161 статья за что: Об ответственности за грабеж (ст.161 УК РФ) - Новости, объявления - Профилактика правонарушений и преступлений

Содержание

Ст 161 Кодекс Административного Судопроизводства (КАС РФ) N 21-ФЗ

Статья 161. Порядок допроса свидетеля

1. Каждый свидетель допрашивается отдельно, за исключением случаев, если суд назначает допрос одновременно двух и более свидетелей в целях выяснения причин расхождения в их показаниях.

2. Допрос свидетеля путем использования систем видеоконференц-связи осуществляется судом, рассматривающим административное дело, по общим правилам, установленным настоящим Кодексом для допроса свидетеля, с учетом особенностей, предусмотренных статьей 142 настоящего Кодекса.

3. Председательствующий в судебном заседании выясняет, в каких отношениях свидетель находится с лицами, участвующими в деле, и предлагает свидетелю сообщить суду все сведения, которые ему лично известны об обстоятельствах данного административного дела.

4. При даче показаний свидетель может пользоваться письменными материалами, если его показания связаны с какими-либо данными, которые трудно удержать в памяти.

По окончании допроса эти материалы предъявляются суду, лицам, участвующим в деле, их представителям и могут быть приобщены к данному административному делу на основании определения суда.

5. После этого свидетелю могут быть заданы вопросы. Первым задает вопросы лицо, по заявлению которого вызван свидетель, или представитель этого лица, а затем вопросы задают другие лица, участвующие в деле, их представители. Суд вправе задавать вопросы свидетелю в любой момент его допроса.

6. При необходимости суд повторно может допросить свидетеля в том же или следующем судебном заседании, а также повторно допросить других свидетелей для выяснения противоречий в их показаниях.

7. Допрошенный свидетель остается в зале судебного заседания до окончания разбирательства административного дела, за исключением случая, если суд разрешит ему удалиться раньше.

Другие статьи КАС РФ

Статья 113. Распределение судебных расходов при отказе от административного иска и заключении соглашения о примирении

Статья 305. Сроки рассмотрения дела в суде апелляционной инстанции

Статья 41. Участие в административном деле нескольких административных истцов или нескольких административных ответчиков

Кодекс административного судопроизводства Российской Федерации N 21-ФЗ ст 161 (действующая редакция 2021)

Статья 161. Требования, по которым может быть выдан судебный приказ Раздел II. Приказное производство (ст. 160–173) Гражданский процессуальный кодекс Украины (редакция с 15.12.2017 г.) | Нормативна база України

1. Судебный приказ может быть выдан, если:

1) заявлено требование о взыскании начисленной, но не выплаченной работнику суммы заработной платы и среднего заработка за время задержки расчета;

2) заявлено требование о компенсации расходов на проведение розыска ответчика, должника, ребенка или транспортных средств должника;

3) заявлено требование о взыскании задолженности по оплате жилищно-коммунальных услуг, телекоммуникационных услуг, услуг телевидения и радиовещания с учетом индекса инфляции и 3 процентов годовых, начисленных заявителем на сумму задолженности;

4) заявлено требование о взыскании алиментов в размере на одного ребенка — одной четверти, на двух детей — одной трети, на трех и больше детей — половины заработка (дохода) плательщика алиментов, но не больше десяти прожиточных минимумов на ребенка соответствующего возраста на каждого ребенка, если это требование не связано с установлением или оспариванием отцовства (материнства) и необходимостью привлечения других заинтересованных лиц;

5) заявлено требование о взыскании алиментов на ребенка в твердой денежной сумме в размере 50 процентов прожиточного минимума для ребенка соответствующего возраста, если это требование не связано с установлением или оспариванием отцовства (материнства) и необходимостью привлечения других заинтересованных лиц;

6) заявлено требование о возврате стоимости товара ненадлежащего качества, если есть решение суда, которое вступило в законную силу, об установлении факта продажи товара ненадлежащего качества, принятое в пользу неопределенного круга потребителей;

7) заявлено требование к юридическому лицу или физическому лицу — предпринимателю о взыскании задолженности по договору (другому, нежели о предоставлении жилищно-коммунальных услуг, телекоммуникационных услуг, услуг телевидения и радиовещания), заключенному в письменной (в том числе электронной) форме, если сумма требования не превышает ста размеров прожиточного минимума для трудоспособных лиц.

2. Лицо имеет право обратиться в суд с требованиями, определенными в части первой настоящей статьи, в приказном или в упрощенном исковом производстве по своему выбору.

Министерство цифрового развития, связи и массовых коммуникаций Российской Федерации

Правила освещения в средствах массовой информации антиобщественных действий (преступлений) с участием несовершеннолетних, случаев самоубийства несовершеннолетних, а также рекомендации по освещению такой информации в сети «Интернет»

Настоящие Правила и Рекомендации разработаны Минкомсвязью России в целях реализации пункта 1.3 протокола заседания Правительственной комиссии по профилактике правонарушений от 18 декабря 2018 г. № 3.

Статьей 4 Закона Российской Федерации от 27 декабря 1991 года № 2124-I (далее – Закон о СМИ) запрещается распространение в средствах массовой информации (далее – СМИ), а также в информационно-телекоммуникационных сетях (далее – сеть «Интернет») информации о несовершеннолетнем, пострадавшем в результате противоправных действий (бездействия), включая:

фамилию, имя, отчество, фото- и видеоизображение такого несовершеннолетнего, его родителей и иных законных представителей,

дату рождения такого несовершеннолетнего,

аудиозапись его голоса,

место его жительства или место временного пребывания,

место его учебы или работы,

иную информацию, позволяющую прямо или косвенно установить личность такого несовершеннолетнего.

При подготовке материала к печати, выпуску в эфир или к распространению иным способом нужно обеспечивать максимальную защиту от того, что личность ребенка будет раскрыта. Так, часто используемый СМИ прием «затемнения» лица пострадавшего ребенка не позволяет гарантировать его неузнаваемость, особенно в небольших городах и населенных пунктах.

Распространение информации, которая идентифицирует ребенка, в СМИ и в сети «Интернет» возможно только при соблюдении двух условий:

1) размещение такой информации необходимо для защиты прав и интересов этого ребенка;

2) наличие согласия законного представителя (если ребенку до 14 лет) или согласия и законного представителя, и ребенка (старше 14 лет).

После того как цель достигнута, распространять информацию о несовершеннолетнем нельзя.

Распространение информации без согласия несовершеннолетнего, достигшего 14-летнего возраста и пострадавшего в результате противоправных действий (бездействия), и (или) законного представителя такого несовершеннолетнего возможно, если получить это согласие невозможно либо если законный представитель такого несовершеннолетнего является подозреваемым или обвиняемым в совершении данных противоправных действий.

Еще более строгие требования к обеспечению конфиденциальности информации касаются случаев, когда речь идет о преступлениях против половой неприкосновенности и половой свободы личности в отношении несовершеннолетнего (статья 41 Закона о СМИ).

Такие случаи регулируются в том числе требованиями статей 161 и 241 Уголовно-процессуального кодекса Российской Федерации (далее – УПК).

В частности, частью 5 статьи 161 УПК не допускается разглашение данных о частной жизни участников уголовного судопроизводства без их согласия, а также данных о частной жизни несовершеннолетнего потерпевшего, не достигшего возраста 14 лет, без согласия его законного представителя.

Согласно части 2 статьи 161 УПК данные предварительного расследования могут быть переданы гласности лишь с разрешения следователя или дознавателя и только в том объеме, в каком ими будет признано это допустимым, если разглашение не противоречит интересам предварительного расследования и не связано с нарушением прав, свобод и законных интересов участников уголовного судопроизводства.

Распространение информации, относящейся к несовершеннолетнему потерпевшему от преступлений против половой неприкосновенности и половой свободы личности, в СМИ и сети «Интернет» может допускаться только в тех случаях, когда это необходимо для:

1) расследования преступления;

2) установления лиц, причастных к совершению преступления;

3) розыска пропавших несовершеннолетних.

В соответствии с частью 5 статьи 241 УПК лица, присутствующие в открытом судебном заседании, вправе вести аудиозапись и письменную запись. Фотографирование, видеозапись и (или) киносъемка, а также трансляция открытого судебного заседания по радио, телевидению или в сети «Интернет» допускается с разрешения председательствующего в судебном заседании. Трансляция открытого судебного заседания на стадии досудебного производства по радио, телевидению или в сети «Интернет» не допускается.

На основании статьи 41 Закона о СМИ также запрещено распространять в СМИ сведения, прямо или косвенно указывающие на личность несовершеннолетнего, совершившего преступление либо подозреваемого в его совершении, без согласия самого несовершеннолетнего и его законного представителя.

Запрещается также распространять сведения о несовершеннолетнем, совершившем административное правонарушение или антиобщественное действие, без согласия самого несовершеннолетнего и его законного представителя.

Разрешение несовершеннолетнего и его законного представителя во всех рассматриваемых случаях должно быть получено СМИ в письменной форме.

При получении необходимых согласований при освещении в СМИ и сети «Интернет» антиобщественных действий (преступлений) с участием несовершеннолетних, а также случаев самоубийств несовершеннолетних, размещающему такую информацию необходимо быть предельно деликатным, проявлять уважение к близким родственникам, родственникам или близким лицам как несовершеннолетнего пострадавшего, так и несовершеннолетнего, нарушившего закон либо подозреваемого в совершении административного правонарушения или антиобщественного действия, или преступления, равно как и к иным участникам происшествия.

В таких случаях следует руководствоваться высокими стандартами профессиональной этики, избегая излишней эмоциональности, провокационных заголовков и изображений.

Рекомендуется быть предельно аккуратными в авторских оценках участников описываемых событий, избегая чрезмерной детализации в описании противоправных действий в отношении несовершеннолетнего, а также совершенных антиобщественных действий (преступлений) с участием несовершеннолетних.

