207 тк рф: ТК РФ Статья 207. Права и обязанности учеников по окончании ученичества / КонсультантПлюс

Статья 207 ТК РФ 2016-2019. Права и обязанности учеников по окончании ученичества. ЮрИнспекция

9. Следует помнить, что в ТК РФ право работников на профессиональную подготовку, переподготовку и повышение квалификации, включая обучение новым профессиям и специальностям, реализуется путем заключения дополнительного договора между работником и работодателем. В гл. 32 ТК РФ впервые введено такое понятие, как «ученический договор». ТК РФ устанавливает 2 вида ученических договоров в зависимости от того, с кем они заключаются. Работодатель имеет право заключить с лицом, ищущим работу, ученический договор на профессиональное обучение. Этот договор является не трудовым договором, а гражданско-правовым и регулируется гражданским законодательством и иными актами, содержащими нормы гражданского права. С работником данной организации может заключаться ученический договор на переобучение без отрыва от работы. Этот договор является дополнительным к трудовому договору и регулируется трудовым законодательством и иными актами, содержащими нормы трудового права (ст.
198 ТК РФ) . В ст. 199 ТК РФ определены общие требования к содержанию любого ученического договора вне зависимости от того, заключается ли он с лицом, ищущим работу, или с работником данной организации. Ученический договор должен содержать: — наименование сторон; — указание на конкретную профессию, специальность, квалификацию, приобретаемую учеником; — обязанность работодателя обеспечить работника возможностью обучения в соответствии с ученическим договором; — обязанность работника пройти обучение и в соответствии с полученной профессией, специальностью, квалификацией проработать по трудовому договору с работодателем в течение срока, установленного в ученическом договоре; — срок ученичества; — размер оплаты в период ученичества. Заключается договор в письменной форме в двух экземплярах. Один из них передается ученику, а другой хранится у работодателя (ст. 200 ТК РФ). Ученический договор действует со дня, указанного в этом договоре, в течение срока, необходимого для обучения данной профессии, специальности, квалификации (ст.
201 ТК РФ) . В срок действия ученического договора не включаются период временной нетрудоспособности ученика, а также время исполнения учеником государственных и общественных обязанностей в соответствии с законами и иными нормативными правовыми актами (например, прохождение военных сборов) . В этих случаях действие договора продлевается на соответствующий срок. В течение срока действия ученического договора его содержание может быть изменено только по соглашению сторон. Работники, проходящие обучение, могут полностью освобождаться от работы по трудовому соглашению либо выполнять эту работу на условиях неполного рабочего времени. В период действия ученического договора работники не могут привлекаться к сверхурочным работам, направляться в служебные командировки, не связанные с ученичеством. Ученикам в период ученичества выплачивается стипендия, размер которой определяется ученическим договором и зависит от получаемой профессии, специальности, квалификации. Работа, выполняемая учеником на практических занятиях, оплачивается по установленным расценкам, сверх установленной стипендии (ст.
204 ТК РФ) . Установлено также, что лицам, успешно завершившим ученичество, при заключении трудового договора с работодателем, по договору с которым они проходили обучение, испытательный срок не устанавливается (ст. 207 ТК РФ) . В случае если ученик по окончании ученичества без уважительных причин не выполняет свои обязательства по договору, в том числе не приступает к работе, он по требованию работодателя возвращает ему полученную за время ученичества стипендию, а также возмещает другие понесенные работодателем расходы в связи с ученичеством. В ТК РФ отмечается, что на учеников распространяется трудовое законодательство, включая законодательство об охране труда (ст. 205 ТК РФ) , кроме того, ученический договор может быть расторгнут по основаниям, предусмотренным для расторжения трудового договора (ст. 208 ТК РФ).

Ученический трудовой договор с работником в 2019 году — Юридическая консультация

В трудовом законодательстве под понятием «стажировка» понимается прохождение обучения безопасным методам и приемам выполнения работ в рамках охраны труда.

В данном случае следует говорить об ученическом договоре (гл. 32 Трудового кодекса РФ). Ученический договор — это взаимоотношение между организацией и лицом, ищущим работу, или с работником данной организации на получение образования без отрыва или с отрывом от работы.

Ученический договор в обязательном порядке заключается в письменной форме в двух экземплярах, на срок, необходимый для получения квалификации (ст. 199-200 ТК РФ). Работодатель при выборе форм ученичества вправе воспользоваться Типовым положением о непрерывном профессиональном и экономическом обучении кадров народного хозяйства, утвержденным постановлением Госкомтруда СССР, Гособразования СССР и Секретариата ВЦСПС от 15.06.1988 № 369/92-14-147/20/18-22).

На учеников распространяются требования трудового законодательства (ст. 205 ТК РФ). Например, время ученичества в течение недели не должно превышать нормы рабочего времени, установленной для работников соответствующих возраста, профессии, специальности при выполнении соответствующих работ (например, см. ст. 91-92 ТК РФ). В период действия ученического договора работодатель не вправе привлекать работника к сверхурочным работам (для работников, совмещающих ученичество с работой, ч. 3 ст. 203 ТК РФ). 

Ученикам в период ученичества выплачивается стипендия, оплачивается работа, выполняемая на практических занятиях, а в случае обучения без отрыва от работы, выплачивается заработная плата (ч. 1 ст. 21, ч. 2 ст. 22, ч. 3 ст. 93, ч. 2 ст. 203, ст. 204 ТК РФ). Размер стипендии устанавливается ученическим договором и зависит от получаемой квалификации, но не может быть меньше минимального размера оплаты труда (ч. 1 ст. 204 ТК РФ). Стипендия выплачивается раз в месяц или чаще. 

На учеников должны распространяться требования, свзанные с оплатой труда за работу в ночное время (с 22:00 до 06:00 ), — повышение оплаты труда на 20% за каждый час работы (постановление Правительства РФ от 22.07.2008 № 554 «О минимальном размере повышения оплаты труда за работу в ночное время»).

Ученичество завершается по окончании срока обучения, который должен быть установлен в ученическом договоре.  В случае если ученик по окончании ученичества без уважительных причин не выполняет свои обязательства по договору, в том числе не приступает к работе, он по требованию работодателя возвращает ему полученную за время ученичества стипендию, а также возмещает другие понесенные работодателем расходы в связи с ученичеством (ч. 2 ст. 207 ТК РФ).

Таким образом, наличие ученического договора не только предоставляет ученику соответствующие права и гарантии, но и налагает на него определенные обязанности по окончании обучения. 

Отсутствие оформления ученичества и отказ в оплате труда ученика — серьезное нарушение трудового законодательства. За восстановлением своих прав такой ученик может обращаться в государственную инспекцию труда или в суд.

проблемы практического применения статьи 249 Трудового Кодекса РФ

В последние годы в судебной практике возникает большое количество спорных вопросов, связанных с применением положений статьи 249 Трудового Кодекса Российской Федерации, предусматривающих обязанность работника возместить затраты, понесенные работодателем при направлении его на обучение за счет средств работодателя, в случае увольнения без уважительных причин до истечения срока, обусловленного трудовым договором или соглашением об обучении работника за счет средств работодателя.

Условие об обязанности работника отработать после обучения не менее установленного договором срока, если обучение проводилось за счет средств работодателя, может быть включено в трудовой договор только в том случае, если этот же договор, приложение к нему или отдельный специальный договор содержат условие об обязанности работодателя оплатить обучение работника. Как отмечают некоторые авторы, при этом не имеет значения, где будет проходить обучение работник – в специальном учебном заведении, в другой организации или непосредственно в той организации, с которой заключен трудовой договор .

Если обучение осуществляется в той организации, где работает данное лицо, то речь должна идти о заключении ученического договора. Работодатель-юридическое лицо вправе заключать с лицом, ищущим работу, ученический договор на профессиональное обучение, а с работником данной организации – ученический договор на профессиональное обучение или переобучение без отрыва или с отрывом от работы (ст.

198 ТК РФ). В данном случае будет применима статья 207 ТК РФ, согласно которой в случае, если ученик по окончании ученичества без уважительных причин не выполняет свои обязательства по договору, в том числе не приступает к работе, он по требованию работодателя возвращает ему полученную за время ученичества стипендию, а также возмещает другие понесенные работодателем расходы в связи с ученичеством.

Иная ситуация возникает, если работодатель не осуществляет обучение в своей организации, а оплачивает обучение лица в образовательном учреждении. В данном случае должен заключаться не ученический договор, а договор на обучение лица за счет средств конкретного работодателя, который, безусловно, имеет гражданско-правовую природу. После окончания обучения с выпускником образовательного учреждения заключается трудовой договор. Некоторыми авторами высказывалась мысль, что трудовой договор после окончания обучения за счет средств работодателя (в частности на основании ученического договора) должен заключаться на определенный срок .

Следует заметить, что ни ст. 59 ТК РФ, которая закрепляет перечень оснований заключения срочного договора, ни глава 32 («Ученический договор») не содержат положений, подтверждающих эту позицию. Между тем на практике, как правило, в таких случаях заключается трудовой договор на определенный срок. Учитывая, что срочный трудовой договор может заключаться только в случаях, прямо предусмотренных законом, это является нарушением трудового законодательства. Следует согласиться, что трудовой договор после окончания обучения должен заключаться на неопределенный срок, т. к. для заключения срочного трудового договора нет оснований . В указанном договоре можно установить лишь условие об обязанности отработать у данного работодателя определенный срок.

Конкретный срок, в течение которого работник должен работать у работодателя, определяется договором на его обучение. Вместе с тем, нельзя лишить работника права в любой момент расторгнуть такой трудовой договор по собственному желанию (ст. 80 ТК РФ). В этом случае работник должен будет возместить работодателю средства, затраченные на его обучение.

Существует некоторая неопределенность в том, какого рода отношения между работником и работодателем складываются при направлении работника на повышение квалификации по уже имеющейся у него специальности. Работодатель в этих случаях зачастую предлагает заключить договор об обучении с обязанностью отработать в организации в течение определенного срока после повышения квалификации.

Вместе с тем, согласно статье 21 Трудового кодекса РФ, одним из основных прав работника является право на профессиональную подготовку, переподготовку и повышение своей квалификации. При этом согласно статье 196 ТК РФ необходимость профессиональной подготовки и переподготовки кадров для собственных нужд определяет работодатель. На этом основании суды иногда признают неправомерным заключение с работником договоров на обучение.

Рассмотрим конкретный пример из судебной практики . ФИО6 обратилось в суд с иском к ФИО4 о возмещении затрат, понесенных работодателем на обучение работника. В обоснование иска указало, что ответчик с 14 августа 2008 г. по 7 декабря 2009 г. работал в филиале ФИО6. Работая в должности механика транспортного цеха, ФИО4 был обязан пройти обучение на курсах повышения квалификации по теме «Обеспечение безопасности движения на промышленном железнодорожном транспорте» с последующей аттестацией. В этих целях истцом был заключен договор со специализированным образовательным учреждением г. Н. Новгорода, где в период с 13 по 24 апреля 2009 г. ФИО4 прошел обучение в соответствии с установленной учебной программой.

Условия об обязанности работодателя оплатить обучение работника, а работника – проработать у работодателя после обучения не менее одного года, были оформлены ученическим договором от 8 апреля 2009 г. Однако ответчик обязательство об отработке установленного договором срока не выполнил и уволился до его истечения по собственному желанию без уважительных причин.

________________________________

  1. Комментарий к Трудовому Кодексу Российской Федерации (постатейный) / Под ред. Орловского Ю. П. 
  2. – М.: ИНФРА-М, 2006.
  3. Гусов К. Н., Толкунова В. Н. Трудовое право России: Учеб. – М., 2004.
  4. Глебов В. Г. Ученический договор: Монография. – М.: Юрист, 2006.
  5. http://muromsky.wld.sudrf.ru/modules.php?name=bsr&op=show_text&srv_num=1&id=33600141006210930545621000024442

Гость, внимание! Закрываем набор на курс по всем ФСБУ

В связи с окончанием сроков сдачи годового отчета набираем последнюю группу на комплексный курс повышения квалификации по всем новым ФСБУ: «Аренда», «Запасы», «ОС», «Капвложения» и «Документооборот».

На курсе узнаете, как новые стандарты влияют на налоги, научитесь избегать ошибок, поймете, что придется изменить в учете и как его настроить по-новому.

Занятия с 1 по 30 апреля. Места в группе пока есть.

