но отличная от не-HNH-типа в пиоцине S3.
Также были обнаружены два других предсказанных бактериоцина P. baetica , гомологичных токсинному модулю кассеты контакт-зависимого ингибирования (тип IV) в Burkholderia pseudomallei .Бактериоцины, действующие на периплазматическом уровне (колицин M-подобный, Pfam14859; пестицины, Pfam16754; или порообразователи (ColIa / ColN), Pfam01024), не могут быть извлечены.
Кластеры генов биосинтеза липида А и основного олигосахарида
Предполагаемые гомологи подтвержденных ферментов биосинтеза липида А (путь Raetz) в P. aeruginosa PAO1 могут быть идентифицированы в секвенированном геноме. Сравнение с различными протеомами Pseudomonas выявило идентичность последовательностей предполагаемых белков в диапазоне от 59% до 97%.Эти идентичности с высокой последовательностью и мотив углеводородной линейки в предполагаемой LpxA (UDP-N-ацетилглюкозаминацилтрансфераза) намекают на липид A с ацильной цепью C10 в положении 3 и 3 ^΄ (Smith et al. 2015). Кроме того, вторичные ацильные цепи C12 или первичные ацильные цепи C12 в положении 2 и 2 возможны из-за гомологии последовательностей предполагаемых LpxD и наличия возможных гомологов HtrB1 и HtrB2 (Lam et al. 2011; Hittle et al. 2015).В целом, вероятно, что P. baetica обладает структурой липида А, подобной известным структурам из P. aeruginosa , когда возможные модификации после синтеза не принимаются во внимание (Knirel et al. 2006).
Дальнейший анализ генома привел к идентификации кластера генов, гомологичного ключевому кластеру генов олигосахаридов, который был описан и изучен на P. aeruginosa . Прямое сравнение кластера показало, что P.baetica не имеет гомологов генов P. aeruginosa PA4998 (предполагаемая киназа) и PA5008 (гептозокиназа), что, возможно, предполагает менее фосфорилированный сердцевинный олигосахарид (Lam et al. 2011). Взаимный поиск BLAST различных протеомов Pseudomonas привел к идентичности последовательностей в широком диапазоне от 14% до 98%. Наибольшее общее сходство последовательностей наблюдалось для белков биосинтеза корового олигосахарида P. fluorescens Pf0-1, в диапазоне от 85% до 98%, что согласуется с филогенезом.В целом кластерная структура и присутствие предполагаемых гликозилтрансфераз (WapR, WapH, WaaG, WaaC, WaaF) указывает на присутствие внутренней сердцевинной олигосахаридной структуры, аналогичной P. aeruginosa (Knirel et al. 2006).
Внеклеточная протеаза и эффекторная секреция
P. baetica
Секреция внеклеточной протеазы является важной детерминантой вирулентности P. aeruginosa . Чтобы определить, есть ли P.baetica имеет аналогичный фенотип, анализы азоказеина и протеазы обезжиренного молока проводили с P. aeruginosa UCBPP-PA14 , P. baetica, P. fluorescens Pf01 и P. putida KT2440 . Как и ожидалось, P. aeruginosa UCBPP-PA14 секретировал огромное количество протеазы (см. Рисунки 5 и 6, дополнительная информация). Pseudomonas baetica a390T секретировал значительно меньше протеазы, чем P. aeruginosa , но незначительно больше, чем другие штаммы.Этот фенотип был наиболее очевиден на минимальном молочном агаре MOPS через 72 часа (см. Рисунок S6b, дополнительная информация).
Основной детерминантой вирулентности грамотрицательных патогенов является способность вводить эффекторные белки в клетки-хозяева с использованием системы секреции типа III (T3SS) (Hauser 2009). Анализ BLAST с использованием белков P. aeruginosa Psc T3SS выявил присутствие T3SS в геноме P. baetica , что дает возможное объяснение вирулентности этого штамма, как предполагалось выше.
Сопротивление ОТ в
P. baetica
После инкубации в течение ночи планшеты с антибиотиками проверяли на рост бактерий, и минимальная ингибирующая концентрация (МИК) ОТ для P. aeruginosa PAO1 была определена как 1 мкг / мл ^-1, что составляет четверть от P. baetica А390Т . ОТ — это ингибирующий синтез белка антибиотик, принадлежащий к классу тетрациклинов, и один из наиболее часто используемых антибиотиков в аквакультуре (Leal et al. 2017).
Когда P. baetica культивировали на среде, содержащей ОТ, он был способен расти в присутствии более высоких концентраций, чем P. aeruginosa PAO1. Минимальная ингибирующая концентрация ОТ, необходимая для подавления роста P. baetica , была определена как 4 мкг / мл ^-1. Способность P. baetica переносить более высокие концентрации ОТ, чем лабораторный штамм Pseudomonas , может быть связана с использованием антибиотика в аквакультуре, особенно в качестве добавки в корм для рыб.Устойчивость к ОТ (OT ^R) наблюдалась ранее у видов бактерий, колонизирующих гранулированный корм для рыб в Чили, а также в половине образцов корма для коммерческих рыб, проанализированных в исследовании 1995 года OT ^R в отложениях рыбоводных хозяйств (Kerry et al. 1995; Миранда и др. 2003).
Утилизация глицерин-3-фосфата в
P. baetica
Примечательной характеристикой, которая отличает P. baetica от близкородственных видов Pseudomonas , является неспособность расти на глицерин-3-фосфате (G3P) в качестве единственного источника углерода (López et al. 2012). Некоторые другие псевдомонады, такие как P. fluorescens и P. aeruginosa , могут использовать G3P в качестве единственного источника углерода. Однако P. baetica может использовать глицерин в качестве единственного источника углерода. Это свидетельствует о том, что P. baetica страдает специфическим дефицитом поглощения G3P, а не метаболизма. Известно, что поглощение G3P происходит с использованием специфического переносчика MFS GlpT (Fann, Busch and Maloney 2003).
Недавно секвенированный геном позволил нам изучить P.baetica рост дефицита G3P более подробно. Примечательно, что P. baetica , по-видимому, содержит гомолог glpT , который очень похож на GlpT из других псевдомонад (см. Рисунок S7, Дополнительная информация). Структура GlpT была выяснена для Escherichia coli , что позволяет нам понять, какие остатки важны для распознавания субстрата (Huang et al. 2003). Все остатки, которые были определены как важные для функциональности в предыдущих исследованиях, не изменились в P.Baetica . Мутация K80 в аланин убила гетерологичный транспорт G3P-Pi белка, реконструированного в протеолипосомы, а мутация h265 привела к скорости транспорта, которая составляла всего ∼6% от скорости, катализируемой белком дикого типа (Law et al. 2008) . Эти данные предполагают, что присутствие гомолога glpT не обязательно приравнивается к поглощению G3P, что подчеркивает необходимость экспериментальной проверки. Этот результат может быть связан с отсутствием индукции гена P. baetica glpT при воздействии G3P.
Бактерицидный антибиотик широкого спектра действия, фосфомицин, активно всасывается в бактериальные клетки через GlpT и транспортер глюкозо-6-фосфата UhpT и ингибирует начальную стадию синтеза клеточной стенки (Kahan et al. 1974). Было показано, что инактивация glpT обеспечивает повышенную устойчивость к фосфомицину у P. aeruginosa при очевидном отсутствии затрат на приспособленность. Эти авторы выделили 10 независимых спонтанных мутантов, полученных на LB-фосфомицине, которые несли мутации в гене glpT .Эти мутанты включали несколько делеций, сдвигов рамки считывания и трех отдельных аминокислотных замен, Gly ₁₃₇ на Asp, Thr ₃₃₆ на Pro и Met ₃₆₆ на Ile (Castañeda-García et al. 2009). Действительно, недавно было показано, что мутации в гене Staphylococcus aureus glpT являются основной детерминантой устойчивости к фосфомицину в этом организме (Xu et al. 2017). Высокая устойчивость к фосфомицину и низкая стоимость биологической пригодности в результате потери захвата G3P позволяют предположить, что P.baetica может иметь эволюционное преимущество в среде, богатой фосфомицином. Дальнейшая работа будет необходима, чтобы точно подтвердить, как поглощение G3P было потеряно у P. baetica .
Ортологи MexAB-OprM и MexEF-OprN резистентность-нодуляция систем оттока клеток в
P. baetica
Системы MexAB-OprM и MexEF-OprN являются членами семейства эффлюксных насосов множественного лекарственного деления резистентных клеток (Poole 2011). BLASTp использовали для сравнения аминокислотных последовательностей, кодируемых оперонами mexEF-oprN и mexAB-oprM в P.aeruginosa , штамм PAO1 с гомологами в P. baetica .
MexAB-OprM, как известно, играет ключевую роль в опосредованной оттоком устойчивости к широкому спектру соединений, таких как антибиотики и растворители, у P. aeruginosa (Li, Zhang and Poole 1998; Poole 2011). Точно так же субстраты оттока MexEF-OprN включают антибиотики и предшественник QS 4-гидрокси-2-гептилхинолин (Lamarche and Déziel 2011; Llanes et al. 2011). Последовательности Pseudomonas baetica , обеспечивающие значительное выравнивание с MexAB-OprM и MexEF-OprN, были идентифицированы с идентичностью от 69% -79% до 72% -88% с P.aeruginosa штамм PAO1 соответственно. Интересно, что расположение оперона mexAB-oprM в P. baetica больше похоже на P. fluorescens , где соседний регуляторный ген кодирует члена семейства регуляторов TetR, в отличие от P. aeruginosa , который кодирует регулятор семейства MarR MexR в этой позиции. Однако следует отметить, что P. baetica действительно имеет гомолог MexR, расположенный рядом с третьим опероном оттока, который имеет значительно меньшую гомологию (8–31%) с mexAB-oprM .
Порины внешней мембраны в
P. baetica
В дополнение к Mex-ассоциированным поринам в геноме P. baetica был проведен поиск генов, кодирующих другие порины внешней мембраны. В P. aeruginosa 26 генов поринов вовлечены в различные важные биологические функции: стабильность внешней мембраны (OprF, OprH) и поглощение питательных веществ (OprB, OprP и порины семейства OprD), которые недавно были рассмотрены (Chevalier et al. 2017). Геном P. baetica выявил только 17 генов поринов, но основные порины, описанные в P. aeruginosa , являются консервативными. Ген oprF , кодирующий основной порин Pseudomonas , присутствует в P. baetica , а также в геномном контексте: estX — menG — cmaX — cfrX — — cmpX — — cmpX — oprF , где EstX — эстераза, MenG — ингибитор РНКазы, CmaX — CorA-подобный переносчик магния, CfrX — предполагаемый антисигма-фактор, CmpX — механочувствительный канал, а SigX — сигма-фактор ECH.OprF имеет C -концевой периплазматический домен, взаимодействующий с пептидогликаном, и цилиндрический N -концевой домен, и он вносит основной вклад в стабильность оболочки. Другими консервативными генами поринов являются oprG и oprH , которые кодируют небольшие порины только с восемью цепями. OprG принадлежит к семейству OmpW и было предложено участвовать в диффузии Fe ²⁺ в периплазму (Catel-Ferreira et al. 2016). OprH индуцируется низким содержанием Mg ²⁺ и способствует стабильности внешней мембраны за счет взаимодействия с LPS (Kucharska et al. 2015). Как и у P. aeruginosa , у P. baetica также есть три гена глюкозопорина OprB, включая один в консервативном опероне gltBFGKoprB (Chevalier et al. 2017). Удивительно, но геном P. baetica не содержит генов поринов, поглощающих фосфат OprO и OprP, у P. aeruginosa . Семейство OprD включает 19 членов в P. aeruginosa , подразделенных на два подсемейства: OccD участвует в поглощении основных аминокислот, а OccK — в поглощении отрицательно заряженных циклических молекул (Eren et al. 2012). Сравнение с поринами P. aeruginosa через BLASTP осложняется тем фактом, что многие члены семейства OprD обнаруживают значительное родство. Тем не менее, исследование генома P. baetica выявило пять членов семейства OccD и шесть представителей семейства OccK.
Устойчивость к осмотическому стрессу
P. baetica
Поскольку P. baetica a390T был первоначально выделен из морской аквакультуры, мы исследовали его генотипическую и фенотипическую способность преодолевать солевой стресс.Трегалоза — это снимающий стресс дисахарид, который накапливается в бактериальной клетке в ответ на стресс. Он широко изучался из-за его роли в качестве совместимого растворенного вещества, обеспечивающего защиту от осмотического стресса. Считается, что трегалоза регидратирует клетку после потери воды, предотвращая потерю клеточных функций (De Smet et al. 2000). Также сообщалось, что трегалоза важна для патогенности Pseudomonas spp . (Freeman, Chen and Beattie 2010; Djonović et al. 2013). Бактерии обладают тремя основными путями биосинтеза трегалозы: OtsAB, TreYZ и TreS.
Путь OtsAB является наиболее распространенным путем биосинтеза трегалозы у бактерий. OtsA катализирует синтез трегалозо-6-фосфата из UDP-глюкозы или ADP-глюкозы и глюкозо-6-фосфата. Затем фосфатную группу удаляют с помощью OtsB с получением трегалозы (De Smet et al. 2000). Пути TreYZ и TreS продуцируют трегалозу с использованием разных субстратов. TreY превращает восстанавливающие мальтозильные единицы мальтоолигосахаридов с образованием α-1,1-концевых фрагментов, которые затем расщепляются TreZ с образованием трегалозы.Путь TreS изомеризует мальтозу в трегалозу, катализируемую трегалозосинтазой TreS, но его полезность in vivo зависит от контекста (Miah et al. 2013).
Сравнительная геномика показала, что сходна с другими Pseudomonas spp., P . baetica не содержит генов пути OtsA / OtsB. Однако P. baetica обладает ферментами путей TreYZ и TreS.
Хотя известно, что TreS способен генерировать трегалозу у некоторых бактерий, предполагается, что функция TreS у P.baetica катаболизирует трегалозу. Фенотипические наблюдения показывают, что способность P. baetica использовать трегалозу в качестве единственного источника углерода зависит от других условий. В исследовании López et al. , сообщалось, что P. baetica не смог утилизировать трегалозу. Из-за его важности для осмотического стресса мы повторили анализ Omnilog на трегалозу и наблюдали промежуточный фенотип, а дальнейший анализ на определенных средах показал, что P.baetica может утилизировать трегалозу.
Ген treS слит с кодирующим мальтокиназу геном pep2 (Chandra, Chater and Bornemann, 2011), что соответствует слитному белку TreS / Pep2, превращающему трегалозу в α-мальтозо-1-фосфат (M1P) (Miah и др. 2013). Ожидается, что на M1P будут действовать GlgE и GlgB с образованием гликоген-подобного α-глюкана, учитывая, что гены treS / pep2 , glgE и glgB сгруппированы.
Прочие Pseudomonas spp. такие как P. fluorescens и P. syringae , обладают дополнительным гомологом неслитого гена treS , что подчеркивает важность продукции трегалозы в этих организмах. Интересно, что этот дополнительный гомолог отсутствует у P. baetica . P. fluorescens и P. syringae , вероятно, выиграют от возможности контролировать синтез трегалозы в более разнообразных условиях.
Мы предположили, что P.baetica была способна вызывать заболевание у морских рыб, поскольку имела более высокую солеустойчивость, чем другие псевдомонады; однако это оказалось неверным. Наши данные показывают, что все протестированные здесь псевдомонады способны расти в концентрациях NaCl, соответствующих морской среде (см. Рисунки S8 и S9, дополнительная информация).
В дополнение к экспериментам по солеустойчивости, P. baetica и P. fluorescens были также протестированы на их способность расти в минимальных средах с добавлением Instant Ocean, который имеет аналогичные уровни большинства микроэлементов, питательных веществ и щелочности. пробы морской воды (рис.3). Pseudomonas baetica хорошо растет в Instant Ocean, тогда как P. fluorescens имеет минимальный рост, что позволяет предположить, что P. baetica может иметь некоторую адаптацию к морской среде. Анализ обоих геномов с помощью программы просмотра SEED показал, что P. baetica имеет гомолог гена OsmY , который выполняет функцию модификации белка во время осмотического стресса, тогда как P. fluorescens этого не делает (Métris, George and Ropers, 2017).
Рисунок 3.
Стрессоустойчивость и ростовые характеристики P. baetica a390T. График роста конечной точки, измеренный как OD ₆₀₀ после 24 ч инкубации при 30 ° C в минимальной среде Pseudomonas (L-глутамин 5%, K ₂ HPO ₄ 1,5%, MgSO ₄ 0,2%, 20 мМ глицерина или другого источника углерода, как указано) с pH или концентрацией соли, отрегулированной, как указано. Данные представлены средним значением ± стандартное отклонение. * P <0,05, ** P <0,01 (определено двусторонним тестом t ).
Рисунок 3.
Стрессоустойчивость и ростовые характеристики P. baetica a390T. График роста конечной точки, измеренный как OD ₆₀₀ после 24 ч инкубации при 30 ° C в минимальной среде Pseudomonas (L-глутамин 5%, K ₂ HPO ₄ 1,5%, MgSO ₄ 0,2%, 20 мМ глицерина или другого источника углерода, как указано) с pH или концентрацией соли, отрегулированной, как указано. Данные представлены средним значением ± стандартное отклонение. * P <0,05, ** P <0.01 (определено двухсторонним тестом т ).
Гены захвата железа у
P. baetica
В геноме P. baetica был проведен поиск генов, кодирующих белки биосинтеза сидерофоров и поглощения, а также те, которые участвуют в поглощении Fe ²⁺. Как и ожидалось, гены биосинтеза и поглощения флуоресцентного сидерофора пиовердина присутствуют (всего 34) и разбросаны по четырем геномным локусам, как это обычно бывает для флуоресцентных псевдомонад (Ravel and Cornelis 2003). Pseudomonas baetica также продуцирует второй сидерофор / металлофор, иерсиниабактин, который был описан для Yersinia pestis и других энтеробактерий (Chaturvedi et al. 2012). Иерсиниабактин разделяет некоторые стадии биосинтеза с пиохелином, вторым сидерофором P. aeruginosa , и способен связывать медь с высоким сродством. Он также был описан у некоторых штаммов P. syringae и P. avellanae (Jones and Wildermuth 2011; Marcelletti and Scortichini 2015).Интересно, что в то время как большинство генов пиовердина имеют свои ближайшие гомологи в P. koreensis , все, кроме одного, гены иерсиниабактина из P. baetica обнаруживают близкую идентичность с генами иерсиниабактина из P. azotoformans , что может указывать на горизонтальный перенос генов. Геном содержит 27 генов, кодирующих TonB-зависимый рецептор, включая ген fpvA для захвата феррипиовердина и два гена fyuA для захвата ферриерсиниабактина.Однако два из этих генов усечены, и вероятный сдвиг рамки считывания очевиден для одного гена рецептора. Обращает на себя внимание наличие шести генов, кодирующих белок TonB. Для сравнения, только три присутствуют в P. aeruginosa (Cornelis, Matthijs and van Oeffelen 2009). Другое удивительное открытие — отсутствие генов feoABC для поглощения Fe ²⁺ у P. baetica . Эта функция, вероятно, обеспечивается продуктами оперона efeUOAB , впервые описанного в E.coli O157: H7, который участвует в поглощении двухвалентного железа в периплазме, где оно повторно окисляется (Cao et al. 2007).