——————————————————————————————————————————————————————————————————————————

Федеральным законом предусматривается использование визуального знака информационной продукции, проставляемого производителем или распространителем информации в соответствии с возрастной классификацией — «6+», «12+», «16+», «18+». Кроме того, это определенный ориентир для родителей, призванный обратить их внимание на специфику информационной продукции. Распространение информации, запрещенной для детского просмотра, не допускается без данного знака, за исключением информации, распространяемой посредством сети интернет, кроме сетевых изданий.

В случае если в состав одной книги входит несколько произведений, относящихся к разным возрастным категориям, рекомендуется обозначать данное издание знаком информационной продукции для детей старшей возрастной категории. Использование закона информационной продукции не распространяется на печатную продукцию, выпущенную в оборот до 1 сентября 2012 года.

Не допускается распространение запрещенной информации без применения административных и организационных мер, технических и программно-аппаратных средств защиты от указанной информации в местах, доступных для детей, а также образовательных организациях, детских медицинских, санаторно-курортных, физкультурно-спортивных организациях, организациях культуры, организациях отдыха и оздоровления детей или на расстоянии менее чем сто метров от границ территорий указанных организаций.

В соответствии с законом №135-ФЗ запрещается распространение информации, пропагандирующей нетрадиционные сексуальные отношения среди несовершеннолетних. Согласно Федеральному закону от 13 марта 2006 года №38-ФЗ «О рекламе», реклама подлежит классификации, не допускается ее распространение без указания категории данной информационной продукции.

Однако необходимо учитывать, что родители имеют преимущественное право на воспитание детей перед всеми другими лицами. Таким образом, учитывая, что ответственность за жизнь и здоровье детей в первую очередь лежит на них, для защиты несовершеннолетних от негативной информации родители могут самостоятельно воспользоваться функцией «родительского контроля» с помощью настроек телевизионного приемника, а также в качестве дополнительной услуги, предоставляемой большинством операторов мультисервисных сетей. Кроме того, ведущие операторы связи (ОАО «Вымпелком», ОАО «МТС» и др.), а также поисковые интернет-компании (ООО «Яндекс», ООО «Гугл») предоставляют услуги по фильтрации нежелательного контента в интернете — контентные фильтры «родительского контроля». Такие программы есть как в платном, так и в бесплатном доступе.

Эксперты говорят, что это отречение от власти, поскольку губернатор отказывается принимать вызов в связи с выпуском Пераривана

Нью-Дели : А.Г. Пераривлану было 19 лет, когда он был арестован в июне 1991 года по обвинению в покупке двух аккумуляторных батарей для Сиварасана, человека ТОТИ, который организовал заговор с целью убийства бывшего премьер-министра Раджива Ганди. Батарейные элементы использовались в бомбе, убившей Ганди.

30 лет, которые он провел в тюрьме, были долгой историей перипетий с множеством раундов судебных разбирательств.Перавалан оставался в камере смертников в течение 23 лет, прежде чем Верховный суд заменил его смертный приговор вместе с приговором двух других осужденных пожизненным тюремным заключением в феврале 2014 года. Это произошло после того, как суд отметил, что на смену президента потребовалось более 11 лет. принимать решения по их прошениям о помиловании.

Между тем, начальник полиции CBI В. Тиагараджан, который записал признание Пераривана — главное оружие CBI против него в обеспечении его осуждения, — сообщил Верховному суду в ноябре 2013 года, что он не записал признание точно.

Губернатор Тамил Наду Банварилал Пурохит воздержался от звонка по поводу досрочного освобождения Пераривана, заявив, что президент Индии является «надлежащим компетентным органом» для рассмотрения просьбы Перавалана о свободе. Губернатору потребовалось более двух лет, чтобы прийти к такому выводу — в сентябре 2018 года кабинет министров штата Тамил Наду посоветовал ему приказать освободить нескольких осужденных по этому делу.

Однако эксперты считают, что губернатор мог бы позвонить по просьбе Перавалана, полагаясь на свои конституционные полномочия в соответствии со статьей 161, и даже высказали мнение, что, не отвечая на звонок, губернатор «отказался от исполнения своих полномочий».

Также прочтите : «Самый редкий из редких» — история смертной казни в Индии и преступления, требующие повешения

Статьи 72 и 161

Статьи 72 и 161 Конституции уполномочивают президента Индии и губернаторов штатов в определенных случаях помиловать или приостанавливать, смягчать или смягчать приговоры.

Согласно статье 72, Президент имеет право «помиловать, смягчить наказание, отсрочку или смягчение наказания либо приостановить, смягчить или смягчить приговор любому лицу, признанному виновным в каком-либо правонарушении».Он может делать это во всех случаях, когда наказание или приговор выносится военным трибуналом, в случаях, когда наказание или приговор назначаются за правонарушение согласно любому закону, касающемуся вопроса, на который распространяется исполнительная власть Союза, и во всех случаях вынесения смертного приговора.

Статья 161 предоставляет губернатору право «помиловать, смягчить наказание, отсрочку или смягчение наказания либо приостановить, смягчить или смягчить наказание». Губернатор может сделать это в отношении любого лица, признанного виновным в нарушении любого закона, относящегося к вопросу, на который распространяется исполнительная власть государства.

Конституционный эксперт Файзан Мустафа объяснил, что «исполнительная власть» здесь находится в контексте законодательной власти.

«Для Центра исполнительная власть распространяется только на те вопросы, по которым Парламент может принимать законы. Для государства это только в отношении вопросов, по которым государство может принимать законы ». Он отметил, что штаты также могут вносить поправки в уголовное законодательство, поскольку это параллельная тема списка.

Поскольку приговор Перавалану в настоящее время означает лишь сговор с целью совершения убийства, в соответствии с Уголовным кодексом Индии (IPC) губернатор также сможет принять вызов по его освобождению.

Также прочтите: Центр, Правительство Тамил Наду выступает против заявления об убийстве Раджива Ганди осужденного Налини

Приговор 2015 г.

В феврале 2014 года правительство Тамил Наду предложило смягчить приговор к пожизненному заключению и освободить всех семи осужденных за убийство. Центр поспешил оспорить это в Верховном суде.

В 2015 году Конституционная коллегия Верховного суда постановила, что Центр, а не правительство штата будет иметь «первенство» при принятии решения о том, должны ли лица, осужденные по делам CBI или центрального агентства, быть освобождены или нет с уплатой смягчения, как в Радживе. Дело убийц Ганди.

Верховный суд постановил, что слово «консультация», используемое в статье 435 Уголовно-процессуального кодекса (УПК), на самом деле означает «согласие». Однако это касалось только полномочий правительства штата в соответствии с разделами 432–435 Уголовно-процессуального кодекса, которые также позволяют правительству штата «после консультации с центральным правительством» приостанавливать или отменять приговоры осужденным.

Д-р Ануп Сурендранат, преподающий конституционное право в Национальном юридическом университете Дели, указал, что Верховный суд в том же решении отметил, что полномочия губернатора в соответствии со статьей 161 были «неприкосновенными и неприступными» по сравнению с «статутными полномочиями в соответствии с законом. CrPC [полагается на другое решение конституционной коллегии по делу Мару Рам] ».

«Таким образом, губернатор все еще может осуществлять свои полномочия в соответствии со статьей 161 и не связан требованием согласия в УПК», — добавил он.

Управляющий — соответствующий орган

Сурендранат утверждал, что именно губернатор является компетентным органом для рассмотрения ходатайства Пераривана об освобождении.

В ответе на электронную почту ThePrint он сослался на текст статьи 161, в которой говорится, что полномочия губернатора распространяются на правонарушения в соответствии с законами, на которые «распространяется исполнительная власть государства».

Он пояснил: «Перариван был осужден и приговорен к наказанию в соответствии с разделом 302 IPC, поскольку он был оправдан за преступления ТАДА. S.302, или убийство, — это вопрос, на который распространяется исполнительная власть государства, согласно совпадающему мнению судьи Лалита в решении коллегии Конституции [пункт 219] ».

«Текстовое прочтение Конституции, таким образом, приводит к выводу, что губернатор является надлежащим органом для рассмотрения ходатайства Перавалана об освобождении», — добавил Сурендранат.

Старший адвокат К.Т.С. Тулси также согласился с этой точкой зрения. «Губернатор имеет независимую власть. Он мог бы это сделать, если бы захотел », — сказал он ThePrint.

Тулси добавил: «Они просто разыгрывают мольбу от одной стороны к другой, которая продолжается довольно долгое время. И это очень прискорбно. Им нужно ответить на звонок и решить, так или иначе ».

«Отречение от власти»

Мусатафа также высказал мнение, что губернатор «отказывается от своих полномочий» ввиду «политического значения этого дела».

Он сказал: «Губернатор, применяя свои полномочия по помилованию, не находится под контролем правительства Индии. Это его власть, и поэтому в идеале он должен использовать ее самостоятельно, с помощью и советом своего совета министров ».

Мустафа добавил: «Вот почему губернатор Тамил Наду не хочет предпринимать никаких действий по совету правительства штата, потому что штат собирается провести опросы через два месяца… Следовательно, он воздержался от принятия решения сам».

Также прочтите : SC продлевает условно-досрочное освобождение осужденного Пераривана по делу об убийстве Раджива Ганди на неделю

Артикул 161 | Европейское банковское управление

1.Комиссия должна проводить периодические обзоры выполнения настоящей Директивы, чтобы гарантировать, что ее выполнение не приведет к явной дискриминации между учреждениями на основе их правовой структуры или модели собственности.