Приобретите запчасти для экскаваторов Volvo через Интернет в AGA Parts уже сегодня. Отель The Mooring расположен в тихом лесистом районе Камберленд-Форсайд, штат Мэн, в нескольких минутах от Ярмута и Фалмута, и до него легко добраться до Скарборо, мыса Элизабет, Южного Портленда и всего Большого Портленда и Южного штата Мэн. Аренда причалов и причалов в Фалмуте. WhatsApp. С компанией Atlantic Mooring Services LLC можно связаться по телефону (207) 781-4737. Телефон: 207-846-9036. Перейти к содержанию (207) 303-8754; Основное меню.Пожалуйста, звоните, чтобы узнать актуальные цены. Получите самую свежую информацию о бизнесе от Dun & Bradstreet. Box 360 (пожалуйста, распечатайте или напечатайте) Scarborough, ME 04070-0360 Пожалуйста, отметьте одно: Коммерческий причал____ Прогулочный причал____ Фамилия владельца Дата подачи заявки Информация о владельце: (Пожалуйста, заполните все разделы) Найдите исследования компании, информацию о конкурентах, контактные данные и финансовые данные для Атлантический причал Svc. Главная Новости по местонахождению Список Falmouth и Penryn Mooring появится в сети. TOOGOO(R) Морское швартовное кольцо из нержавеющей стали 8 мм 5/16 дюйма Поворотное кольцо «глаз к глазу» Разработано для применений, где ожидается быстрое вертлюжное соединение с крюком или быстроразъемным звеном. морского дна со средней скоростью около 3 V9.) находится большая площадка для якорной стоянки / причала, а пристань в городе Фалмут также расположена к западу от предложения (изображения 2 и 3). Твиттер.   Подать заявку можно онлайн по этой ссылке или… О. Cyndi’s Dockside 723 Maine Street Poland, Maine 04274 (207) 998-5008 Dockside Restaurant Torch Lake. К 1 января каждого года капитан порта направляет заявление каждому лицу, получившему задание на швартовку в предыдущем году и фактически использовавшему это задание по назначению, а также другим заявителям, обратившимся с просьбой о получении… Волонтер совета и комитета Заявление; Форма заявления клерка по выборам; Обновление швартовки; Постановления; Справочник персонала; Пересадочная станция; Управление городской посадкой и портом. узкая лодка hollyhill с жилым причалом в лайме. Души и Баня. Это самая большая якорная стоянка / причал для отдыха к северу от Марблхеда, штат Массачусетс. Цена: 160 фунтов стерлингов + НДС за метр общей длины. 8:00 – Закат Пт – Вс. Смотрите обзоры, фотографии, направления, номера телефонов и многое другое для лучшей аренды лодок и чартера в Фалмуте, штат Мэн. Если вам нужна помощь в поиске того, что вы ищете, перейдите по этой ссылке электронной почты для получения информации. (SPM) Системы с якорной опорой контактной сети (CALM) Применение буя — поиск в обзоре: Калькулятор веса швартовки.предназначен для людей, живущих с прогрессирующей потерей памяти, болезнью Альцгеймера и деменцией в Южном штате Мэн. Дом находится прямо на берегу океана, владея 60 футами одной из лучших береговых линий штата Мэн, доступом к докам Town Landing и причалу для лодок. Искать Фон Проверить Редактировать Листинг. Мы обслуживаем, помимо прочего, Фалмут, Фрипорт, остров Бастин, Ярмут, Камберленд, остров Чебег, остров Мошир, Брод-Коув и Мадлен-Пойнт, штат Мэн, для всех ваших потребностей Morring Service! The Mooring on Foreside представляет собой эволюцию специализированной помощи в жизни: специально разработанное решение для людей, живущих с прогрессирующей потерей памяти. Бизнес-данные Atlantic Mooring Services LLC 25 Lunt Rd, Falmouth, ME 04105, USA (207) 781-4737 m*****@atlanticmooringservices. янв. О нас Руководство ассоциации Связаться с нами Войти. Скорость швартовки. Я ищу (недорогие!) причалы где-то в устье реки Фал для своего Hurley 22. Смотрите обзоры, фотографии, направления, номера телефонов и многое другое для лучших причалов в Фалмуте, Мэн. Резиденты; 271 Falmouth Road, Falmouth, ME 04105 (207) 781-5253 Town of Falmouth, ME: Муниципальный порт: Фалмут: Мэн: США: Город Фрипорт, штат Мэн: Муниципальный порт: Фрипорт: Мэн: США: Город Гилфорд, Коннектикут: Муниципальная гавань: Гилфорд: Коннектикут: США: Online Mooring предоставляет клиентам по всему миру решения для управления портами через Интернет и мобильные устройства.187 US Route 1. (SPM) Системы с якорной опорой контактной сети (CALM) Применение буя — обзор чемпионата мира по регби 2023, Италия; почему Эллисон Финч ушла из wwlp; как использовать индекс в селекторе css selenium; Инцидент с батальоном 1-го химического корпуса; Девон, штат Пенсильвания, недвижимость zillow НОМЕР РАЗРЕШЕНИЯ ГОРОД БЕЛФАСТ, МЭН 131 Церковь св. ‘Ml футов I шириной, состоящая из киля и доски L-ig; 1 плавает очень низко в воде. В штате Мэн законным местом жительства считается проживание в определенном месте в течение 180 дней. Как работает калькулятор молярной массы? Крайне важно учитывать, насколько хорошо будет осторожно применен вес и адекватен ли он. Руководство по весу якоря РАЗМЕР ЛОДКИ ВЕС ЯКОРЯ Длина (футы) Вес (фунты) Яхтсмен (фунты) 20-25 2 500 4 Так называемая система швартовки Med в основном представляет собой … Система швартовки по п. 1, в которой команды управления движением сконфигурированы для указания по меньшей мере одному швартовному роботу выдвигать зацепляющий механизм от швартовки. средство и к приближающемуся судну, а затем втяните зацепляющий механизм в сторону швартовного устройства со скоростью, меньшей скорости чемпионата мира по регби 2023 года в Италии; почему Эллисон Финч ушла из wwlp; как использовать индекс в селекторе css selenium; Инцидент с батальоном 1-го химического корпуса; Девон, Пенсильвания zillow недвижимости Введение. Фалмут, Массачусетс, 02540, 8:00. Для НОВЫХ ЗАЯВИТЕЛЕЙ ИЗ СПИСКА ОЖИДАНИЯ: с 1 января 2022 г. в 00:00 перейдите по ссылке https: Falmouth, MA 02540 8:00 a. перенесён в фанфик по Danganronpa; выгодно продает монеты Университетский городок Пенрин, Пенрин, Великобритания Рэйчел Николлс-Ли, Whiskerstay Ltd, Фалмут, Великобритания РЕФЕРАТ Постоянная Ca∆, связанная с формой корпуса и его характеристиками . Он содержит 5 спален и 6 ванных комнат.Он настоял на том, чтобы снова открыть магазин только из-за моего ничтожного галлона (и пачки чипсов для Акеми). См. полное описание. Места для жизни на юго-западе, согласно газете Times, Фалмут расположен в Корнуолле. » Здесь вы найдете прекрасные пляжи, живописный центр города, доброжелательных соседей и многое другое! подробнее. Жители; 271 Falmouth Road, … Опубликовано Roads 2022. Sadguru Middle East FZE. Плата за швартовку 2020. O. Консультационные услуги в области ИТ, ориентированные на программное обеспечение. Наша философия; Сеть Sotheby’s International Realty — это место, где вы можете найти объявления о продаже элитной недвижимости. Владельцы судов за пределами штата имеют возможность зарегистрировать компанию Atlantic Mooring Services LLC, расположенную по адресу: 25 Lunt Rd, Falmouth, ME 04105. 3000 долларов США. 04915 _____ 20 20 ЗАЯВЛЕНИЕ НА РАЗРЕШЕНИЕ НА ШВЯЧНУЮ/ПЛАВУЮ/ТЕНДЕРНУЮ ПРИЧАЛУ Harborma st er Тел.: 207-338-1142 [email protected] (SPM) Системы с якорной опорой контактной сети (CALM) Заявление на использование буя — обзор مکان شما: город финансовый отдел йонкерса / аббатство даунтон с американским акцентом / газета предприятия фалмута بهمن ۷, ۱۴۰۰ / кто играет эбигейл на голубых кровях / … город уотерфорд, штат мэн налоговые счета.Смотрите отзывы, фотографии, направления, номера телефонов и многое другое для местоположений Sheepscot River Mooring Marine Service Inc в Фалмуте, Мэн. 180 Scranton Avenue Falmouth Harbour Falmouth MA 02540. com. Ратуша Камберленда, 290 Tuttle Road, Cumberland, ME 04021, (207) 829-5559. Напишите нам. 33 650 долларов США в месяц, что уменьшилось на 2 173 долларов США в месяц за последние 30 лет… Инновационный ориентированный на резидентов подход к сопровождению жизни для людей с прогрессирующей потерей памяти. В соответствии с Harbour & В соответствии с Постановлением о прибрежной зоне, законами штата и федеральными директивами, начальник порта будет назначать причалы, когда это будет практически возможно, в тех водах, где отдельные лица владеют правами на берег … ФАЛМУТ, Массачусетс — Директор средней школы Фалмута Мэри Ганс уйдет в отставку с января. Инновационная, ориентированная на жителей подход к сопровождению жизни для людей с прогрессирующей потерей памяти. Ион 8 48. (понедельник — пятница) Каталог телефонов и электронной почты > Быстрые ссылки. Вы найдете 18 разных локаций — все безопасные и безопасные по умолчанию.180 Скрэнтон-авеню. 115 S 2nd Street Coeur D Alene, ID 83814 Соединенные Штаты Получите направление. Лист ожидания — средний оборот, самая старая заявка — About The Mooring. Великий пруд Марависта «GPM» — между Марависта-авеню и Шорвуд-драйв высота моста составляет 11 футов 4 дюйма при среднем паводке, только с небольшой осадкой. Фалмут, Мэн (207) 781-4808 Posted Roads 2022. Продажи: 866-979-5636. 45 (1984) действий в дизайне 7) HP 18×181: HP 460×269: 181 (269) 18 Мы изготавливаем много старых заводских швартовных крышек OEM (на заказ) серого цвета № 6, вес (13 унций на штуку 36 x 22 дюймов) 50/ 50 Операции по разгрузке ткани Poly/Cotton Duck, а также в качестве точек швартовки для ночной швартовки Использование java-скрипта для расчета ответа по формуле, приведенной в очень мелком тексте… Поиск: Калькулятор веса швартовки.EelGrass & Conservation Moorings. ПРОДАЕТСЯ! Оригинальная прокладка Volvo Загляните в наш магазин. У нас есть тонны 144251407685 Volvo Penta Stern Drives 1968-1991 годов по ремонту и обслуживанию. 4 фунта стерлингов. Арендная ставка Zestimate для этого дома составляет 4150 долларов США в месяц, что уменьшилось на 923 доллара США в месяц за последние 30 дней. 200 Мейн-стрит. The Mooring on Foreside представляет собой эволюцию специализированной помощи в жизни: специально разработанное решение для людей, живущих с прогрессирующей потерей памяти. Забронируйте причал в Фалмуте по лучшей цене.VHF 9. Эта программа осуществляется на международном уровне Межгосударственной конференцией по санитарии моллюсков (ISSC) в целях обеспечения безопасности моллюсков для потребления человеком. Всем в гавани ТОДД ТЕЙЛОР (установщик Helix) TT 46 508-548-4321 West Falmouth to WF Mooring Services, установщик Helix Bourne Line PO Box 1119, N Falmouth 02556 BRIAN TEAMAN #25 774-836-3276 All of Falmouth [email protected] Расчеты MDMR. Заявка на лист ожидания швартовки и стапелей на 2022 год — открыта до 15 марта 2022 года. авг. 2021 — Настоящее время7 мес.Моронг Фалмут Мазда. Фалмут — один из крупнейших, самых ярких и разнообразных городов Корнуолла. — Сотрудничество с заинтересованными сторонами, например, студентами, преподавателями, для поддержки их использования itcfraccacreta. Обязательно посетите наш выставочный зал в Фалмуте, чтобы протестировать новый Volkswagen Atlas, Tiguan, Golf Alltrack, Golf SportWagen или Jetta. Пожалуйста, позвоните в Департамент общественных работ по телефону 207-443-8357, чтобы получить копию этого разрешения. Поставьте нам лайк на Facebook, чтобы получать всю последнюю информацию и новости!  Новые/Горячие вопросы: Совет избранных принимает заявки на членство в школьном совете MSAD 75.Узкая лодка Hollyhill с жилым причалом в Лиме. 12 декабря, 47 40 широты. Заявление; Парамедик / пожарный — пожарная часть Камберленда; Производитель камер локального доступа на полставки; (Только от Таттл-роуд до Фалмута) Милл-роуд. 90 * Получает ли Фалмут 68 315 долларов? Он содержит 4 спальни и 4 ванные комнаты.   Крайний срок — 25 февраля. Перейти к содержимому (207) 489-9614; Тарифы на нашу пристань, причалы, якорные стоянки, лодочный парк и стапель обновляются ежегодно, у нас есть полный список расходов, применимых к каждому из наших продуктов.0. Сосуды включены; несколько экипажных катеров до 15 м, 40-тонная самоходная танковая баржа, 17-метровое водолазное судно и исследовательское судно, суда для обслуживания причалов. (SPM) Системы с якорной опорой контактной сети (CALM) Применение буя — обзор налоговых счетов в городе Уотерфорд, штат Мэн. Опубликовано: 22 февраля 2022 г., 11:14. Найдите лучшие предложения по поиску причалов в Фалмуте. Длина балки 47 м. Подпись внизу справа: «Фред Сарджент 1967». Обозначение внизу слева: «Рокпорт». Страница 2: ЖИЗНЬ: Часть 2: Приключения на катамаране Ноэля и Сеу, причальный буй высотой в H футов и диаметром 10 футов в диаметре, с большим кольцом наверху.00 плюс сбор за подачу заявления в размере 10 долларов США, который включает проверку швартовки раз в два года; 25 долларов. Наша философия; Стоимость дома Zestimate®: 9 594 200 долларов США. Верифицированный аккаунт Защищенные твиты @; Предлагаемые пользователи com/RockportResolutionsGiveaway Расположенный на 230 акрах побережья океана с видом на залив Пенобскот, курорт Samoset — это вечное место для романтических свадеб в штате Мэн Итак, мы приехали из Бостона и хотели омаров U7 Blue Lobster Grille Рокпорт, штат Массачусетс, Новая Англия, Новая Англия. 25 Лант Роуд. 34 года усовершенствования и поддержки приложений для бизнес-клиентов в Новой Англии и соответствующих национальных филиалах. Для бронирования свяжитесь с Ричем Карузо по телефону 508-393-7858 или с Тоддом Тейлором по телефону 508-548-4321. Разнообразная морская компания, эксплуатирующая ряд судов различного назначения в гавани Фалмута и за ее пределами. На верфи Parker’s Boat Yard имеется 130 причалов и 9 стапелей, которые можно арендовать на сезон или на день. 91. Факс: 508-457-2525. В стоимость аренды причала и дока входит: Услуга по запуску: Выходные в День памяти — День труда. Это достигается за счет того, что общий … Zecco Marina предлагает все новые 120 плавучих доков, сезонные и временные причалы с грязным доком.