ОБСУЖДЕНИЕ
Секвенирование всего генома стало повсеместным явлением в микробиологии, и доступ к этой технологии сейчас широко распространен. Здесь мы показываем, что сочетание двух относительно дешевых и удобных для пользователя методов (секвенирование Ion Torrent Semiconductor и Oxford Nanopore MinION) позволяет собрать геном относительно большого бактериального генома до конечного состояния.Наш филогенетический анализ показывает, что P. baetica тесно связан с P. koreensis в группе P. fluorescens . Однако наши данные показывают, что таксономия группы P. fluorescens нуждается в пересмотре. Учитывая тесную связь между P. baetica a390T и P. irchel 3e19, мы предполагаем, что 3e19 является штаммом P. baetica. Хотя оба являются водными изолятами, Irchel 3e19 был изолирован из пресной воды и P.baetica a390T является морским (López et al. 2012; Butaitė et al. 2017). Наши данные показывают, что способность к росту в концентрации морской соли обычна для рода Pseudomonas . Это, в сочетании с происхождением Irchel 3e19, позволяет предположить, что P. baetica a390T не является морским организмом и, вероятно, является условно-патогенным микроорганизмом морской рыбы, что, возможно, связано с высокой плотностью рыбы в аквакультурных хозяйствах. С другой стороны, наличие T3SS В ОБЕИХ P.baetica A390T и Irchel 3E19 (проф. Рольф Куммерли, личное сообщение) предполагает, что эти организмы не являются просто благоприятными экологическими штаммами. Геном P. baetica демонстрирует доказательства пластичности генома и содержит множество геномных островков и профагов, как и в случае с другими псевдомонадами, включая P. aeruginosa (Klockhibited et al. 2011). Разнообразные системы приобретения железа и мембранного транспорта, закодированные в геноме P. baetica , соответствуют организму, который хорошо адаптируется к целому ряду сред.Мы не находим геномных свидетельств известных систем QS, обнаруженных у других псевдомонад, но наши наблюдения о том, что P. baetica способен к секреции протеазы и рою, предполагают, что он может участвовать в социальном поведении.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ДАННЫЕ
Дополнительные данные доступны по телефону FEMSLE онлайн.
ФИНАНСИРОВАНИЕ
Работа в лаборатории NPT финансировалась грантом BB / K019600 / 1 Совета по исследованиям биотехнологии и биологических наук и грантом TCS / 16/24 Управления главных ученых.AB поддерживается аспирантами, финансируемыми Инновационным центром промышленной биотехнологии и Университетом Стратклайда. TS был поддержан стипендией PhD, финансируемой правительством Ирака. MG была поддержана докторской стипендией от FWO Vlaanderen (12M4618N). CL была поддержана стипендией SB PhD от FWO Vlaanderen (1S64718N). JB был поддержан грантом Fundação para a Ciência e a Tecnologia (SFRH / BD / 104095/2014). NPT хотела бы лично поблагодарить всех авторов этого документа, которые сделали это новое сотрудничество открытым и приятным опытом.AM и ED были поддержаны Партнерством по обучению докторантов по биотехнологиям и биологическим наукам, финансируемым Юго-Западным исследовательским советом по биотехнологиям (BB / M009122 / 1).
Конфликт интересов. Не заявлено.
ССЫЛКИ
Эндрюс
S
.
FastQC Инструмент контроля качества для данных последовательности с высокой пропускной способностью
.
2014
. .
Арахал
DR.
Анализ всего генома: средняя идентичность нуклеотидов
.
Method Microbiol
2014
;
41
:
103
—
22
.
Арндт
D
,
Grant
JR
,
Marcu
A
et al.
PHASTER: улучшенная и быстрая версия средства поиска PHAST по фагам
.
Nucleic Acids Res
2016
;
44
:
W16
—
21
.
Банкевич
А
,
Нурк
S
,
Антипов
D
и др.
SPAdes: новый алгоритм сборки генома и его приложения для секвенирования отдельных клеток
.
Дж. Comput Biol
2012
;
19
:
455
—
77
.
Бертелли
С
,
Laird
MR
,
Williams
KP
et al.
IslandViewer 4: расширенное прогнозирование геномных островов для крупномасштабных наборов данных
.
Nucleic Acids Res
2017
;
45
:
W30
—
5
.
Блин
К
,
Wolf
T
,
Chevrette
MG
et al.
antiSMASH 4.0 — улучшения в предсказании химии и идентификации границ кластера генов
.
Nucleic Acids Res
2017
;
45
:
W36
—
41
.
Браво
СО
,
Lozano
GL
,
Handelsman
J
.
Проект последовательности генома Flavobacterium johnsoniae CI04, изолята из ризосферы сои
.
Объявление генома
2017
;
5
:
e01535
—
16
.
Butaitė
E
,
Baumgartner
M
,
Wyder
S
et al.
Обман сидерофоров и устойчивость к обману формируют конкуренцию за железо в почвенных и пресноводных сообществах Pseudomonas
.
Нац Коммуна
2017
;
8
:
414
.
Цао
Дж
,
Woodhall
MR
,
Alvarez
J
et al.
EfeUOB (YcdNOB) представляет собой трехкомпонентный, индуцируемый кислотой и регулируемый CpxAR, переносчик Fe 2+ с низким pH, который скрыт в Escherichia coli K-12, но функционирует в E.?coli O157: H7
.
Mol Microbiol
2007
;
65
:
857
—
75
.
Кастаньеда-Гарсия
А
,
Rodríguez-Rojas
A
,
Guelfo
JR
et al.
Глицерин-3-фосфатпермеаза GlpT является единственным переносчиком фосфомицина в Pseudomonas aeruginosa
.
J Бактериол
2009
;
191
:
6968
—
74
.
Кател-Феррейра
м
,
Marti
S
,
Guillon
L
et al.
Порин OmpW внешней мембраны Acinetobacter baumannii участвует в захвате железа и связывании колистина
.
FEBS Lett
2016
;
590
:
224
—
31
.
Каркамо-Оярсе
г
,
Lumjiaktase
P
,
Kümmerli
R
et al.
Определение кворума запускает случайный выход отдельных клеток из биопленок Pseudomonas putida
.
Нац Коммуна
2015
;
6
:
5945
.
Чандра
г
,
Chater
KF
,
Bornemann
S
.
Неожиданные и широко распространенные связи между бактериальным гликогеном и метаболизмом трегалозы
.
Микробиология
2011
;
157
:
1565
—
72
.
Чатурведи
кс
,
Hung
CS
,
Crowley
JR
et al.
Сидерофор иерсиниабактин связывает медь для защиты патогенов во время инфекции
.
Nat Chem Biol
2012
;
8
:
731
—
6
.
Шевалье
S
,
Bouffartigues
E
,
Bodilis
J
et al.
Структура, функции и регуляция Pseudomonas aeruginosa поринов
.
FEMS Microbiol Ред.
2017
;
41
:
698
—
722
.
Коннор
TR
,
Loman
NJ
,
Thompson
S
et al.
CLIMB (облачная инфраструктура для микробной биоинформатики): онлайн-ресурс для сообщества медицинской микробиологии
.
Microb Genom
2016
;
2
:
e000086
.
Корнелис
П
,
Matthijs
S
,
van Oeffelen
L
.
Регулирование поглощения железа у Pseudomonas aeruginosa
.
Biometals
2009
;
22
:
15
—
22
.
Де Смет
КА
,
Weston
A
,
Коричневый
IN
et al.
Три пути биосинтеза трегалозы у микобактерий
.
Микробиология
2000
;
146
:
199
—
208
.
Джонович
S
,
Urbach
JM
,
Drenkard
E
et al.
Биосинтез трегалозы способствует патогенности Pseudomonas aeruginosa у растений
.
PLoS Pathog
2013
;
9
:
e1003217
.
Дороский
RJ
,
Yu
JM
,
Pierson
LS
III и др.
Pseudomonas chlororaphis продуцирует два различных R-хвостоцина, которые вносят вклад в бактериальную конкуренцию в биопленках и на корнях
.
Appl Environ Microb
2017
;
83
:
AEM.00706
—
17
.
Дуберн
J-F
,
Coppoolse
ER
,
Stiekema
WJ
et al.
Генетическая и функциональная характеристика кластера генов, управляющих биосинтезом путизолвина I и II в штамме Pseudomonas putida PCL1445
.
Микробиология
2008
;
154
:
2070
—
83
.
Эрен
E
,
Vijayaraghavan
J
,
Liu
J
et al.
Специфичность субстрата в семействе карбоксилатных каналов внешней мембраны
.
ПЛоС Биол
2012
;
10
:
e1001242
.
Европейский комитет по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам (EUCAST) Европейского общества клинической микробиологии и инфекционных заболеваний (ESCMID)
.
Окончательный документ EUCAST E.DEF 3.1, июнь 2000 г .: Определение минимальных ингибирующих концентраций (МИК) антибактериальных агентов путем разведения в агаре
.
Clin Microbiol Infect
2000
;
6
:
509
—
15
.
Фанн
M-C
,
Буш
А
,
Мэлони
ПК
.
Функциональная характеристика остатков цистеина в GlpT, переносчике глицерин-3-фосфата Escherichia coli
.
J Бактериол
2003
;
185
:
3863
—
70
.
Фриман
г. до н.э.
г. ,
Чен
C
,
Битти
GA
.
Идентификация локусов биосинтеза трегалозы Pseudomonas syringae и их вклад в приспособленность в филлосфере
.
Environ Microbiol
2010
;
12
:
1486
—
97
.
Ghequire
МГК
,
de Mot
R
.
Антибактериальные белки и пептиды, кодируемые рибосомами из Pseudomonas
.
FEMS Microbiol Ред.
2014
;
38
:
523
—
68
.
Ghequire
МГК
,
de Mot
R
.
История Тайлоцинов: отслаивание хвостов фагов
.
Trends Microbiol
2015
;
23
:
587
—
90
.
Гомила
м
,
Peña
A
,
Mulet
M
et al.
Филогеномика и систематика Pseudomonas
.
Передний микробиол
2015
;
6
:
214
.
Грант
JR
,
Arantes
AS
,
Stothard
P
.
Сравнение тысяч кольцевых геномов с помощью инструмента сравнения CGView
.
BMC Genomics
2012
;
13
:
202
.
Гупта
В
,
Haider
S
,
Sood
U
et al.
Сравнительный геномный анализ новых симбионтов Acinetobacter: комбинированный подход системной биологии и геномики
.
Sci Rep
2016
;
6
:
29043
.
Гуревич
А
,
Савельев
В
,
Вяххи
N
и др.
QUAST: инструмент оценки качества сборки генома
.
Биоинформатика
2013
;
29
:
1072
—
5
.
Хаузер
AR.
Система секреции типа III синегнойной палочки : инфекция путем инъекции
.
Nat Rev Microbiol
2009
;
7
:
654
—
65
.
Хиттл
LE
,
Powell
DA
,
Jones
JW
et al.
Сайт-специфическая активность ацилтрансфераз HtrB1 и HtrB2 в биосинтезе липида A Pseudomonas aeruginosa
.
Pathog Dis
2015
;
73
:
ftv053
.
Хуан
Я
,
Lemieux
MJ
,
Song
J
et al.
Структура и механизм транспортера глицерин-3-фосфата из Escherichia coli
.
Наука
2003
;
301
:
616
—
20
.
Jamet
А
,
Nassif
X
.
Новые игроки в области токсинов: системы полиморфных токсинов в бактериях
.
млнBio
2015
;
6
:
e00285
—
15
.
Joh
S-J
,
Ahn
E-H
,
Lee
H-J
et al.
Бактериальные патогены и флора, выделенные из выращиваемых на фермах угрей (Anguilla japonica) и их экологических вод на корейских фермах по разведению угрей
.
Vet Microbiol
2013
;
163
:
190
—
5
.
Джонс
AM
,
Вильдермут
MC
.
Фитопатоген Pseudomonas syringae pv.томат DC3000 имеет три высокоаффинные системы поглощения железа, работающие в условиях ограничения железа, но незаменимые для патогенеза
.
J Бактериол
2011
;
193
:
2767
—
75
.
Кахан
FM
,
Kahan
JS
,
Cassidy
PJ
et al.
Механизм действия фосфомицина (фосфономицина)
.
Ann NY Acad Sci
1974
;
235
:
364
—
86
.
Керри
Дж
,
Hiney
M
,
Coyne
R
et al.
Корм для рыб как источник устойчивых к окситетрациклину бактерий в отложениях под рыбоводными хозяйствами
.
Аквакультура
1995
;
131
:
101
—
13
.
Кешаварз-Тохид
В
,
Taheri
P
,
Muller
D
et al.
Филогенетическое разнообразие и антагонистические признаки корневых и ризосферных псевдомонад фасоли из Ирана для борьбы с Rhizoctonia solani
.
Res Microbiol
2017
;
168
:
760
—
72
.
Klock Всего
Дж
,
Cramer
N
,
Wiehlmann
L
et al.
Pseudomonas aeruginosa Геномная структура и разнообразие
.
Передний микробиол
2011
;
2
:
150
.
Knirel
Я.
,
Быстрова
О.В.
,
Кочарова
Н.А.
и др.
Обзор: консервативные и вариабельные структурные особенности липополисахарида Pseudomonas aeruginosa
.
J Endotoxin Res
2006
;
12
:
324
—
36
.
Кухарская
я
,
Seelheim
P
,
Edrington
T
et al.
OprG использует динамику своих внеклеточных петель для транспортировки небольших аминокислот через внешнюю мембрану Pseudomonas aeruginosa
.
Структура
2015
;
23
:
2234
—
45
.
Лам
JS
,
Taylor
VL
,
Islam
ST
et al.
Генетическое и функциональное разнообразие липополисахарида Pseudomonas aeruginosa
.
Передний микробиол
2011
;
2
:
118
.
Ламарш
MG
,
Déziel
E
.
Отводящий насос MexEF-OprN экспортирует прекурсор сигнала Pseudomonas quinolone (PQS) HHQ (4-гидрокси-2-гептилхинолин)
.
PLoS One
2011
;
6
:
e24310
.
Закон
кДж
,
Almqvist
J
,
Bernstein
A
et al.
Динамика солевого мостика контролирует индуцированные субстратом конформационные изменения в мембранном транспортере GlpT
.
Дж Мол Биол
2008
;
378
:
828
—
39
.
Лил
JF
,
Henriques
IS
,
Correia
A
et al.
Антибактериальная активность фотопродуктов окситетрациклина в воде морской аквакультуры
.
Environ Pollut
2017
;
220
:
644
—
9
.
Ли
XZ
,
Zhang
L
,
Пул
K
.
Роль систем оттока нескольких лекарственных препаратов Pseudomonas aeruginosa в толерантности к органическим растворителям
.
J Bacteriol
1998
;
180
:
2987
—
91
.
Льянес
С
,
Köhler
T
,
Patry
I
et al.
Роль системы оттока MexEF-OprN в низком уровне устойчивости Pseudomonas aeruginosa к ципрофлоксацину
.
Антимикробные агенты Ч
2011
;
55
:
5676
—
84
.
Лопес
JR
,
Diéguez
AL
,
Doce
A
et al.
Pseudomonas baetica sp. nov., патоген рыб, выделенный из клиновидной подошвы, Dicologlossa cuneata (Moreau)
.
Int J Syst Evol Microbiol
2012
;
62
:
874
—
82
.
Лопес
JR
,
Lorenzo
L
,
Marcelino-Pozuelo
C
et al.
Pseudomonas baetica : патогенность для морских рыб и разработка протоколов быстрой диагностики
.
FEMS Microbiol Lett
2017
;
364
:
fnw286
.
Марчеллетти
S
,
Scortichini
M
.
Сравнительный геномный анализ нескольких штаммов Pseudomonas , инфицированных деревьев Corylus avellana , выявил наличие двух генетических кластеров с общими и отличительными признаками вирулентности и приспособленности
.
PLoS One
2015
;
10
:
e0131112
.
Métris
А
,
Джордж
SM
,
Ropers
D
.
Кусочно-линейные аппроксимации для моделирования динамики адаптации пищевых патогенов к осмотическому стрессу
.
Int J Food Microbiol
2017
;
240
:
63
—
74
.
Миах
Ф
,
Koliwer-Brandl
H
,
Rejzek
M
et al.
Поток через синтазу трегалозы течет от трегалозы к альфа-аномеру мальтозы в микобактериях
.
Chem Biol
2013
;
20
:
487
—
93
.
Мишель-Бриан
Я
,
Baysse
C
.
Пиоцины синегнойной палочки
.
Biochimie
2002
;
84
:
499
—
510
.
Миранда
CD
,
Kehrenberg
C
,
Ulep
C
et al.
Разнообразие генов устойчивости к тетрациклину у бактерий из чилийских лососевых ферм
.
Антимикробные агенты Ч
2003
;
47
:
883
—
8
.
Ондов
BD
,
Treangen
TJ
,
Melsted
P
et al.
Mash: быстрая оценка расстояния между геномом и метагеномом с использованием MinHash
.
Genome Biol
2016
;
17
:
132
.
Паскуаль
Дж
,
García-López
M
,
Bills
GF
et al.
Pseudomonas granadensis sp. nov., новый вид бактерий, выделенный из природного парка Техеда, Альмихара и Альхама, Гранада, Испания
.
Int J Syst Evol Microbiol
2015
;
65
:
625
—
32
.
Perkel
JM
.
Как ученые используют Slack
.
Природа
2016
;
541
:
123
—
4
.
Пул
к.
Pseudomonas aeruginosa : устойчивость до
.
Передний микробиол
2011
;
2
:
65
.
Рамбаут
А.
FigTree v1. 4
.
2012
. .
Рамирес-Бахена
M-H
,
Cuesta
MJ
,
Flores-Félix
JD
et al.
Pseudomonas helmanticensis sp. nov., выделено из лесной почвы
.
Int J Syst Evol Microbiol
2014
;
64
:
2338
—
45
.
Равель
Дж
,
Корнелис
П
.
Геномика поглощения железа, опосредованного пиовердином, псевдомонадами
.
Trends Microbiol
2003
;
11
:
195
—
200
.
Рихтер
м
,
Росселло-Мора
R
,
Оливер Глёкнер
F
et al.
JSpeciesWS: веб-сервер для описания прокариотических видов на основе попарного сравнения генома
.
Биоинформатика
2016
;
32
:
929
—
31
.
Зееманн
т.
Prokka: быстрое аннотирование генома прокариот
.
Биоинформатика
2014
;
30
:
2068
—
9
.
Sharp
С
,
Bray
J
,
Housden
NG
et al.
Разнообразие и распределение нуклеазных бактериоцинов в бактериальных геномах выявлено с помощью скрытых марковских моделей
.
PLoS Comput Biol
2017
;
13
:
e1005652
.
Смит
EW
,
Zhang
X
,
Behzadi
C
et al.
Структуры Pseudomonas aeruginosa LpxA раскрывают основу его субстратной селективности
.
Публикации ACS
2015
;
54
:
5937
—
48
Вазер
R
,
Sović
I
,
Nagarajan
N
et al.
Быстрая и точная сборка генома de novo из длинных неисправленных считываний
.
Genome Res
2017
;
27
:
737
—
46
.
Ходунки
BJ
,
Abeel
T
,
Shea
T
et al.
Pilon: интегрированный инструмент для комплексного обнаружения вариантов микробов и улучшения сборки генома
.
PLoS One
2014
;
9
:
e112963
.
Фитиль
руб. ,
Judd
LM
,
Gorrie
CL
et al.
Unicycler: Разрешение сборки бактериального генома из короткого и длинного секвенирования считывает
.
PLoS Comput Biol
2017
;
13
:
e1005595
.
Фитиль
руб. ,
Schultz
MB
,
Zobel
J
et al.
Повязка: интерактивная визуализация агрегатов генома de novo: Рис.1
.
Биоинформатика
2015
;
31
:
3350
—
2
.
Сюй
S
,
Fu
Z
,
Zhou
Y
et al.
Мутации белков-переносчиков GlpT и UhpT придают устойчивость к фосфомицину у Staphylococcus aureus
.
Передний микробиол
2017
;
8
:
914
.
Чжан
D
,
de Souza
RF
,
Anantharaman
V
et al.
Полиморфные токсиновые системы: всесторонняя характеристика способов торговли, обработки, механизмов действия, иммунитета и экологии с использованием сравнительной геномики
.
Биол Директ
2012
;
7
:
18
.
Заметки автора
© FEMS 2018.
Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное повторное использование, распространение и воспроизведение в любых средний при условии правильного цитирования оригинала.
Ссылки | Фтор в питьевой воде: научный обзор стандартов EPA
Леви, С.М., З. Зарей-М. 1991. Оценка воздействия фтора на детей. J. Dent. Ребенок. 58 (6): 467-473.
Леви, С.М., Т.Дж. Морис и Дж.Р. Якобсен. 1992. Пилотное исследование использования дошкольниками средств для ухода за зубами с обычным вкусом и ароматизаторов для детей. Педиатр. Вмятина. 14 (6): 388-391.
Леви, С.М., Т.Дж. Морис и Дж.Р. Якобсен. 1993. Использование средств для ухода за зубами у детей дошкольного возраста. Варенье. Вмятина. Доц. 124 (9): 57-60.
Леви, S.M., M.C. Кирицы, Дж. Уоррен.1995a. Источники поступления фторидов у детей. J. Public Health Dent. 55 (1): 39-52.
Леви, С.М., Ф.Дж. Кохут, Н. Гуха-Чоудхури, М.С. Кирицы, J.R. Heilman, J.S. Wefel. 1995b. Потребление фторидов младенцами только из питьевой воды и из воды, добавленной в смеси, напитки и пищу. J. Dent. Res. 74 (7): 1399-1407.
Леви, С.М., Ф.Дж. Кохут, М.С. Кирицы, J.R. Heilman, J.S. Wefel. 1995c. Прием фторида младенцами из воды, добавок и средств для ухода за зубами. Варенье. Вмятина.Доц. 126 (12): 1625-1632.
Леви, S.M., M.C. Кирицы, С. Slager, J.J. Уоррен и Ф.Дж. Кохут. 1997. Модели использования фторсодержащих средств для ухода за зубами среди младенцев. Педиатр. Вмятина. 19 (1): 50-55.
Леви, S.M., J.A. МакГрэйди, П. Бхуридедж, Дж. Дж. Уоррен, Дж.Р. Хейлман и Дж. Wefel. 2000. Факторы, влияющие на использование и прием средств для ухода за зубами среди выборки дошкольников США. Педиатр. Вмятина. 22 (5): 389-394.
Levy, S., K. Furst, and W. Chern. 2001a. Фармакокинетическая оценка 0.5% и 5% крем фторурацила для местного применения у пациентов с актиническим кератозом. Clin. Ther. 23 (6): 908-920.
Леви, С.М., Дж. Дж. Уоррен, К.С. Дэвис, Х.Л. Киршнер, М.Дж. Канеллис и Дж. Wefel. 2001b. Характер потребления фторидов от рождения до 36 месяцев. J. Public Health Dent. 61 (2): 70-77.
Леви, С.М., С.Л. Хиллис, Дж. Дж. Уоррен, Б.А. Броффит, А. Махбубул Ислам, Дж. Wefel и M.J. Kanellis. 2002a. Первичный флюороз зубов и прием фторидов в течение первого года жизни. Сообщество Dent.Oral Epidemiol. 30 (4): 286-295.
Леви, С.М., Дж. Дж. Уоррен и Дж.Р. Якобсен. 2002b. Последующее исследование эстетических представлений студентов-стоматологов о легкой форме флюороза зубов. Сообщество Dent. Устный. Эпидемиол. 30 (1): 24-28.