2. К 30 июня 2016 года Комиссия в тесном сотрудничестве с EBA представит отчет Европейскому парламенту и Совету вместе с законодательным предложением, если это необходимо, о положениях о вознаграждении в настоящей Директиве и Регламенте. (ЕС) № 575/2013, после его рассмотрения с учетом международных разработок и с особым учетом:

(a) их эффективности, реализации и обеспечения соблюдения, включая выявление любых пробелов, возникающих в результате применения принципа соразмерности этим положениям;

(b) влияние соблюдения принципа Статьи 94 (1) (g) в отношении:

(i) конкурентоспособности и финансовой стабильности; и

(ii) любой персонал, эффективно и физически работающий в дочерних компаниях, учрежденных за пределами ЕЭЗ, или в материнских организациях, учрежденных в ЕЭЗ.

В ходе этой проверки, в частности, рассматривается вопрос о том, должен ли принцип, изложенный в статье 94 (1) (g), продолжать применяться к любому персоналу, подпадающему под действие пункта (b) (ii) первого подпараграфа.

3. Начиная с 2014 г., EBA в сотрудничестве с EIOPA и ESMA будет публиковать двухгодичный отчет, в котором анализируется степень, в которой законодательство государств-членов относится к внешним кредитным рейтингам для целей регулирования, и шаги, предпринятые государствами-членами для уменьшения количества таких ссылок. В этих отчетах должно быть указано, как компетентные органы выполняют свои обязательства в соответствии со Статьей 77 (1) и (3) и Статьей 79 (b).В этих отчетах также указывается степень сближения надзорных органов в этом отношении.

4. К 31 декабря 2014 года Комиссия должна рассмотреть и представить отчет о применении статей 108 и 109 и представить этот отчет Европейскому парламенту и Совету вместе с законодательным предложением, если это необходимо.

5. К 31 декабря 2016 года Комиссия должна рассмотреть и отчитаться о результатах, достигнутых в соответствии со Статьей 91 (11), включая уместность сравнительного анализа практики разнообразия, с учетом всех соответствующих событий Союза и международных событий, и представить этот отчет в Европейскому парламенту и Совету вместе с законодательным предложением, если это необходимо.

6. К 31 декабря 2015 года Комиссия должна проконсультироваться с ESRB, EBA, EIOPA, ESMA и другими соответствующими сторонами относительно эффективности механизмов обмена информацией в соответствии с настоящей Директивой как в обычное время, так и во время стресса.

7. До 31 декабря 2015 г. EBA рассмотрит и представит в Комиссию отчет о применении настоящей Директивы и Регламента (ЕС) № 575/2013 о сотрудничестве Союза и государств-членов с третьими странами. В этом отчете должны быть указаны любые области, требующие дальнейшего развития в отношении сотрудничества и обмена информацией. EBA публикует отчет на своем веб-сайте.

8. Получив мандат от Комиссии, EBA должен изучить, охватываются ли организации финансового сектора, заявляющие, что они осуществляют свою деятельность в соответствии с принципами исламского банкинга, настоящей Директивой и Регламентом (ЕС) № 575/2013. Комиссия должна рассмотреть отчет, подготовленный EBA, и представить законодательное предложение в Европейский парламент и Совет, если это необходимо.

9. К 1 июля 2014 года ЕБА должен отчитаться перед Комиссией об использовании кредитными организациями долгосрочных операций рефинансирования центральных банков ЕСЦБ и аналогичных мерах поддержки финансирования со стороны центральных банков. Основываясь на этом отчете и после консультации с ЕЦБ, Комиссия должна до 31 декабря 2014 года представить отчет Европейскому парламенту и Совету об использовании и выгодах от этих операций рефинансирования и мерах поддержки финансирования для кредитных организаций, уполномоченных в Union, вместе с законодательным предложением об использовании таких операций рефинансирования и мерах финансовой поддержки, если это необходимо.

10. К 31 декабря 2023 года Комиссия должна рассмотреть и отчитаться о реализации и применении надзорных полномочий, указанных в пунктах (j) и (l) статьи 104 (1), и представить отчет Европейскому парламенту и в Совет.

Исполнительная власть по помилованию в соответствии с Конституцией Индии

Источник изображения: https://bit.ly/2UPk8pG

Эта статья написана Анкитой Джангидом из Банастхали Видьяпитх, Раджастхан.Эта статья касается исполнительной власти по помилованию в соответствии с Конституцией Индии.

Право помилования президента является одним из полномочий, возложенных на исполнительную власть. Статья 72 Конституции Индии наделяет президента правом помилования, а статья 161 предоставляет такие же полномочия губернатору. Сила милосердия применялась веками. В более ранний период власть использовалась королями для получения политического преимущества, в то время как в наши дни использование и понимание силы прощения чаще ассоциируются с концепцией милосердия и справедливости.

Значение помилования можно обозначить как «помилование», «амнезиак», «благодать» или милосердие. Сила помилования упоминается в письменной конституции многих стран. Президентские полномочия по помилованию связаны с отправлением правосудия в отношении людей, что, по сути, является функцией судебной власти.

Помилование стало неотъемлемой частью исполнительной функции каждой страны. Власть часто критикуют на основании доктрины разделения властей, которая является одной из известных доктрин Конституции Индии.

Историческая справка

Практика помилования была широко распространена по всему миру и берет свое начало в обществе Древних Афин, где практика, известная как adeia , способствовала демократическому помилованию лиц, которые добились одобрения 6000 граждан путем тайного голосования. Хотя источником его силы помилования не была привилегия исполнительной власти, нетрудно найти сходство в древней концепции adeia и нынешней практике рассмотрения таких факторов, как общественное мнение о человеке, которого добивались помилования.

Концепция милосердия использовалась древними римлянами. Основная цель — получить политическое преимущество. Римляне использовали силу помилования, чтобы контролировать массы солдат и граждан. Например, римляне выбрали каждую десятую армию отрядами преступников и тем самым внушили страх и дисциплину оставшимся солдатам.

Положение в Индии в контексте помилования сильно отличалось от положения Афин и римлян. В Индии король считался главой государства, и жизнь человека была полностью в руках короля, он может наказать его или может помиловать его, но некоторым слоям общества смертные приговоры не выносились. как преступники брамины, старики и дети младше 5 лет.

г. Во времена британского правления власть милосердия была наделена британским монархом. В системе общего права право помилования рассматривается как акт милосердия, при котором Король прощает любого преступника. Итак, хорошо сказано, что сила милосердия к людям — это не наивное понятие.

Милосердие в разных странах

Американская конституция предусматривает, что президент может предоставлять отсрочку или помилование в соответствии со статьей II раздела 2 против Соединенных Штатов, за исключением случая импичмента, и включает в себя право переводить штрафы, пени и конфискации, за исключением денег, покрываемых казначейство или выплачено информатору.

Современная концепция права помилования в Соединенных Штатах предполагает, что ни Конгресс, ни суды не могут нарушать полномочия президента помиловать. Право на помилование — это перечисленное право самой конституции, которое упоминается в статье 2 Конституции США, что оно не может быть использовано в случае импичмента.

В Великобритании конституционный монарх может помиловать осужденный с помощью и советом совета министров. Помилование может быть абсолютным и условным.Он является условным, если он не вступает в силу до тех пор, пока получатель гранта не выполнит определенное действие или не уклонится от него.

В Канаде вопрос о помиловании рассматривается Национальной комиссией по условно-досрочному освобождению в соответствии с Законом о судимости. Федеральный кабинет имеет право помиловать лиц, осужденных за уголовное преступление. Помилование может быть бесплатным или условным.

Объем помилования

Объем полномочий президента по помилованию в соответствии со статьей 72 Конституции Индии шире, чем полномочия губернатора по помилованию, указанные в статье 161 Конституции Индии. Статья 72 наделяет президента полномочиями по помилованию, отсрочке наказания, отсрочке или смягчению наказания либо приостановлению, смягчению или смягчению наказания любого лица, признанного виновным в совершении преступления, в следующих случаях:

В случае наказания военным трибуналом.
Если наказание предусмотрено за нарушение закона, относящегося к вопросам исполнительной власти союза.
Где приговор — смертная казнь.

Статья 161 наделяет губернатора правом помилования в определенных случаях.Губернатор штата имеет право предоставить помилование, отсрочку, отсрочку или смягчение наказания, а также приостановить, отменить или смягчить наказание любого лица, осужденного за любое преступление.

Полномочия президента и губернатора различаются следующим образом:

Полномочия президента по помилованию распространяются на случаи, когда наказание выносится военным трибуналом, но статья 161 не предоставляет такие полномочия губернатору в соответствии с Конституцией Индии.
Президент может разрешить помилование во всех случаях, когда вынесен смертный приговор, но право помилования губернатора не распространяется на случаи вынесения смертных приговоров.

Помилование — это акт милосердия, прощения, помилования. Конституция Индии уполномочивает президента и губернаторов помиловать или прощать любого человека. Президенту дается право помилования с тем, чтобы в законодательстве были положения, спасающие человека от последствий наказания, назначенного судебной властью по неосторожности или ошибке в отношении этого человека.Именно по этой причине положение о помиловании включено в Конституцию Индии.

Согласно взглядам, которые высказываются о существовании помилования в наше время. Один из них включает гегелевский взгляд, который продвигает силу милосердия, которая укрепляет справедливость в обществе. Еще один, кто верит в теорию реабилитации и искупления. Считается, что у человека должен быть второй шанс стать хорошим человеком, и его рассуждения основаны на общественном благополучии.

Целью помилования является исправление судебных ошибок, поскольку ни одна человеческая система судебного управления не может быть свободна от недостатков.Помилование — это инструмент милосердия и способ исправить эту серьезную несправедливость либо на основании фактов, либо путем ожидаемого действия уголовных законов, о которых просто необходимо напомнить. Следовательно, право помилования является неотъемлемым элементом даже совершенной системы законов.