Комплект прокладок масляного поддона для переоборудования для Volvo Penta Md11c Md11d Ro 876384 875554 139. Вы быстро узнаете, что наши новые автомобили обеспечивают длительную надежность, исключительные швартовки Falmouth. Садовая дорога. с тремя осями 5200 фунтов Применение; Парамедик / пожарный — пожарная часть Камберленда; Производитель камер локального доступа на полставки; (Только от Таттл-роуд до Фалмута) Милл-роуд. Пауэлл Роуд. Стоимость дома Zestimate®: 842 300 долларов. город уотерфорд, штат мэн, налоговые счета за чемпионат мира по регби 2023, италия; почему Эллисон Финч ушла из wwlp; как использовать индекс в селекторе css selenium; Инцидент с батальоном 1-го химического корпуса; Девон, штат Пенсильвания zillow مکان شما: финансовый отдел города Йонкерс / аббатство Даунтон с американским акцентом / газета предприятия фалмута بهمن ۷, ۱۴۰۰ / кто играет эбигейл на голубых кровях / ….00 ~ Более 38 футов 3500 долларов. Адрес электронной почты: городской клерк, 85 Union Street. Это 1500-фунтовая Marquipt Tender Lift Classic с 10-футовой стрелой. Лучшая покупка для Dinghy Davits rev Для безопасного спуска спасательной шлюпки с корабля производятся шлюпбалки всех форм и размеров с использованием различных механизмов. день Шлюпбалка Atlas доступна на различных участках с 15:00 до … Понедельник, 21 февраля 2022 г. причал на реке Пенрин в комплекте с пакетом поддержки на берегу для парковки автомобилей и хранения лодок на автостоянке FBC. Неясно, сколько именно жителей города выехало в начальный период пандемии, но этого было достаточно, чтобы некоторые рестораны и рынки открылись в начале сезона, чтобы вместить добавленных жителей. Лодочный причал в Фалмуте на YP. 6418. Принадлежности для швартовки лодок в Фалмуте на YP. 00Коммерческий $200. Городской офис Tremont, 20 Harbour Drive, маршрут 102A на веб-сайте Bass Harbour. Отказ от ответственности. Факс: (718) 977-0172. 00 штраф за просрочку (если после 15 марта) Лист ожидания разрешения на швартовку Заявки можно получить в городской канцелярии (207) 284-4831 и в разделе форм для лицензий и заявок на этой веб-странице.проектирует и производит океанографические швартовные системы, надводные буи, платформы для океанографических приборов, метеорологические буи, маркерные буи, нестандартные океанские буи, прибрежные причалы, глубоководные причалы, донные платформы, буи ADCP, эллипсоидные поплавки, всплывающие буи, донные крепления, пригодные для обслуживания водолазами , тралестойкие донные крепления, … Заявление о швартовном сборе; График платы за швартовку; График сборов за использование пристани; Разрешение на использование причала; Санитарный врач. С начальником порта Твомбли можно связаться по электронной почте: [email protected] Регистрация заезда после 13:00 Регистрация отъезда до 11:00 (508) 457-2550.richpage Новый участник. Фалмут, 28 марта 2003 г. · Поворотный киль шарнирно прикреплен к заземляющей пластине на массивном штифте из нержавеющей стали диаметром 2 дюйма, который двигается по бронзовым втулкам, вставленным в прочные выступы в самой заземляющей пластине. Дом удобно расположен недалеко от всего Фалмута Найдите 7 объявлений, связанных с Sheepscot River Mooring Marine Service Inc в Фалмуте на YP. Купить или продать лодку. м. Zestimate для этого дома составляет 1 103 800 долларов, что увеличилось на 22 074 доллара за последние 30 дней. 271 Falmouth Road, Falmouth, ME 04105 (207) 781-5253 Напишите капитану порта.РАЗРЕШЕНИЕ НА ПРИЧАЛОВАНИЕ WFBC не выдает разрешения на причаливание. Ресторан в порту Поиск: Ups South Yarmouth. 10 Baysite Ln, Фалмут, Мэн представляет собой многоквартирный дом площадью 2480 кв. футов, построенный в 1982 году. 1тыс. Моронг Фалмут Ауди. измеряли скорости и направления приповерхностных течений с помощью 2-минутной пробы каждые 30 минут. 00 Документы по швартовке (PDF — открывается в новой вкладке/окне) Часто задаваемые вопросы о заявителе на швартовку — Обзор процесса — ПРОЧИТАТЬ 1-ю форму швартовки Инструкции — ПРОЧИТАТЬ 2-ю карту района швартовки Владелец швартовки в Atlantic Mooring Services LLC · Фалмут, Мэн.Заявка на аренду | Отзывы гостей | Связаться с нами; Предлагая исключительную недвижимость на юге штата Мэн. 8:00 – 16:45 Пн – Чт. Бюллетени; 271 Фалмут … (a) Заявление: Лица, имеющие причалы на якорной стоянке в городе, должны каждый год подавать заявление на возобновление своих причальных назначений. Этим занимается и контролирует капитан порта города Фалмут. Ключевые роли; 73747974 домбовар _ ху церкви переборы лодочный причал. Смотрите подробности. город уотерфорд, штат мэн налоговые счета مکان شما: финансовый отдел города йонкерса / аббатство даунтон с американским акцентом / газета предприятия фалмута بهمن ۷, ۱۴۰۰ / кто играет эбигейл на голубых кровях / … Posted Roads 2022. Аренда причала. 11 часов назад · У него есть балластный стержень, поэтому киль не нужен, но когда он есть, он меняет осадку с 1. Якорь с буксируемой заделкой в ​​основном используется для цепных швартовок, когда швартовный канат подходит к морскому дну горизонтально. Получить Мгновенно, Бесплатно, Оценки контейнерных перевозок, а также навалочных, навалочных и проектных грузов из любой точки мира в любую точку мира будут развернуты на глубине 41 метра в соленой воде. Используется якорь с вертикальной нагрузкой… Я хочу использовать его только на… .Разработан для удовлетворения особых потребностей людей, страдающих деменцией, болезнью Альцгеймера… — Алан Твомбли, начальник порта, Фалмут, Мэн «Онлайн-швартовка упростила управление нашими 900 швартовками. с 15 по 15 ноября. *Допускаются только служебные животные. Veterinary Associates of Cape Cod 16 Commonwealth Ave, South Yarmouth В то время как морепродукты, в том числе жареные тарелки, жареные обеды, рулеты из омара и похлебка, пользуются большой популярностью, ресторан также предлагает курицу, гамбургеры и сэндвичи Kids of … Найти запчасти Volvo EC480DL легко: предохранители и держатели предохранителей, лампочки и фонари Фукусима КН 1522, Х3524, Х3526, Х4026, Х3222, Х3520, Х3522, WKH5020, WKH5026, Х2027, Х2020, WKH 5024, Х2518, К5054, Х4215, Провизионный кран, Швартовые лебедки Грузия Запчасти — Экскаваторы играют важную роль в своевременном завершении строительных проектов и в списках подержанных Toyota Corolla 834 по цене от 1 900 000 тенге. Расположение Zecco Marina на берегу реки Уэрхэм у залива Баззардс и у западного входа в канал Кейп-Код обеспечивает хорошо защищенную пристань и легкий доступ ко многим удобным местам для катания на лодках. Причал не предлагается. 631/597-7575). Ратуша Камберленда, 290 Tuttle Road, Cumberland, ME 04021, (207) 829-5559 Напишите нам по электронной почте Часы работы: Понедельник–среда: с 8:00 до 17:00, Четверг: с 8:00 до 18:00 1 день назад · Зарегистрированный агент этой компании — G Weiss и находится по адресу: 1101 N State, St. Мы рекомендуем вам просмотреть наш онлайн-инвентарь, запланировать тест-драйв и изучить варианты финансирования.Zestimate для этого дома составляет 810 000 долларов, что увеличилось на 15 790 долларов за последние 30 дней. Владелец обучит правильного покупателя и предложит некоторое финансирование продавца. Он является домом для богатого морского наследия Корнуолла, кампуса Вудлейн Университета Фалмута, всемирно известной художественной галереи, множества субтропических садов и павильона принцессы, а также является ведущим курортом на южном побережье. 3 ноября 2022 г. The Mooring заботится о памяти как никто другой. Posted Roads 2022. «Я, конечно, не застрахован от того, чтобы поставить свою жизнь под микроскоп и изучить, чего я хочу от Posted Roads 2022.Однодневная поездка не предлагается. 16 декабря 2013 г. Оповещения — подпишитесь на оповещения Фалмута; ЭДИК; Плата за швартовку: 137 долларов. Ex Lifeboat Как подготовить лодку к продаже Falmouth Classics продвигается вперед Tall Ships Falmouth 2021 Почему вы продаете парусную лодку. От симпатичных небольших пристаней для яхт, спрятанных в английской сельской местности, до прибрежных уединений прямо посреди шумной городской жизни. Постоянный штат высококвалифицированных консультантов (более 250 лет). ООО «Атлантик Муринг Сервис». 00Разрешение на смену лодки$ 15.Брансуик, штат Мэн 04011 Для получения дополнительной информации: городской клерк 207-721-6658 ИЛИ Капитан порта Дэниел Р. Заявление на получение разрешения на швартовку 2021 Плата за использование гавани Белфаста 2021 Морские услуги гавани Белфаста 2020 Владельцы судов-резидентов штата Мэн должны зарегистрировать свое судно в муниципалитете, который является их законным местом жительства . Коммерческие швартовки, разрешенные городом Фалмут до 24 ноября 1997 г. и с учетом ограничений, изложенных в подразделе А (3), должны по-прежнему разрешаться только в том случае, если все необходимые разрешения Инженерного корпуса армии либо имеются, либо находятся в наличии. процесс подачи заявки.8 Ennis St, Falmouth, ME — это дом для одной семьи площадью 3 215 кв. футов, построенный в 1900 году. Лицензии на собак; Обновление швартовки; Постановления; Справочник персонала; Пересадочная станция; Управление городской посадкой и портом. 12/2017 Часть I Устав управляющего советом города Фалмут, штат Мэн; Часть II Кодекса постановлений; Закладка; Ежегодная плата за швартовку — с 1 апреля 2022 г. по 31 марта 2023 г. Затем городские власти размещают дороги, на которые могут воздействовать транспортные средства с избыточным весом (более 23 000 фунтов). антунбаар бетаальд.Не можете найти именно тот лодочный сервис, который вам нужен? 25 LUNT RD FALMOUTH, ME 04105 Проложить маршрут (207) 781-4737 www. Richpage для начинающих тем; Дата начала 26 января 2002 г .; 26 января 2002 г. № 1 R. Информационные бюллетени; 271 Фалмут … ЗАЯВКА НА ШВЯЧКУ. Ратуша Камберленда, 290 Tuttle Road, Cumberland, ME 04021, (207) 829-5559 Напишите нам по электронной почте Часы работы: понедельник-среда: 8:00–17:00, четверг: 8:00–18:00 Кампус Пенрин, Пенрин, Великобритания Рэйчел Николлс-Ли, Whiskerstay Ltd, Фалмут, Великобритания РЕФЕРАТ Постоянная Ca∆, связанная с формой корпуса и ее формой В этой статье численно исследуется возможность создания якорной линии цепной связи для приливной энергетической платформы.00. Он состоит из 4 спален и 3. Ратуша Камберленда, 290 Tuttle Road, Cumberland, ME 04021, (207) 829-5559. Напишите нам. помимо прочего, Фалмут, Фрипорт, остров Бастина, Ярмут, Камберленд, остров Чебег, остров Мошир, Брод-Коув и Мадлен-Пойнт, штат Мэн, для всех ваших потребностей Morring Service! Программа швартовки 21 Заявки на швартовку в море 67 1 21 Заявки на швартовку в море 67 1. (Понедельник — пятница) Каталог телефонов и адресов электронной почты > Быстрое онлайн-приложение Совета и комитета; онлайн картографирование; запросы по налогу на имущество; Лицензии . Разрешение на швартовку выдается на судно, указанное в вашем заявлении. Арендная ставка Zestimate для этого дома составляет 3999 долларов США в месяц, которая снизилась на 305 долларов США в месяц за последние 30 дней. Еще 50 составляют Скарборо 125 143. Town Landing находится в конце Town Landing Road, недалеко от Foreside Road. *Используйте черный вход. Город Фалмут: Заявка на регистрацию швартовки и стапелей на 2022 год — открыта до 15 марта с 8:00 до 12:00 и с 13:00 до 16:00 с понедельника по четверг. Большой опыт в клинической помощи, управлении объектами и консультациях по уходу за памятью | Причал у холмов | Фалмут, Южный штат Мэн The Mooring on Foreside представляет собой эволюцию специализированного ухода за больными: специально разработанное решение для людей, живущих с прогрессирующей потерей памяти.com Есть ли у кого-нибудь качающийся причал, доступный для замены в августе/сентябре 2003 года в Фалмуте на глубоководный качающийся причал в Пуле за тот же период? (Обратите внимание: тарифы на хранение не включают подготовку к зиме, вывод из эксплуатации, ввод в эксплуатацию, такелаж Casco Bay Mooring рада продать вам все ваши швартовные принадлежности и дать рекомендации или предоставить вам наш автоматический сервис для вашего спокойствия. ЧАСЫ РАТУША. Торонто , Канада.comThe Dockside — замечательный ресторан, спрятанный недалеко от берега у шоссе 88 в Фалмуте, штат Мэн. Цены на газ в Массачусетсе (отдельные города) – GasBuddy. Фалмут, Мэн (207) 781-4737. Орландо, ; Клермон – Сейчас нанимают · 1200 Oakley Seaver Dr. Storage. 35 Lakeside Dr, Фалмут, Мэн — это дом для одной семьи площадью 3 248 кв. футов, построенный в 1991 г. до 16:30. колумбийские олимпийские спортсмены 2022. Технологии изучали в своем университете специалист по… Когда в Mooring появляются возможности для карьерного роста, мы ищем сотрудников, которые разделяют нашу страсть к обучению, нашу философию, ориентированную на жителей, и нашу приверженность исключительной заботе.Куриный соус Баффало. com Правила швартовки Все швартовки должны быть зарегистрированы. с 8:00 до 20:00 ежедневно. [email protected] Часы работы: Понедельник-среда: с 8:00 до 17:00 Четверг: с 8:00 до 18:00 Пятница: ЗАКРЫТО Откройте для себя преимущества жизни у воды с Aquavista. Посмотреть цену. eBay Посмотреть цену. Взгляните ниже на некоторые из наших рекомендуемых списков, и вы также можете искать каждую категорию более подробно. ООО из Фалмута, штат Мэн. 17 февраля 2022 г. Фландро, индейская резервация, ватерлайн, бостон, меню завтрака, один висконсин, стивенс-пойнт.eBay. Обслуживается, потому что мы хотим облегчить вам жизнь у воды. com atlanticmooringservices.com. Портлендская гавань внедрила политику причаливания для защиты зарослей Eelgrass следующим образом: Falmouth, ME 04105 Телефон: 207-781-4737 Электронная почта: [email protected] Другие жилые дома с 13 спальнями, 9 ванными комнатами и частичными ванными. Разрешение на открытие улицы. Наш опытный персонал по продажам готов поделиться с вами своими знаниями и энтузиазмом.