Леви, С.М., Б. Броффит, Р. Слейтон, Дж. Дж. Уоррен и М.Дж. Канеллис. 2003a. Посещение стоматолога и профессиональные аппликации фтора для детей от 3 до 6 лет в Айове. Педиатр. Вмятина. 25 (6): 565-571.
Леви, С.М., Дж. Дж. Уоррен и Б. Броффит. 2003b.Характер потребления фторидов в возрасте от 36 до 72 месяцев. J. Public Health Dent. 63 (4): 211-220.
Льюис, Д. У. и Х. Лаймбек. 1996. Сравнение рекомендованного и фактического среднего потребления фторида канадцами. J. Can. Вмятина. Доц. 62 (9): 708-715.
Льюис, Х.А., У. М. Чикте, А. Бутчарт. 1992. Флюороз и кариес зубов у школьников из сельской местности с примерно 9 и 1 ppm F в водопроводной сети. Сообщество Dent. Oral Epidemiol. 20 (1): 53-54.
Ли, Г., и Л. Рен. 1997. Влияние избытка фтора на метаболизм костей в условиях диеты с различным содержанием кальция [на китайском языке]. Чжунхуа Бин Ли Сюэ За Чжи 26 (5): 277-280.
Ли, Л. 2003. Биохимия и физиология фторида металла: действие, механизм и последствия. Крит. Rev. Oral Biol. 14 (2): 100-114.
Li, L.C., Y.S. Чжан, Р.З. Ху и X.C. Чжоу. 1992. Ингибирующее действие фторида на образование камней в почках у крыс. Урол. Int. 48 (3): 336-341.
Ли, Х.С., Дж.Л. Чжи, Р.О. Гао. 1995. Влияние воздействия фтора на интеллект детей. Фторид 28 (4): 189-192.
Li, Y., C.K. Лян, Б. Кац, Э. Бризендин, Г. Stookey. 1995. Длительное воздействие фторида в питьевой воде и частота обмена сестринских хроматид в лимфоцитах крови человека. J. Dent. Res. 74 (8): 1468-1474.
Ли Ю., К. Лян, К. В. Слеменда, Р. Цзи, С. Сун, Дж. Цао, К. Л. Эмсли, Ф. Ма, Ю. Ву, П. Инь, Ю. Чжан, С. Гао, В. Чжан, Б.П. Кац, С.Ниу, С. Цао и К.С. Джонстон-младший, 2001. Эффекты
Как «Манчестер Юнайтед» можно исправить, потратив всего 65 млн фунтов стерлингов
Отправляйте свои недовольные мысли «Манчестер Юнайтед» и многое другое по адресу [email protected]
Сочувствие Моаниньо II
Уважаемый F365,
Во вторник, сразу после , появилась новость о травме Сон Хын Мина , я написал вам электронное письмо, предсказывая неминуемую гибель Шпор. Я предсказывал, что «Шпоры» проиграют Red Bull и вылетят из CL; Я предсказывал, что они проиграют «Челси» и в конечном итоге выпадут из квалификационных мест CL.Я даже предсказывал выбывание из Кубка Англии в руках «Норвича».
Вы не опубликовали мою почту, и я вас не виню. Лучше не подвергать мир моей чепухе.
Однако прошу опубликовать это. Во-первых, как подтверждение моей правоты за четыре дня до мероприятия — на самом деле, это случается не так часто.
Но также, чтобы я мог еще раз заявить о своей точке зрения: Моуринью не виноват в этом. У «Тоттенхэма» было четыре очень хороших атакующих игрока. Его лучший (Сын) получил травму. Его второй лучший игрок (Кейн) также получил травму.Его третий (Эриксен) был продан. Там просто очень мало осталось. Если вы думаете, что в этом виноват Моуринью, ВЫ пытаетесь построить нападение на не в форме Деле Алли.
Все получают травмы, но я действительно думаю, что травма Сына была смертельным ударом для «Шпор». В моем предыдущем электронном письме я предсказывал, что «Шпоры» не забьют больше 12 голов до конца сезона. Я поддерживаю это число. Фактически, если исключить дальнейшие автоголы, число 12 может быть немного большим.
Я ничего не имею против «Шпор» или Моуринью.Я тоже не фанат ни того, ни другого. Я просто думаю, что у них был массивный удар неудач — тот, который они частично навлекли на себя, построив такой несбалансированный состав.
Cheers,
Ursolin Waxoh
Вратари
Быстрый вопрос к почтовому ящику… почему вратари получают такую снисходительность, когда неправильно наносят удар?
Наблюдать за игрой «Манчестер Сити» в Лестере и столкновением Эдерсона с Ихеначо — нарушение в течение всего дня.
Когда вратари прыгают, при малейшем касании вратарь получает штрафной удар. Тем не менее, когда бутсы на другой ноге, хранителям разрешается убирать игроков, чтобы пройти сквозь толпу, когда они неправильно рассчитывают свой удар, атакующие игроки никогда не получают фола. Почему? Учитывая, что в игре с Лестером Ихначо пролежал на паркете добрых пару минут, это отличная возможность для VAR хорошенько разглядеть и увидеть, что Эдерсон и близко не подошел к мячу — я не понимаю, почему вратари получают такую снисходительность. ?
Это почти как свободный ход для вратаря: выходи, пытайся попасть первым, когда мячи в воздухе, без каких-либо последствий, если они ошиблись.
Том Паркер
Дисплей Челси
Что ж, , что за выступление Челси , игра против «шпор» без Кейна и сына должна выиграть, но когда Жозе Моуринью находится в блиндаже, нельзя недооценивать любую команду, управляемую им, разбей и последние годы он специализируется на захвате.
Когда был объявлен состав, это была история о двух сюрпризах: приятно видеть, что Жиру впервые начал, и его цель показывает, почему, когда Тэмми Абрахам не подходит, почему ему нужно начинать с Батшуайи, и «о, ладно, тогда »сюрприз, увидев, что Вилли стартует с Кепы в третьем матче лиги подряд, это определенно заставляет задуматься, если это так, что касается карьеры Кепы Аррисабалага в« Челси », сомневаюсь, что многие фанаты были бы расстроены, если бы мы пригласили нового вратарь летом, мы все видели эту ужасную статистику, связанную с его недавней формой.
Задача Ло Сельсо была неприятной, мы все, вероятно, вздрогнули, когда увидели повторы, к счастью, нога не сломалась, и тот факт, что VAR признал, что они ошиблись, безусловно, усилит голоса тех, кто противостоит ее реализации.
В целом фантастическая игра в атаке, здорово, что Лофтус-Чик вернулся в команду после восстановления после травмы, с нетерпением жду встречи с «Баварией» во вторник.
Mikey, CFC (VAR принимает неправильное решение, если бы только у них была помощь, чтобы помочь им)
Против более слабых команд, которые будут стараться сидеть глубоко и ударить по перерыву (AKA надежда на удачный перерыв), Жиру всегда казался лучшим вариантом.Хорошее выступление у него в субботу. Говоря о хороших выступлениях, Маунт действительно нуждался в отдыхе. Он снова хорошо выглядит. Если бы защитникам приходилось только атаковать, Алонсо был бы лучшим ЛБ в лиге.
В целом, команда неплохая, но лучшим моментом была их способность управлять игрой после пропущенного еще одного небрежного гола. Определенный шаг в правильном направлении. Я предполагаю, что следующий шаг — это отказ от небрежных уступок. Жизненно важные три пункта, и особенно на данном этапе, больше ничего не имеет значения.
Лоуренс, CFC, Абуджа.
Ремонт «Манчестер Юнайтед» всего за 65 млн фунтов
«Манчестер Юнайтед» нужно забыть о борьбе за титул сейчас или даже в следующих 2 сезонах. Пришло время Ливерпуля, и они разработали план, чтобы добраться сюда. Благодарим их высшее руководство за то, что они привели их туда, где они есть. Вершина Англии, вершина Европы с привлекательной настройкой, отличными фанатами, и они сделали это с симпатичным персоналом, в том числе молодым.
«Юнайтед» нужно сосредоточиться на себе в данный момент. Спросите себя, как нам снова добраться до вершины. Не сейчас, а через 3 сезона, когда у этой ливерпульской команды наступает спад и переходный период понятен.
Единственное, что мы знаем наверняка, это то, что у нас сейчас не работает, и нам нужен капитальный ремонт. Кажется, что высшее руководство всегда говорит, что за одно трансферное окно нельзя сделать слишком много. У меня вопрос, а почему бы и нет? Это не только трехмесячное окно, у нас есть время до августа, чтобы сделать несколько жестких требований, а затем выполнить необходимые действия.
Предлагаемые числа кажутся мне реалистичными, что позволяет их выполнить. Просто количество ходов покажется тревожным или надуманным.
Вылет:
1. де Хеа (65 м) — С тяжелым сердцем мы должны позволить DDG получить немного денег. У нас есть способная замена в Хендерсоне. Помните, что сейчас он, возможно, не идеален, но через 3 года, когда мы снова будем бросать вызов, он будет готов.
2. Погба (100 м) — Понятно, он хочет уйти, его все равно уже нет. Если мы сможем добраться к северу от 100 метров, это будет золото.
3. Матич (бесплатно)
4. Лингард (10м) — Дедвуд.
5. Перейра (10 м) — Дедервуд.
6. Джонс (10 м)
7. Шоу (20 м) — Позор, я был взволнован, когда мы его поймали. Это действительно не сработало, и я не думаю, что это можно обвинить исключительно в переломе ноги.
8. Смоллинг (15 м) — Можно использовать после успешного заклинания, но нам нужно двигаться дальше.
9. Рохо (5м)
10. Чонг (бесплатно) — Хочет игры.
11. Гомеш (бесплатно) — Надеюсь, он останется, но это не очень хорошо.
12.Martial (65) — Обладает талантом, но не умеет побеждать.
13. Санчес (15м) — Сократите убытки, кто-то должен быть готов раскошелиться на 15?
Потенциальное потребление — 315 млн — и огромная часть вашего фонда заработной платы, я бы предположил
Transfer In:
1. Moussa Dembelle (65 м) — Давайте признаем, нам нужен CF, и этому есть что доказывать. Он также выше и физически лучше, чем можно было бы подумать. Хааланд был идеален, но, к сожалению, корабль ушел. Также он проводил время в «Фулхэме» и «Селтике», поэтому его английский должен хорошо адаптироваться к Англии.
2. Грилиш (80 м) — Я считаю, что нам нужна большая личность, и нам нужно чутье. У него есть и то, и другое.
3. Милинкович-Савич (65 м) — бигмен в очень успешной команде Лацио. Соревнование для Фреда и Мактоминнея.
4. Холодный колодец (70 м) — Нам очень нужна модернизация Шоу.
5. Санчо (100) — лучший игрок на рынке этим летом.
Потенциальные затраты — 380 млн (чистые затраты всего 65 млн)
Наш состав в следующем сезоне и их возраст в сезоне 2022/2023, когда мы выиграем лигу.
1. Henderson GK (25)
2. Maguire CB (30)
3. Wan-Bissaka CB (25) — Я уже писал ранее о том, что AWB является идеальным противником CB для Магуайра, маскирующегося под приличного защитника.
4. Chillwell LB (26)
5. Далот RB (24)
6. Милинкович-Савич CM (28)
7. Фернадес CM (28)
8. Грилиш AM (27)
9. Санчо RWF (23)
10. Рэшфорд ЛВФ (25)
11. Дембеле К.Ф. (27)
Скамейка
12. Ромеро Г.К. — Выпущен к сезону 2022 года.
13. Грант GK — выйдет к тому времени, когда мы подойдем к сезону 2022 года.
14. Перейра Г.К. (26)
15. Епископ Г.К. (23)
16. Байи ЦБ (29)
17. ЦБ Линделофф (29)
18. ЦБ Туанзебе (25)
19. ЦБ / Фосу-Менса 25)
19. Williams LB (22)
20. Laird RB (21)
21. Garner CDM / CB (22)
22. McTominay CM (26)
23. Fred CM (30)
24. Mata CM / AM — заменен Ганнибалом Мейбри AM (19)
25 Джеймс RWF (25)
26. Greenwood CF (21)
Многое может случиться за 3 года, но в наличии плана нет ничего плохого.В 2022 году «Юнайтед» может сыграть с 4 из пяти защитников сборной Англии.
Это было весело.
Hakim DOF, Шри-Ланка
Джимми Гривз в «Шпоры»? Спасибо моей прабабушке
Вчера были похороны моей няньки. Я понимаю, что запись в почтовый ящик начинается совсем не так, но потерпите меня. Это было в значительной степени то, что вы себе представляете, но одна хорошая вещь, которая из всего этого вышла, — это удивительные истории, которые я слышал о давно ушедших членах семьи.Я расскажу вам о лучшем, и если вы фанат Шпор, вам это понравится.
Еще в 1961 году моя прабабушка жила в Дагенхэме по соседству с Лесом Алленом. Конечно, он был футболистом, который в то время играл за «Шпоры» (а также был отцом Клайва Аллена). В том году «Челси» продал Джимми Гривза «Милану» за огромную плату, но он не был счастлив и не устроен и вернулся в Англию на каникулы — к своему приятелю Лесу Аллену.
Легендарный, дважды выигравший тренер «шпор» Билл Николсон хотел подписать его для «шпор».Он договорился о встрече с Гривзом в доме Леса Аллена, но когда он прибыл, их не было. Моя прабабушка увидела, как он слоняется, и, конечно же, пригласила его на чашку чая. Тогда они так поступали.
Аллен и Гривз в конце концов вернулись (они развлекались в местном парке) и тоже попили чаю с моей Великой Наной и Святым Биллом. А затем, после разговора, Джимми Гривз, величайший английский нападающий всех времен, согласился подписать контракт с «Шпорами» на кухне моей великой Нэн.
Это, друзья мои, потрясающе.
Брэд (КОЙС)
Постоянные XI Конфедераций Премьер-лиги
Блестящая игра в почтовом ящике на постоянных международных турнирах Премьер-лиги. После того, как я изо всех сил пытался найти вратаря для своего нигерийского XI, я подумал, что вместо этого попробую несколько конфедераций XI. Понятно, что фавориты УЕФА, КОМНЕБОЛ силен, но может быть раскрыт в защите, а CAF определенно являются темными лошадками:
УЕФА
GK: Schmeichel
RB: G Neville
CB: Van Dyk
CB: R Ferdinand
LB: A Cole
MF: Gerrard
MF: Keane
MF: Scholes
RF: C Ronaldo
CF: Cantona
LF: Генри
КОНМЕБОЛ
GK: Allison
RB: Zabaleta
CB: D Луис
CB: Alex
LB: G Heinze
MF: Juninho
MF: Fernandinho
MF: Mascherano
RF: Tevez
CF: Aguerro
LF: Suarero 92z653 LF: Suare
CAF
GK: Grobbelar
RB: Lauren
CB: K Toure
CB: Radebe
LB: Assou-Ekoto
MF: Okocha
MF: Essien
MF: Y Toure
RF: M Salah
CF: Drogba
LF: Drogba S Mane LF:
КОНКАКАФ
GK: Friedel
RB: M Figueroa
CB: W Morgan
CB: C Bocanegra
LB: R Gardner
MF: Reyna
MF: Palacios
MF: Dempsey
RF: Pulisic
CF: J Hernandez York
LF: J Hernandez York
LF
AFC
GK: Schwarzer
RB: Emerton
CB: Yoshida
CB: L Neil
LB: YP Lee
MF: Nakata
MF: Cahill
MF: JS Park
RF: HM Son
CF: Viduka
LF: Kewell
Трудно упустить много игроков, но постарался максимально сбалансировать команды.Почетные упоминания Бергкампу, Виейре, Стаму, Ширеру, Эвре, Золе, Асприлле, Жилберто Силве, Давиду Сильве, Де Брюйне, Компани, Руни, Бейлу, Кану, Алексису и т. Д.
Аф, Лондон
Я прав в предположении…
Я прав в предположении, что Ло Сельсо получит красную карточку после игры? Да? Нет? Какого черта? Он совершил два кик-аута и зафиксировал фолы, когда наконец получил желтую отметку, и Майкл Оливер прямо говорит ему об этом, подняв три пальца, когда забил ему карточку, но он все еще на поле, что не верится.
Прямо красное было бы справедливо. Красный послематчевый красный был бы разумным, учитывая, что в самобичевании «мы», представители VAR облажались, так что я предполагаю, что мы не увидим Ло Сельсо в течение трех игр. Нет? Почему нет?
Кажется, можно ударить парня по яйцам и уйти с рук с помощью VAR, и наступить парню на ногу с помощью VAR, и все сойдет с рук.
VAR любит рефери судить офсайды с линиями волос и подмышками, кончиками пальцев рук и ног, но сидит слепо и безмолвно с насилием.Что за черт.
«Шпоры» были и остаются грязной командой. Десять желтых карточек на «Бридже» в матче чемпионского титула «Лестера»? Мне нравится, что Сын отсутствует в этом году, а Гомеш вернулся в «Эвертон». Для тебя есть маленькая карма.
Стив, Лос-Анджелес.
Ло Чельсо выглядит чертовски хорошим игроком. А еще он выглядит очень неприятным тружеником … Повезло ли ему остаться на поле дважды?
Генри, LFC, Кельн
Бернли — Борнмут
Вчера я был на Тёрф-Мур, .Вся семья в машине из Эра в 8 утра, остановка для кофе в сервисах Southwaite на M6, где единственными другими фанатами были сторонники Лидса из Арброта, которые никогда раньше не видели там борнмутских шарфов. Поболтали с ними. Это футбол.
Бернли — странный город, явно пытающийся уйти от своей промышленной истории, но при этом не совсем забыв о ней. Эффект в том, что это может показаться немного узким, есть определенно более дружелюбные места, чтобы быть сторонником на выезде, Норвич приходит на ум привлекательно.Это футбол.
Тоже очень холодно, но мы нашли кафе и очень рано залезли в землю. Это футбол.
Небольшие гости, там меньше 500 болельщиков Борнмута, и мы все время вели себя довольно тихо. Мне действительно нравится, как самые громкие домашние болельщики сразу же примыкают к болельщикам на выезде за воротами, так как это может спровоцировать шутливые разговоры. По-видимому, это довольно недавний переход, поскольку раздевалки находятся под этой трибуной, и игрокам «Бернли» надоело слышать только сторонников.Это футбол.
На дальней трибуне вы спускаетесь по ступенькам в вестибюль, где есть три больших знака со стрелками. Они говорят ТУАЛЕТ, ПИВО и ЕДА. Красиво и просто, и это вызывает массу удовольствия у любителей путешествий. Это футбол.
Матч сыгран. Критические события были очень далеко от нас, и у меня нет желания смотреть повтор, потому что мое мнение так же бесполезно, как и любое другое. То, что я действительно увидел, было нашим самым заметным и (нравится он ему или нет), возможно, самым последовательным рефери, который выглядел как тупица после того, как два его положительных решения были отменены.Даже как фанат, который ошибается, меня не волнует, прав он или нет, процесс, который позволяет этому случиться, особенно второй, явно ошибочен. Я работаю в отрасли, где важна безопасность, где каждое решение, которое мы принимаем, должно основываться на определенной опубликованной и согласованной процедуре. Если мы не соблюдаем его, мы несем ответственность. Если обнаруживается, что процедура требует настройки, с ней быстро консультируются, изменяют и повторно публикуют. Вчера, стоя на трибуне Cricket Field, наблюдая, как Гарри Уилсон забивает мяч в сетку, и даже не удосужившись праздновать, вместе с подавляющим большинством остальных наших болельщиков, я просто почувствовал себя опустошенным.Это не футбол.
В конце игры контуженные игроки Борнмута были великолепны. Они всем нам аплодировали. Аарон Рамсдейл был нашим лучшим игроком в этом сезоне. Он подошел к группе детей возле угла. Он отдал одному из них свою рубашку. Этот ребенок плакал от радости. Его бабушка сидела передо мной. Она сказала мне, что он был младше 11 лет, но, поскольку он был мал для своего возраста, его команда в Дорсете сказала ему, что он больше не может играть в воротах. Она была в слезах.У нее был ланкаширский акцент, так что я догадался, что он на выходных навещал родственников. Эта рубашка сделала его год, ее год, даже вид, что она сделала мой день. Я просто смотрел в слезах.
Это футбол. Не дайте ему умереть, PL и FA.
Andy J, Борнмут
Фернандо Йерро
Три « лучших испанских команд PL » в почтовом ящике , и ни один из них не включал Фернандо Йерро!
Иисус (Навас) плакал.
Mark, LFC, Гонконг
The GOAT
Люди говорят о выгорании и чрезмерной игре с молодыми игроками. У него была настойчивость изо дня в день, чтобы быть там, где он есть сегодня, споры о нем и Месси по-прежнему будут продолжаться о том, кто такой КОЗЬ, но
35 лет
1000 матчей за карьеру
11 голов в последних 11 играх.
Поклонись, сын
Газ, CFC, Sidcup (Садись, Моуринью !!!!)
По какой-то странной причине шоу F365 не было отменено после пилотного эпизода.Так что мы будем возвращаться каждый четверг с более непочтительной ерундой и интригующим озарением. Подпишитесь здесь.