Право помилования президента не является абсолютным, но регулируется советом Совета министров. Основное развитие судебной системы в контексте статей 72 и 161, разрешающих судебный надзор.Судебный контроль — это независимая судебная власть, которая обеспечивает веру, закрепленную в Конституции Индии.

Всегда велись дебаты о том, должно ли право исполнительной власти на помилование подвергаться судебному контролю или нет. В ряде дел Верховный суд Индии издал закон о судебном пересмотре полномочий на помилование.

В деле Мару Рам против Союза Индии (1981) t конституционная коллегия Верховного суда постановила, что полномочия по помилованию в соответствии со статьей 72 должны осуществляться по рекомендации Совета министров.В данном случае Верховный суд сделал упор на британскую практику, придя к такому выводу относительно позиции Индии.

Верховный суд в деле Дхананджой Чаттерджи, псевдоним Дхана v . В деле штата Западная Бенгалия (1994 г.) было подтверждено ранее вынесенное решение по делу Мару Рам и сказано, что «власть в соответствии со статьей 72 и статьей 161 может осуществляться центральным правительством и правительством штата, а не президентом и губернатором по отдельности.Совет соответствующего правительства связывает главу государства ». В данном случае податель апелляции Дхананджой, охранник, был осужден и привлечен к ответственности за изнасилование и убийство, а также за преступление, предусмотренное статьей 380 Уголовного кодекса Индии, за кражу наручных часов Хетал Парех, 18-летней девушки в ее квартире. .

В деле из Кехар Сингх против Союза Индии ( 1989) коллегия из пяти судей Верховного суда подробно рассмотрела объем полномочий президента по помилованию в соответствии со статьей 72.Заявитель Кехар Сингх был осужден за убийство премьер-министра Смт. Приговор Индиры Ганди к смертной казни был подтвержден Высоким судом, и его апелляция в Верховный суд также была отклонена. Далее он подал прошение президенту о помиловании. Президент отклонил его ходатайство по совету союзного правительства, не приняв во внимание существо решения Верховного суда об утверждении смертного приговора. Суд высказал мнение, что президент при исполнении своих полномочий в соответствии со статьей 72 должен тщательно изучить представленные доказательства и прийти к другому выводу как о виновности Кехара Сингха, так и о вынесенном ему приговоре.Президент не изменяет, не изменяет и не отменяет протокол судебного заседания. Протокол судебного заседания остается нетронутым. Суду не нужно разъяснять конкретные руководящие принципы для осуществления власти в соответствии со статьей 72, это так потому, что полномочия в соответствии со статьей 72 имеют самую широкую амплитуду. Распоряжение Президента не подлежит судебному пересмотру по существу. Соответственно, было решено, что президент должен заново рассмотреть этот вопрос в соответствии с законом, изложенным в настоящем деле.

В историческом случае Epuru Sudhakar & Anr.v. Правительство штата Андхра-Прадеш, (2006), Верховный суд постановил, что помилование президента и губернатора в соответствии со статьями 72 и 161 подлежит судебному пересмотру.

Верховный суд установил определенные основания, по которым заявитель может потребовать судебного пересмотра полномочий о помиловании:

Если заказ передан без всякого напряжения ума.
Если приказ принят недействительным.
Если заказ передали по совершенно неактуальным соображениям.
Если заказ страдает от произвола.

Апекс Суд постановил, что в случаях необъяснимой задержки подачи прошения о помиловании срок от 6 до 12 лет, то в таких случаях смертные приговоры должны быть заменены пожизненным заключением. Существует множество факторов, по которым может быть оспорено решение о помиловании, например, психическое заболевание, возраст обвиняемого, отсутствие юридической помощи и т. Д. Суд также отметил, что эти полномочия возлагаются на высшие органы власти, то есть на президента или губернатора штата. , в зависимости от обстоятельств, и в статьях не упоминаются ограничения по словам, и они могут предоставить прощение как акт благодати и гуманности в соответствующих случаях.

Существует так много случаев, когда прошения о помиловании удовлетворялись президентом, используя свои полномочия в соответствии со статьей 72 Конституции Индии.

Говиндасами (2000) был осужден за убийство, зверски убив во сне своих родственников в 1984 году. Он принадлежал к бедной семье в Тамил Наду. Причина этого акта в том, что его родителей пытали из-за земельного спора. Его милостивые мольбы были отклонены много раз. Наконец, президент рассмотрел его прошение о помиловании, обнаружив, что «не было свидетеля» убийств, за которые он был осужден.

Дхармендра Сингх и Нарендра Сингх Ядав (1997 г.), осужденные за убийство в штате Уттар-Прадеш, были помилованы. В 1994 году они зверски убили семью из пяти человек, в том числе 15-летнюю девочку. Нарендра Сингх пытался изнасиловать ее за несколько дней до этого, но безуспешно вступил в сговор с Дхармендрой Сингхом, чтобы преподать им урок. Трое человек были обезглавлены, а 10-летний мальчик был брошен живым в огонь.

Другой пример — Шобхит Чамар (1998), безземельный сапожник из района Бихар Бхабуа, получивший помилование в 2011 году.Он был приговорен к смертной казни за убийство 6 членов семьи своего домовладельца из высшей касты, включая детей.

Дханаджой Чаттерджи (1994), обвиняемый, который был приговорен к смертной казни за преступление изнасилования и убийства в 1990 году и подал прошение о помиловании губернатору Западной Бенгалии. Он был повешен после четырнадцати лет ожидания, когда его просьба о помиловании была отклонена президентом из-за задержки с осуществлением своего помилования.

Ходатайство о помиловании Афзала Гуру (2003 г.), атаковавшего индийский парламент в 2001 г., и Азмаля Касаба, который был признан виновным в нападениях в Мумбаи и приговорен к смертной казни, недавно был отклонен президентом.

Помимо этого, есть много дел, по которым жалобы о помиловании находятся на рассмотрении президента. Призыв о милосердии Сушил Мару, обвиняемого в жестоком убийстве пятилетней девочки в 1995 году, и трех далитов из Бихара, осужденных за массовые убийства представителей высших каст, ожидает рассмотрения президентом.

Помилование президента очень важно, поскольку оно исправляет ошибки в судебной системе. Конституция в соответствии со статьей 72 уполномочивает президента помиловать, приостанавливать, смягчать или смягчать приговоры, включая смертный приговор.Параллельные полномочия также даны губернатору штата в соответствии со статьей 161. Поскольку судебный надзор имеет первостепенное значение в нашей Конституции, право помилования президента и губернатора подчиняется ограниченной судебной власти. Это хорошее развитие, поскольку оно предотвращает злоупотребление этой конституционной властью недобросовестными политиками в пользу людей, обладающих властью и влиянием.

Если эта власть используется должным образом судебной властью и неправильно используется исполнительной властью, тогда было бы полезно устранить недостатки судебной системы.Фраза «Отложенное правосудие — отказ в правосудии» подходит для помилования, поскольку во многих случаях возникает необъяснимая задержка с ответом на прошения. Если на разрешение вопроса уйдет много времени, то помилование будет скорее отказом в правосудии, чем способом правосудия.

Компания LawSikho создала группу телеграмм для обмена юридическими знаниями, рекомендациями и различными возможностями. Вы можете перейти по этой ссылке и присоединиться:

https://t.me/joinchat/J_0YrBa4IBSHdpuTfQO_sA

Следуйте за нами в Instagram и подпишитесь на наш канал YouTube, чтобы получать больше потрясающего юридического контента.

границ | Радиоактивное мечение альбумина сыворотки человека с помощью тербия-161 в мягких условиях и оценка стабильности in vivo

Введение

Тербий — новый тераностический элемент, содержащий четыре важных с медицинской точки зрения радиоизотопов (¹⁴⁹ Tb, ¹⁵² Tb, ¹⁵⁵ Tb и ¹⁶¹ Tb) (1). Например, ¹⁵² Tb (β ⁺ эмиттер, t _1/2 = 17,5 ч, Eβср. + = 1,140 МэВ) и ¹⁵⁵ Tb (EC, γ-излучатель, t _1/2 = 5.32 дня, Eγ = 0,105 МэВ) можно использовать в диагностических приложениях, таких как позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) и однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ), соответственно (1, 2). ¹⁴⁹ Tb (α-излучатель, t _1/2 = 4,12 ч, Eα = 3,97 МэВ) и ¹⁶¹ Tb (β ^— излучатель, t _1/2 = 6,90 суток, Eβсредн. = 0,154 МэВ ) с другой стороны, может применяться в целевой альфа (α) и бета (β) терапии соответственно (3–5). После того, как радиомечение оптимизировано для одного радионуклида, тот же протокол можно использовать для включения других изотопов тербия.

Из-за схожего процесса распада и физического периода полураспада ¹⁶¹ Tb часто считается многообещающей альтернативой для ¹⁷⁷ Lu (β ^— эмиттер, t _1/2 = 6,7 дня, Eβсредн. = 0,134 МэВ ) (4, 6), который стал золотым стандартом бета-терапии с момента клинического утверждения Lutathera® ([¹⁷⁷ Lu] Lu-DOTATATE) для лечения нейроэндокринных опухолей (7, 8). В исследовании Müller et al. (9) было исследовано прямое сравнение терапевтического эффекта двух радиоизотопов.Был сделан вывод, что [¹⁶¹ Tb] Tb-cm09 имел повышенную эффективность по сравнению с [¹⁷⁷ Lu] Lu-cm09 (9). В последующем исследовании с использованием простатоспецифического мембранного антигена (PSMA), нацеленного на радиофармпрепарат, наблюдалась повышенная выживаемость мышей с опухолью простаты при лечении [¹⁶¹ Tb] Tb-DOTA-PSMA-617 по сравнению с [¹⁷⁷ Lu] Lu-DOTA-PSMA-617 (3). Было высказано предположение, что дополнительная эффективность ¹⁶¹ Tb обусловлена дополнительным терапевтическим эффектом электронов Оже / конверсии (E _e- = 36 кэВ) (3, 4, 9, 10).Помимо терапевтической мощности ¹⁶¹ Тб, существует совместное излучение гамма-излучения (Eγ = 49 кэВ, I = 17,0%; Eγ = 75 кэВ, I = 10,2%) (4), что может быть использовано для ОФЭКТ-изображение [аналогично ¹⁷⁷ Lu (Eγ = 113 кэВ, I = 6,17%, Eγ = 208 кэВ, I = 10,36%)] (11, 12), как показано в первом приложении [^{], сделанном человеком. 161} Tb] Tb-DOTATOC (13).