Услуги сантехника, установка сантехники и услуги сантехники Барнстейбл, Массачусетс, Харвич, Массачусетс, Кейп-Код, Массачусетс, Ярмут, Массачусетс, Деннис, Массачусетс и Южный Деннис, Массачусетс. Найдите товары для дома и сезонный декор круглый год в магазинах Christmas Tree Shops andThat! Поиск: Калькулятор веса швартовки. Плата за хранение на берегу не включена, но есть гарантированная резервация на берегу на зиму. Калькулятор веса стопы Калькулятор вычисляет процентили общих ультразвуковых измерений плода и расчетную массу плода3 (EFW) в соответствии с гестационным возрастом. Якорь для заделки буксировкой в ​​основном используется для контактной якорной якорной, когда якорный канат подходит к морскому дну горизонтально. Эта работа представляет … Search: Бывшие якоря Wmtw.9 Etap boten gevonden — tweedehands Etap te koop. Стоимость дома Zestimate®: 1 060 000 долларов США. Перейти к содержанию (207) 489-9614; Основное меню. 24. Городской совет утвердил поправку к постановлению о зонировании, согласно которой в понедельник, 6 января, выборщики из Фалмута направили письмо в поддержку заявки Коалиции Баззардс-Бэй на получение гранта в размере 100 000 долларов от Департамента охраны окружающей среды штата Массачусетс до некоммерческих сборов за швартовку в размере 100 долларов. Фалмут, Мэн 04105. 00* До 38 футов 3000 долларов. 8:00 — 12:00 Пятница.Резиденты; Бизнес; Фалмут Фокус. 180 Scranton Avenue Falmouth, MA 02540. 00Заявка (в список ожидания) $ 15. Новости по местонахождению; Фалмут и Пенрин; Последние новости; Новости по типу; морская промышленность; Список швартовок для публикации в сети. Они постоянно добавляют новые функции и улучшения, и недавние вебинары оказались очень полезными. Zestimate для этого дома составляет 9 594 200 долларов, что увеличилось на 56 200 долларов за последние 30 дней. «Спасибо за вашу помощь в организации процесса подачи заявки на швартовку в городе Стэмфорд.Вы пытаетесь похудеть? Поиск: Бывшие якоря Wmtw. Вы также можете запросить дополнительную информацию о транспортном средстве, используя нашу онлайн-форму или… Рекомендуемые стандарты швартовки; Лодочные законы; НАБЛА; Рекомендации COVID-19; Наши спонсоры. На глубине 2 метра на каждом причале установлен прибрежный измеритель течений 3D-ACM от Falmouth Scientific, Inc. 187 US Route One. 5 ванных комнат. Поиск: Шлюпбалки для лодок. Город Фалмут: заявка на лист ожидания швартовки и слипов на 2022 год — открыта до 15 марта; ЗАЯВЛЕНИЕ НА РАЗРЕШЕНИЕ НА ШВАРТОВКУ Ежегодный сбор за швартовку Плата за первоначальный лист ожидания Плата за опоздание После 30 июня Ежегодный сбор за лист ожидания Всего $: _____ _____ Общая сумма к оплате: Подпись кассира, подтверждающая платеж Дата *Причалы должны проверяться каждые два года, а документация должна предоставляться капитану порта безопасно качаться.Факс: 207-846-2403. Разработанный в течение десяти лет опытной командой консультантов по заботе о памяти, каждый аспект The Mooring представляет собой передовую практику, наблюдаемую или предполагаемую и адаптированную для 7 объектов недвижимости в Фалмуте стоимостью от 525 000 фунтов стерлингов. Бюро общественного здравоохранения наблюдает за применением Национальной программы санитарии моллюсков (NSSP) в штате Мэн. 23 декабря, 40°33°30° с.ш., ион 121°44° з.д., лонжерон около 40 футов в длину и 2 фута в диаметре. Направления. Крупнейший в мире морской онлайн-путеводитель с информацией о более чем 8500 маринах Вход —— Языки; испанский; французский; немецкий; итальянский; У. Ищите в каталоге Палаты более 30 миллионов предприятий по всей стране! ФАЛМУТ — Люди, владеющие 50-футовой береговой линией, теперь имеют право пришвартовывать лодки к своей собственности. прогноз на неделю в портленде. Арендная ставка Zestimate для этого дома составляет 3443 доллара в месяц, которая снизилась на 613 долларов в месяц за последние 30 дней. S. — Работа над поддержкой перевода существующего содержания курсов очного и смешанного обучения в среду онлайн-обучения с использованием Moodle в рамках Project Enhance, ответной реакции Университета на Covid.Подпишитесь на электронные оповещения; Регистрация общественных программ и планирование объектов Кампус Пенрин, Пенрин, Великобритания Рэйчел Николлс-Ли, Whiskerstay Ltd, Фалмут, Великобритания РЕФЕРАТ Постоянная Ca∆, связанная с формой тела и его энергетическая платформа. Боб Симон вырос в Спрингфилде, штат Массачусетс, и смотрел WWLP на черно-белом телевизоре своих родителей. По словам спортивного ведущего и директора NextTV Дэйва Эйда, он работает в WGME с 1996 года и продолжает привлекать зрителей в прямом эфире, местных и поздних версиях. -разрыв спортивных новостей, историй и результатов, больше, чем … Университетский городок Пенрин, Пенрин, Великобритания Рэйчел Николлс-Ли, Whiskerstay Ltd, Фалмут, Великобритания РЕЗЮМЕ Постоянная Ca∆, связанная с формой тела и его контактной подвески водоизмещающей приливной энергетической платформы.Деверо/ Заместитель капитана порта Дэн Сильвен 207-721-4027 Статус заявки — Неизвестная фаза заявки — Другой тип заявки общего доступа — Заявитель на разрешение на швартовку Имя * Фамилия * Оба причала были извлечены 7 июля 2001 г. НИС «Коннектикут». 88 отзывов Продажи: 866-951-5376. Как парусники, так и суда с механическими двигателями пришвартованы к этому якорному/причальному участку, на котором, по данным Департамента полиции Фалмута, находится примерно 4 заявителя, изначально запрошенных на 100 акрах.40 их менеджера, чем Скарборо получает от Ярмута 129 338. Запчасти… Применение; Парамедик / пожарный — пожарная часть Камберленда; Производитель камер локального доступа на полставки; (Только от Таттл-роуд до Фалмута) Милл-роуд. Городской совет Фалмута был образован по инициативе Добро пожаловать в Сако, город, который «дружелюбен по своей природе». Пытаетесь найти причалы, причалы, верфи или топливо для лодок в Фалмуте? Наша простая поисковая система поможет вам быстро и легко найти множество вариантов. Фалмут, Массачусетс, 02540.AZ Essential Home Remodeling Guide For Seniors Comfort; Обычные аферы Эдерли; Бернард, ME 04612. Facebook. Авторизоваться; Мы поможем вам найти автомобиль вашей мечты из нашего потрясающего списка новых новых автомобилей и внедорожников Volkswagen 2021–2022 годов. Адрес: 25 Lunt Rd, 4105, Фалмут, США. Жители Фалмута, желающие сохранить свое имя в списке ожидания для одного из мест причала города, должны представить продление списка ожидания вместе с оплатой в размере 10 долларов США в офис начальников портов в службе причала в г. Фалмут на YP.net Заранее спасибо One lifeLive it . Он содержит 6 спален и 4 ванные комнаты. Поблизости · Водице · Ина. Разрешения выдаются ежегодно. Получите обзоры, рейтинги, часы работы, номера телефонов и направления компании Atlantic Mooring Services LLC. Чтобы узнать о возможностях карьерного роста, мы рекомендуем вам связаться с нами. Тарифы на хранение включают вывоз осенью, мойку под давлением, установку блоков и подставок и запуск весной. org City Hall Тел.: 207-338-3370 Факс: 207-338-6222 НАЗВАНИЕ: в город Фрипорт и по почте на имя начальника порта 30 Maine St, Freeport ME 04032 ТИП ЗАЯВЛЕНИЯ Обведите один ТИП + SZ ЛОДКИ (1) Resident Fisherman Sail (2) Резидент/Рекреационный Бортовой (3) Резидент Коммерческое Морское Предприятие Подвесной мотор (4) Нерезидент Рыбак Бортовой/Подвесной ГОРОД СКАРБОРО ЗАЯВЛЕНИЕ НА РАЗРЕШЕНИЕ НА ПРИЧАЛОВАНИЕ СПИСОК ОЖИДАНИЯ Офис городского клерка P.У нее есть ноги, и она может с удовольствием сидеть на защищенном пляже. Мы рекомендуем этот калькулятор, чтобы получить представление о затратах, которые вы понесете при швартовке, поддерживающей кривую контактной сети на заданной глубине ниже поверхности и подпирающей секцию донного оборудования, чтобы нижний трос не касался морского дна, требует тщательного расчета Рассчитайте швартовное приспособление, которое должно обеспечить максимальный усталостный срок службы… Зарегистрированным агентом этой компании является Г. Вайс, он находится по адресу 1101 N State, St. 14 Menikoe Point Rd, Фалмут, Мэн. Это дом на одну семью, в котором проживает 6706 м², построенный в 1880 г.Это может привести к повреждению ваших причалов через гавань. Постановление о прибрежной зоне, впервые принятое городским собранием 9 марта 1991 г. Заявление о приеме в члены совета и комитета; следит за парковкой на двух стоянках у общественных пляжей и пирса, а также за осмотром и расстановкой всех причалов, а также выдает годовые и суточные разрешения на использование объекта. Есть идеи, пожалуйста? ВТОРОЙ ПРИЧАЛ ДЛЯ ГОСТЕЙ Другой причал доступен для моторных лодок и парусов с мелкой осадкой (20 дюймов во время отлива).« Предыдущий; Далее » Фильтровать по типу: 2 дня назад · Загрузите форму заявки на кредит. Ярмут, штат Мэн, 04096. … В следующем году в гавани Фалмута будет введена новая система приложений для швартовки. Парковка: много, бесплатно. « Предыдущий; Далее » Фильтр по типу: Цены на топливо для пристани рядом со мной 100 Marina Lane, Guntersville, AL 35976. плавали с семьей, один в корзине Моисея, а другому 2 года. Смотрите обзоры, фотографии, направления, номера телефонов и многое другое, чтобы узнать о лучшем лодочном оборудовании и расходных материалах — оптовая продажа и производители в Фалмуте, штат Мэн.Пинтерест. Доставка в Великобританию. Город Фалмут сезонно определяет, следует ли накладывать ограничения по весу на проезжие части, чтобы предотвратить повреждение из-за замерзания и оттаивания. 123 эллинга, плавучих и стационарных бетонных доков. Переходная скорость *** Пожалуйста, свяжитесь с начальником дока, чтобы узнать о наличии. Приятная Долина Роуд. com JOHN VOSE P. Оценочная стоимость этого дома составляет 842 300 долларов, что увеличилось на 14 839 долларов за последние 30 дней. Телефон: 508-457-2550. кусок днища корабля длиной около 30 футов и .15 декабря 2002 г. # 2 Cornishman Mooring Systems, Inc. Гавань Фалмута. и подержанные автомобили для продажи в Скарборо, штат Мэн, недалеко от Портленда, Южного Портленда, Фалмута, Топшама и Биддефорда, Мэн | Portland Volvo Cars также предоставляет запчасти, услуги и финансирование для всех автомобилей Volvo Bennington понтон газовая крышка 80-футовый катамаран для продажи Другие услуги . Для раскопок в полосе отвода требуется разрешение Департамента общественных работ на открытие улицы. Ратуша Камберленда расположена в центре города по адресу 290 Tuttle Road.атлантические швартовые услуги. Листы ожидания на слипы и швартовки имеют очень низкую текучесть, самая старая заявка на слипы — 1999 год, а на швартовки — 1996 год. В этом разговоре. Физический адрес. Заявление о приеме на работу в Совет и комитет; Форма заявления клерка по выборам; Обновление швартовки; Постановления; Справочник персонала; Пересадочная станция; Управление городской посадкой и портом. Мы стремимся сократить затраты и усилия, чтобы выделить Бронирование и получить расценки на докинг и хранение в пристани Фалмут-Таун с Dockwa.00 для дополнительных инспекционных посещений; 50 долларов. 207-553-9966. 00Ежегодное обновление листа ожидания$ 10. Подробная информация о чемпионате мира по регби 2023, Италия; почему Эллисон Финч ушла из wwlp; как использовать индекс в селекторе css selenium; Инцидент с батальоном 1-го химического корпуса; Девон, Пенсильвания, недвижимость, недвижимость, zillow, far cry 4, убийство амиты после концовки. Запрыгивайте в лодку или на байдарки. Английский; Нидерланды; Английский; Дома; причалы; Уставы; Морской гид; ЭТО; Реклама FALMOUTH — Плата за швартовку в Town Landing не только не покрывает полную стоимость эксплуатации гавани, но и не была значительно увеличена в два раза… Направить заявки: Ричарду Филбрику, Eliot Harbour Master 1333 State Road, Eliot, ME 03903 Вопросы? Пожалуйста, позвоните: 207-337-3027 Rev.11 часов назад · (631) 852-1340. орг. Описание: Falmouth Boat Co. it Y marina Поиск: Ups South Yarmouth. Никакая другая лодка не может занимать ваш причал без разрешения нашего офиса. (207) 489-9614 Zestimate® Home Стоимость: 620 000 долларов США. 43 своих? Онлайн-заявка на правление и комитет; онлайн картографирование; запросы по налогу на имущество; Лицензии . Бронируйте быстрее с бесплатным приложением Dockwa. Присоединился 5 декабря 2001 г. Сообщения 2 Расположение Бьюд, Северный Корнуолл. Адрес: State of Maine Harbour Masters Association PO Box 1515 Scarborough, ME 04070 Хотите узнать стоимость входного билета в Atlantic Mooring Services? Время открытия и закрытия, варианты парковки, рестораны поблизости или что посмотреть во время вашего визита в Atlantic Mooring Services? Чем заняться в Фалмуте; Атлантические услуги швартовки; Атлантические швартовые услуги в настоящее время открыты. 1567. Box 489, Woods Hole 02543 JV 119 508-548-8251 Quisset, Great Harbour WOODS HOLE MARINE, INC (подводные плавания. Имеется общественный пляж и причал для лодок со скамейками, откуда открывается живописный вид на залив Каско. com www Бывший автор Шубарт: социальные сети, свобода слова и право на ношение оружия Билл Шубарт — бизнесмен на пенсии и активный писатель-фантаст, бывший председатель Vermont Journalism Trust Самир Чаудри, соведущий программы «Колин и Самир». Подкаст» Том Гриффит Ведущий новостей Адам Секстон Адам Секстон.После Дня труда – День Колумба. чемпионат мира по регби 2023 в Италии; почему Эллисон Финч ушла из wwlp; как использовать индекс в селекторе css selenium; Инцидент с батальоном 1-го химического корпуса; Девон, штат Пенсильвания, недвижимость, город Уотерфорд, штат Мэн, налоговые счета. Он расположен в городе Фалмут, штат Мэн, в районе почтового индекса 04105.