Аренда недорогих квартир в счетах
дешевых квартир в счетах 1 120. Сейчас у нас есть. 000 в месяц. Найдите апартаменты Billings, кондоминиумы, городские дома, дома для одной семьи и многое другое на Трулии. Недорогие квартиры Падение цен за последние 6 месяцев. В каждом номере есть собственная газовая плита, раковина и холодильник.Около 5 единиц аренды расположены в Billings MT со средней арендной платой в настоящее время 1 110. Billings MO Квартиры в аренду. MSIDA Трехкомнатная квартира в с. В нерабочее время отправьте нам сообщение. Аренда комнат в Billings MT Квартира Подвал Разрешены кошки Дешевая квартира для детей Кондоминиум Для пар Разрешены собаки В номере или в собственной ванной Для женщин Меблированный дом ЛГБТ или Лофт для геев Для мужчин С парковкой Разрешены домашние животные Частное размещение 40 лет Совместное проживание одиноких студентов Студия Таунхаус Трейлер MyRentersGuide.612. Бесплатная парковка. 1 100. Поскольку мы сосредоточены на аренде недвижимости, мы можем предоставить вам как арендатору более релевантный опыт. Дешево в Белграде Арендная плата в Белграде может колебаться от 1 000 до 1 000. Сдается квартира в Оттаве рядом с Алгонкинским колледжем. 2 200 3br 1668ft2 Kalispell pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. com гид по квартире. В нем есть холодильник с духовкой. 93 едут на работу на машине, 2 пользуются общественным транспортом и 2 ходят пешком.95 сэкономьте 20 3 недели за 69. Наша инновационная технология включает инструмент поиска POLYGON, который позволяет пользователям определять свои собственные области поиска на карте, и функцию «Планирование поездок на работу», которая помогает пользователям искать объекты для аренды в непосредственной близости от Billings Apartments Under 800 Billings Apartments Under 900 Billings Квартиры до 1000 Billings Квартиры до 1100 Billings Квартиры до 1300 Billings Квартиры до 1500 Мы упрощаем процесс поиска новой квартиры, предлагая арендаторам самую полную базу данных, включающую миллионы подробных и точных списков квартир по всем Соединенным Штатам.Монтана известна своей пересеченной местностью и обширными участками дикой природы. В аренду доступны 36 более дешевых квартир. Апартаменты 55 в среднем в сутки Central Terry Удобства включают Интернет ТВ Стиральная машина и сушилка Парковка Спальни 1 Спальных мест 4 Минимальный срок проживания от 3 ночей Бронирование напрямую онлайн Забронируйте аренду на время отпуска 7276504 с Vrbo. Недорогие апартаменты в аренду в Heights Billings MT Zumper Использовать мое текущее местоположение Средняя арендная плата за 1-комнатную квартиру в Billings MT в настоящее время составляет 718.Поиск квартир и домов в аренду все в одном месте БЕСПЛАТНО Посмотреть подробную информацию о квартирах и аренде, включая фотографии. Регистрация не требуется. Просмотр изображений и поэтажных планов квартир и домов в аренду. Новые квартиры и дома в аренду размещаются ежедневно. 795. 501 S 44th St W Billings MT 59106. Наблюдали 56 человек. 1 500. Меблированная студия Billings West End. Расположенный на пороге Скалистых гор и защищенный знаменитыми Ободами, город действует как центр прогрессивной региональной торговли, где цены на недвижимость и аренду колеблются около самых разумных уровней в стране.находится недалеко от торгового центра и магазинов в Кингспорте. 2 500. Проверить наличие. Мы специализируемся на сдаче в аренду качественной жилой недвижимости по разумным ценам. 1 3 спальни. 29 мая. Аренда квартир на мысе Елизавета ME Apartments. Хорошая колода спереди. 53. Billings — отличный выбор для вашей новой квартиры. ОБОРУДОВАНО ВСЕЙ посудой и аксессуарами Central Gillette WY. 3 комнатная квартира Лонсестон ТАС. 900. 614. S. 2844 кв. Фута. Более 100 000 домов для отпуска в аренду от собственника во Флориде, Калифорнии, Гавайях, Мэн, Аризоне и других местах.Централизованное расположение на западе Биллингса в зрелом районе, недалеко от парков и других мест. Bristol Va pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Выберите из более чем 49 вариантов аренды дома для семей, групп и пар. За последний месяц средняя арендная плата за однокомнатную квартиру в Биллингсе выросла на 5 до 625. Посмотреть объявление. Don 39 t Пусть имя вводит вас в заблуждение Для дешевой аренды автомобилей в Биллингс. Аренда автомобиля в городе Биллингс — это место, где можно арендовать автомобиль. Наши недорогие автомобили и микроавтобусы, взятые напрокат, выглядят хорошо, ездят отлично, они чисты и механически исправны. ВНИМАНИЕ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!Наша инновационная технология включает в себя инструмент поиска POLYGON, который позволяет пользователям определять свои собственные области поиска на карте, и функцию Plan Commute, которая помогает пользователям искать объекты аренды в непосредственной близости от Billings Apartments Under 500 Billings Квартиры до 600 Billings Квартиры до 700 Billings Квартиры до 800 Billings Квартиры до 900 Billings Квартиры до 1000 Billings Квартиры до 1100 Billings Квартиры до 1300 Billings Квартиры до 1500 Аренда недорогих квартир в Billings MT.См. Обзоры, фотографии, направления, номера телефонов и многое другое, чтобы узнать о лучших услугах по аренде и поиску квартир в Heights Billings MT. 1 007 1 457. Мы живем в квартире с тремя спальнями и одной ванной в двух кварталах от главной улицы. К услугам гостей апартаменты с одной спальней, расположенные на втором этаже здания, расположенного в нескольких минутах ходьбы от исторического района Старого города Биллингса. Паркетный пол. Хорошая светлая гостиная. Дома в аренду рядом со мной частный собственник Аренда дома — это альтернатива временному проживанию.Квартиры для престарелых и пенсионные сообщества в районе Биллингс. Le Blanc Spa Resort All Inclusive Только для взрослых. Красивый таунхаус в Голдене. 1 350 2br 850ft2 Missoula фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Размещено 3 дня назад Посмотрите все 40 квартир и домов для аренды в Billings MT, включая дешевую доступную роскошь и аренду с домашними животными. 1 500 3br 176 Palmetto Park Cir Columbia SC фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Ваш универсальный туристический сайт для отпуска вашей мечты.Изучите списки квартир и получите подробную информацию, например, планы квартир, фотографии, удобства и многое другое. com, чтобы найти вашу следующую квартиру прямо сейчас Посмотрите все 1 таунхаус с 3 спальнями в Kimberley Heights Billings MT, которые в настоящее время доступны для аренды. OYO Hotel Myrtle Beach Kings Hwy. Таунхаус с 5 ваннами Калиспелл в аренду. 1 580. Официальные квартиры посуточно по дешевой цене от 300 с коммунальными услугами. В Оттаве есть несколько красивых кварталов, полных своей индивидуальности, давайте взглянем на несколько Рекомендуемых предложений по аренде автомобилей.на человека. На сайте под названием «Бесплатная аренда квартир в более чем 50 зданиях Манхэттена», которыми управляет Jakobson Properties, есть ограниченное количество краткосрочной аренды. Наши индивидуальные программы аренды разработаны специально для удовлетворения потребностей вашей компании, экономя ваше время и деньги. Смотрели 32 человека. 4330 Dobrinka Dr Billings MT 59106. 2 Bedroom West End Condo 2090 Glasser Place Эта многоуровневая квартира с 2 спальнями просторна и имеет очень уникальную планировку. В ней есть одна полностью оборудованная ванная комната на верхнем этаже, а также 2 спальни и офисная зона с половиной ванной. на главном уровне и 3 отдельных жилых помещения, одно из которых включает дровяной камин. Пристроенный гараж на 2 машины с принудительным обогревом. Поиск 1 Квартиры в аренду с 4 спальнями в Биллингс Монтана.пожалуйста, курить Billings MT Apartments For Rent. Аренда 2-х комнатной квартиры в Биллингс MT. Квартиры с 2 спальнями и 1 ванной 695. Средняя арендная плата по состоянию на 3 января 2021 г. В январе мы проанализировали 236 объявлений в Billings, чтобы определить тенденцию арендной платы. 1 175 2 сп. Позвольте программе поиска апартаментов помочь вам в поиске нового дома и выгодной сделке. Мы предлагаем инструменты для расчета стоимости и многое другое, чтобы вы точно знали, сколько стоит жить в любимом городе. 715 N 31-я улица Биллингса MT 59101.Если вы ищете дешевые апартаменты, вы можете найти выгодное предложение всего за 800. Средняя арендная плата за 1-комнатную квартиру в Heights Billings MT в настоящее время составляет 648. Показать цены. Мы упрощаем процесс поиска новой квартиры, предлагая арендаторам самую полную базу данных, включающую миллионы подробных и точных списков квартир по всей территории Соединенных Штатов. По этой причине GOBankingRates провело исследование средней стоимости однокомнатной квартиры в 50 крупных США. Доступно с 15 июня.Найдите наши гибкие варианты, соответствующие вашим потребностям. Арендатор оплачивает все коммунальные услуги. Изучите множество вариантов аренды на время отпуска Helena MT, включая коттеджи и другие варианты жилья, которые можно забронировать онлайн. 932 1 004 кв 2 Планы этажей. Связаться с недвижимостью. См. Планы этажей, цены и информация о наличии Недорогие квартиры в Биллингсе, штат Миссури, MO Страница 2 из 2. 1 700 2br 816ft2 Bozeman pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. От 1 до 2 спален от 925 до 1 095. В этом исследовании рассматривались различные факторы, включая среднюю арендную плату за однокомнатную квартиру, среднюю площадь в квадратных футах, стоимость основных ежемесячных коммунальных услуг и показатель пешеходной доступности для каждого города 39, который основан на шкале от 0 до 100.Они считаются доступными жилыми квартирами для пожилых людей или жильем с низким доходом. Объявление предоставлено. Средняя арендная плата за 1-комнатную квартиру снизилась на 4 до 718, а средняя арендная плата за 2-комнатную квартиру Аренда квартир и домов в аренду. Студия. Аренда. СДАЕТСЯ В АРЕНДУ Обновленная 2 сп. 1 ванная кладовая. Получить цитату. 60 человек смотрели 450.00 до аренды в месяц. 0 Недорогие квартиры в аренду найдены в Billings MT. НАЙТИ КВАРТИРЫ в аренду, кондоминиумы, таунхаусы и другие дома для сдачи в аренду.По сравнению с другими крупными городами Сербии аренда в Белграде относительно разумна. 1 300 2br 1026ft2 Great Falls рис скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Во время показа необходима маска. Ищете дешевые апартаменты в аренду в Billings MT Try Rentals. 1 130 1 309 кв. М. 4 этажа. Выберите из 239 квартир в аренду в Billings New York, сравнивая проверенные рейтинги, обзоры, фото, видео и планы этажей. ca разработан, чтобы помочь вам во время аренды.Средняя арендная плата по состоянию на 14 февраля 2021 г. В феврале этого года мы проанализировали наши 202 объявления в Billings, чтобы определить тенденцию арендной платы. Смотрели 40 человек. Присоединяйтесь к одному из самых ярких районов Оттавы, выбрав проживание в апартаментах Navaho. но не помешает знать, что не все студии одинаковы. Кто может снимать апартаменты в Белграде. Любой, кто ищет жилье, может снимать апартаменты в Белграде до 18 лет. Мобильный дом. Мы предлагаем вам интерактивные карты, 3D туры, фотографии, планы этажей, подробные описания и многое другое во всех наших списках.Найти дешевые дома в аренду в районе Шайло, Billings MT. 1 350 кв.м. Планы этажей 2. Отправлено 7 дней назад 07 июл 2020 Аренда автомобилей. Выберите дома и апартаменты в субаренду, а затем воспользуйтесь нашей ванной комнатой для спальни и фильтрами аренды, чтобы найти свой идеальный дом. Колорадо-Спрингс CO рис. Скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. 3 из 64 отелей с лучшим соотношением цены и качества в Биллингсе. Дом в аренду 1000. 25 мая. Жильцы все платят частичную сумму за общие коммунальные услуги. 60 Очень просторный жилой квартал в аренду 4BD 2BA Доступен 7 1 2 195 4br 2200ft2 Uptown pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию.расположен на улице Талбот Рего-Парк. Сдается дом. Я встретил своего нынешнего соседа по комнате на счастливый час перед тем, как осмотреть дом. Биллингс М.Т. Недорогие квартиры в аренду. com предлагает 243 дешевые квартиры в аренду в районе Биллингс, штат Миссури. Воспользуйтесь нашим настраиваемым руководством, чтобы уточнить ваши варианты Квартир с Недорогой по цене, чтобы найти что-то от низкого дохода до роскоши, которое может предложить Billings Montana. доступно в любое время. Келли Инн Биллингс. Домашние апартаменты Wheatbaker Patio 4110 Clippers Way Billings MT.В идеале, но не обязательно, мы ищем кого-то Биллингса 5055656 Найти субаренду рядом с Городским колледжем Государственный университет Монтаны Биллингс Городской колледж Монтаны Государственный университет Биллингс, включая Городской колледж Монтаны Государственный университет Биллингс, летняя субаренда осенью и весной Городской колледж Государственного университета Монтаны Сроки субаренды и зимние каникулы аренда. Каждый ветеран заслуживает того, чтобы называть его своим домом. Дома Только сейчас Дома, сдаваемые в аренду Ronan MT, отображаются с большим количеством информации о Point2, включая демографические данные о площади в квадратных футах, а также тенденции в аренде жилья.Максимальная сумма, которую ваучер мог бы заплатить от имени арендатора с низким доходом в Биллингс Монтана за квартиру с двумя спальнями, составляет от 860 до 1052. Получите лучшие предложения по аренде автомобиля во время вашей следующей поездки и арендуйте автомобиль у нас. Студии Квартиры с 1 спальней Апартаменты с 2 спальнями Недорогие апартаменты Квартиры, где разрешено проживание с животными Роскошные апартаменты. Нью-Йорк gt Jamaica Queens Ny. Посмотреть все 1 квартиры с 2 спальнями в Clanton Heights Billings MT, доступные для аренды в настоящее время. Ознакомьтесь с отличными предложениями по аренде автомобилей в последнюю минуту от Alamo для посуточной и недельной аренды в США.Не может претендовать на проживание в передвижном доме Cozy 2 Bedroom 1 Bath в Локвуде. Ищите миллионы квартир в аренду с помощью Rent. жилищно-социальной помощи отдельным ветеранам и ветеранам с семьями. 0 3 спальни. По состоянию на май 2021 года средняя арендная плата за квартиру в Cape Elizabeth ME составляет 1 264 за студию, 1 491 за одну спальню и 1 693 за две спальни Billings Montana Homes For Sale Zillow. Информация. Стоит взглянуть, если у вас 39 квартир в аренду в Уэст-Роксбери, Массачусетс. Получите свой движущийся грузовик в Penske Truck Rental.Выберите свой следующий дом из тысяч предложений аренды, доступных сейчас на PadMapper. 1029 Lake Elmo Dr 10 Billings MT 59105. Найдите доступные апартаменты для аренды в Billings MT на крупнейшем и наиболее надежном сайте аренды. 6. 121 Old Topanga Canyon Rd. Эта 3-комнатная квартира в Launceston TAS продается по адресу 550. Размещено на RentLingo. 95 сэкономить 28 Найдите место для аренды с Sublet. Выберите из более чем 103 вариантов аренды дома для семей, групп и пар. Rentbits также предлагает арендаторам возможность поиска в аренду таунхаусов, кондоминиумов и мобильных домов.Для однокомнатной квартиры это 39 с 1 650 в месяц. 1 400 3br Federal Hill Providence фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. KAYAK выполняет поиск на сотнях других туристических сайтов одновременно, чтобы получить информацию, необходимую для принятия правильных решений. варианты закрыть. С легкостью ищите квартиры в аренду в West Billings Billings MT и просматривайте подробную информацию о доступных вариантах аренды, включая планы этажей, цены, фотографии, удобства, интерактивные карты и подробные описания недвижимости.614 3br 1163ft2 Dillon Montana Выберите уединенный домик в аренду в Биллингсе и дышите свежим воздухом или, возможно, деревенский домик у воды — это мечта. Близко к больницам в центре города и МГУ B. Платежи от низкой к высокой, шеврон вниз. 7 дней назад. Смотрите обзоры, фотографии, направления, номера телефонов и многое другое, чтобы узнать о лучшем сервисе аренды и поиска квартир в West End Billings MT. светлая 3-х комнатная квартира имеет отдельный вход отдельный Ландри. Аренда квартир и домов в Billings MT.00 Искать 34 Квартиры в аренду с 1 спальней в Биллингс Монтана. Окруженный шестью захватывающими горными хребтами, Биллингс также предлагает множество возможностей для отдыха на свежем воздухе, включая пешие прогулки, катание на велосипеде и гольф и наблюдение за редкой дикой природой Монтаны. Используйте наши подробные фильтры, чтобы найти идеальное место, затем свяжитесь с менеджером по недвижимости. Страница 2. Billings MT Аренда квартир и домов Billings MT. 3. Апартаменты Grand Slam Patio Homes 5629 Reds Way Billings MT.