Радиомечение векторной молекулы изотопом тербия осуществляется с помощью специальных бифункциональных хелатирующих агентов (1).Эти бифункциональные агенты часто неспецифично связываются с биологическими векторными молекулами посредством реакций со свободными лизинами (например, с использованием бифункциональных хелаторов, содержащих активированные сложные эфиры или изотиоцианатные группы) или сайт-специфически связываются с группами цистеина (например, с использованием тиол- химия малеимида) (14). Хелатирующие агенты, такие как макроциклические 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусная кислота (DOTA) и лиганды типа ациклической диэтилентриаминпентауксусной кислоты (DTPA), обладают высоким сродством к лантаноидам и имеют На протяжении десятилетий широко использовался радиофармацевтическим сообществом (2, 15–17).В идеале, чтобы обеспечить радиоактивное мечение термочувствительных векторных молекул, лиганды должны сочетать стабильную природу связи DOTA-металл и быструю кинетику реакции хелаторов DTPA (18). В последние годы такие лиганды, как [4- [2- (бис-карбоксиметиламино) этил] -7-карбоксиметил- [1,4,7] триазонан-1-ил] уксусная кислота (NETA), также недавно стали привлекли внимание, поскольку они имеют гибридную структуру между гибким каркасом DTPA и жестким ядром DOTA (19, 20).

До сих пор сообщалось о большинстве реакций мечения тербием с лигандами и пептидами, которые совместимы с высокими температурами радиоактивного мечения (3, 9).Радионуклидная терапия на основе биомолекул, например использование трастузумаба для лечения рака со сверхэкспрессией рецептора-2 эпидермального фактора роста человека (HER-2), проложила путь к более целенаправленному подходу к тераностике (21). Мечение тербием и большинством других элементов f-блока проводилось при температурах (> 90 ° C), значительно превышающих температуры, совместимые с термочувствительными биомолекулами, такими как моноклональные антитела и фрагменты антител (22). В этом исследовании мы разработали протокол мягкого радиоактивного мечения (температура реакции 40 ° C в водном буфере) с рядом обычно используемых бифункциональных лигандов (рис. 1).Затем мы использовали человеческий сывороточный альбумин (HSA, 66,5 кДа) в качестве модельного белка для оценки стабильности in vitro и in vivo соответствующих ¹⁶¹ Tb-меченных конъюгатов HSA. Высокая растворимость, стабильность и период полувыведения из плазмы, составляющий приблизительно 16-18 часов, делают HSA идеальным вектором для оценки стабильности ¹⁶¹ Tb-хелатов in vivo .

Рисунок 1 . Химическая структура бифункциональных хелаторов, используемых в этом исследовании.

Материалы и методы

Материалы

Реагенты, если не указано иное, были приобретены у Sigma-Aldrich (Борнем, Бельгия) и использованы без дополнительной очистки. Растворители были приобретены в VWR (Лёвен, Бельгия) или Sigma-Aldrich и использовались без дополнительной очистки. p. -SCN-Bn-CHX-A ”-DTPA ( DTPA ) и p. -SCN-Bn-DOTA ( DOTA ) были приобретены у Macrocyclics, Inc. (Техас, США), и p. -NCS-Bz-DOTA-GA ( DOTA-GA ) был приобретен у CheMatech (Дижон, Франция) и использован без дополнительной очистки.3 p -C-NETA-NCS ( NETA ) был синтезирован и охарактеризован согласно литературным методам (19). Все буферы для радиоактивной метки перемешивали с хелексом [натриевая форма Chelex 100 (50–100 меш, Sigma Aldrich)] для удаления следов металлов в течение 15 минут, а затем фильтровали для удаления гранул хелекса. Все растворы перед использованием дегазировали и фильтровали.

Животные

Здоровых мышей-альбиносов ВМС (NMRI) (возраст: 6–8 недель, Envigo, Gannat, Франция) содержали в индивидуально вентилируемых клетках (IVC) в регулируемой среде (22 ° C, влажность, 12 часов день / ночь. цикл), с пищей и водой.Эксперименты на животных проводились в соответствии с бельгийскими правилами практики, а использование экспериментов на животных было одобрено этическим комитетом по уходу за животными из KU Leuven.

Контрольно-измерительные приборы и характеристики

Масс-спектры записаны на времяпролетном масс-спектрометре сверхвысокого разрешения с ионизацией электрораспылением (ESI) (Bruker MaXis Impact, Бремен, Германия), подключенном к системе Dionex Ultimate 3000 UPLC (Thermo Fisher Scientific, США). . Количественную оценку концентрации белка определяли с использованием микрообъемного УФ-видимого спектрофотометра (NanoDrop One, Thermo Fisher Scientific).Обеспечение качества дериватизированных конструкций HSA и ¹⁶¹ Tb-HSA конструкций осуществляли с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) с использованием колонки Superdex 200 10/300 GL (GE Healthcare Bio-Science AB, Уппсала, Швеция) с элюированием натрий-фосфатный буфер (0,15 М хлорид натрия, 0,01 М фосфат, pH 7,4, Thermo Fisher) при скорости потока 0,75 мл / мин. Выходящий из колонки поток пропускали через УФ-детектор (детектор 2998 PDA, Waters) последовательно с 3-дюймовым детектором радиоактивности NaI (Tl).Гамма-счет был выполнен на Wizard ² 3470 [кристалл: NaI (Tl), 50 мм в высоту, 32 мм в диаметре, мертвое время 2,5 мкс; Perkin Elmer, Германия], с профилем обнаружения распада ¹⁶¹ Tb (4). В счетчики были внесены поправки на радиационный фон, физический распад и мертвое время счетчика.

Производство [

¹⁶¹ Tb] TbCl ₃

[¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ получали с использованием метода, адаптированного из литературы (4). Вкратце, обогащенный ¹⁶⁰ Gd ₂ O ₃ (1.0 мг, 98,2%, Isoflex USA) загружали в виде нитратной соли в кварцевую ампулу и герметично закрывали. Ампулу запаивали внутри алюминиевой капсулы и облучали в течение 10 дней в реакторе BR2 Бельгийского центра ядерных исследований (SCK CEN) при потоке тепловых нейтронов 3,0 · 10 ¹⁴ н / см ² / с. После облучения и последующего охлаждения в течение 5 дней облученный материал растворяли в воде с чистотой следов металлов. Для отделения [¹⁶¹ Tb] от [¹⁶⁰ Gd] целевой матрицы элюированием α-гидроксиизомасляной кислотой с гидроксидом аммония (чистота следовых металлов) (добавляется для доведения pH до 4.5). Собранные фракции, содержащие [¹⁶¹ Tb], объединяли и концентрировали, загружая их на колонку, заполненную экстракционной смолой (ø: 2,1 мм, l: 30 мм, LN3, TrisKem International), и элюировали 50 мМ соляной кислотой (следы- без металла). Выделенные растворы [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ имели радионуклидную чистоту 99,998% (определено с помощью гамма-спектроскопии), концентрацию ~ 0,99 МБк / мкл и удельную активность ~ 3,6 ТБк / мг.

Конструкции лиганда сывороточного альбумина человека (HSA)

Пяти молярный избыток бифункционального лиганда (3 мкмоль) в 200 мкл раствора бикарбоната натрия (0.05 M, pH 8,5, 1,5% DMSO) по каплям добавляли к перемешиваемому раствору сывороточного альбумина человека (400 мкл, 0,6 мкмоль, CAF-DCF, Брюссель, Бельгия) в бикарбонате натрия (0,05 M, pH 8,5) во флаконе LoBind. (Эппендорф, Арсхот, Бельгия). Затем смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре и конъюгат очищали с использованием картриджа для эксклюзионной хроматографии (колонка PD-10, GE Healthcare Bio-Science AB, Упсала, Швеция), элюируя натрий-ацетатным буфером (0,1 М, pH 4,7. ). Концентрацию конструкции HSA-лиганд в конечном продукте реакции определяли с помощью спектрофотометрии при 280 нм (NanoDrop® One, Thermo Fisher Scientific) с ε = 35 700 л / моль / см и M = 66 477 г / моль.Очищенный продукт анализировали с помощью SEC, используя метод, описанный выше. УФ-детектирование элюата проводили при 280 нм. Количество хелаторов на белок оценивали с помощью анализа ESI-TOF-HRMS с учетом наиболее распространенного пика. Система была оборудована колонкой Waters Acquity UPLC BEH C18 (1,7 мкм 2,1 × 50 мм, Waters, Милфорд, США) с использованием градиента при скорости потока 0,6 мл / мин с подвижной фазой A: H ₂ O, 0,1%. HCOOH и подвижная фаза B: ацетонитрил, 0,1% HCOOH. Колонку нагревали до 40 ° C. Градиент элюирования составлял: 0-2 мин: 95% А; 2–8 мин: от 95% А до 5% А; 8–10 мин: 5% А; 10–12 мин: от 5% A до 95% A. Расчетные значения массы молекулярных ионов были получены с использованием программного обеспечения Compass Isotope Pattern (версия 3.2, Bruker). HSA-DTPA : ESI-MS m / z (разложение) рассчитано для HSA [66,477,96] + C ₅₂ H ₆₈ N ₈ O ₂₀ S ₂ · H ₆ Cl ₆ [1,296,33]: 67 852,22. Найдено: 67 852,20 (81,9%). HSA-DOTA : ESI-MS m / z (разл.) рассчитано для HSA [66 477,96] + C ₄₈ H ₆₆ N ₁₀ O ₁₆ S ₂ · H ₃ Cl ₃ [1,210,34]: 67 688,30. Найдено: 67 687,74 (31,4%). HSA-DOTA-GA : ESI-MS m / z (разложение) рассчитано для HSA [66,485,42] + C ₅₄ H ₇₆ N ₁₂ O ₁₈ S ₂ · C ₂ H ₄ O ₄ [1336,50]: 67 821,91. Найдено: 67 821,87 (95,2%). HSA-NETA : ESI-MS m / z (разл.) рассчитано для HSA [66,457,96] + C ₅₂ H ₇₄ N ₁₀ O ₁₆ S ₂ · C ₂ O ₅ H ₆ [1,268,49]: 67,726,46. Найдено: 67 726,63 (80,1%).