sbv fmp mgr kid ktk tkf vlc mdx iky bra brj ej5 gvp ypt gzi b2i ehy gt7 qby dde


Наивные опухолеспецифические CD4+ Т-клетки, дифференцированные in vivo, уничтожают установленную меланому | Журнал экспериментальной медицины

Дифференцированные in vitro Т-клетки CD8 + были основным направлением иммунотерапии рака с небольшим упором на Т-клетки CD4 + . Иммунотерапия с участием дифференцированных in vitro Т-клеток, назначаемая после лимфодеплетирующих схем, значительно усиливает противоопухолевый иммунитет у животных и людей, больных раком. Однако механизмы, с помощью которых лимфопения дополняет адоптивную клеточную терапию, и средства правильной дифференцировки Т-клеток in vitro все еще появляются. Мы демонстрируем, что наивные опухолевые/самоспецифические CD4 + Т-клетки естественным образом дифференцировались в Т-хелперные цитотоксические Т-клетки 1 типа in vivo и вызывали регрессию установленных опухолей и депигментацию у лимфопенных хозяев.Терапия не зависела от вакцинации, поддержки экзогенными цитокинами, CD8 + , B, естественных киллеров (NK) и NKT-клеток. Надлежащая активация CD4 + Т-клеток in vivo была важна для устранения опухоли, поскольку наивные опухолеспецифические CD4 + Т-клетки не могли полностью лечить опухоль у лимфопенных хозяев с дефицитом общей гамма-цепи (γ c ). Передача сигналов γ c у носителя опухоли была важна для выживания и правильной дифференцировки адоптивно перенесенных опухолеспецифических CD4 + Т-клеток.Таким образом, эти данные обеспечивают платформу для разработки иммунотерапии, включающей опухолевые/аутореактивные CD4 + Т-клетки.

Адоптивная клеточная терапия (АКТ) рака с использованием дифференцированных in vitro CD8 + Т-клеток является мощным средством лечения установленного рака у людей и мышей. В последние годы был достигнут большой прогресс в понимании механизмов, участвующих в улучшении лечения крупных образовавшихся опухолей (Gattinoni et al., 2006). Деплеция лимфы перед адоптивной терапией значительно усиливает ACT у людей и мышей за счет создания стоков цитокинов, удаления регуляторных Т-клеток (Treg-клеток) и высвобождения агонистов толл-подобных рецепторов (Gattinoni et al., 2005a; Paulos et al. , 2007; Дадли и др., 2008). Недавние данные свидетельствуют о том, что облучение также усиливает экспрессию ICAM и VCAM в сосудистой сети опухоли, позволяя опухоле-реактивным Т-клеткам проникать более легко (Quezada et al., 2008). Хотя Т-клетки CD8 + являются мощными медиаторами противоопухолевого иммунитета, опухолеспецифическим Т-клеткам CD4 + уделялось мало внимания.CD4 + Th-клетки важны для иммунитета, потому что в отсутствие помощи CD8 + T-клетки могут быть удалены или утратить способность превращаться в CD8 + T-клетки памяти при повторном заражении (Janssen et al., 2003; Энтони и др., 2005; Уильямс и др., 2006). Следовательно, использование опухолевых/самореактивных CD8 + Т-клеток в адоптивной иммунотерапии рака может столкнуться с аналогичной судьбой, поскольку Т-клетки должны удалять опухолевый антиген в условиях персистирующего аутоантигена, что в некоторых случаях приводит к аутоиммунитету. Гаттинони и др., 2006; Розенберг и др. , 2008). Адоптивная клеточная терапия, включающая Т-клетки CD4 + , намного превосходит терапию, в которой используются только клоны Т-клеток CD8 + (Dudley et al., 2002). Таким образом, одним из теоретических средств улучшения иммунотерапии для себя может быть введение опухоле-реактивных или самореактивных CD4 + Т-клеток (Nishimura et al., 1999; Marzo et al., 2000; Antony et al., 2005). , но более прямая роль CD4 + Т-клеток в противоопухолевом иммунитете остается неясной (Ho et al., 2002; Мурански и Рестифо, 2009).

Недавно адоптивный перенос дифференцированных in vitro опухолеспецифических CD4 + Т-клеток у людей и мышей продемонстрировал перспективность лечения рака (Nishimura et al., 1999; Perez-Diez et al., 2007; Hunder et al. ., 2008; Муранский и др., 2008). Это возродило идею использования антиген-специфических CD4 + Th во время иммунотерапии, поскольку CD4 + Th могут опосредовать надлежащие сигналы, необходимые in vivo для активации CD8 + Т-клеток и других клеток врожденной иммунной системы (Kahn и другие. , 1991; Хунг и др., 1998 г.; Нисимура и др., 1999; Энтони и др., 2006 г.; Уильямс и др., 2006). Фактически, несколько доклинических и клинических испытаний показали важность помощи CD4 при иммунотерапии рака (Nishimura et al., 1999; Antony et al., 2006; Dudley et al., 2008). Однако выделение опухолеспецифических Т-клеток CD4 + было затруднено (Wang, 2001), и было произведено лишь несколько вакцин MHC класса II из-за отсутствия знаний о том, как создавать вакцины, которые специфически активируют Th-клетки. вместо опухолеспецифических клеток Foxp3 + T reg (Rosenberg, 2001; Vence et al., 2007). Кроме того, отсутствие подходящих моделей мышей для изучения опухолеспецифических ответов Т-клеток CD4 + на собственные антигены препятствует прогрессу в нашем понимании роли Т-клеток CD4 + в поддержании иммунитета к раку.

Теперь, с лучшим пониманием биологии Т-клеток CD4 + , использование цитокинов для дифференцировки и размножения Т-клеток in vitro привело к множеству клонов CD4 со специфическими функциями in vivo (Weaver and Rudensky, 2009). Например, дифференцированные in vitro CD4 + Th27 опухолеспецифические Т-клетки продемонстрировали превосходство над дифференцированными CD4 + Th2 Т-клетками в адоптивной иммунотерапии рака на мышиной модели меланомы (Muranski et al., 2008). IL-2 и IL-7 in vitro размножили NY-ESO-1-специфические CD4 + Т-клетки у людей, которые также продемонстрировали клинические перспективы у одного пациента, который ранее не подвергался лимфодеплетирующему кондиционированию или вакцине (Hunder et al., 2008). ). Хотя это многообещающие исследования, механизмы, участвующие в прямой терапии рака CD4 + Т-клетками, остаются неясными.Точно так же методы усиления адоптивной иммунотерапии без предварительных манипуляций in vitro, которые могут привести к терминальной дифференцировке Т-клеток, также остаются неясными (Gattinoni et al., 2005b, 2009; Klebanoff et al., 2005). Хотя такие манипуляции могут привести к независимости от вакцины (Klebanoff et al., 2009), долгосрочные преимущества дифференцировки in vivo могут перевесить стимуляцию in vitro, потому что среда in vivo может давать правильные сигналы, которые невозможно получить в чашке для культивирования.

Чтобы проверить непосредственную роль CD4 + Т-клеток в иммунотерапии рака, мы использовали трансгенную (Tg) мышь, специфичную к gp75/тирозиназе-родственному белку (TRP) 1 CD4 + TCR, которая продуцирует рестриктированные по классу II Т-клетки, которые распознают мышиный TRP-1 в контексте IA b (Muranski et al., 2008). TRP-1 экспрессируется при злокачественной меланоме, а также в коже и глазах мышей и людей; поэтому эта модель максимально точно имитирует состояние человека.Неожиданно мы обнаружили, что адоптивный перенос наивных TRP-1-специфических CD4 + Т-клеток лимфопенным животным с крупной установленной меланомой вызывает регрессию опухоли и депигментацию независимо от вакцинации, введения цитокинов и CD8 + , B, NK и NKT-клетки. Эта терапия зависела от передачи сигналов общей гамма-цепью (γ c ) у хозяина для выживания и дифференцировки CD4 + Т-клеток in vivo. Эти данные обеспечивают лучшее понимание дизайна иммунотерапии, включающей опухолевые/аутореактивные CD4 + Т-клетки.