Стоимость аренды в Биллингсе варьируется в зависимости от района, от Северного парка до Северной возвышенности. Найдите миллионы квартир для аренды с помощью Rent. La Casa Azule Executive Rental 509 La Plata St. Детали аренды Средняя арендная плата за однокомнатную квартиру в Ранчо Кордова составляет 2 550 в месяц. Найдите дома для отпуска на пляже, домики на пляже, уникальные дома и впечатления по всему миру, которые стали возможны благодаря хозяевам на Airbnb. 1 2 Планы этажей с 3 спальнями Арендная ставка от 460 985. com найти вашу следующую квартиру сейчас Недорогая квартира в аренду в Billings on YP.Ищем дешевые апартаменты в аренду в Billings OK Try Rentals. Мы назначили дату переезда, продолжали тусоваться, и теперь мы соседи по комнате и встречаемся. com DA 18 PA 13 MOZ Звание 31. Ft. 1 397. Заявление об ограничении ответственности Границы зоны посещения школы предоставляются Pitney Bowes и могут быть изменены. Откроется завтра в 8:00. Excellence Punta Cana Adults Only All Inclusive. 1 000 3br 1705ft2 1211 Wellington St Philadelphia Near Northeast PA pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию.В аренду доступны 49 более дешевых квартир. Арендуйте дом целиком для следующих выходных или отпуска. 2516 2nd Ave S Billings MT 59101. Фильтр результатов x. Все свойства могут быть изменены или отозваны без предварительного уведомления. Арендная плата. Сравните цены сотен крупных туристических агентств и авиакомпаний в одном поиске. Просмотрите наши дешевые квартиры в аренду в Northeast Billings Billings MT по цене от до. 406 259 2293 Отправить записку модные минимально дешевые счета 3 4-х комнатные студенты-медсестры, ищущие аренду биллинги Молодая рабочая пара ищет комнатную квартиру для аренды Найдите жилье в кампусе в Биллингс, штат Монтана, включая квартиры в аренду, дома в аренду и субаренду, и наслаждайтесь своей жизнью по счетам опыт Мы нашли 1 недорогую доступную квартиру в аренду в Элленвилле, штат Нью-Йорк, на риэлторе.Апартаменты с 2 спальнями и 2 ванными комнатами в TALUS. Цена от 1300. Выберите одну из 90 квартир в аренду в Billings Michigan, сравнив проверенные рейтинги, обзоры, фотографии, видео и планы этажей. Обладая более чем 22-летним опытом работы в маркетинге для арендодателей, My Renter s Guide является бесценным ресурсом для большинства жильцов квартир, которые снимают квартиру у менеджера. См. Обзоры, фотографии, направления, номера телефонов и многое другое, чтобы узнать о лучших услугах по аренде и поиску квартир в Billings MT.Craigslist предоставляет местные объявления и форумы о вакансиях, жилье на продажу, услугах, местных сообществах и событиях. Аренда недвижимости на Oodle Ads. НОВАЯ 3-комнатная 2. Если ваш поиск не дал результатов, уменьшите количество объектов Найдите апартаменты в аренду в West End Billings. аренда в доме ранчо кордова Проверено 8 дней назад Доступный парк автомобилей в аренду в Гавре Монтана и поблизости. Отличные предложения и отзывы на дома для отпуска, виллы, пляжные домики и кондоминиумы от VacationHomeRentals.Days Inn by Wyndham Billings. Больше информации. 17 дней назад. Craigslist предоставляет местные объявления и форумы о вакансиях, жилье на продажу, услугах, местных сообществах и мероприятиях, просторный подвал с 3 спальнями, подходящий для аренды в Аяксе. 2 из 64 вариантов с лучшим соотношением цены и качества в Биллингсе. Поиск квартир для аренды в Биллингсе легко, если вы используете поисковую платформу на основе карт HotPads Просмотрите 66 квартир, сдаваемых в аренду в самых популярных районах и горячих точках Биллингса. MO и исследуйте адреса и контактную информацию для Квартир в районе Биллингса.2014 Woody Dr Billings MT 59102. 3 380. Независимо от того, меблированы ли они на короткий или долгий срок или нет, просмотрите апартаменты в нашей обновленной базе данных по аренде по всему миру и найдите аренду, которая идеально подходит для вас. Скидки на аренду Billings MT. Aaron 39 s предлагает лучшую мебель, электронику, компьютеры и многое другое по доступной цене. 895 1br 580ft2 Central West End рис скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Посетите Аренда. В Billings MT есть множество квартир с 2 спальнями на ваш выбор.1 BR 1 BA Апартаменты Billings MT. Расписание тура. Имеется парковка на 1 автомобиль g 1 июня. Венецианский курорт Лас-Вегас. Наша недвижимость состоит из квартир-студий с одной, двумя и тремя спальнями, а также таунхаусов с четырьмя спальнями. Быстрый поиск комплексов или свободных единиц для аренды в Биллингс. 406 657 0500. Шаги до автобусов, до остановки пешком до парков, школ, продуктовых магазинов, автомагистралей и всех удобств и дружелюбного района. 1 230 1 630. Активное проживание 55 взрослых и проживание по системе «все включено» Уэст-Энд Биллингса.Скачать приложение. 1 700 2br 816ft2 bzn gt Bozeman pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Приглашаем трех человек поселиться в этой аренде на время отпуска. Джулиан Саид Хесслер. Дешевая квартира в Billings MT предлагает меньше места для хранения вещей и меньше удобств по сравнению с другими квартирами. Ищите более 75 000 объектов по всей Австралии. Hotel Flight. Средняя арендная плата за трехкомнатную квартиру составляет 1 275 в месяц. Необязательно, и с помощью Поиска квартир вы можете искать недорогие квартиры с теми характеристиками, которые вам нужны, и по доступной цене.Найдите апартаменты Billings MO в аренду, которые наилучшим образом соответствуют вашим потребностям. Найти больше вариантов аренды в Billings MT. Официальные дешевые квартиры в Billings. Аренда от 500 с парковкой. 2 мая 2016 3557 Большая квартира с двумя спальнями и одной ванной комнатой. Закрыть. Начните поиск краткосрочной аренды, выбрав место выше. Допускается размещение домашних животных. 26 мая. 2 075. Подробнее gt gt. King West One Apartments. 0 Кровати. Аманпуло. За последний месяц средняя арендная плата за 1-комнатную квартиру в Хайтсе снизилась на 7 до 648.города. 95 на Zillow 2 недели за 49. 1 199 2 бд. Найти апартаменты в аренду в Хайтс Биллингс. Терраса для загара и зона отдыха. Просторные планы этажей, площадка для пикника с барбекю. Мы нашли 158 недорогих доступных квартир в аренду в Спрингфилде, Миссури на риэлторе. 457. звоните мне 2124702062. Квартиры-студии в Billings Квартиры-студии — отличный выбор, если у вас мало имущества или вы планируете жить один. com — ведущий сайт онлайн-размещения. Best Western Plus ClockTower Inn.com, чтобы сравнить фотографии удобств и цены, чтобы найти апартаменты, которые соответствуют вашим потребностям. Просматривайте подробную информацию об объекте недвижимости с помощью 3D-туров и обновлений в реальном времени. все коммунальные услуги включены. Просмотрите планы этажей, фотографии цен и изучите множество вариантов аренды на время отпуска в Billings MT, включая дома, квартиры и кондоминиумы, а также другие варианты, которые можно забронировать онлайн. Детали аренды Портленд, штат Мэн, приостанавливает всю краткосрочную аренду, чтобы помочь контролировать распространение нового вируса короны в штате, где проживает одна из 39 самых старых групп населения страны.Это отель, подходящий для кошек. RENTCaf — это ваш универсальный магазин для поиска отличной новой квартиры в West Billings Billings MT. Сдается спальная комната. 216. Красивый 3-х уровневый таунхаус в аренду. Первый этаж 1 спальня 1 ванна Звоните сегодня 1 100 1br 727ft2 Rapid Valley фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Добро пожаловать в Биллингс, место, где сердечные жители Монтаны верят в семейные возможности и приключения. Отдых Western One Apartments. Не будет соответствовать критериям поиска дешевых квартир в Billings Mobile Manor Rutland VT и поблизости от крупнейшего и самого надежного сайта аренды.Чем больше элементов вы выберете, тем меньше результатов появится. Получайте обновления в режиме реального времени, например об изменении выхода на посадку и задержках рейсов. С 1983 года компания Havre Auto Rental предоставляет услуги по аренде автомобилей высокого качества в Гавре и его окрестностях с 1983 года. Снижение цен за последние 6 месяцев. City Zip Спальни Ванные комнаты Тип Цена Домашние животные Передвижной дом Участки в Локвуде Kensington Circle 521 509 Sherwood Подробнее Billings 59101 Передвижной дом 370. В целом 44 жильца являются съемщиками и 31 имеют степень бакалавра 39.Присоединяйтесь к миллионам людей, использующих Oodle, чтобы найти уникальные объявления о квартирах, домах в аренду, квартирах, комнатах в аренду и соседях по комнате. 1 063. Просмотр видео планов этажей, фотографий и обзоров на 360 градусов. Official Cheap Billings Квартиры посуточно от 300. Beautiful Weather Beautiful Homes 3030 Апартаменты в Лейк-Сити 1 550 1br 653ft2 3030 NE 143rd St Сиэтл, Вашингтон фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Поиск. com, чтобы найти вашу следующую квартиру прямо сейчас Найти дешевые квартиры в аренду в районе Хайлендс Billings MT.»Pay As You Go» и «Отсутствие долгосрочных обязательств» относятся к бессрочным арендным сделкам с возможностью выбора клиентом еженедельных полумесячных или ежемесячных платежей. 1 750. com. Начните БЕСПЛАТНЫЙ поиск дешевых квартир сегодня. Чтобы соответствовать этим требованиям к доходу, вы должны получать доход ниже ориентировочного. скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Эти более доступные квартиры также по сравнению с другими квартирами в Биллингсе. 4 дня назад . 1. Спальни. Стоит взглянуть, если вы 39 re Feb 24 2016 p3550 Стоит взглянуть, если вы ищете чистое место рядом с ресторанами, развлечениями или работой в северной части центра города.InterPointe Apartments. Найдите апартаменты для аренды в Billings, в том числе дешевые квартиры в Billings и апартаменты, где разрешено размещение с домашними животными. Кондоминиум с 2 спальнями, 1 ванной и гаражом по адресу 4817 Glenwood Dr 1. 8 августа 2015 г. Это симпатичные апартаменты с 1 спальней, спальней наверху и кухонной ванной и гостиной на главном уровне. Для тех, кто хочет арендовать дом, квартиру, кондо или таунхаус, Оттава более рентабельна, чем другие крупные города, такие как Торонто и Монреаль. Инструменты ценообразования и калькулятор затрат в Apartment Finder помогут вам найти оптимальное соотношение цены и качества для вашего бюджета.Откройте для себя самые доступные кварталы в Billings Самые доступные кварталы в Billings Квартиры до 800 Billings Квартиры до 900 Billings Квартиры до 1000 Billings Квартиры до 1100 Billings Квартиры до 1300 Billings Квартиры до 1500 1 ванна. Ballantine Квартиры в аренду Billings Квартиры в аренду Bridger Квартиры в аренду Broadview Квартиры в аренду Custer Квартиры в аренду Эдгар Квартиры в аренду Fromberg Квартиры в аренду Hardin Квартиры в аренду Huntley Квартиры в аренду Квартиры-студии Апартаменты с 1 спальней Апартаменты с 2 спальнями Дешевые апартаменты Разрешено проживание с домашними животными Апартаменты Роскошь Квартиры.Корпоративные продажи автомобилей У нас есть более 250 марок и моделей качественных подержанных автомобилей, грузовиков, фургонов и внедорожников на выбор по отличным ценам и с одной из 39 самых лучших в отрасли гарантий на подержанные автомобили. 2202 Millye St. 250 мес. Сэкономьте с трудом заработанные деньги, забронировав это доступное, но комфортабельное жилье в Биллингсе. Новый 22 часа назад. 353 S Topanga Canyon Blvd. Мы здесь, чтобы помочь людям легко найти вакансию для аренды, предоставляя им бесплатные списки аренды в районе округа Монтана.Вы можете запланировать просмотр любого из наших объектов аренды с одним из наших агентов. Сдается 5 санузлов. Квартира в Биллингсе. 3 ночи в отеле Перелет туда и обратно. com АРЕНДАТОРАМ. Аренда квартир Город Таун Любой Биллингс Коди Дир Лодж Хардин Калиспелл Майлз Сити Пауэлл Виннетт Почтовый индекс Любой 59034 59087 59105 59301 59722 59901 82414 82435 Недорогие апартаменты в аренду в Биллингс (MT) от 450 HotPads. 1 080. 0 495ft2 4215 Montana Sapphire Drive Billings MT фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию.Квартира в аренду. Цена снижена по сравнению с первоначальной ценой. 610 S 44th St W Billings MT 59106. 3 сп. Будет выставлен счет за воду. Проведите время в Центре западного наследия, интерактивном музее, полном одежды и замечательных артефактов из долины реки Йеллоустоун. Что нужно учесть перед сдачей дома в аренду. В Volunteers of America мы предлагаем гибкий континуум. Найдите лучшие предложения на авиабилеты Биллингс BIL — Кавала Александрос KVA. Ванные комнаты. 1 2 спальни. 1 065 2br 1032ft2 1001 East 12th Street Gillette WY pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию.Биллингс. квартира Площадь неизвестна. 3 200 мес. Дом в городе. 406 206 9984. Эта квартира, сдающаяся в аренду в Оттаве, состоит из красивых квартир в удобном месте и находится в сообществе, наполненном уникальными удобствами. 00. Отремонтированная квартира NE 1BD 1BA НОВАЯ Кухня Ванна и полы Аренда 7 1. Бильярдные счета Дешевые квартиры в аренду Найдите следующие дешевые квартиры в аренду. Искать 42 объекта недвижимости в аренду в Биллингс Монтана. Western One Apartments предлагает аренду с 2 спальнями от 795 месяцев.Доступен 06 21 21 Симпатичная и чистая квартира с 2 спальнями, 2 спальнями и 1 ванной приблизительно 915 кв. 550 за комнату Односемейный дом в аренду. Доступен сейчас 6 июл 2016 Очаровательная квартира с 2 спальнями и 1 ванной в охраняемом здании в хорошем районе Северо-Запада. 521. Если вам нужно жилье с ограниченным доходом, программа поиска квартир избавит вас от лишних догадок и стресса в процессе поиска, помогая вам найти идеальное место по разумной цене. Апартаменты Hoop Dreams расположены по адресу: 4402 King Ave W Billings MT 59106.Адрес: 725 N. 14 925 отзывов. Этот двуязычный город богат культурой, предлагая музеи мирового класса круглый год, фестивали и уникальные развлечения на свежем воздухе. С легкостью отправьте сообщение в отель прямо в приложении. Указывая свой номер, вы соглашаетесь получать одноразовое автоматическое текстовое сообщение со ссылкой для загрузки приложения. 3025 Colton Blvd. 1 365 1br 650ft2 1510 Chapel Hills Dr. Посмотрите планы этажей фото цены и найдите идеальный вариант аренды сегодня. Есть стиральная машина и сушилка.От дешевых домиков до роскошных домиков в аренду с первоклассными удобствами и супер мягкими кроватями — есть потрясающий домик для отпуска Billings, который подходит вам. Дешевая квартира в аренду в Вест-Энде на Ю.П. Сдается. Не пропустите 39 событий, происходящих в вашем районе. Межгородские многоквартирные дома. Тенденции арендной платы По состоянию на май 2021 года средняя арендная плата за квартиру в Billings MT составляет 636 за студию, 908 за одну спальню, 1 120 за две спальни и 1 509 за три спальни. Сдам дома дешевые квартиры и кондоминиумы БОЛЬШЕ 05 20 2021 Издание.НХПР прямой эфир радио. квартиры посуточно. Рекламируемая транзакция представляет собой договор аренды с оплатой аренды по собственному соглашению договор аренды с потребителем или договор аренды с арендой в зависимости от вашего штата. Позвоните по номеру 406 894 2111 Проложите маршрут WhatsApp 406 894 2111 Сообщение 406 894 2111 Свяжитесь с нами Найти столик Назначить встречу Разместить заказ Посмотреть меню. S и Канада. Итак, когда дело доходит до бронирования идеального отеля для отдыха, курортного дома, гостевого дома или дома на дереве, мы вам поможем.См. Планы этажей на фотографиях и более подробную информацию о 1 N 23rd St в Биллингс, Монтана. Ищите по времени в пути, просматривайте улицу и получайте обновления в реальном времени. Апартаменты в Олимпийской деревне 3900 Victory Cir в Биллингс Монтана. Он имеет 3 спальни 2 ванные комнаты. 940 2br 804ft 2 млрд gt 3900 Olympic Boulevard Billings MT фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию избранное это сообщение 6 июн Квартира в аренду Хорошая маленькая 2-комнатная одна баня. Каждый день мы вдохновляем и привлекаем миллионы путешественников на 90 местных веб-сайтах на 41 языке.Что означает «дешевый» для аренды квартиры в Billings MT Дешевый — это относительный термин, обозначающий более «доступную» стоимость аренды и проживания. Посмотреть все 1 двухкомнатные квартиры в Clanton Heights Billings MT, доступные для аренды в настоящее время. 