Исследования радиомечения с [

¹⁶¹ Tb] TbCl ₃

Оптимизация условий радиоактивной метки: [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ (0,2 МБк, 10 мкл, 50 мМ HCl) добавляли к 90 мкл раствора с различными количествами лиганда ( DTPA, DOTA, DOTA-GA или NETA , 0.1-1,0 нмоль) в буфере ацетата натрия (0,1 М, pH 4,7, обработанный хелексом) и прореагировал в стеклянном флаконе в течение 60 мин при 25 или 40 ° C ( n = 3). Радиохимический выход каждой реакционной смеси определяли с помощью мгновенной тонкослойной жидкостной хроматографии (iTLC-SG, Varian, Diegem, Бельгия). Бумаги iTLC-SG были проявлены в элюирующей камере с использованием ацетонитрила / воды (75/25). Распределение активности на хроматограммах iTLC количественно оценивали с помощью авторадиографии с накоплением люминофора [экран с сверхвысоким разрешением, Perkin Elmer, Waltham, США, обработанный в системе Cyclone Plus (Perkin Elmer) и проанализированный с использованием программного обеспечения Optiquant (Perkin Elmer)].

Радиоактивно меченные конструкции HSA: Очищенные конструкции HSA метили с использованием 10 мкМ конъюгата HSA (90 мкл) с [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ (0,2 МБк, 10 мкл, 50 мМ HCl) при 40 ° C. в течение 60 мин ( n = 3). Радиохимические выходы определяли с помощью iTLC-SG, элюируя натрий-цитратным буфером (0,1 М, pH 5,8). Радиоактивно меченые HSA-конструкции дополнительно анализировали с помощью радио-SEC, используя метод, описанный выше.

In vitro Исследования стабильности

Стабильность лигандных комплексов в фосфатно-солевом буфере pH 7.4. Радиоактивно меченые лиганды очищали с использованием картриджа C18 Plus SEP-PAK (Waters, Антверпен, Бельгия) путем загрузки реакционной смеси, промывки водой (5 мл) для удаления непрореагировавшего [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ и элюируя очищенный комплекс абс. этанол (0,5 мл). 80 мкл этанольного раствора добавляли к 720 мкл натрий-фосфатного буфера (0,15 М хлорид натрия, 0,01 М фосфат, pH 7,4, Thermo Fisher) и инкубировали при 37 ° C ( n = 3). Образцы собирали в разные моменты времени (10 мин, 1 час, 4 часа и 24 часа), и процент интактного Tb-комплекса ¹⁶¹ определяли с использованием той же хроматографической системы iTLC, которая использовалась выше.

Стабильность HSA-лиганда в сыворотке крови человека: после радиоактивной метки и без очистки 50 мкл раствора для радиоактивной метки ¹⁶¹ Tb-HSA добавляли к 720 мкл сыворотки человека (Sigma Aldrich) и инкубировали при 37 ° C ( n = 3). Образцы собирали в разные моменты времени (10 мин, 1 час, 4 часа и 24 часа), и процентное содержание интактной конструкции ¹⁶¹ Tb-HSA определяли с использованием той же системы мгновенной тонкослойной жидкостной хроматографии, которая использовалась для радиоактивного мечения и относительно начального радиохимического выхода. Стабильность in vitro была подтверждена с помощью метода радио-SEC, описанного выше, через 1, 4 и 24 часа.

Конкурсные исследования с ЭДТА: после радиоактивной метки и без очистки 50 мкл раствора радиоактивной метки ¹⁶¹ Tb-HSA добавляли к 50 мкл раствора ЭДТА (10 мМ, 0,1 М PBS, pH 7,4, Sigma Aldrich) и инкубировали при 37 ° С. С ( n = 3). Образцы собирали в разные моменты времени после инкубации (1 час, 4 часа и 24 часа), и процент интактной конструкции ¹⁶¹ Tb-HSA определяли с использованием того же метода iTLC, упомянутого выше.

Исследования биораспределения

Мышей анестезировали 2,5% изофлураном в O ₂ при потоке 1 л / мин и вводили ~ 1 МБк [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ или ¹⁶¹ конструкцией Tb-HSA (0,1–0,3 nmoles) через хвостовую вену. Животных умерщвляли декапитацией через 10 минут, 1 час, 4 часа, 24 часа или 7 дней после инъекции ( n = 3 животных на момент времени). Кровь и органы собирали в пробирки, взвешивали и определяли радиоактивность с использованием автоматического гамма-счетчика, как описано выше. Результаты представлены в виде стандартизованных значений поглощения [SUV; определено с использованием SUV = (MBq _ткани / г _ткани) / (MBq _{инъецировано} / г _мыши)]. Для расчета процента введенной дозы (% ID) в крови, костях и мышцах масса была принята равной 7, 12 и 40% от веса тела мыши соответственно (23, 24). Точки данных крови (% ID _{, рассчитанный}) были подогнаны к стандартному уравнению периода полураспада (регрессионный анализ методом наименьших квадратов),% IDcalc = A · 0,5kΔt, где A = константа, Δt = часы после инъекции (ч), и k = 1 / период полураспада в плазме (h ^-1).

Статистический анализ

Количественные данные выражены как среднее ± стандартное отклонение, если не указано иное. Средние значения сравнивали с использованием смешанной модели анализа ANOVA в GraphPad Prism 9.1.2. Значения были определены как статистически значимые для значений p меньше порогового значения 0,05.

Результаты

Оптимизация условий радиоактивной маркировки для низкотемпературной маркировки

Эффективность радиомечения всех лигандов ( DTPA, DOTA, DOTA-GA, NETA ) оценивалась с использованием четырех различных концентраций лиганда (0.1, 1, 5 и 10 мкМ) при 25 ° C и 40 ° C через 60 мин времени реакции. Результаты радиоактивной метки можно найти на рисунках 2A, B. Мечение радиоактивным изотопом DTPA привело к эффективности радиомечения> 98% при всех испытанных концентрациях, даже при 25 ° C. Для всех других лигандов требуется температура 40 ° C для эффективного (> 90%) хелатирования иона тербия (III). Радиоактивное мечение с использованием NETA при 40 ° C привело к количественным выходам для всех исследованных концентраций лиганда (эффективность мечения> 97%).И DOTA , и DOTA-GA требовали более высоких концентраций для достижения достаточной эффективности радиомечения.

Рисунок 2 . Радиохимический выход [¹⁶¹ Tb] Tb- L (где L = DTPA, DOTA, DOTA-GA или NETA ) при 25 ° C (A) и 40 ° C (B ) через 60 мин. Красная линия вставлена для обозначения количественного выхода (95%).

In vitro Стабильность радиоактивно меченных лигандов

Металл-лиганд in vitro стабильность определяли в фосфатно-солевом буфере (PBS, pH 7.4) при 37 ° C и анализировали в течение 24 часов (Рисунок 3). Количество ¹⁶¹ Tb, связанное с лигандом, было отнесено к исходной радиохимической чистоте. Для систем лигандов DTPA, DOTA и NETA > 95% металла все еще хелатировалось с лигандом через 24 часа. Было обнаружено, что лиганд DOTA-GA сохранил только 92,1 ± 6,8% исходной радиохимической чистоты за тот же период.

Рисунок 3 . In vitro стабильность ¹⁶¹ Tb-радиоактивно меченных комплексов в PBS при 37 ° C.

Синтез, радиомечение и

in vitro Стабильность конъюгатов сывороточного альбумина человека

DTPA, DOTA, DOTA-GA или NETA реагировал с HSA в молярном избытке 5: 1. HSA-конструкции очищали с использованием картриджа для исключения размера и анализировали с помощью HPLC-SEC. Было обнаружено, что неконъюгированный человеческий сывороточный альбумин удерживается в колонке исключения размера в течение 19 минут, а конструкции хелатора с HSA элюируются при том же времени удерживания (дополнительные рисунки 1–6).Конструкции анализировали с помощью масс-спектрометрии для определения количества лигандов, присоединенных к белку HSA. Увеличение на 1000–1300 Да наблюдалось для каждого конъюгата, что указывает на среднее количество двух хелаторов на молекулу альбумина. Данные масс-спектров приведены в таблице 1.

Таблица 1 . Данные масс-спектра HSA и соединения L-HAS.