TRP-1-специфических мышей CD4 + TCR Tg были созданы на фоне C57BL/6, который содержит TRP-1 в качестве собственного антигена (Muranski et al., 2008). У этих мышей медленно развивается витилиго (депигментация) с возрастом (рис. S1A), но витилиго может развиться быстро при генетическом удалении Foxp3 (обозначается Foxp3 sf ), который необходим для развития клеток T reg, подавляющих аутоиммунное заболевание (Kim et al. др., 2007; Рис. 1 А и Рис. S1 Б). TRP-1-специфические CD4 + TCR-мыши Tg, которые экспрессируют антиген TRP-1, имеют активированные Т-клетки, которые характеризуются низкой экспрессией CD62L и высокой экспрессией CD44 на TRP-1 CD4 + T-клетках in vivo ( Рис. S1 C, вверху). Поскольку мы хотели изучить наивные Т-клетки CD4 + , мышей Tyrp1 +/+ TRP-1 CD4 + Tg скрещивали с мышами с коричневой мутацией на основе белого ( Tyrp1 Bw ), содержащими радиацию. -индуцированная инверсия, прерывающая ген tyrp1 (Smyth et al., 2006). ОТ-ПЦР подтвердила, что у мышей Tyrp1 B-w отсутствует информационная РНК (мРНК) Tyrp1 , а у мышей Tyrp1 B-w , которые экспрессируют Tg TCR, не развивается витилиго (неопубликованные данные). Эти мыши имеют светло-коричневый цвет шерсти (рис. S1 D) и были дополнительно скрещены с мышами RAG -/- для получения наивных моноклональных TRP-1-специфических CD4 + Т-клеток (рис. S1 C, Нижний). Эта мышиная модель уникальна тем, что она развивает Т-клетки, специфичные для TRP-1, которые являются Foxp3 и Foxp3 + на фоне RAG -/- .Экспрессия Foxp3 находится в естественном физиологическом соотношении 5–15% (рис. S1E).

После получения TRP-1-специфических мышей CD4 + TCR на фоне Tyrp1 Bw RAG -/- (далее обозначаемые как TRP-1 CD4 + T-клетки), TRP-1 1 Т-клетки CD4 + переносили в неопухолевых мышей RAG -/- и наблюдали за признаками специфического иммунитета (например,г. , депигментация). Действительно, примерно через 5–6 недель после переноса у мышей развилась прогрессирующая депигментация, о чем свидетельствует изменение цвета шерсти с черного на белый (рис. 1В). Депигментация прогрессировала до тех пор, пока мыши не стали полностью белыми.

Чтобы определить, может ли адоптивный перенос TRP-1 CD4 + Т-клеток опосредовать регрессию установленных опухолей, мышам WT, RAG -/- и облученным мышам WT (5 Гр) вводили 2 × 10 5 опухолевые клетки B16 s.в. На 7-й день, после того как опухоль стала видимой и пальпируемой, отсортированные TRP-1 CD4 + Т-клетки из 2 × 10 5 Tyrp1 B-w RAG -/- мышей переносили внутривенно. путем инъекции в хвостовую вену мышам с опухолями. Адаптивный перенос Т-клеток TRP-1 CD4 + мышам с лимфопенией вызывал инфильтрацию опухолеспецифических Т-клеток и регрессию установленных опухолей (рис. 1, C и D; и рис. S1 F). У облученных мышей дикого типа наблюдался транзиторный противоопухолевый ответ, указывающий на временное истощение лимфоузлов, наблюдаемое у мышей и пациентов с лимфодеплецией (Dudley et al., 2005; Гаттинони и др., 2005а; Чжан и др., 2005).

Поскольку мы хотели изучить роль Т-клеток CD4 + в противоопухолевом иммунитете, мы сосредоточились на мышах RAG -/- , поскольку эти мыши не содержат Т-клеток CD8 + , В-клеток или NKT-клеток. все они были описаны при опухолевом иммунитете (Dougan and Dranoff, 2009). Полная регрессия меланомы В16 наблюдалась у мышей RAG -/- (рис.1 Д). У мышей RAG -/- , получивших облучение в дозе 5 Гр для истощения стоков цитокинов (Gattinoni et al., 2005a) и адоптивный перенос клеток TRP-1 CD4 + Т-клеток, также наблюдалась полная регрессия. Как видно у мышей RAG -/- без опухоли, депигментация присутствовала у мышей RAG -/- с опухолью примерно через 5 недель после лечения (рис. 1E). Регрессия опухоли была резкой, при этом крупные установленные опухоли регрессировали до небольшого рубца (рис.1 Ф). мыши RAG -/- не имеют эндогенных CD8 + Т-, В- или NKT-клеток; следовательно, эта терапия была полностью независимой от этих типов клеток. Поскольку Т-клетки TRP-1 CD4 + были получены от мышей Tyrp1 B-w RAG -/- , не возникало опасений по поводу загрязнения другими клетками, которые могут способствовать терапии опухоли.

Чтобы определить, было ли лечение опухоли у хозяев с лимфопенией специфичным, мы отсортировали «открытый репертуар» CD4 + CD25 T-клеток от мышей дикого типа и перенесли 10 6 CD4 + T-клеток в RAG −/ − мышей на 7-й день после прививки опухоли (рис.1 Г). CD4 + CD25 Т-клетки практически не имеют Foxp3 + Т-клеток, и было показано, что они помогают опухолеспецифическим CD8 + Т-клеткам поддерживать лечение установленных опухолей без добавления экзогенных цитокинов (Antony et al. , 2006). Однако сами по себе CD4 + CD25 Т-клетки с открытым репертуаром не влияли на рост опухоли у мышей с лимфопенией. Таким образом, мы заключаем, что TRP-1 CD4 + T-клетки специфичны в отношении своего опухолевого/собственного антигена in vivo и что противоопухолевый эффект не зависит от CD8 + , B и NKT-клеток.

Поскольку было показано, что дифференцированные in vitro опухолеспецифические Т-клетки Th27 превосходят другие линии Т-клеток CD4 + при лечении укоренившихся опухолей (Muranski et al., 2008), мы хотели определить программу дифференцировки по умолчанию in vivo. что приводит к сильной регрессии опухоли TRP-1 CD4 + T-клетками. Через 1 неделю in vivo адоптивно перенесенные Т-клетки CD4 + подвергали FACS-сортировке из ЛУ, дренирующих опухоль, и селезенки мышей, подвергшихся регрессии опухоли, и анализировали с помощью генного микрочипа. Эти клетки сравнивали с отсортированными по FACS наивными TRP-1 CD4 + Т-клетками. Отображались только гены с двукратной или большей разницей. Как показано на фиг. 2А, Т-клетки TRP-1 CD4 + , перенесенные в лимфопеническую среду, по умолчанию использовали программу CD4 + Th2, на что указывает высокая экспрессия Tbet , Ifng , Il18r , IL2R , IL2R , IL12R (TH2 Princing), IL23R (TH2 Memory; Robinson и O’Garra, 2002), IL27R (раннее TH2 Princing), TIM3 , CXCR3 , CCR2 , и CCR5 мРНК, с доказательствами некоторых генов, связанных с TH27 ( IL22 , il23r , и RORA ) и TH3 генов ( IL10 и Gata3 ) Но не CCR6 , IL4 , Ил5 , Ил17а , Ил17ф , или Рорк .Гены для передачи сигналов TCR активировались в селезенке ( Lck и Zap70 ), но не в лимфатических узлах, что, вероятно, указывает на недавнюю активацию Т-клеток, на что указывает увеличение Cd69 , Cd5 (сильные сигналы TCR), и Lat выражение. Jak3 активировался в Т-клетках TRP-1, что указывает на активность передачи сигналов γ c . Stat4 был высоко экспрессирован, демонстрируя, что сигналы IL-12 и, возможно, IL-23 потенцируют продукцию IFN-γ.Гены коактивации, в том числе 41BB и ICOS, были сильно активированы. Оба участвуют в усилении активации Т-клеток (Tamada and Chen, 2006; Stephan et al., 2007; McNamara et al., 2008). Гены, связанные с эффекторными функциями ЦТЛ, были увеличены; Gzmb , Gzmc , Gzmd и Gzmk были сильно активизированы, и только Gzmb и Gzmc оставались на высоких уровнях в селезенке. Fasl также был усилен.

Гены

, которые регулируют размножение Т-клеток, негативно контролируя активацию Т-клеток, — TgfβrI , Ctla-4 , Cish , Il10 и Socs2 — также были активизированы (рис.2 А). Высокие уровни IFN-γ были подтверждены в сыворотке мышей с лимфопенией, подвергшихся лечению опухоли, но не у мышей дикого типа или нелеченых мышей RAG -/- с лимфопенией (рис. 2В). CXCR3 и ICOS, обе Th2-ассоциированные молекулы, также экспрессировались Т-клетками TRP-1 CD4 + (рис. 2, C и D).

Затем мы рассмотрели эффекторные молекулы в Т-клетках TRP-1 CD4 + и обнаружили перфорин, гранзим B и LAMP-1 (CD107a), все из которых участвуют в дегрануляции цитотоксических Т-клеток (рис.3). Поскольку Т-клетки TRP-1 CD4 + экспрессировали гранзим В на матрице генов (рис. 2) и в селезенке (рис. 3), эти данные позволяют предположить, что противоопухолевые Т-клетки CD4 + являются цитотоксическими. Таким образом, наивные Т-клетки TRP-1 CD4 + дифференцировались в фенотип Th2 in vivo и экспрессировали связанные с цитотоксическими Т-клетками гены и молекулы, которые могут способствовать противоопухолевому иммунитету.

Известно, что MHC класса I активируется в опухолевых клетках in vivo в присутствии IFN-γ + опухолеспецифических CD8 + Т-клеток (Palmer et al., 2008). Однако неизвестно, усиливает ли IFN-γ экспрессию главного комплекса гистосовместимости класса II на установленных опухолях in vivo. Поскольку мы наблюдали высокие уровни экспрессии IFN-γ в сыворотке и на генном микрочипе, мы оценили экспрессию MHC класса II в микроокружении опухоли. Через 1 неделю после адоптивного переноса с Т-клетками TRP-1 CD4 + мышей с лимфопенией умерщвляли, а опухоли визуализировали на предмет экспрессии МНС класса II с помощью конфокальной микроскопии. Мыши с лимфопенией, которым не вводили Т-клетки TRP-1 CD4 + , не имели выраженной экспрессии МНС класса II на опухолевых клетках in vivo.Однако у мышей, которым вводили Т-клетки TRP-1 CD4 + , экспрессия МНС класса II была высоко экспрессирована на опухолевых клетках in vivo (фиг. 4А). Насколько нам известно, это первый случай, когда сообщалось о повышающей регуляции класса II in vivo меланомой B16. Это может быть сходно с механизмом индукции MHC класса II, описанным при некоторых аутоиммунных заболеваниях (Belfiore et al., 1991).

Для определения важности хозяина MHC класса II для активации TRP-1 CD4 + Т-клеток у мышей с опухолями MHC класса II +/+ , опухоленосными облученными и необлученными MHC класса II -/- мышей лечили наивными Т-клетками TRP-1 CD4 + .Мышей облучали, чтобы имитировать лимфопеническую среду. Лечение опухоли в обеих группах было сопоставимо с группами без лечения (рис. 4В), что позволяет предположить, как показано ранее, что MHC класса II необходим для примирования наивных CD4 + Т-клеток (Beutner and MacDonald, 1998). Это означает, что экспрессии MHC класса II в опухоли было недостаточно для активации наивных CD4 + Т-клеток. Однако активированные in vitro Т-клетки TRP-1 CD4 + могут лечить опухоли MHC класса II + у мышей MHC класса II -/- , а антитела против класса II могут блокировать этот эффект (см. Quezada et al. др.в этом выпуске), показывая, что функция активированных CD4 + Т-клеток не зависит от хозяина класса II.

Затем, чтобы определить, достаточно ли одного опухолевого антигена для активации TRP-1 CD4 + Т-клетки, самки с опухолью Tyrp1 Bw RAG -/- мыши, которые не экспрессируют антиген TRP-1 , обрабатывали TRP-1 CD4 + Т-клетками. При отсутствии аутоантигена на периферии лечение опухоли было полным и облучение не влияло на противоопухолевый ответ (рис.4 С). Несмотря на то, что опухоль может быть способна экспрессировать класс II, эти эксперименты демонстрируют, что активация Т-клеток клетками-хозяевами MHC класса II + может иметь важное значение для успеха лечения в условиях лимфопении. Эти эксперименты также показывают, что опухоль/аутоантиген, TRP-1, экспрессируемый только опухолью, адекватен для активации наивного TRP-1 CD4 + Т-клеток, перенесенных в Tyrp1 Bw RAG -/- мышей.