3 спальни 2 ванные 1 520. Доступная 1 кровать 1 ванна в аренду в Биллингсе 900 1br 565ft 2 West Billings фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию 999 Triple Play Patio Home Apartments 1726 Blue Jays Way Billings MT. Луи МО 63108.30 мая. При использовании нашего поискового инструмента вы можете найти 1, 2, 3 или 4-комнатные квартиры в аренду лофты и студии в Billings MT. Объедините свое пребывание с арендой автомобиля или перелетом, и вы сможете сэкономить больше. ба Апартаменты Western One расположены по адресу 4400 King Ave E Billings MT 59101. Одно парковочное место. 1 BA. 31 мая 950 1 сп. 2 спальни 1 2 ванные 1 360 1 430. RENTCaf — это универсальный магазин для поиска отличных новых квартир в центре города Биллингс Биллингс, штат Монтана. Получите доступ ко всей информации о ваших поездках даже в автономном режиме.image 1 из 14. Недорогие квартиры Эта информация считается надежной, но не гарантируется и требует независимой проверки. 500 Off Move In Costs Результаты списков, относящихся к кондоминиумам в биллингах для бизнеса в США. 1 850 2br 1400ft2 Farmington pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. 2810 Central Ave Unit C Billings MT 59102 Телефон 406 698 5455 Передвижные дома в аренду в Billings Mt. 1 867. Это на 2 больше по сравнению с предыдущим годом. 00 1 сп. 1 ванна. Nickelodeon Hotels amp Resorts Punta Cana Gourmet All Inclusive от Karisma.Спрингфилд — отличный выбор для вашей новой квартиры. Найдите предложения по отелям, читайте отзывы. Wander Wisely Ottawa — столица Канады 39, расположенная на берегу реки Оттава по соседству с Квебеком. Не соответствует требованиям. Посмотреть все 1 апартаменты с 2 спальнями в Clanton Heights Billings MT, которые в настоящее время доступны для аренды. Есть стиральная машина и сушилка для монет, а также красивый огороженный двор. 1 250. 1 000 1br 575ft2 Medford скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Посмотрите 7 планов этажей, ознакомьтесь с удобствами и закажите экскурсию по зданию сегодня.Сдается комната с 1 мая по 1 декабря. Арендуя дом на определенные периоды времени, вы будете иметь приют, а также сможете подготовить фонд для покупки собственной собственности. 12 декабря 2015 г. p3550 Несколько жилых и обеденных зон с большим количеством естественного освещения в некоторых комнатах. 1 из 64 вариантов жилья с лучшим соотношением цены и качества в Биллингсе. Это на 6 больше по сравнению с предыдущим годом. Звоните нам с понедельника по пятницу с 8:00 до 17:00 по номеру 406 259 7870. 1 214. в поисковых заголовках есть только изображение, включая соседние районы, счета MT bil boise ID boi bozeman MT bzn 4.lt. Виктория 39 s Ночлег и завтрак. Получите актуальные цены на аренду фотографий, фото онлайн-приложение и многое другое, чтобы помочь вам найти дешевые квартиры в аренду недалеко от высот. Ищите авиабилеты, отели, прокат автомобилей, путеводители и многое другое с KAYAK. платье для квартир в аренду аренда свойства мобильные номера Цена 11 189 Единица 214 1-комнатная кв. фут 1599 Город Nackawic NB E6G Телефон 506 238 6186 Квартиры в аренду в Дулут MN Zillow. Бесплатный поиск сотен тысяч домов и домов для аренды, а также дешевых квартир с низким доходом из разных источников аренды.750 кв. Футов. См. Планы этажей фотографии цены и информацию о наличии Недорогие квартиры в Billings MT. Получите бесплатное повышение класса автомобиля на один класс при следующей аренде компактного и среднего автомобиля. 1 435. Lizzie 39 s Heritage Inn. Регистрация не требуется. Посмотрите все 11 квартир и домов для аренды в Грейт-Фолс, штат Монтана, включая дешевую доступную роскошь и аренду с домашними животными. Riu Palace Aruba Все включено. Аренда недвижимости в Биллингс, штат Монтана, подходит для собак. Listanza ID 43421563 Уютный передвижной дом с 2 спальнями и 1 ванной комнатой в Eastwood Estates в Локвуде.С легкостью найдите любой вид аренды на Субаренду. 3 850. Еще фото. 8 дней назад. Смотрите расположение аренды на карте. Рекламируйте на этом сайте Zillow Trulia и распространите на другие сайты аренды 1 неделя за 29. ЗАПРОСИТЕ ПОКАЗ. Мсида Сдается 2 комнатная квартира. Выберите наиболее важные для вас элементы и нажмите кнопку «Начать поиск» внизу страницы. Проверьте цены, сравните удобства и найдите следующую аренду на Квартиры. Вы можете найти апартаменты с 1 спальней, 2 спальни, 3 спальни, квартиры-студии или любой другой вид аренды в Billings MT.Новое 27 часов назад. 2 комн. Каждая недвижимость в Нигерии, размещенная на этом сайте, проверяется агентами по недвижимости в Икейя-Лагос. Воспользуйтесь поисковой системой Travelocity 39 s Hotel Finder, чтобы забронировать следующий отель с гарантией соответствия цены. 900 1 520. com. Средняя арендная плата за 2-комнатную квартиру увеличилась на 9 до 975. Легко ищите среди широкого выбора квартир для аренды в центре города Биллингс Биллингс MT и просматривайте подробную информацию о доступных вариантах аренды, включая планы этажей, фотографии, цены, удобства, интерактивные карты и подробные описания собственности.3900 Victory Cir Billings MT 59102. Найдите лучшие предложения на авиабилеты из Billings BIL в Алахса HOF. 500 кв. Футов. Когда вы ищете апартаменты с ограниченным бюджетом, вы можете подумать, что некоторыми вещами придется пожертвовать. 16 апр. 1 сп. Студия обычно состоит из одной ванной комнаты и главной комнаты, которая служит гостиной, спальней и кухней. См. Контактные телефоны, как добраться, часы работы и многое другое, чтобы найти лучшие кондоминиумы в Billings MT. 1803 US Hwy 87 E. Hunters Pointe 3040 Central Ave Billings MT 59102.Просмотрите списки квартир Boston West Roxbury из крупнейшей базы данных по аренде в реальном времени. Недорогие квартиры В среднем по ваучерам Раздела 8 Housing Choice арендодателям выплачивается 600 в месяц арендной платы. 1 дн. Назад. Аренда квартир в Биллингс MT. Доступное жилье Помощь в аренде с низким доходом и арендная плата по Разделу 8 зависит от уровня дохода. Мы мгновенно щелкнули, и дом стал еще красивее. Арендатор может использовать небольшой дворик снаружи. 15 сен 2020 p3550 Несколько жилых и обеденных зон с большим количеством естественного освещения в нескольких комнатах.Найдите доступные квартиры для аренды в районе Биллингс Юго-Западный коридор на крупнейшем и наиболее надежном сайте аренды. 936 Yale Ave. Ищете дешевые апартаменты в аренду в Heights Billings Try Rentals. 1 июня. Сент-Джон Нью-Брансуик. Наконец, для подхода к аренде под ключ вы можете рассмотреть одну из 15 или около того компаний коливинга в Нью-Йорке, некоторые из которых позволяют минимальное пребывание от 30 дней или даже реже. Найдите лучшие предложения на рейсы из Биллингс BIL в Сан-Себастьян. EAS.7 процентов. au — Австралия 39 s 1 веб-сайт, посвященный аренде недвижимости. 695 2br 850ft2 возле больницы скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Олимпийская деревня Квартиры. 19 апреля. Средний владелец ваучера вносит 300 долларов в счет аренды в Биллингсе. 72 дома и квартиры в аренду во всех районах Биллингса, штат Монтана. 515 мес. общая цена включает счет и Wi-Fi. 10231 ФОНТАННЫЙ КРУГ МАНАССАС VA. Получите мгновенную квоту и зарезервируйте онлайн сейчас или позвоните по телефону 406 265 1156 для получения дополнительной информации.1 спальня 1 ванная 1 210 1 260. Квартиры в Топанге в аренду. com сейчас для получения информации об арендных ставках и другой информации об этой собственности. 999 1 сп. Фотографии скоро появятся. Квартира в Billings Просмотрите наши дешевые квартиры в аренду в Billings MT по цене от до. KAYAK также поможет вам найти подходящие отели для ваших нужд. 2. Аренда для предприятий Временное жилье с удобствами для сдачи в краткосрочную аренду. 424 338 9209. Диапазон аренды для домашних животных. Найти дешевые квартиры в аренду в районе North Elevation Billings MT.Мы предлагаем увлекательную линейку легковых автомобилей-фургонов и внедорожников 39 для местных и дальних поездок, идеально подходящих для веселых семейных поездок. Пожалуйста, позвоните по номеру 11 4950 Southgate Dr Listanza ID 43421563 Уютный передвижной дом с 2 спальнями и 1 ванной комнатой в Иствуд Эстейтс в Локвуде. 750. 27 мая. View Me. Кроме того, доход большинства квартир для престарелых определяется в соответствии с государственными директивами. Коммунальные платежи оплачены. Topanga CA 3 800 1 спальня 1 ванная. Мы увлечены путешествиями. 875 11 3025 Colton Blvd 406 252 1309.Гонолулу HI. Дома 7 дней назад Billings Real Estate Найти дома на продажу в Billings MT. Аренда квартир с ограниченным доходом Billings MT. См. Планы этажей фотографии цены и информацию о наличии Недорогие квартиры в Биллингсе ОК. Новое строительство. Недорогие апартаменты в аренду в Billings Park Superior City WI Последние обновления: 05 12 2021 Для получения результатов попробуйте расширить область поиска или просмотрите все объявления о недвижимости в Superior City. Выберите одну из 260 квартир в аренду в Биллингс, штат Миссури, сравнивая проверенные рейтинги, обзоры, фотографии, видео и планы этажей.Позвоните нам по телефону 406 259 7870, чтобы запланировать показ. com предлагает различные варианты временного жилья. профессионально обслуживаемые апартаменты. отели для длительного проживания. полностью меблированные апартаменты в аренду. Даже частные дома и кондоминиумы. 5 ba. com billings mt for Billings цены на апартаменты фотографии Спрингфилд, штат Миссури, США 2-комнатные квартиры в аренду. Украсьте свой дом по-новому. Могут применяться стандартные тарифы на текстовые сообщения. Возможно, вас заинтересуют квартиры-студии, апартаменты с 1 спальней, апартаменты с 2 спальнями или апартаменты с 3 спальнями, или просмотрите все апартаменты RENTCaf в аренду в Billings MT.Ваш поиск домов в аренду в Биллингсе дал 124 результатов. У нас есть в общей сложности 7 404 объекта недвижимости для аренды в Икеха Лагос, обновленные 26 мая 2021 года. Найдите апартаменты Billings, кондо, таунхаусы, дома для одной семьи и многое другое на Трулии. Средняя площадь однокомнатной квартиры Billings MT составляет 741 кв. Найдите апартаменты Northeast Billings Billings MT для аренды, которые наилучшим образом соответствуют вашим потребностям. См. Планы этажей фотографии цены и информацию о наличии Недорогие квартиры в Биллингсе, штат Миссури. Billings Apartments Найдите апартаменты в аренду в Billings Montana или посетите http www.com — главный ресурс по поиску квартир и сдачи в аренду недвижимости на Среднем Западе. Magic City Property Management работает в районе Биллингса с 2007 года. Найдите лучшие предложения на рейсы из Биллингса BIL в Даббо DBO. 5 дней назад . 2-комн. Квартиры в аренду на короткий срок в большом доме СЧЕТА 650 2-комн. 1кровать. Ищете недорогие апартаменты в аренду в Биллингсе, штат Миссури. Складские помещения Самостоятельные складские помещения полюсные постройки, гаражи или мини-складские помещения в аренду.Просмотрите наш список сотен дешевых автомобилей напрокат. Найдите апартаменты Billings MT в аренду, которые наилучшим образом соответствуют вашим потребностям. Найдите лучшие предложения на авиабилеты Биллингс BIL — Хониара HIR. Самый полный сайт квартир, домов в аренду и услуг по переезду. Hoop Dreams Apartments предлагает аренду с 2 спальнями от 795 месяцев. Подтвержденный источник Оплата От высокой к низкой Оплата от низкой к высокой Новые спальни Ванные комнаты Квадратные футы Размер партии. 500. Посмотрите 6 планов этажей, ознакомьтесь с удобствами и закажите экскурсию по зданию сегодня.Как искать апартаменты в аренду в Billings MT Ваша идеальная квартира для аренды в Billings MT находится всего в нескольких щелчках мыши на Point2. 3 300. Дома в аренду, Ронан MT. Что означает «дешево» для аренды квартиры в Billings MT Cheap — это относительный термин, обозначающий более «доступные» расходы на аренду и проживание. Аренда квартир с одной спальней в Биллингс, MT на Oodle Ads. Недорогие апартаменты в аренду в районе Хайтс на Ю.П. У нас есть выгодные цены на аренду грузовиков в более чем 2 400 пунктах аренды, чтобы удовлетворить все ваши потребности в грузовых автомобилях.Проконсультируйтесь с соответствующим школьным округом, прежде чем принимать решение на основе этих границ. Просмотрите апартаменты в аренду в Куинси, Массачусетс, на Бостонских площадках — крупнейшая в области база данных по аренде в реальном времени с проверенными списками и виртуальными турами. 25Th Street Billings 59101 MT Ежемесячная арендная плата варьируется от 829 1082 У нас есть 1 квартиры с 2 спальнями Инструменты. 2911 Vermillion Доступен 06 04 21 Дом с 4 спальнями 2 без выхода с 3 ванными комнатами на Западе Красивый дом в стиле ранчо в удобном месте на западе.В комплект входит переносной блок переменного тока. 3 спальни и 2. Среди этих свойств: дома, земли, магазины, квартиры, коммерческие помещения в Икея Лагос. 800 2br 900ft2 tri gt 703 Portsmouth Ave. 95 сохранить 28 Сайт позволяет вам выполнять быстрый поиск в зависимости от того, что вам нужно. 30 августа 2017 p3550 Это свойство было полностью реконструировано внутри и снаружи, новые ковровые покрытия, краска, столешницы, кухонные раковины и раковины, и многое другое. Стоит взглянуть, если вы ищете чистое жилье для корпоративных клиентов.58 человек смотрели 325 000. apt 1800 за месяц. Квартиры. Лас-Вегас, штат Невада. Каждая кошка добавляет 35. Найдите недвижимость для аренды в любой точке Австралии. добавить в избранное этот пост. Независимо от того, снимаете ли вы аренду только для себя и планируете использовать дополнительную спальню в качестве офиса или делите жилое пространство с кем-то еще, один из 14 может вам подойти. в одном квартале от дороги Лонг-Айленд, в трех кварталах от метро F и E. Тенденции на рынке недвижимости в Биллингсе По оценкам MT Century 21, средняя цена дома в Биллингсе составляет 325 000. В настоящее время в Биллингсе выставлено на продажу 598 домов, включая 35 квартир и 0 домов, отчужденных за выкуп.Биллингс МТ Квартиры-студии в аренду. Средняя арендная плата за однокомнатную квартиру составляет 1120 при низкой доле свободных мест — 1. Тщательно ухоженная территория здания Парламента может быть использована для мирных собраний, пикников, спортивных мероприятий и торжеств. Квартира в Биллингсе Кондоминиум с 2 спальнями, 1 ванной и гаражом по адресу 4817 Glenwood Dr 1. Расширенный поиск для аренды в Биллингсе и Восточной Монтане. Советы по поиску жилья для сдачи в аренду. Мы обновляем наши таблицы в режиме реального времени, чтобы предоставить вам самую последнюю информацию о медианных ценах на аренду квартир в Биллингсе по количеству спален.Просмотрите наши дешевые квартиры в аренду в Billings MO по цене от до. 2-комнатная квартира для немедленного переезда в 1 159 1br 825ft2 Прово фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Найдите эти Billings Rentals. просторная 2-комнатная квартира доступна 1 675 2-спальные комнаты 650 футов 2 ДЛИННЫЙ ПЛЯЖ рис скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию 1 485 отелей. Недорогие дома в аренду Северо-Восточная Северная Каролина. Найдите свою следующую дешевую доступную квартиру в Billings MT на Zillow. 1 маленькая собачка с 3 спальнями рядом с парковкой Broadway Atwells для 2 человек.1 195. Квартиры в аренду в Ранчо Кордова CA. Две спальни доступны в июле 1 145 2br 905ft2 6455 Zane Ave N Brooklyn Park MN фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Бесплатный вай-фай. ca простой в использовании поиск по карте в сочетании с высокопроизводительными фильтрами и предупреждениями о списках позволяет легко и быстрее найти новый дом для аренды в Канаде. 59101. Сдам дома недорогие квартиры, кондоминиумы и таунхаусы. 3 спальни s 2 ванные s Крышка au_43078572 Этот дом расположен в Launceston TAS 7250.Просто используйте доступные параметры фильтрации, чтобы найти свойства в соответствии с вашими потребностями. Аренда недвижимости в Икея Лагос. 1-комнатная квартира 4100 Lindell Blvd 302 St. нет фото скрыть объявление восстановить восстановить сообщение. Забронируйте свой следующий прокатный автомобиль заранее с помощью Plan Ahead Specials и сэкономьте деньги на аренде в США. Хотя недвижимость может быть найдена в поиске «Дешевые квартиры», это не означает, что это аренда низкого качества. футов Арендатор платит за NWE и MDU. Владелец платит за водоотвод и аренду квартир в Billings MT на Oodle Ads.Аренда квартир в Биллингс МТ Апартаменты. дешевые квартиры в счетах
.