HSA-конъюгаты и неконъюгированный HSA метили радиоактивным изотопом в концентрации 10 мкМ [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ при 40 ° C для обеспечения максимального радиохимического выхода.HSA (не конъюгированный с каким-либо хелатирующим агентом) координировал только 6,0 ± 1,2% [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ в реакционной смеси. Все исследуемые конъюгаты были помечены с количественным выходом (> 98%) (дополнительная таблица 1), как определено с помощью iTLC и радио-SEC-HPLC (дополнительные рисунки 3–6). Радиоактивно меченые конструкции (без дополнительной очистки) добавляли к сыворотке человека и инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов. [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA -HSA, [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA-GA -HSA и [¹⁶¹ Tb] Tb- NETA -HSA остались нетронутыми (> 93%) не менее 24 часов.Напротив, только 87,5 ± 2,6% радиометалла оставалось скоординированным с [¹⁶¹ Tb] Tb- DTPA -HSA через 24 часа (рис. 4). Хроматограммы радио-SEC-HPLC ¹⁶¹ Tb-меченных конъюгатов HSA представлены во вспомогательной информации (дополнительные рисунки 7–10). Для оценки чувствительности к трансхелатированию меченые конъюгаты HSA инкубировали с 1000-кратным избытком ЭДТА (дополнительная фигура 11). Как наблюдалось в предыдущем исследовании, из системы лигандов DTPA -HSA было выщелочено ¹⁶¹ Tb, причем только 64.4 ± 0,9% от исходных ¹⁶¹ Tb оставалось связанным с HSA через 24 часа при 37 ° C. Для других конъюгатов> 90% исходной фракции радиометалла оставалось связанным с HSA через 24 часа.

Рисунок 4 . In vitro стабильность ¹⁶¹ Tb-радиоактивно меченных HSA-комплексов в сыворотке крови человека при 37 ° C. Значимые значения выражаются как P <^* 0,05, ^** 0,01, ^*** 0,001, ^**** 0,0001.

Ex vivo Биораспределение [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ и ¹⁶¹ Tb-меченных конъюгатов HSA

HSA-конъюгаты метили [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ и вводили мышам внутривенно (хвостовая вена). Кроме того, контрольной группе вводили [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ (PBS, pH 7,4) для идентификации органов, в которых накапливается ¹⁶¹ Tb в случае его выщелачивания из комплекса. Неконъюгированный [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ показал высокое накопление в костях и печени (рис. 5; таблица 2; дополнительные таблицы 4–6). Через четыре часа после инъекции [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ для кости и печени наблюдались SUV 5,0 ± 0,5 (60,2 ± 6,4% ID) и 4,1 ± 0,4 (23,8 ± 2,5% ID) соответственно.Отношение костной ткани к крови 4,8 ± 3,8 наблюдалось уже через 1 час после инъекции (p.i.), и это значение дополнительно увеличивалось, достигая отношения кости к крови 39,3 ± 13,0 через 4 часа p.i. (Дополнительная таблица 2). Период полураспада свободного [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ в крови составлял около 0,4 часа (дополнительная фигура 17). Как и следовало ожидать, конструкции HSA не показали какого-либо специфического накопления в какой-либо ткани-мишени. Не наблюдалось значительной активности костного поглощения [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA -HSA, [¹⁶¹ Tb] Tb- NETA -HSA и [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA- Конъюгаты GA -HSA (рисунки 6A – D, таблица 2).Напротив, у мышей, которым вводили [¹⁶¹ Tb] Tb- DTPA -HSA, наблюдалось увеличение поглощения костной тканью (SUV: 0,8 ± 0,3 и 1,1 ± 0,3 через 24 часа и 7 дней после инъекции, соответственно) в зависимости от время (таблица 2), что предполагает диссоциацию in vivo и абсорбцию свободного ¹⁶¹ Tb в кости. Период полужизни в крови конструкций HSA был значительно больше, чем для [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ (8-15 часов, дополнительные рисунки 17-21). Стандартизированные графики значений поглощения представлены на Рисунке 6, а диаграммы активности в% введенных — на дополнительных рисунках 12–16.Значения% ID,% ID / g и SUV представлены в дополнительных таблицах 4–18.

Рисунок 5 . Биораспределение [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃, выраженное в стандартизованных значениях поглощения на орган.

Таблица 2 . Внедорожные значения поглощения костной тканью у здоровых мышей.

Рисунок 6 . Биораспределение [¹⁶¹ Tb] Tb- DTPA -HSA (A) , [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA -HSA (B) , [¹⁶¹ Tb] DOTA- -GA -HSA (C) и [¹⁶¹ Tb] Tb- NETA -HSA (D) , выраженные в стандартизованных значениях поглощения на орган (* n = 2).

Обсуждение

В этом исследовании мы стремились разработать методы, позволяющие маркировать термочувствительные биомолекулы радиоактивным изотопом ¹⁶¹ Tb. Ряд лигандов был предварительно выбран на основе их хелатирующей способности лантаноидов, описанной в литературе (20, 25, 26). Для каждого лиганда мы оценили влияние концентрации лиганда и температуры на выход радиоактивной метки. Наконец, была оценена стабильность различных комплексов лигандов in vitro и in vivo .

Координация тербия чувствительна к pH, так как слишком низкий pH блокирует координацию карбоксильной группы, которая является основным координирующим фрагментом интересующих лигандов (дополнительная таблица 3). В водных растворах тербия гидролиз (образование видов Tb (H ₂ O) _x (OH) _y) будет происходить при повышенном pH (pH ~ 6–7,6) (3, 10, 12, 27–29). ). Гидролиз резко снизит или предотвратит общее образование комплекса Tb-лиганд, что можно смягчить путем повышения температуры во время радиоактивного мечения.Мы выбрали условия с низким pH [буфер ацетата натрия (0,1 M, pH 4,7)], чтобы предотвратить гидролиз и обеспечить низкотемпературное хелатирование Tb. При мечении лиганда DTPA радиоактивной меткой наблюдались количественные радиохимические выходы (> 98%) для всех исследованных условий. Инкубации реакционной смеси при 25 ° C было достаточно для получения количественных выходов даже при низких концентрациях лиганда (рис. 2А). Это можно объяснить гибкой природой линейного каркаса DTPA, которая облегчает хелатирование иона тербия (III) (1).При 25 ° C радиохимические выходы DOTA и DOTA-GA были ниже, с максимальным радиохимическим выходом 91% (10 мкМ). Этого можно было ожидать, учитывая более жесткое тетраазовое кольцо последних двух лигандных структур. Повышение температуры до 40 ° C не привело к изменению максимальных выходов, полученных для более высоких концентраций DOTA и DOTA-GA , но позволило улучшить радиохимические выходы при низких испытанных концентрациях (рис. 2B). Наконец, для NETA средний радиохимический выход ~ 60% наблюдался при 25 ° C, но количественные выходы (> 95%), сравнимые с DTPA , были получены при 40 ° C.Гибридная природа каркаса NETA может объяснить радиохимические выходы, аналогичные DOTA и DOTA-GA при 25 ° C. Однако небольшое повышение температуры, по-видимому, обеспечивает достаточно энергии, чтобы тербий (III) более эффективно встраивался в карман для связывания хелатора.

Стабильность связи ¹⁶¹ Tb-лиганд оценивалась в фосфатно-солевом буферном растворе (pH 7,4) при 37 ° C в течение 24 часов с использованием мгновенной тонкослойной хроматографии (рис. 3).В конце исследования> 95% (относительно исходной радиохимической чистоты) металла оставалось нетронутым для комплексов с DTPA, DOTA и NETA . Комплекс с DOTA-GA оказался наименее стабильным: 92,1 ± 6,8% исходного хелатного металла осталось неизменным через 24 часа.

После оптимизации условий радиоактивной метки мы использовали эти оптимизированные условия для радиоактивной метки конъюгатов HSA в качестве доказательства концепции. HSA представляет собой термочувствительную молекулу и является наиболее распространенным белком в крови, необходимым для транспорта многих белков по организму (30, 31). Он имеет увеличенный период полужизни в сыворотке (30), что также делает его полезным для определения долгосрочной стабильности in vivo радиоактивно меченных конъюгатов. Кроме того, поскольку HSA циркулирует в крови и демонстрирует минимальное физиологическое накопление в ткани, это идеальный инструмент для оценки диссоциации и потенциального накопления свободного радиометалла в других тканях. Бифункциональные лиганды конъюгировали с HSA нерегиоселективно, используя лизиновое связывание. Лиганды реагировали с HSA с получением конъюгатов L -HSA (где L = DTPA, DOTA, DOTA-GA или NETA ) и анализировали с помощью УФ-ВЭЖХ и масс-спектрометрии высокого разрешения.Только один пик (Rt = 19 мин) был зарегистрирован в УФ-канале ( L -HSA), и время их удерживания идентично времени удерживания недериватизированного HSA (дополнительные рисунки 1, 3–6). Никаких продуктов агрегации или разложения с помощью SEC-HPLC не наблюдалось. Кроме того, масс-спектрометрия высокого разрешения использовалась для оценки количества лигандов, конъюгированных с HSA для каждого конъюгата. Неконъюгированный HSA использовали в качестве эталона для расчета количества молекул лиганда, которые конъюгированы (66477-66485 Да) с HSA.Молекулярная масса всех конъюгатов увеличилась на 1000–1300 Да по сравнению с HSA, что позволяет предположить, что конъюгаты имеют в среднем два лиганда на фрагмент HSA (Таблица 1).

Используя оптимизированные условия мечения (60 мин, 40 ° C), конструкции HSA L -HSA метили радиоактивным изотопом ¹⁶¹ Tb, и реакционную смесь мечения анализировали с помощью iTLC и радио-SEC. Кроме того, недериватизированный HSA инкубировали с [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃, чтобы определить, есть ли какое-либо связывание тербия с белком, не связанное с хелатирующим агентом.Было обнаружено, что конъюгаты, меченные ¹⁶¹ Tb ([¹⁶¹ Tb] Tb- L -HSA), имеют радиохимическую чистоту> 98% для всех конструкций. Напротив, неконъюгированный HSA имел радиохимическую чистоту всего 6,0 ± 1,2%, что позволяет предположить, что минимальное комплексообразование ¹⁶¹ Tb происходит в отсутствие хелатора (дополнительная таблица 1). РадиоВЭЖХ-анализ конструкций HSA подтверждает успешную координацию ¹⁶¹ Tb с исследуемыми конъюгатами HSA (дополнительные рисунки 1–6).