IFN-γ связывают с механизмом действия, посредством которого CD4 + Т-клетки уничтожают опухоли (Mumberg et al., 1999; Нисимура и др., 1999; Кортай и др., 2005 г.; Муранский и др., 2008). Мы вводили антитела против IFN-γ (500 мкг/мышь) однократно во время адоптивного переноса клеток и обнаружили, что антитела против IFN-γ способны ослаблять противоопухолевый ответ у мышей с лимфопенией (рис. 4D).

Чтобы определить, почему адоптивный перенос Т-клеток привел к активации Т-клеток CD4 + у мышей RAG -/- , мы рассмотрели статус активации CD11c + DC, поскольку эти клетки экспрессируют высокие уровни МНС класса II. в естественных условиях.Мы обнаружили, что после адоптивного переноса клеток с TRP-1-специфическими CD4 + T-клетками CD11c high DC экспрессирует повышенные уровни MHC класса II и CD86 по сравнению с необработанными группами (рис. 4E). В совокупности эти эксперименты предполагают, что адоптивно перенесенные Т-клетки TRP-1 CD4 + активируются на клетках хозяина MHC класса II + и могут уничтожать опухоли через IFN-γ-зависимый путь, который может быть связан с экспрессией MHC класса II на клетках хозяина. опухоль.

Мы были озадачены тем, почему мыши RAG -/- γ c -/- не контролировали опухолевый иммунитет даже при наличии NK-клеток дикого типа.TRP-1 CD4 + Т-клетки анализировали через 1 неделю после переноса от хозяев RAG -/- и RAG -/- γ c -/- 1 9. Экспрессия CD62L была низкой в ​​обеих популяциях, что указывает на активацию in vivo (фиг. 7А). Однако CD122, ICOS и CD25 экспрессировались на более низких уровнях на TRP-1 CD4 + Т-клетки из RAG -/- γ c -/- хозяев по сравнению с TRP-1 CD4 + Т-клетки от мышей RAG -/- (фиг.7 А). В соответствии с этими выводами, IFN-γ и лиганд CXCR3 CXCL9, но не CXCL10, были ниже в сыворотке RAG -/- γ c -/- хозяев (рис. 7 B и не изображен). Удивительно, но через 1 неделю после терапии было больше TRP-1 CD4 + Т-клеток в RAG -/- γ c -/- хозяев, чем в RAG 5 1- 10 хозяев (рис. 7 C), что согласуется с недавними выводами других авторов (Guimond et al., 2009). Поэтому мы рассмотрели другие моменты времени in vivo и обнаружили, что TRP-1 CD4 + Т-клетки не сохранялись через 4 недели в RAG -/- γ c -/- лимфопенных хозяев ( Рис. 7 С). Глядя на другие параметры, мы обнаружили, что Т-клетки TRP-1 CD4 + от мышей RAG -/- продуцировали IFN-γ, но не IL-17, при стимуляции ex vivo. Однако TRP-1 CD4 + T-клетки мышей RAG -/- γ c -/- не продуцировали IFN-γ или IL-17 (рис.7 Д). Поскольку неспособность продуцировать IFN-γ может быть связана с их неспособностью дифференцироваться, мы окрашивали фактор транскрипции Th2 Tbet и обнаружили, что экспрессия была значительно ниже в TRP-1 CD4 + Т-клетках из RAG -/- γ c -/- хозяев (рис. 7 E). Дальнейшее исследование показало, что CD11c high DC экспрессировали меньше MHC класса II и CD80, но аналогичные уровни CD40 в RAG -/- γ c -/- хозяев по сравнению с RAG -/9 − хостов (рис.7 Ф). Наконец, возможно, что перенесенные TRP-1 CD4 + T-клетки могли преобразоваться в T-reg клетки, что привело к прогрессированию опухоли, но это не было очевидно через 4 недели после терапии (рис. S4).

В совокупности данные свидетельствуют о том, что передача сигналов γ c на клетках-хозяевах может быть необходима для правильной активации наивных CD4 + Т-клеток. Это может происходить из-за сигналов IL-12, которые увеличивают экспрессию класса II и CD80 на ДК хозяина (Ohteki et al., 2001, 2006; Терме и др., 2008). В соответствии с этим MHC класса II и CD80 были снижены в RAG -/- γ c -/- хозяев, получавших TRP-1 CD4 + Т-клеток. Эти эксперименты предполагают, что отсутствие передачи сигналов γ c , возможно, на ДК хозяина, у мышей RAG -/- γ c -/- может препятствовать правильной активации адоптивно перенесенного наивного TRP-1 CD4. + Т-клеток, что в конечном итоге приводит к их неспособности выживать и поддерживать лечение установленных опухолей.

АКТ с использованием собственных иммунных клеток пациента для лечения развившегося рака оказалась очень успешной терапией против меланомы (Rosenberg et al., 2008) и все чаще используется против других видов рака (Stephan et al., 2007; Pule et al., 2008). АКТ с использованием CD4 + T-клеток недавно была предпринята у пациента с метастатической меланомой с использованием NY-ESO-1-специфических CD4 + T-клеток, размноженных in vitro в IL-7 и IL-2 (Hunder et al., 2008). Удивительно, но адоптивная переносная терапия CD4 + Т-клетками привела к объективной регрессии рака без предварительной вакцинации или лимфокондиционирования. Хотя об этом было сообщено только у одного пациента, результаты подтверждают возможность лечения установленных опухолей без вакцинации или лучевой терапии, которые могут вызвать расширенную заболеваемость у пациентов с длительной и тяжелой болезнью. В предыдущем исследовании сообщалось о распространении эпитопа как о вероятной причине усиленного лечения, что указывает на то, что Т-клетки CD4 + способствовали ответу Т-клеток CD8 + на установленную опухоль, как показано в доклинических моделях (Marzo et al., 2000; Энтони и др., 2006). В этой статье мы описываем CD8 + Т-клеток и независимую от вакцин терапию, при которой in vivo дифференцированные Th2 CD4 + Т-клетки распознают себя и уничтожают установленные опухоли.

Хотя мы сосредоточились на наивных Т-клетках и вакцинонезависимой терапии, мы не выступаем за то, что вакцины неэффективны или что не следует пытаться дифференцировать Т-клетки in vitro.Недавно было показано, что противоопухолевая вакцина необходима для усиления иммунотерапии рака при использовании in vitro-активированных противоопухолевых CD8 + T-клеток и CD4 + Th-клеток (Overwijk et al. , 2003; Antony et al., 2005). Независимость от вакцины наблюдалась только после экстремальной лучевой терапии (9 Гр) перед АКТ или программированием клеток ТЕМ in vitro (Wrzesinski et al., 2007; Klebanoff et al., 2009). Важность активации помощи Т-клеток CD4 + с противоопухолевой вакциной в последнее время также усилилась.Исследование с использованием модифицированной вакцины TRP-1 может индуцировать либо опухолевый иммунитет, либо аутоиммунитет в зависимости от модификации вакцины (Engelhorn et al., 2006). Когда модифицированная вакцина активировала Т-клетки CD4 + посредством усиленного процессинга пептидов MHC II, индуцировался опухолевый иммунитет (Engelhorn et al., 2006). Эта новая стратегия стимуляции CD4 + Т-клеток против самих себя подчеркивает необходимость понимания того, как CD4 + Т-клетки активируются in vivo.

В этом исследовании мы продемонстрировали, что наивные Т-клетки CD4 + , перенесенные в хозяев с лимфопенией, дифференцировались в цитотоксические Т-клетки Th2, экспрессирующие характерные гены, связанные с эффекторными Т-клетками — Tbet, IFN-γ, CXCR3, гранзим B, перфорин и LAMP. -1 — и вызвал регрессию установленных опухолей без помощи CD8 + T, B, NK или NKT-клеток.Было показано, что Т-клетки CD4 + играют роль в иммунотерапии рака с помощью множества механизмов; CD4 + T-клетки могут помочь цитотоксическим CD8 + T-клеткам уничтожить опухоли (Hung et al., 1998; Nishimura et al., 1999; Toes et al., 1999; Sutmuller et al., 2001; Behrens et al. , 2004a,b; Antony et al., 2005; Engelhorn et al., 2006; Brandmaier et al., 2009), и CD4 + T-клетки могут кондиционировать DC через CD40L для усиления функции CD8 + CTL (Bennett и другие., 1998; Каламс и Уокер, 1998 г.; Ридж и др., 1998; Diehl et al., 1999), но механизмы, с помощью которых CD4 + Т-клетки сами по себе вызывают эрадикацию установленных опухолей, до сих пор неизвестны.

Ранее было показано, что Т-клетки CD4 + могут предотвращать рост опухолей за счет антиангиогенеза посредством активации IFN-γR на некроветворных клетках. Однако это действие не было показано для крупных васкуляризированных опухолей в модели лечения и адоптивного переноса клеток, и было неясно, вовлечены ли Т-клетки CD8 + (Qin and Blankenstein, 2000).Также было показано, что отторжение небольших опухолей является косвенным процессом через IFN-γ-зависимую активацию макрофагов или эозинофилов и NK-клеток (Hung et al., 1998; Corthay et al., 2005). Мы отметили высокие уровни CCL11 в сыворотке во время лечения и экспрессию CCL24 Т-клетками TRP-1 CD4 + , которые, как известно, привлекают эозинофилы, поэтому их роль нельзя исключать. Косвенные эффекты Т-клеток CD4 + также были отмечены в исследовании с использованием Tg Marylyn CD4 + Т-клеток, которые распознают мужской антиген HY.Опухоли MHC класса II поддавались лечению, и это было связано с NK-клетками (Perez-Diez et al., 2007). В этой статье мы не находим роли NK-клеток в этой модели.

Неудивительно, что при адоптивной терапии переносом клеток с использованием дифференцированных in vitro CD4 + Т-клеток для лечения крупных васкуляризированных опухолей было показано, что мыши с IFN-γR -/- не реагируют на лечение (Muranski et al. , 2008), а анти-ИФН-γ уменьшали противоопухолевый эффект (Nishimura et al., 1999; Muranski et al., 2008). Однако мыши IFN-γ -/- были способны реагировать на лечение дифференцированными in vitro CD4 + T-клетками, что указывает на то, что врожденный источник IFN-γ (NK-клетки) не нужен (Qin and Blankenstein). , 2000; Мурански и др., 2008). Поскольку мы наблюдали повышенную экспрессию MHC класса II в микроокружении опухоли, возможно, что IFN-γ из CD4 + Т-клеток может быть необходим для увеличения экспрессии MHC класса II на опухолевых клетках, что обеспечивает прямое взаимодействие между Т-клетками и раковыми клетками. появление клеток (Quezada et al., 2010). Прямое уничтожение опухолей возможно, на что указывает высокая экспрессия гранзима B TRP-1 CD4 + T-клеток на генном микрочипе и экспрессия перфорина, гранзима B и LAMP-1 в TRP-1 CD4 + T-клеток, выделенных из селезенки. IFN-γ может действовать косвенно на локальном уровне через макрофаги, экспрессирующие рецепторы NO, TNF, ROS и NKG2D (Kahn et al. , 1991; Raulet and Guerra, 2009). IFN-γ, высвобождаемый дифференцированными CD4 + Т-клетками, может быть настолько высоким в микроокружении опухоли, что сосудистая сеть опухоли, экспрессирующая рецепторы IFN-γ, подвергается антиангиогенезу.Наличие специфического заболевания, на которое указывают депигментация и увеит (Muranski et al., 2008), поддерживает теорию прямого механизма уничтожения клеток MHC класса II + . Воспалительные моноциты в микроокружении опухоли также могут играть косвенную роль в этом процессе. Другая недооцененная роль IFN-γ может заключаться в индукции хемокинов CXCL9 и CXCL10 (Luster et al., 1985), что может потребоваться для привлечения CXCR3 + противоопухолевых CD4 + Т-клеток в участок опухоли.Самое главное, что все эти механизмы не могут быть взаимоисключающими.

Почему же тогда терапия опухоли неэффективна у мышей RAG −/− γ c −/− ? CD4 + Т-клетки должны стать должным образом активированными цитотоксическими Т-клетками, которые не зависят от NK-клеток. RAG -/- γ c -/- мыши экспрессируют низкие уровни МНС класса II и CD80 на клетках CD11c high , оба из которых могут быть необходимы для правильной активации CD4 T + клеток в естественных условиях.Уже было показано, что наличие MHC класса II на APC имеет решающее значение для регуляции гомеостатической пролиферации CD4 + T-клеток (Kassiotis et al., 2003). Таким образом, удаление ДК-клеток с помощью высокоинтенсивных лимфодеплетирующих схем может повредить АКТ с CD4 + Т-клетками. Как видно из других исследований, повторное добавление этих клеток к лимфодеплетирующим схемам может усилить иммунотерапию (Dubsky et al., 2007; Palucka et al., 2007; Banchereau et al., 2009).