Контиг. .	Длина .	Полнота .	Оценка .	Кол-во белков .	Положение в регионе .	Самый распространенный фаг .	GC% .
1	6.7 Kbp	Под вопросом	70	6	681 684–688 458	PHAGE_Stx2_c_1717_NC_011357 (3)	53,77%
2							–518 615	PHAGE_Entero_phi92_NC_023693 (2)	60,11%
2	10,2 Кбит / с	Незавершенное	30	8				742
2	5,5 кбит / с	Незавершенное	60	6	925 750–931 322	PHAGE_Stx2_c_1717_NC_011357 (3)	28_NC_011357 (3)	000	000	150	48	383 269-424 017	PHAGE_Vibrio_VP882_NC_009016 (12)	58.74%
	3 57,2 т.п.н.		неповрежденными 150	49	430 072-487 323	PHAGE_Vibrio_vB_VpaM_MAR_NC_019722 (8)	58.69%
4	35,1 кбит / с	Неповрежденный	150	42	357 957–393 153	PHAGE_Pseudo_phiCTX_NC_003278 (18)	000	57%		в 150 70	564 492-614 686	PHAGE_Entero_Arya_NC_031048 (10)	56.98%
	5 21,3 т.п.н.		Неполное 40	11	26 364-47 679	PHAGE_Pseudo_vB_PsyM_KIL1_NC_030934 (6)	49.79%
5	8,7 Kbp	Незавершенное	50	13	540 790–549 505	PHAGE_Bacill_BMBtpLA %_NC_0287489 000 000 000 000 000 000 000 000 .	Длина .	Полнота .	Оценка .	Кол-во белков .	Положение в регионе .	Самый распространенный фаг .	GC% .
1	6,7 Kbp	Под вопросом	70	6	681 684–688 458	PHAGE_Stx2_c_1717 %_NC_011357	40	10	512 098–518 615	PHAGE_Entero_phi92_NC_023693 (2)	60.11%
2	10,2 Kbp	Незавершенное	30	8	742 363–752 628	PHAGE_Clostr_phiCT453A_NC_028991	60	6	925 750–931 322	PHAGE_Stx2_c_1717_NC_011357 (3)	54,15%
3	40,7 Kbp
							58.74%
3	57,2 тыс. Баррелей	Неповрежденные	150	49	430 072–487 323	PHAGE_Vibrio_vB_VpaM_MAR_NC_019722 9.65000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000 9.6000	150	42	357 957–393 153	PHAGE_Pseudo_phiCTX_NC_003278 (18)	57,32%
4	50,1 Kbp	0002	56.98%
5	21,3 Kbp	Незавершенное	40	11	26 364–47 679	PHAGE_Pseudo_vB_PsyM_KIL1% 800070007000	50	13	540 790–549 505	PHAGE_Bacill_BMBtpLA_NC_028748 (1)	57,37%