После инкубации в сыворотке человека радиохимическая чистота выше 95% поддерживалась для радиоактивно меченных конструкций HSA [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA -HSA, [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA-GA -HSA и [¹⁶¹ Tb] Tb- NETA -HSA за 24-часовой период исследования. [¹⁶¹ Tb] Tb- DTPA -HSA имело заметное снижение радиохимической чистоты через 24 часа с 98,6 ± 0,5% до 88,1 ± 1,3%. Это обычно наблюдается с лигандами, несущими хелатный каркас DTPA, так как он часто обозначается как лиганд, «легко получаемый» для металлов (18). В исследовании конкуренции с EDTA (1000 × молярный избыток), [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA -HSA, [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA-GA -HSA и [¹⁶¹ Tb] Tb — NETA -HSA обнаружил минимальную транскелляцию ¹⁶¹ Tb, при этом> 90% металла все еще связано с L-HSA. Напротив,> 35% из ¹⁶¹ Tb трансхелировалось из DTPA -HSA в EDTA (дополнительная фигура 11). Эти результаты in vitro показывают, что DTPA — плохой выбор для хелатирования тербия.

Как описано ранее, HSA можно использовать в качестве эффективного модельного белка для оценки стабильности in vivo и радиоактивно меченных комплексов (30). Сначала было выполнено биораспределение с [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃, чтобы определить его судьбу in vivo . Было обнаружено, что свободный [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ выводится из крови в течение первых 24 часов (рис. 5; дополнительные таблицы 4–6), а высокое поглощение и удерживание наблюдались в печени и костях, при этом наблюдались самые высокие значения. в 4 л.i (SUV _печень = 4,1 ± 0,4 и SUV _кость 5,0 ± 0,5). На 7-й день наблюдалось все еще высокое удержание радиоактивности в костях и печени (SUV _{, печень} = 1,4 ± 0,8, SUV _{, кость} = 3,5 ± 1,0), что приводило к сильному увеличению отношения костей к крови и костей к крови. соотношение мышц за 7-дневный период (дополнительная таблица 2). Высокое накопление радиоактивности в кости позволило нам идентифицировать эту ткань как индикатор вымывания радионуклида из радиофармпрепарата in vivo .Биораспределение конструкций HSA, меченных ¹⁶¹ Tb, показало ожидаемое накопление активности в органах с высоким содержанием крови (сердце, легкие, селезенка и т. Д.). Как наблюдалось для свободного [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃, в течение всего 7-дневного периода наблюдалось увеличение поглощения [¹⁶¹ Tb] Tb- DTPA -HSA костями и печенью (фиг. 6A). Через 7 дней после инъекции [¹⁶¹ Tb] Tb- DTPA -HSA, значение SUV _кости составляет 1,1 ± 0.3 наблюдалось. Это значительно выше ( P <0,001), чем для трех других конструкций ([¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA -HSA: SUV _bone 0,1 ± 0,0; [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA -GA -HSA: SUV _кость 0,1 ± 0,0; [¹⁶¹ Tb] Tb- NETA -HSA: SUV _кость 0,2 ± 0,1), что убедительно свидетельствует о том, что in vivo диссоциация металла из лиганда DTPA -HSA (Рисунки 6B – D). Этот результат, вместе с данными о стабильности in vitro в сыворотке человека и конкурентным исследованием EDTA, убедительно свидетельствует о том, что DTPA имеет быструю кинетику радиоактивной метки, но не сохраняет адекватно радиометалл после хелатирования.В тесте in vitro с сывороткой человека 10% радиоактивности [¹⁶¹ Tb] Tb- DTPA -HSA диссоциировало через 24 часа. Через 24 часа исследования in vivo показали 10% введенной активности в кости (дополнительная фигура 12), показывая хорошее соответствие между результатами in vitro и in vivo . Никакого увеличения сохранения активности печени и костей не наблюдалось в течение 7 дней после инъекции радиоактивно меченных конструкций с DOTA -HSA, DOTA-GA -HSA и NETA -HSA (Рисунки 6B – D), что свидетельствует о высоком уровне в vivo стабильность комплексов ¹⁶¹ Tb с лигандами DOTA, DOTA-GA и NETA по сравнению с DTPA .Это важный результат для дальнейших исследований радиоактивных изотопов тербия, поскольку каркас CHX-A ”-DTPA ( DTPA , рис. 1) часто рассматривается и используется в качестве общего хелатора для различных радиометаллов (32). DOTA, DOTA-GA и NETA имеют более жесткие каркасы, что может объяснить более стабильное хелатирование металлов in vivo .

Как и ожидалось, радиоактивно меченные конструкции HSA дольше удерживались в крови по сравнению с [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃.Биологический период полувыведения из крови увеличился с 0,4 часа (свободный [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃, дополнительный рисунок 17) до 8–14 часов ([¹⁶¹ Tb] Tb- DTPA -HSA: 14,8 часа; [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA -HSA: 8,6 ч; [¹⁶¹ Tb] Tb- DOTA-GA -HSA: 14,2 ч; [¹⁶¹ Tb] Tb- NETA -HSA: 10,8 ч; дополнительные рисунки 18–21). Это незначительное изменение в биологическом периоде полужизни в крови различных конъюгатов может быть связано с нерегиоселективным связыванием лигандов с HSA; потенциально реагирует с областями, существенными для биологических циркулирующих белков (неонатальный рецептор Fc и т. д.)). Следовательно, в будущих экспериментах важно использовать более сайт-специфические подходы нацеливания (связывание с his-tag, sortase A и т. Д.) (33–35), чтобы избежать нарушения сродства связывания биомолекулы.

Заключение

Это исследование является первым отчетом о маркировке ¹⁶¹ Tb в мягких условиях (25 ° C и 40 ° C в водном буфере). В качестве доказательства концепции мы успешно пометили термочувствительную биомолекулу HSA ¹⁶¹ Tb с высокими радиохимическими выходами.Несколько бифункциональных лигандов были оценены на предмет их свойств радиоактивной метки, а также на их стабильность in vivo, и in vitro, . Из этих лигандов радиоактивное мечение DTPA было высокоэффективным даже при комнатной температуре. Однако конструкция DTPA -HSA показала самую низкую стабильность, как in vitro , так и in vivo , что привело к значительному захвату и удержанию в кости не по назначению. Напротив, комплексы с более жестким каркасом ( DOTA, DOTA-GA и NETA ) требовали немного более высоких температур радиомечения, но оказались очень стабильными in vitro и in vivo . Эти лиганды потенциально могут быть использованы с другими векторными молекулами для диагностических и терапевтических применений семейства радиоизотопов тербия. В настоящее время продолжаются исследования по конъюгированию этих лигандов с другими термочувствительными векторными молекулами, чтобы обеспечить доставку ¹⁶¹ Tb или других радиоизотопов тербия к интересующей биологической мишени.

Заявление о доступности данных

Исходные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы, дальнейшие запросы можно направлять соответствующим авторам.

Заявление об этике

Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Комитетом по этике экспериментов на животных, KU Leuven.

Авторские взносы

Экспериментальные работы выполнены IC и SA. Это исследование разработали IC, GB, TC, MO и FC. IC, MO и FC проанализировали данные. [¹⁶¹ Tb] TbCl ₃ получали и очищали AB и MV. IC, MO и FC подготовили рукопись. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Это исследование получило поддержку от Исследовательского фонда — Фландрия (FWO) -SBO, проект: Изотопы тербия для медицинского применения во Фландрии (Tb-IRMA-V). Фредерик Клерен — научный сотрудник FWO (12R3119N). Кристоф М. Деруз — старший клинический исследователь в FWO.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Примечание издателя

Все утверждения, выраженные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно отражают претензии их дочерних организаций или издателей, редакторов и рецензентов. Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или заявление, которое может быть сделано его производителем, не подлежат гарантии или одобрению со стороны издателя.

Благодарности

Авторы благодарят Джули Корнелис, Ивана Саннена и Питера Хаспеслаха из Лаборатории радиофармацевтических исследований за их вклад.Бернарда Понсара (BR2, SCK CEN) выражают благодарность за облучение мишени ¹⁶⁰ Gd и Франка Ван дер Линдена за организацию транспортировки ядерных материалов из SCK CEN в KU Leuven. Выражаем благодарность Академии SCK CEN.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmed.2021.675122/full#supplementary-material

Сокращения

HSA, человеческий сывороточный альбумин; SEC, эксклюзионная хроматография; ВЭЖХ, высокоэффективная жидкостная хроматография; iTLC, мгновенная тонкослойная жидкостная хроматография; Внедорожник, стандартизованное значение поглощения.

Список литературы

1. Миширо К., Ханаока Х., Ямагути А., Огава К. Радиотераностика с радиолантаноидами: дизайн, стратегии разработки и медицинские приложения. Coord Chem Rev. (2019) 383: 104–31. DOI: 10.1016 / j.ccr.2018.12.005

CrossRef Полный текст | Google Scholar

2. Аморосо А.Дж., Фаллис И.А., Папа С.Я. Хелатирующие агенты для радиолантаноидов: приложения для визуализации и терапии. Coord Chem Rev. (2017) 340: 198–219. DOI: 10.1016 / j.ccr.2017.01.010

CrossRef Полный текст | Google Scholar

3. Мюллер К., Умбрихт К.А., Грачева Н., Чан В.Дж., Пеллегрини Г., Бернхардт П. и др. Terbium-161 для ПСМА-направленной радионуклидной терапии рака простаты. Eur J Nucl Med Mol Imaging. (2019) 46: 1919–30. DOI: 10.1007 / s00259-019-04345-0