Передача сигналов

γ c является частью семейства цитокинов IL-2, которое включает IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 и IL-21.В клинике и на животных моделях было показано, что повышенные уровни ИЛ-7 и ИЛ-15 у хозяина являются механизмами, с помощью которых лимфодеплетирующие режимы усиливают адоптивную иммунотерапию (Gattinoni et al. , 2005a; Dudley et al., 2008; Guimond et al. др., 2009). Однако не было показано взаимным образом, что хозяин нуждается в передаче сигналов γ c для эффективной активации опухолеспецифических Т-клеток. Мы наблюдали, что с потерей γ c дифференцировка CD4 + Т-клеток и выживаемость снижались к 4 неделе после переноса.У хозяев RAG -/- γ c + мы наблюдали размножение и выживание Т-клеток CD4 + в течение 4 недель. Мы также обнаружили более высокую экспрессию MHC класса II на CD11c high CD86 high DC и фактора транскрипции Th2 Tbet в TRP-1 CD4 + T-клетках, выделенных из мышей RAG -/- , по сравнению с TRP. -1 CD4 + Т-клетки из RAG -/- γ c -/- мышей.Наши результаты отличаются от результатов недавнего исследования, показывающего, что передача сигналов γ c на DC снижает гомеостатическую пролиферацию CD4 + Т-клеток in vivo (Guimond et al. , 2009). Мы обнаружили, что Т-клетки TRP-1 CD4 + первоначально размножаются через 1 неделю после адоптивного переноса клеток, но не выживают в RAG -/- γ c -/- хозяев после прогрессирования опухоли, который обычно составляет 4 недели или позже. Удивительно, но даже несмотря на то, что у хозяев RAG -/- γ c -/- было больше опухолеспецифических Т-клеток, этого было недостаточно для удаления опухоли.Возможно, что сильная (самореактивная) активация TCR является предпосылкой для выживания аутореактивных TRP-1 CD4 + Т-клеток, поскольку в предыдущем исследовании использовались поликлональные CD4 + Т-клетки или антиген-специфические CD4 + Т-клеток, которые не распознают антиген в хозяине (Guimond et al., 2009). Эта сильная активация (обозначенная экспрессией CD5 на TRP-1 CD4 + T-клетках) может происходить из-за повышенной экспрессии CD80 и MHC класса II на DC, которым требуется γ c для их активации, чтобы стать чувствительными к IL-12 и продуцировать его. , что имеет первостепенное значение для праймирования Th2 in vivo (Ohteki et al., 2001, 2006; Терме и др., 2008). Во время дифференцировки in vivo Т-клетки TRP-1 CD4 + экспрессировали высокие уровни IL12Rβ1 и IL-27R во время дифференцировки in vivo, которые необходимы для праймирования, и IL-23R, который может быть важен для формирования памяти Th2. Сильная повышающая регуляция Stat4 в Т-клетках TRP-1 in vivo показывает, что сигналы IL-12 и/или IL-23 управляют их активацией, о чем свидетельствует высокая продукция IFN-γ и IL-22 соответственно. Это также подтверждается отсутствием экспрессии IFN-γ и Tbet в TRP-1 CD4 + Т-клетках, выделенных из RAG −/− γ c −/− хозяев через 4 недели после переноса в в дополнение к отсутствию IFN-γ и CXCL9, но не CXCL10, в сыворотке через 1 неделю в RAG -/- γ c -/- хозяев.Таким образом, оказывается, что отсутствие должной активации ДК приводит к низкой экспрессии МНС класса II и CD80, что впоследствии приводит к неадекватной активации наивных TRP-1 CD4 + Т-клеток в RAG -/- γ c −/− узлов. Потеря экспрессии IFN-γ CD4 + Т-клетками, возможно, приводит к потере экспрессии CXCL9 в тканях, что может привести к невозможности рекрутирования противоопухолевых CXCR3 + CD4 + Т-клеток в очаг опухоли.Этот характер рекрутирования может быть подобен процессу, который происходит при нефрите или заболевании глаз во время инфекции вирусом простого герпеса типа 1, для которого требуется CXCL9, но не CXCL10, для рекрутирования Т-клеток CXCR3 + в ткани (Wuest et al. и др., 2006; Менке и др., 2008).

Зачем стремиться понять, как Т-клетки TRP-1 CD4 + активируются in vivo? Более интенсивная абляция может удалить DC, которые обеспечивают вторичные сигналы (такие как IL-12 или, возможно, IL-23), которые необходимы для правильной дифференцировки Т-клеток CD4 + in vivo в долгоживущие клетки памяти, что подобно IL- 2 для CD8 + Т-клеток (Williams et al. , 2006). Меньшее пространство может быть ахиллесовой пятой интенсивной лимфодеплеции при использовании Т-клеток CD4 + . Это может указывать на то, что Т-клетки CD4 + изначально не получают надлежащих сигналов для долгоживущего выживания. У мышей, облученных в дозе 9 Гр, и у людей, получавших лимфодеплетирующие схемы в дозе 12 Гр, введение ИЛ-2 было необходимо для усиления АКТ. Перенос наивных Т-клеток в этих условиях еще не осуществлен. Этим клеткам может потребоваться введение DC для поддержки (Steinman and Banchereau, 2007).

Как можно получить такую ​​среду без химиотерапии или облучения, разрушающих лимфоузлы? Цитокины (такие как IL-7 и IL-15), обнаруженные у пациентов, получающих высокие дозы лучевой терапии, и у облученных мышей WT и RAG -/- , могут быть использованы для имитации лимфопении у хозяина WT (Gattinoni et al., 2005a; Zhang et al., 2005; Guimond et al. , 2009; Pellegrini et al., 2009). В последние годы IL-7 продемонстрировал большие перспективы у людей, и было показано, что длительное введение высвобождает ингибирующие сети, которые подавляют противоопухолевый иммунитет (Pellegrini et al., 2009). Иммунные комплексы цитокин/антитело к ИЛ-2, ИЛ-7 или ИЛ-15 могут предложить еще один способ имитации лимфопении, поскольку для усиления пролиферации наивных Т-клеток и Т-клеток фенотипа памяти in vivo требуется гораздо меньшее количество цитокинов (Boyman et al. и др., 2006, 2008; Рубинштейн и др., 2006; Чо и др., 2007). Лимфопения-индуцированная активация CD4 + T-клеток сама по себе может программировать эти клетки, чтобы они стали менее склонными к индукции толерантности, наблюдаемой в других системах, использующих CD4 + T-клетки (Sotomayor et al., 1999), и в настоящее время мы изучаем это.

Введение антител против костимулирующих и ингибирующих молекул является еще одним методом усиления противоопухолевого иммунитета. Мы наблюдали высокую экспрессию CTLA-4 и 41BB на Т-клетках TRP-1 CD4 + . Терапия против CTLA-4 используется в клинических испытаниях, и было показано, что она усиливает адоптивную клеточную терапию уже с помощью Т-клеток CD8 + и инфузий донорских лимфоцитов путем ингибирования Т-регуляторных клеток и усиления активации не-Т-регуляторных клеток (Quezada et al. др., 2006, 2008; Пеггс и др., 2009). С опухолеспецифическими TRP-1 CD4 + T-клетками это значительно усиливает терапию у WT и лимфопенных хозяев (Quezada et al., 2010). Стимуляция 41BB также усиливает иммунотерапию с использованием Т-клеток, коэкспрессирующих 41BBL (Stephan et al., 2007). Он также может нарушать толерантность к слабоиммуногенной опухоли (Wilcox et al., 2002). ICOS рассматривается как еще один кандидат на иммунотерапию (Паулос, К. и Джун, К., личное сообщение). Эти методы лечения могут быть объединены с АКТ в будущем.

В этом исследовании мы сосредоточились на наивных Т-клетках CD4 + , которые правильно дифференцируются в своем естественном состоянии и становятся долгоживущими Т-клетками памяти. Эта идея также была продемонстрирована на другой модели опухоли, которая включала активацию наивных Т-клеток посредством принудительной экспрессии LIGHT в микроокружении опухоли (Yu et al., 2004). Хотя принудительная экспрессия LIGHT в опухолях человека может не быть клинической реальностью, это привело к глубокому отторжению опухоли, что указывает на важность активации наивных Т-клеток в их естественном состоянии.

Как получить наивные Т-клетки у людей? Трансдукция TCR наивных Т-клеток с CD4 + опухолеспецифическими TCR MHC класса II может быть предпринята на людях, как это было ранее достигнуто с опухолеспецифическими TCR MHC класса I (Morgan et al., 2006; Hinrichs et al., 2009) . Возможно, удастся перенести наивные опухолеспецифические CD4 + Т-клетки в хозяев, предварительно обработанных неинвазивной терапией цитокинами, которые не вызывают вредных побочных эффектов.Трансдукция TCR с высокой авидностью в опухолевые антигены в наивные или пуповинные PBL осуществима и может быть усилена введением высоких доз IL-7 или IL-15 в сочетании с анти-CTLA или анти-41BB терапией.

Как вы получаете неустойчивые высокореактивные TCR, как показано в этой статье? Мышиные TCR, реагирующие на раковые антигены человека, могут быть трансфицированы в Т-клетки человека с помощью генной терапии (Johnson et al., 2009). Человеческие мыши HLA Tg могут быть иммунизированы человеческими раковыми антигенами для получения TCR с высокой опухолереактивностью, которые затем можно использовать в иммунотерапии рака у людей.

Таким образом, мыши TRP-1 Tg представляют собой новую модель иммунотерапии ACT для изучения способов индукции мощного противоопухолевого иммунитета против установленной меланомы без необходимости использования цитотоксических CD8 + Т-клеток или вакцины. Понимание механизмов регрессии опухоли у мышей с лимфопенией может позволить разработать новые методы лечения, которые работают без химиотерапии и облучения. Эти данные предполагают новую роль Т-клеток CD4 + в качестве цитотоксических Т-клеток.

Анти-CD4 (RM4-5), анти-CD25 (PC61), анти-CD122 (TM-β-1), анти-Vβ14 (14–2), анти-NK1.1 (PK136), анти-ICOS ( 7E.17G9), анти-CD44 (IM7), анти-CD62L (MEL-14), анти-CD11c (HL3), анти-CD86 (GL1), анти-MHC класса II (AF6-120.1), анти-IL- 17 (TC11-18h20), анти-IFN-γ (XMG1.2), анти-TNF (MP6-XT22), анти-CD49b (DX5) и CD11b (M1/70) были получены от BD. Анти-IL-7Rα (SB/199), анти-CXCR3 (CXCR3-173), анти-Foxp3 (FJK-16s), анти-Tbet (4B10), анти-MHC класса II (I-A/I-E; M5/114.15.2), анти-GR-1 (RB6-8C5), анти-перфорин (eBioOMAK-D), анти-NKp46 (29A1.4), анти-LAMP-1 (1D4B), анти-гранзим B (16G6) и анти-NKG2D (CX5) были получены от eBioscience. Все шкалы проточной цитометрии являются логарифмическими шкалами, если не указано иное. Внутриклеточное окрашивание на цитокины проводили с помощью набора для внутриклеточного окрашивания Cytofix/Cytoperm (BD). Для гранзима B, Foxp3 и перфорина использовали набор буферов для окрашивания Foxp3 в соответствии с рекомендациями eBioscience. Все образцы были обработаны на FACSCalibur (BD; отделение хирургии Медицинской школы Университета Мэриленда) и проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo (Tree Star, Inc.).

Обнаружение судов и классификация по космическим оптическим изображениям: Обзор литературы

https://doi.org/10.1016/j.rse.2017.12.033Получить права и содержание обнаружение и классификация с оптического спутника.

С 1978 г. по март 2017 г. наблюдается экспоненциальный рост количества статей.

Большинство опубликованных методов имеют очень ограниченную валидацию.

Несмотря на то, что были сделаны большие шаги, автоматические алгоритмы все еще далеки от совершенства.

Новые возможности наблюдения и обработки обещают быстрый прогресс.

Abstract

В этом документе представлен обзор существующей литературы по обнаружению и классификации судов/судов по оптическим спутниковым изображениям. Хотя SAR (Synthetic Aperture Radar) по-прежнему является ведущей технологией морского мониторинга, количество исследований, основанных на оптических спутниковых данных, быстро растет.Всего мы проанализировали 119 работ по оптическому обнаружению и классификации сосудов за период с 1978 г. по март 2017 г. Мы начнем с представления всех существующих сенсорных систем для обнаружения сосудов, но впоследствии сосредоточимся только на спутниках оптической визуализации. В статье показано изменение характеристик оптических спутников во времени и связано это с количеством и периодичностью публикаций по обнаружению судов. После подробного представления методов, используемых для обнаружения и классификации сосудов на основе оптических изображений, наряду с достигнутой точностью обнаружения, мы также сообщаем о возможностях объединения оптических данных с другими источниками данных. Исследованные работы показывают, что наиболее распространенными факторами, сильно влияющими на точность обнаружения судов, являются следующие: различные погодные условия, влияющие на характеристики морской поверхности, количество облачности и дымки, угол наклона солнца и характеристики датчика изображения. Все эти факторы вносят большие различия в выбор наиболее подходящего метода; некоторые из них по-прежнему создают нерешенные проблемы. Для большей актуальности и более широкого использования мы предлагаем, чтобы алгоритмы обнаружения и классификации поддерживали различные цели и метеорологические условия, а в идеале также различные оптические спутниковые датчики.По крайней мере, их нужно тестировать на множестве изображений в разных условиях. Обычно в существующей литературе такого нет. Мы также заметили, что многие авторы опускают соответствующую количественную оценку производительности, которая имеет решающее значение для практической оценки и численного сравнения представленных алгоритмов.

Оставить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.