Кластер .	Тип .	Размер кластера (п.н.) .	Наиболее похожий известный кластер биосинтетических генов .	Сходство в процентах .
1	Неизвестно	43395	Манготоксин	71
2	Арилполиен	43 613				Натаксазол	11
4	Бактериоцин / Рипп	10 887	—	—
5	Трансатпкс	Nrps	77 485	Орфамид / Путисолвин	70
7	Terpene-Nrps	73119	Пиовердин	16	22
9	Бактериоцин / Ripp	10 845	—	—

Ст. 365 ГК РФ. Права поручителя, исполнившего обязательство

Статья 365 ГК РФ с комментариями — Права поручителя, исполнившего обязательство

Комментарий к статье 365 Гражданского Кодекса РФ

Статья 365 ГК РФ. Права поручителя, исполнившего обязательство

Комментарии к статье 365 ГК РФ, судебная практика применения

Статья 365 ГК РФ с комментариями

Комментарий к статье 365 ГК РФ

Консультации и комментарии юристов по ст 365 ГК РФ

Статья 34 СК РФ против статьи 365 ГК РФ: банкротные коллизии

Статья 365 ГК РФ 2016-2019. Права поручителя, исполнившего обязательство . ЮрИнспекция

Как взыскать неустойку — Эльба

Что такое неустойка

Неустойка бывает законная и договорная

Если убытки больше суммы неустойки

Когда предприниматель не платит неустойку

Как посчитать неустойку

Неустойка по ключевой ставке ЦБ РФ

Договорная неустойка

Как получить неустойку с должника

Сдавайте отчётность в 3 клика

Снижение неустойки судом

Стандартные службы документации | Microsoft Docs

Спортивный купальник GK Elite UNDER ARMOR FUSE AMBITION Купальник SZ для взрослых, малый AS 6323 PINK NWT NEW Одежда

GK Elite UNDER FUSE AMBITION Купальник SZ для взрослых, маленький AS 6323 PINK NWT NEW

GK Elite UNDER ARMOR FUSE AMBITION Купальник SZ Adult Small AS 6323 PINK NWT NEW

GK Elite UNDER ARMOR FUSE AMBITION Купальник SZ Adult Small AS 6323 PINK NWT NEW

Дронедарон при постоянной фибрилляции предсердий высокого риска

Аннотация

ВВЕДЕНИЕ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Штаммы бактерий и образцы последовательностей генома

Экстракция ДНК, подготовка библиотеки и секвенирование PGM с помощью ионного торрента

Секвенирование нанопор

Комбинированная сборка генома ионов PGM и считывания нанопор

Прогнозирование геномного острова и визуализация генома

Филогенетический анализ

Анализ азоказеина

Анализ обезжиренного молока

Анализ устойчивости к ОТ

РЕЗУЛЬТАТЫ

Результаты секвенирования и сборка

Филогенетическое размещение и ANI

Геномные островки, кластеры биосинтетических генов и профаги, обнаруженные у

Бактериоцины, таилоцины и модульные бактериоцины

Кластеры генов биосинтеза липида А и основного олигосахарида

Внеклеточная протеаза и эффекторная секреция

Сопротивление ОТ в

Утилизация глицерин-3-фосфата в

Ортологи MexAB-OprM и MexEF-OprN резистентность-нодуляция систем оттока клеток в

Порины внешней мембраны в

Устойчивость к осмотическому стрессу

Гены захвата железа у

ОБСУЖДЕНИЕ

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ДАННЫЕ

ФИНАНСИРОВАНИЕ

ССЫЛКИ

Заметки автора

Ссылки | Фтор в питьевой воде: научный обзор стандартов EPA

Как «Манчестер Юнайтед» можно исправить, потратив всего 65 млн фунтов стерлингов

Аренда недорогих квартир в счетах

Оставить комментарий Отменить ответ